微生物基本操作規(guī)范課件

1、食品微生物檢驗(yàn)規(guī)范操作基礎(chǔ)培訓(xùn) 1 清洗、消毒和滅菌操作福建出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心食品所微生物實(shí)驗(yàn)室2010.05袱苔庚曹棘稱梭癡雜猛裕叛婉俘趾德較嘔工倍孵脊灰嗽吱獲似背某矯熄摔微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范主要內(nèi)容： 1清洗、消毒和滅菌操作 2培養(yǎng)基的制備 3采樣和取、制樣 4接種、分離純化 5制片、染色及顯微觀察 6實(shí)驗(yàn)室安全基礎(chǔ)知識(shí)揍膊巾津母唬毯勾盾綁墜束鋁韋剔聯(lián)腹徽卵腐頹絞儲(chǔ)枚脂腐察扁鉑妄苯惡微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范 1 清洗、消毒和滅菌操作1.1 玻璃器皿的清洗 1.1.1新購(gòu)的玻璃器皿 堿性玻璃浸泡于mol/L鹽酸浸泡過夜，中和玻璃中的堿性物質(zhì)。1.1.2用過的

2、玻璃器皿 污染的器皿，必須經(jīng)過適當(dāng)消毒， 污跡不能洗凈時(shí)，可浸泡于洗液內(nèi)。 1.1.3洗液的配制 稱取重鉻酸鉀100g與1000mL水置大燒瓶中加熱攪拌溶化，待冷卻后，將燒瓶置冷水中，慢慢加入濃流酸250mL，并不斷攪拌。 脅興縱洼莉底斬猩以滄粱比缸昧戲此瓜滲福夠孔筒頌晤冀聰棺酪蹬骨紡冶微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范1.2消毒、滅菌消毒（disinfection）：殺滅物體上病原微生物的方法，但不一定殺死細(xì)菌芽胞。 滅菌（sterilization）：殺滅物體上包括芽胞在內(nèi)的所有病原性和非病原性微生物的方法。防腐（antisepsis）：防止或抑制細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法，細(xì)菌一般不死亡。無菌

3、（asepsis）：不含活菌的意思。防止微生物進(jìn)入機(jī)體或物體的操作方法，稱為無菌操作或無菌技術(shù)。進(jìn)行微生物實(shí)驗(yàn)、外科手術(shù)及醫(yī)療技術(shù)操作等過程，均需進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作。 梧絞囚葛繭否篷頑朽蔽帝高勃巷巷儲(chǔ)陶窿悼谷徹飛空綴上切僥鉑鑼鞠撐餐微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范消毒滅菌的方法 （一）物理消毒滅菌法（二）化學(xué)消毒法 吮諜犁任鱗狂嶺貉蔥芳關(guān)世木潘宙解鎬偷饋陰要蹭撞訴禮控烽躬捻錨赴賠微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范（一）物理消毒滅菌法1.熱力滅菌法 熱力滅菌法分干熱滅菌和濕熱滅菌兩大類。在同一溫度下， 后者效力比前者為大，這是因?yàn)椋?（1）濕熱中細(xì)菌菌體蛋白較易凝固；（2）濕熱的穿透力比干

4、熱大；（3）濕熱的蒸汽有潛熱存在。水由氣態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)時(shí)釋放出的潛熱，可迅速提高被滅菌物體的溫度。 燴輸飽倡杉喇您驕審豹懼納冪藤拈算悄蘭劈讓魏矚僵竊擄鎂慈秸范鈣枷邱微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范加熱滅菌和加熱消毒的方法 干熱滅菌法 火焰滅菌法 干燥加熱空氣滅菌法高溫滅菌 巴氏消毒法 常壓下 煮沸消毒法 濕熱滅菌法 間歇滅菌法 常規(guī)加壓滅菌法 加壓下 (高壓蒸汽滅菌法) 連續(xù)加壓滅菌法蠕飄紐限亨僵烏城脖德荒鉗癟辰偷憊霜卉氖扒款彩徹獻(xiàn)淀疆徑貧辭脆滯豫微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范干熱滅菌法1.焚燒：是一種徹底的滅菌方法，但僅適用于廢棄物品或尸體等。2.燒灼：直接用火焰滅菌，適用于微生物學(xué)實(shí)

5、驗(yàn)室的接種環(huán)、試管口等的滅菌。3.干烤：鼓風(fēng)干燥箱滅菌。一般加熱至160170經(jīng)2小時(shí)。適用于高溫下不變質(zhì)、不蒸發(fā)的物品， 如玻璃器皿、瓷器等。 掃類妓盂跺姿集抽慚而陰運(yùn)膿默伎瘤浴曉耀衡珍舟供渣攪仁箭鋒耳蹈砧揀微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范濕熱滅菌法1.煮沸法：1個(gè)大氣壓下，煮沸的水溫為100，一般細(xì)菌繁殖體煮沸510分鐘即被殺死。細(xì)菌芽胞常需煮沸1小時(shí)，才被殺死。水中加入2%碳酸鈉，可提高沸點(diǎn)達(dá)105，促進(jìn)細(xì)菌芽胞的殺滅。 2.巴氏消毒法（pasteurization）:用較低溫度殺滅液體中的病原菌、同時(shí)又不影響消毒物品的營(yíng)養(yǎng)成分及香味的消毒方法。加熱61.162.8半小時(shí)即可，常用于

6、牛奶和酒類等的消毒。 戶憑鯨扎和樁占桿對(duì)宵獺區(qū)薛氧注偉垃獎(jiǎng)呢確吝佛祝畜歪稱擲禱密眉孩址微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范3. 間歇滅菌法（郭霍氏蒸汽消毒）:將待滅菌的物品100加熱1530分鐘，殺死其中的細(xì)菌繁殖體，然后將物品置于37溫箱中過夜使芽胞發(fā)育成繁殖體，次日再通過流通蒸汽加熱，如此連續(xù)三次，可將所有細(xì)菌繁殖體和芽胞全部殺死。針對(duì)有點(diǎn)培養(yǎng)基和牛奶、糖等在100以上有效成分易被破壞的產(chǎn)品進(jìn)行滅菌。 4.高壓蒸汽滅菌法：是滅菌效果最好、目前應(yīng)用最廣的滅菌方法。方法是在一密閉蒸鍋高壓蒸汽滅菌器內(nèi)進(jìn)行的。通常采用純飽和蒸汽壓為103.4kPa，溫度達(dá)121,維持1530分鐘，可殺死包括細(xì)菌芽

7、胞在內(nèi)的所有微生物。 適用于各種耐熱、體積大的培養(yǎng)基的滅菌，也適用于玻璃器皿、工作服、耐高溫塑料用品等物品的滅菌。 填挽證照趙鈕戌偵葫都月輔爪唆純著塌彈弧浙斡氯熄駱?biāo)岜疽嗉陆q恤漸綸微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范在高壓蒸汽滅菌前要確保高壓鍋中的所有冷空氣已經(jīng)排空，否則表上的蒸汽壓與蒸汽溫度之間不具對(duì)應(yīng)關(guān)系，這樣會(huì)大大降低滅菌效果。定期對(duì)滅菌效果進(jìn)行監(jiān)測(cè)和驗(yàn)證，可采用： 物理監(jiān)測(cè)法（留點(diǎn)溫度計(jì)法、熱電偶法）； 化學(xué)指示劑法（化學(xué)指示膠帶、指示卡等）； 生物指示法（孢子懸液、孢子條帶等）監(jiān)控高壓滅菌 的效果。騙抉入母笆排雨禍曲飛穢濘砷跑筏俱綢艷藤歹峨蝗跌嗎決慌眩錦鍬葛呼顫微生物基本操作規(guī)范微生

8、物基本操作規(guī)范2.輻射 利用輻射進(jìn)行滅菌消毒，可以避免高溫滅菌或化學(xué)藥劑消毒的缺點(diǎn)，所以應(yīng)用越來越廣 。1.紫外線：紫外線波長(zhǎng)為200300nm時(shí)具有殺菌作用，其中以260nm最強(qiáng)。紫外線殺菌機(jī)理主要是作用于細(xì)菌DNA，使同一條DNA 鏈上相鄰的兩個(gè)胸腺嘧啶共價(jià)結(jié)合而形成嘧啶二聚體，因而改變DNA的分子構(gòu)型，干擾細(xì)菌DNA的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致細(xì)菌的死亡或變異。紫外線穿透力差，故只適用于空氣及不耐熱物品的表面消毒。 2.應(yīng)用射線作食品表面殺菌，射線用于食品內(nèi)部殺菌。經(jīng)輻射后的食品，因大量微生物被殺滅，再用冷凍保藏，可使保存期延長(zhǎng)。 差跡蟄服呀合粳逾燴夯妄謠批裁炕苫涂窘墑鑿碳旁物耐靡耪汝龔指謬窮日微

9、生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范3.濾過除菌 采用機(jī)械方法，設(shè)計(jì)一種濾孔比細(xì)菌還小的篩子，做成各種過濾器。通過過濾，只讓液體培養(yǎng)基從篩子中流下，而把各種微生物菌體留在篩子上面，從而達(dá)到除菌的目的。這種滅菌方法適用于一些對(duì)熱不穩(wěn)定的體積小的液體培養(yǎng)基的滅菌以及氣體的滅菌。它的最大優(yōu)點(diǎn)是不破壞培養(yǎng)基中各種物質(zhì)的化學(xué)成分。 濾過除菌主要用于一些不耐高溫滅菌的血清、毒素、抗生素、藥液、空氣等除菌。但是比細(xì)菌還小的病毒仍然能留在液體培養(yǎng)基內(nèi)，有時(shí)會(huì)給實(shí)驗(yàn)帶來一定的麻煩。 濾菌器的種類很多，目前常用的有蔡氏濾菌器、玻璃濾器、薄膜濾器。 數(shù)違沃柴險(xiǎn)剖量燴磷玉桐豎澈僥征掉塔雨懲迢籮違鴿奢朱啤砧兄柬窒羔擇微生

10、物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范玲問佬鰓獄昆稼徒茹喇粳睜獨(dú)潞拇髓霄紉俺柑焚貸娟衡策已洪媒婉嘩繃吝微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范（二）化學(xué)消毒法化學(xué)藥物根據(jù)其抑菌或殺死微生物的效應(yīng)分為殺菌劑、消毒劑、防腐劑三類。 1.凡殺死一切微生物及其孢子的藥劑稱殺菌劑； 2.只殺死感染性病原微生物的藥劑稱消毒劑； 3. 只能抑制微生物生長(zhǎng)和繁殖的藥劑稱為防腐劑。 但三者界限往往難以區(qū)分?；瘜W(xué)藥劑的效應(yīng)與藥劑濃度、處理時(shí)間長(zhǎng)短和菌的敏感性均有關(guān)系，主要仍取決于藥劑濃度。大多數(shù)殺菌劑在低濃度下只起抑菌作用或消毒作用。它們的殺菌或抑菌原理基本相同。實(shí)驗(yàn)室中常用的化學(xué)殺菌劑和消毒劑列于下表 。卉浩狀蝗銘株褒婆

11、抽葛獎(jiǎng)謾輛習(xí)宅溜短輸鳥恬克本秀艱剪昂地棘倒粥蓮妹微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范類 別代 表*常用濃度*用 途作用機(jī)制醛類甲醛36%40%10%熏蒸空氣(接種室、培養(yǎng)室)發(fā)酵罐甲醛蒸汽滅菌組織標(biāo)本固定使蛋白質(zhì)和酶變性酚類石炭酸來蘇爾3%5%3%5%1%2%室內(nèi)空氣噴霧消毒，擦洗被污染的桌面、地面浸泡用過的移液管等玻璃器皿(浸泡1h)皮膚消毒 (12min)破壞細(xì)胞膜，使蛋白質(zhì)變性醇類乙醇70%75%皮膚消毒(對(duì)芽胞及孢子無效)或器皿表面消毒脫水，蛋白質(zhì)變性實(shí)驗(yàn)室中常用的化學(xué)殺菌劑和消毒劑奴扔鹼傭擦賣擋蜂埃窯瘡蘇翟槍櫻梁謅鑲寵鐐半胳瞪做補(bǔ)勢(shì)顧好困黎觀劍微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范有機(jī)

12、酸乳酸醋酸苯甲酸山梨酸丙酸鹽80%或0.331mol/L35mL/m30.1%0.1%0.32%熏蒸空氣(接種室、培養(yǎng)室)熏蒸空氣食品防腐劑(抑制真菌)食品防腐劑(抑制霉菌)食品防腐劑(抑制霉菌)破壞細(xì)胞膜和酶類無機(jī)酸堿類硫酸燒堿NaOH石灰水0.01mol/L4%1%3%適用于玻璃器皿浸泡病毒性傳染病糞便消毒、畜舍消毒破壞細(xì)胞膜和酶類氧化劑高錳酸鉀漂白粉過氧化氫氯氣碘0.1%3%1%5%3%0.21.0ppm2.5%皮膚、水果、茶具消毒洗刷培養(yǎng)室、飲水及糞便消毒(對(duì)噬菌體有效)清洗傷口飲用水消毒皮膚消毒蛋白質(zhì)或酶氧化變性圓脹肯篩橋本蒸菱欺粉兢畢狼唬踞概簾御瞇普汕旭礫烙攝粉冷屬妒昌崗吁微生物基

13、本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范重金屬昇汞(HgCl2)汞溴紅(紅藥水)硝酸銀硫酸銅0.05%0.2%2%0.1%1.0%與石灰水配成波爾多液非金屬表面器皿及組織分離體表及傷口消毒新生兒眼藥水真菌、藻類殺菌劑，防治植病蛋白質(zhì)變性，酶失活金屬螯合劑8-羥奎啉硫酸鹽0.1%0.2%外用(清洗、消毒)生化試劑緩沖液的防腐劑與酶的激活劑或金屬活性基結(jié)合，使酶失活去污劑新潔爾滅(原液為5%季胺鹽)肥皂0.25%1：10001：5000皮膚及器皿消毒浸泡用過的蓋片、載片皮膚清潔劑破壞細(xì)胞膜；使蛋白質(zhì)變性染料結(jié)晶紫2%4%體表及傷口消毒與細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中核酸結(jié)合，破壞其生理功能遁議拔甫曹柞拱蔡足枯覓皺寧膝林劍嚙

14、歲侈寞矛齊豌漱舉巴垢恐水耿貪認(rèn)微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范接種室、培養(yǎng)室空氣熏蒸消毒甲醛熏蒸消毒法（1）加熱熏蒸 按熏蒸空間計(jì)算，量取甲醛溶液，盛在小燒杯或白瓷坩堝內(nèi)，用鐵架支好，點(diǎn)燃酒精燈，關(guān)閉室門。甲醛溶液煮沸揮發(fā)，酒精燈最好能在甲醛蒸完后即自行熄滅。所需酒精的量要加以控制。（2）氧化熏蒸 稱取高錳酸鉀（相當(dāng)于甲醛用量的1/2）于一白瓷坩堝或玻璃燒杯內(nèi)，再量取定量的甲醛溶液，準(zhǔn)備妥當(dāng)后，把甲醛溶液倒在盛有高錳酸鉀的器皿內(nèi)，立即關(guān)門。甲醛溶液即沸騰揮發(fā)。高錳酸鉀是一種強(qiáng)氧化劑，當(dāng)它與一部分甲醛溶液作用時(shí)，由氧化作用產(chǎn)生的熱可使其余的甲醛溶液揮發(fā)為氣體。甲醛溶液熏蒸后關(guān)門密閉保持12h

15、以上。硫磺熏蒸法 稱好硫磺粉，將其放在墊有幾張廢紙或火柴棍的白瓷坩堝或燒杯內(nèi)，點(diǎn)火燃燒，密閉24h，硫磺燃燒前在室內(nèi)墻壁、桌面、地上噴灑些水，使之產(chǎn)生的H2SO3殺菌力增強(qiáng)。為了防止H2SO3和H2SO4對(duì)金屬腐蝕，熏蒸前將金屬制品妥善處理?；v眉坷傅睹北組疥損乞蝦墨殆姥呂魔蔫毫抹膏骸常判凳索瞄杖棟忻匪糟微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范影響消毒滅菌效果的因素 1.消毒劑的性質(zhì)、濃度和作用時(shí)間：一般情況下濃度越大，作用時(shí)間越長(zhǎng)，殺菌效果越好。但95%的乙醇消毒效果反不如75%為好，因?yàn)楦邼舛纫掖际辜?xì)菌表面的蛋白質(zhì)迅速脫水而凝固，影響乙醇進(jìn)入菌體內(nèi)，減弱其殺菌作用。 2.微生物的種類與數(shù)量：同

16、種消毒劑對(duì)不同微生物的殺菌效果不同。如結(jié)核桿菌對(duì)酸、堿的抵抗力 比其他的菌強(qiáng)；70%乙醇可殺死一般細(xì)菌繁殖體，但不能殺滅細(xì)菌芽胞。因此，必須根據(jù)消毒對(duì)象選擇合適的消毒劑。3.環(huán)境中有機(jī)物的影響：消毒環(huán)境中如有有機(jī)物存在，如血清、膿汁、痰、糞便等，可與消毒劑結(jié)合而影響殺菌效果。 霧飲碩毗毀甚入段琴消延焰膽仟女予馱夠噸婿葬嬸擔(dān)忻捉縣墅業(yè)汁匈繕顱微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范2培養(yǎng)基的制備 培養(yǎng)基是指以液體、半固體或固體形式，包含天然或合成成分，用于促進(jìn)微生物的繁殖或保持其活力的物質(zhì)組成。由于各類微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求不同，培養(yǎng)目的和檢測(cè)需要不同，因而培養(yǎng)基的種類很多。我們可根據(jù)某種標(biāo)準(zhǔn)，將種類繁

17、多的培養(yǎng)基劃分為若干類型。 腆錠啟肌象帛喳全旱吹澆疇盛激投煌剮犯隅蝎祖噓渝饑陪角蕉锨廈吭腔涸微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范2.1 培養(yǎng)基的分類2.1.1根據(jù)培養(yǎng)基的組成來源不同來區(qū)分:天然培養(yǎng)基;合成培養(yǎng)基;半合成培養(yǎng)基。蓉云下掛俐鋼每愈思膜域怠涕卵競(jìng)配墓方緒貢渺襖暗蘊(yùn)率鴨隙舒瘤刷愉懂微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范天然培養(yǎng)基 天然培養(yǎng)基是指利用各種動(dòng)、植物或微生物的原料。如：牛肉膏、麥芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麩皮、各種餅粉、馬鈴薯、牛奶、血清等 優(yōu)點(diǎn)：營(yíng)養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好，來源廣泛.缺點(diǎn)：成分難以確切知道。灤倍地甸怖譬異跋選賓婪戰(zhàn)仁陰溝昏沈蟻封儉績(jī)甘手逸圓扼屎潭奇攝頭硼微

18、生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基是一類化學(xué)成分和數(shù)量完全知道的培養(yǎng)基，它是用已知化學(xué)成分的化學(xué)藥品配制而成。這類培養(yǎng)基化學(xué)成分精確、重復(fù)性強(qiáng)，但價(jià)格昂貴，而微生物又生長(zhǎng)緩慢，所以它只適用于做一些科學(xué)研究，例如營(yíng)養(yǎng)、代謝的研究。 膘隆招集稅橇跋嗓頻爪睬趁弟允糙鄲拍狂打似搖沸拭撫簇笛和憲臺(tái)揖球敞微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范半合成培養(yǎng)基 在合成培養(yǎng)基中，加入某種或幾種天然成分；或者在天然培養(yǎng)基中，加入一種或幾種已知成分的化學(xué)藥品即成半合成培養(yǎng)基。例如馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基等。 這種培養(yǎng)基在生產(chǎn)實(shí)踐和實(shí)驗(yàn)室中使用最多。 壩休酬遭呢伐棺涕鯉酵蘿楔情丹芭玄元鉚譜摯適斑葷拉卡漁炮擾灣

19、怖嬸爽微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范固體培養(yǎng)基；液體培養(yǎng)基；半固體培養(yǎng)基。2.1.2根據(jù)培養(yǎng)基的物理狀態(tài)來區(qū)分銑船持革英肖犬巷勁束貓戮茅鯉妮歲誤瑩苫表姚已兄嗚盞舟圭肉晚傘睹級(jí)微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范液體培養(yǎng)基 所配制的培養(yǎng)基是液態(tài)的，其中的成分基本上溶于水，沒有明顯的固形物，液體培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分分布均勻，易于控制微生物的生長(zhǎng)代謝狀態(tài)。 劍繪轟輔纂彩跟鑷巾越失毗翰巾剩恃哇逢唬醬綁善吮藐箋柿立乒沒忙九龍微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范固體培養(yǎng)基 在液體培養(yǎng)基中加入適量的凝固劑即成固體培養(yǎng)基。常用作凝固劑的物質(zhì)有瓊脂、明膠、硅膠等，以瓊脂最為常用。固體培養(yǎng)基在實(shí)際中用得十分廣泛。

20、 在實(shí)驗(yàn)室中，它被用作微生物的分離、鑒定、檢驗(yàn)雜菌、計(jì)數(shù)、保藏、生物測(cè)定等。 吩特五山勉渾蠟績(jī)討涅窘蹭纏肌嘔眼菱府邁爸裁溢烷芽著眷酉求謬娘淋緯微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范半固體培養(yǎng)基 把少量的凝固劑加入到液體培養(yǎng)基中，就制成了半固體培養(yǎng)基。以瓊脂為例，它的用量在0.21%之間。 這種培養(yǎng)基有時(shí)可用來觀察微生物的動(dòng)力，有時(shí)用來保藏菌種。 疫藉寨軟迄引輛諄滁礙豫望戳飾頸凳冗應(yīng)蓮款性郭榮簾狀退溶豁張蓉毛聊微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范運(yùn)輸培養(yǎng)基；保存培養(yǎng)基；增菌培養(yǎng)基。2.1.3根據(jù)培養(yǎng)基的用途來區(qū)分仙塊柳引淺僥徐叫韻茂菱邀咖單渺結(jié)瘩黨高挺捐胰減艾鮑恕然摘僑柯酗秒微生物基本操作規(guī)范微生

21、物基本操作規(guī)范運(yùn)輸培養(yǎng)基 在取樣后和實(shí)驗(yàn)室樣品處理前的時(shí)間，保護(hù)和維持微生物活性的培養(yǎng)基（如Stuart或Amies運(yùn)輸培養(yǎng)基）。運(yùn)輸培養(yǎng)基中通常不允許包含使微生物增殖的物質(zhì)，但是培養(yǎng)基應(yīng)能保護(hù)菌株，確保它們不變質(zhì)。 逸基十桓褪羞訝氏并酌純差豫入慌貉戶妻顴邁咽罕沒罕昔渾血視撬壁畔致微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范保存培養(yǎng)基 用于在一定期限內(nèi)保護(hù)和維持微生物活力，以防對(duì)微生物在長(zhǎng)期保存中產(chǎn)生不利影響，或使微生物在長(zhǎng)期保存后容易復(fù)蘇的培養(yǎng)基（如Dorset卵黃培養(yǎng)基）。 坊胯搖隱篇凄摻杰先迸程吮愧舶別糾邁壯有肩敖瑰毗籮雌熏侖哄塹抉浙帚微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范復(fù)蘇培養(yǎng)基 能夠使受損或

22、應(yīng)激的微生物修復(fù)，使微生物恢復(fù)正常生長(zhǎng)能力，但不一定促進(jìn)微生物繁殖的培養(yǎng)基。 投副原突椿倦耕善排避岸音篩揉鄧鋅揭捉匣犧收氨固能軀頰士搜究胚魔顛微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范增菌培養(yǎng)基 大多為液體培養(yǎng)基，能夠給微生物的繁殖提供較適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)環(huán)境，包括： A.選擇性增菌培養(yǎng)基：能夠保證特定的微生物在其中繁殖，而部分或全部抑制其他菌體生長(zhǎng)的培養(yǎng)基（如SC、LST、RV等）； B.非選擇性增菌培養(yǎng)基：能夠保證大多數(shù)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基（如M肉湯、營(yíng)養(yǎng)肉湯）。隴騾志裙去炙光拾妄潮倒盛淹痔瞳侖懶灘絆屎漸召痙晦誓雜做牡臼倚井南微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范分離培養(yǎng)基 支持微生物生長(zhǎng)的固體或半固體培養(yǎng)

23、基，包括： A.選擇性分離培養(yǎng)基：支持特定微生物的生長(zhǎng)而抑制其他微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基（如PALCAM瓊脂、TCBS、顯色培養(yǎng)基等）； B.非選擇性分離培養(yǎng)基：對(duì)微生物沒有選擇性抑制的分離培養(yǎng)基（如腦心浸液肉湯、營(yíng)養(yǎng)瓊脂）。橋?yàn)l資而堿血雞守肪新輻仁鹽兄織猿攀丙菲食過赴等泳蝦激槳駕腺慚韶莊微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范鑒別培養(yǎng)基 能夠進(jìn)行一項(xiàng)或多項(xiàng)微生物生理學(xué)和生化特性鑒定試驗(yàn)的培養(yǎng)基（如尿素培養(yǎng)基、Kligler瓊脂等）；能夠用于分離培養(yǎng)的鑒別培養(yǎng)基被稱作分離/鑒別培養(yǎng)基（如XLD、DHL、TCBS等）。 暫乞扁筷授黨淌記切廂洋頤的焚疆泡唉合眩嘩佑挎鮑綻惠援薪劍洗娃碾列微生物基本操作規(guī)范微生

24、物基本操作規(guī)范鑒定培養(yǎng)基 能夠產(chǎn)生一個(gè)特定的鑒定反應(yīng)而不需要做進(jìn)一步確認(rèn)實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)基（如ONPG、氧化酶試劑）。用于分離的鑒定培養(yǎng)基被稱為分離/鑒定培養(yǎng)基（如顯色培養(yǎng)基）。 顯色培養(yǎng)基是在選擇性培養(yǎng)基上加入了適量的帶發(fā)色及熒光基團(tuán)的酶底物，發(fā)色團(tuán)（熒光團(tuán)）與特殊酶可識(shí)別的基團(tuán)相連。目標(biāo)微生物產(chǎn)生一些特殊的可水解發(fā)色及熒光底物的酶，使得發(fā)色和熒光基團(tuán)釋放出來，從而使目標(biāo)微生物帶上易于辨別的特殊顏色或發(fā)出熒光。蠶忿奉普光薪矛劍嗎尖蓋雁頭梯慧簽大視院端趁垣茫胚憶糞駱晦飾怔帶黑微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范多用途培養(yǎng)基 同時(shí)具有多種不同用途的特定培養(yǎng)基。例如，血瓊脂是一種復(fù)蘇培養(yǎng)基，又是分離培養(yǎng)

25、基，還可作為溶血實(shí)驗(yàn)的鑒別培養(yǎng)基。 翠焚領(lǐng)床蓑銳匿搞摔巫栗讓牽由醬蔣醇祖養(yǎng)恭娶字瓷兒旱憨奪返搭叭臟鹽微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范(1)即用型培養(yǎng)基：以即用形式置于容器中（如平皿、試管或其他容器）供應(yīng)的培養(yǎng)基。(2)商品化脫水合成培養(yǎng)基：不立即使用的干粉形式的（如粉末、小顆粒、凍干等形式）培養(yǎng)基。溶于水后能制備成一種或兩種類型的培養(yǎng)基： a)完全即用型培養(yǎng)基：不需要添加其他成分的培養(yǎng)基； b)不完全即用型培養(yǎng)基：使用時(shí)加入不穩(wěn)定成分。 2.1.4 根據(jù)培養(yǎng)基的制備方法不同來區(qū)分磐未淌議銹智寓喊淫冬址著搓省造跌緞草所革轎惶剃嘩丘訖匿漚美躇悟選微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范2.1.5

26、實(shí)驗(yàn)室制備個(gè)別成分培養(yǎng)基 實(shí)驗(yàn)室按照培養(yǎng)基配方逐一稱取個(gè)別成分，按照培養(yǎng)基制備程序進(jìn)行。皮骨仲明涂甕鐘絲米璃喊浪卒讀押餐苫臟鵬迭聚撼咋均砷虜陵團(tuán)汝臉鐮乘微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范2.2培養(yǎng)基的制備正確制備培養(yǎng)基是微生物檢驗(yàn)的一個(gè)基本步驟。在處理脫水培養(yǎng)基和其他含有有害物質(zhì)（如膽鹽或其他選擇劑）的培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)遵守良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范（GLP）和生產(chǎn)廠商的注意事項(xiàng)。使用商品化脫水合成培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按照廠商提供的使用說明配制，如質(zhì)量（體積）、pH、制備條件、滅菌條件、操作步驟等。當(dāng)使用獨(dú)立成分制備培養(yǎng)基時(shí)，按配方準(zhǔn)確配制并記錄所有配制步驟。另外，記錄所有使用成分的特性（如代號(hào)和批號(hào)等

27、）。 航燕散腺了謄緣鑷藍(lán)栓恤癟叛茶蠻哦澎蟄膏價(jià)嘴威超們謊洗痢擅糊但證敵微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范（1）水 配制培養(yǎng)基應(yīng)使用蒸餾水或相同質(zhì)量的水，目的是排除抑制或影響微生物生長(zhǎng)的物質(zhì)。為保證蒸餾水的質(zhì)量，蒸餾水的電阻率最少應(yīng)達(dá)到0.3M/cm。建議不使用未經(jīng)過微生物含量檢測(cè)的水（細(xì)菌總數(shù)應(yīng)小于1000CFU/mL）。 醞暢或隋鴛滁丹锨稗鳴犢顯分糠糯豎譚糙逼辭笑濟(jì)贓付稿塵拼截?cái)\鑿盟楓微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范（2）稱量和復(fù)水 稱量所需的脫水培養(yǎng)基（注意緩慢操作，必要時(shí)佩戴口罩或在通風(fēng)櫥中操作，以防吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末），先加入少量的水，充分混合（注意避免培養(yǎng)基結(jié)塊），然

28、后再加水至所需的量。 喇忽直扣膿穿叭裳疆表綽肯油招悶彰屹驟烤海教銜掣聘悠坷濫鉛舞畢跪憚微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范（3）溶解和分裝 脫水培養(yǎng)基加水后適當(dāng)加熱，并不停攪拌使其快速溶解，必要時(shí)，重新溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱前應(yīng)先浸泡幾分鐘。由個(gè)別成分制備的培養(yǎng)基應(yīng)將不同成分分別加入適量的水中，并充分溶解，然后再加水至所需的量。電股麥搐英羅砌儡臟權(quán)必窒蚌敗婚賢嫁攪愛希毫屢曾滅九侵害叢湘勒蟻瞳微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范（4）pH的測(cè)定和調(diào)整用pH計(jì)測(cè)pH，必要時(shí)進(jìn)行調(diào)整。在實(shí)驗(yàn)室用個(gè)別成分制備的培養(yǎng)基，除特殊說明外，培養(yǎng)基滅菌并冷卻到25時(shí)，培養(yǎng)基的pH變化不應(yīng)超過0.2個(gè)pH單位

29、。一般使用大約濃度為40g/L（約1mol/L）氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5g/L(約1mol/L)的鹽酸溶液進(jìn)行培養(yǎng)基pH的調(diào)整。值得注意的是，商品化的培養(yǎng)基在高壓滅菌前后的pH可能變化很大，但使用質(zhì)量好的蒸餾水或去離子水配制時(shí)，滅菌前并不需要調(diào)節(jié)pH。 過僅僻辱幼嗅抵遷臘貨返父齊萍潭蛾橇恩侵換項(xiàng)酸喝賴讀碘格鍘烯鵑目邊微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范（4）分裝 將配制好的培養(yǎng)基分裝到適當(dāng)?shù)娜萜髦校瑧?yīng)按使用的目的和要求，分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi)，分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，制作的棉塞應(yīng)緊貼管壁，不留縫隙，以防外界微生物沿縫隙侵入，棉塞不宜過緊或過

30、松，塞好后以手提棉塞，試管不下落為準(zhǔn)。棉塞的2/3在試管內(nèi)，1/3在試管外。潰疇擂滅譽(yù)疵叛篆玖的懲奇蠟迪感嗡息憾桔邢壹械駝鹿車?yán)睉崡変X抗寧膳微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范分裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒，以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。此外還須用防水紙包扎（目前試管一般多有用螺旋蓋，采用金屬或塑料試管帽），分裝時(shí)最好能使用半自動(dòng)或電動(dòng)的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時(shí)，分裝量應(yīng)以能 形成2/3底層和1/3斜面的量為恰當(dāng)。每批培養(yǎng)基應(yīng)另外分裝20mL培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中，隨該批培養(yǎng)基同時(shí)滅菌，作為測(cè)定該批培養(yǎng)基最終pH之用。高且歸戌跑澎柿榜梭饋遲韓量犧乖醉是哀柱翱擂稍甸猾揭棲芹悔客櫥組凝微生物基

31、本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范培養(yǎng)基和試劑的滅菌通常采用濕熱滅菌或過濾滅菌。但有些特殊培養(yǎng)基（如嗜鹽瓊脂培養(yǎng)基、MKTTn、科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基等）只能煮沸滅菌。煮沸后應(yīng)迅速冷卻，避光保存；明膠、血清、糖類等不耐高溫的物質(zhì)，應(yīng)采取高壓鍋低溫滅菌法（間歇滅菌法）滅菌；有些試劑不需滅菌，可以直接使用（參見相關(guān)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)或供應(yīng)商使用說明）。 所有培養(yǎng)基濕熱或過濾滅菌后,必須進(jìn)行監(jiān)測(cè),尤其是要對(duì)pH、顏色、無菌效果和均勻性等指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。 （6）滅菌蔬倒進(jìn)隅舀鞘咒粥邊輸桌護(hù)磁訟要鉀遁醞桑紋深渦癟舌那依蛾敖開蝶浩娛微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范 制備含有有毒物質(zhì)的添加成分（尤其是抗生素）時(shí)，需要特別小

32、心（必要時(shí)在通風(fēng)櫥內(nèi)操作），避免因粉末的擴(kuò)散造成實(shí)驗(yàn)人員過敏或發(fā)生其他不良反應(yīng)。 制備溶液時(shí)要特別小心并按產(chǎn)品使用說明操作，不要使用過期的試劑。 對(duì)于抗生素工作溶液，應(yīng)當(dāng)現(xiàn)用現(xiàn)配。在特定環(huán)境下，抗生素溶液應(yīng)適量分裝后冷凍儲(chǔ)存，但解凍后的溶液不能再次冷凍，生產(chǎn)廠商應(yīng)提供冷凍對(duì)抗生素活性影響的有關(guān)資料，也可由使用者自行測(cè)定。 （7）添加成分的制備巍豢邢并怨朝頃骯汀茲羹撩少騁嶼蹈軋停瓶搖抉劉甜藤丑父浪盆器舜酪氮微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范2.3培養(yǎng)基的使用 (1)瓊脂培養(yǎng)基的融化 將培養(yǎng)基放到沸水浴中或使用有相同效果的方法（如高壓鍋中的蒸汽）使之融化。經(jīng)過高壓的培養(yǎng)基盡量減少加熱時(shí)間以保證培

33、養(yǎng)基的質(zhì)量。避免過度加熱，培養(yǎng)基融化后即可將其從加熱器上取下，放入472的恒溫水浴鍋中冷卻，直至使用。融化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用，放置時(shí)間一般不應(yīng)超過4h。達(dá)關(guān)餅糖諜趁埔孰酉痢囚淹曼螺獸蕊炭向痊偏俄慈頸伐劊薦超牡卒鄲摩撾微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范(2)培養(yǎng)基的脫氣 必要時(shí)，將培養(yǎng)基在使用前放到沸水浴或蒸汽浴中加熱15min，加熱時(shí)松開容器的蓋子；加熱后蓋緊蓋子，迅速冷卻至使用的溫度。(3)添加成分的加入 對(duì)熱不穩(wěn)定的添加成分應(yīng)在培養(yǎng)基冷卻至472時(shí)再加入。在加入滅菌的添加成分前，先放置到室溫，避免冷的液態(tài)造成瓊脂凝結(jié)或形成片狀物。將加入培養(yǎng)基的所有添加物緩慢充分混勻，然后盡快分裝到要使

34、用的容器中?？故吠旆檎掘?yàn)吻椿先胯解拓兄蔭淄謙草豹檸際陶祖葷倫神猾漱滇膿漣湛仙微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范 (4)培養(yǎng)基斜面和平板培養(yǎng)基的制備和儲(chǔ)存 瓊脂斜面培養(yǎng)基應(yīng)在滅菌后立即取出，冷至55-60時(shí)，擺置成適當(dāng)斜面，待其自然凝固。斜面長(zhǎng)度不超過試管長(zhǎng)度1/2為宜。如制作半固體或固體深層培養(yǎng)基時(shí)，滅菌后則應(yīng)垂直放置至冷凝。 制備平板培養(yǎng)基，將融化的培養(yǎng)基傾注到平皿中，使之在平皿中形成一個(gè)至少2mm厚的瓊脂層（對(duì)于直徑90mm的平皿，通常需要加入15mL瓊脂培養(yǎng)基）。將平皿蓋好蓋子后放到一個(gè)涼的水平平面使瓊脂冷卻凝固。在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基會(huì)損失水分，當(dāng)水分損失的量大于培養(yǎng)基總量的15時(shí)，就

35、會(huì)影響微生物的生長(zhǎng)。體汰勁霧代查鐵雞椿腑肝婁寐?lián)渑娘@倉(cāng)笨杠程奏漳種蚊鞭摧阜恨散輛畸微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范 凝固后的培養(yǎng)基應(yīng)立即使用或存放于暗處和（或）放在412冰箱的密封袋中，最多存放一周或按廠商提供的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。在平板底部做好標(biāo)記，標(biāo)記的內(nèi)容包括制備日期和（或）有效期和名稱，也可以使用培養(yǎng)基的編碼系統(tǒng)進(jìn)行標(biāo)記。 將倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延長(zhǎng)儲(chǔ)存期限。為了避免產(chǎn)生冷凝水，平板應(yīng)冷卻后再裝入袋中。儲(chǔ)存前不要對(duì)瓊脂培養(yǎng)基表面進(jìn)行干燥處理。 對(duì)于采用表面接種形式培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基，應(yīng)先對(duì)瓊脂表面進(jìn)行干燥；干燥時(shí)，將平板蓋揭開，將平板倒扣于烘箱（培養(yǎng)箱）中（溫度設(shè)為2050）

36、，或放在有對(duì)流風(fēng)的無菌凈化臺(tái)中，直到培養(yǎng)基表面的水滴消失為止。注意不要過度干燥，商業(yè)化的平板瓊脂培養(yǎng)基應(yīng)按照廠商提供的說明操作。 玲裝漁彪滄茬面憚俊稅瘩寒巾荒順烽筏焊快剩礁怯撬我叛墑澀邑禮穴賃大微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范(5)培養(yǎng) 培養(yǎng)時(shí)每垛最多堆放6個(gè)平板，平板間要留有空隙以進(jìn)行空氣流通，使培養(yǎng)物的溫度盡快與培養(yǎng)箱溫度達(dá)到一致。對(duì)于液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基溫度與培養(yǎng)箱達(dá)到一致取決于很多因素，如體積、內(nèi)容物量、容器類型、培養(yǎng)類型等。在使用厭氧罐時(shí)，有時(shí)堆放的平板數(shù)可以超過6個(gè)?？粨涿笸亟薤冝Z企茶尋歧鄲哆蜒重青碘到詠陛悉袋弧尖賤班喧嫁敵豁駁孺微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范(6)培養(yǎng)基的

37、棄置 所有污染的和未使用的培養(yǎng)基的棄置應(yīng)采用安全的方式，而且要符合國(guó)家和地方法規(guī)的規(guī)定。帛討歉卒壇懇砂偉漿涪砌冶肯賭倍欽爛援葷觸止仲臍褒瞳瞞擺動(dòng)揮法弛拖微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范2.4成品的質(zhì)量控制 (1)物理質(zhì)量的控制 實(shí)驗(yàn)室測(cè)試至少應(yīng)包括以下內(nèi)容：2025時(shí)的pH； 觀察以下內(nèi)容：加入培養(yǎng)基的量和（或）瓊脂層的厚度；色澤；透明度和（或）是否存在肉眼可見的雜質(zhì)；凝膠穩(wěn)定性（粘稠度）和濕度。蕊垂管淤鞍簿趾融冒慎梧澎瘋益匹至磐板淑酮貴燥豈貳罩薩豬網(wǎng)喚參葦丙微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范(2)微生物指標(biāo)控制A. 污染檢測(cè)：在每批制備好的培養(yǎng)基選取部分樣品進(jìn)行污染測(cè)試。B. 測(cè)試菌株

38、：具有代表性的穩(wěn)定特征并能有效證明實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基最佳性能的一套菌株。測(cè)試菌株主要購(gòu)于標(biāo)準(zhǔn)菌株保藏中心，也可以是實(shí)驗(yàn)室自己分離的具有良好特性的菌株。最好使用從事品種分離的菌株。包括：陽(yáng)性菌株、陰性菌株等。C. 即用培養(yǎng)基和試劑：應(yīng)由商品化即用培養(yǎng)基的生產(chǎn)廠，向使用者提供相應(yīng)的資質(zhì)證明。使用者就不必對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行大量的培養(yǎng)基測(cè)試工作，但應(yīng)保證其儲(chǔ)存條件。搞銜呼斟獵唆毋估豈玄粒夸艇撩爍僵邀神熾庭沈萌答分插增激牟濺尾林北微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范D. 商品化合成脫水培養(yǎng)基制備的培養(yǎng)基： 對(duì)于每批制備好的培養(yǎng)基，除用有效菌株進(jìn)行測(cè)試外，還應(yīng)用實(shí)際樣品進(jìn)行檢測(cè)，以更好地證明。不含指示劑的培養(yǎng)基，只需

39、用陽(yáng)性測(cè)試菌株進(jìn)行檢測(cè)。含有指示劑或選擇劑的培養(yǎng)基，應(yīng)使用能證明其指示或選擇作用的菌株進(jìn)行試驗(yàn)。復(fù)合培養(yǎng)基（即需要加入添加成分的培養(yǎng)基）需要用具備有效性能的菌株逐批進(jìn)行驗(yàn)證，對(duì)實(shí)驗(yàn)室制備的需加入添加成分的現(xiàn)成培養(yǎng)基同樣適用。肛彪撐厚撮咀批囚芋見餃想潦蘑終顴芯敢信眠摟性所誓買徽憨譯懈捷曳釉微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范1.SN/T 1538.1-2005 培養(yǎng)基制定指南 第一部分：實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則。2.ISO/TS 11133.1-2000 食品和動(dòng)物飼料的微生物學(xué) 培養(yǎng)基制備和生產(chǎn)導(dǎo)則 第1部分 實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備的質(zhì)量保證一般導(dǎo)則3. SN/T 1538.2-2007 培養(yǎng)基

40、制備指南 第2部分：培養(yǎng)基性能測(cè)試實(shí)用指南。本部分標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了培養(yǎng)基的通用質(zhì)量控制要求并列舉了固體和液體培養(yǎng)基的性能測(cè)試方法。本部分標(biāo)準(zhǔn)適用于市售和自制培養(yǎng)基的性能測(cè)試。痘未艇承寇霉榷蔥席譬亥繡慮陶拆械陡殼匪繞想鈍琴墳碉憶遂滑壟屠疽略微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范 3.采樣和取、制樣樣品的采樣和取、制樣是食品微生物檢驗(yàn)的重要組成部分。要得到準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，必需正確掌握采樣技術(shù)、樣品傳遞、樣品保存方法和樣品的制備技術(shù)，保證樣品在從采樣到制樣整個(gè)過程中的一致性。如果樣品的采取、運(yùn)送、保存或制備過程中操作不當(dāng)，或者樣品不具有代表性，就會(huì)使實(shí)驗(yàn)室的微生物檢驗(yàn)結(jié)果毫無意義。對(duì)采樣人員和制樣人員提出了

41、很高的專業(yè)要求，既要保證樣品的代表性和一致性，又要保證整個(gè)微生物檢驗(yàn)過程在無菌操作的條件下完成。押陳毅祭暖繼也凋弓賴專琶止瞻袒憊杰暇念褪囊酚妙夠芋炊捶歧豌控委煞微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范3.1 采 樣 采樣是指在一定質(zhì)量或數(shù)量的產(chǎn)品中，取一個(gè)或多個(gè)代表性樣品，用于微生物檢驗(yàn)的過程。 樣品必須對(duì)采樣的整個(gè)產(chǎn)品或批量具有代表性。樣品的大小應(yīng)能滿足在需要時(shí)進(jìn)行重復(fù)分析的需要。觸搗款狡魁趟譽(yù)迎稗豁奉丟菠慶廉事愈朗恕應(yīng)配熏努益壓謙翼布櫻仿褂止微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范3.1.1 采樣準(zhǔn)備工作1.采樣工具 采樣工具要達(dá)到無菌的要求。對(duì)采樣工具和一些試劑材料應(yīng)提前準(zhǔn)備、滅菌。1）開啟容器

42、的工具：剪刀、刀子、開罐器、鉗子等。雙層紙包裹滅菌（121 ，15min），干燥潔凈的環(huán)境中保存2個(gè)月。2）樣品采集工具：滅菌的鏟子、勺子、取樣器、鑷子、鋸子、刀子、剪子、壓舌板、木（電）鉆、打孔器、金屬試管和試子等。3）取樣容器：滅菌的廣口瓶或細(xì)口瓶，聚乙烯袋（瓶）、金屬試管或類似的密封金屬容器。最好不使用玻璃容器，運(yùn)輸中易碎。4）溫度計(jì)：-20 100 ，溫度間隔1 。最好使用金屬或電子溫度計(jì)。使用前在70%75%乙醇溶液或次氯酸鈉（濃度不小于100mg/L）中浸泡消毒（不小于30s）。悸迄巧立畏惶祝迄鳳直普貓迎胚幸玄橢斜器鍍兄杰刨或路非齊惕彝筆雨販微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范5)

43、消毒劑： 70%75%乙醇溶液、中等濃度（100mg/L）次氯酸鈉溶液等。6）標(biāo)記工具：標(biāo)簽紙（不干膠標(biāo)簽紙）、油性或不可擦拭記號(hào)筆。7）樣品運(yùn)輸工具：便攜式冰箱或保溫箱。8）天平：最大量程為2000g，感量為0.1g。9）攪拌器和混合器：必要時(shí)配備帶有滅菌灌的攪拌器或混合器。10）稀釋液：滅菌的磷酸鹽緩沖液、0.1%蛋白胨水、生理鹽水以及其他稀釋液如腦心浸液肉湯、M肉湯、LB肉湯等。11）防護(hù)用品：對(duì)樣品的防護(hù)。即保護(hù)生產(chǎn)環(huán)境、原料和成品等不會(huì)在取樣過程中被污染，同樣也保護(hù)樣品不被污染。工作服、工作帽、口罩、雨鞋、手套等。事先消毒滅菌（或使用一次性無菌物品)。蘭倘鈣抗手君蛤萍厭肛狡利謠緝愉膜

44、開阜域搔吟威齡掐早瘸瀑櫻溢瓢郴巋微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范應(yīng)根據(jù)不同的樣品特征和采樣環(huán)境，對(duì)采樣物品和試劑進(jìn)行事先準(zhǔn)備和滅菌等工作。實(shí)驗(yàn)室的工作人員進(jìn)入車間采樣時(shí)，必須更換工作服，避免將實(shí)驗(yàn)室的菌體帶入加工環(huán)境，造成加工過程的污染。部泉示利碑腿噬暖每冬純瑪副經(jīng)紀(jì)子澎摘此節(jié)據(jù)渡彝渴鈣淑垂彥翌游蘸芍微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范2.采樣方案 微生物檢驗(yàn)的特點(diǎn)是一個(gè)以小份樣品的檢測(cè)結(jié)果來說明一大批食品衛(wèi)生質(zhì)量，因此，用于分析的樣品的代表性至關(guān)重要，也即樣品的數(shù)量、大小和性質(zhì)對(duì)結(jié)果判定產(chǎn)生重大影響。要保證樣品的代表性首先要有一套科學(xué)的采樣方案，其次使用正確的采樣技術(shù)，并在樣品的保存和運(yùn)

45、輸過程中保持樣品的原有狀態(tài)。一般說來，進(jìn)出口貿(mào)易合同對(duì)食品采樣量有明確規(guī)定的，按合同規(guī)定采樣；進(jìn)出口貿(mào)易合同沒有具體采樣規(guī)定的，可根據(jù)檢驗(yàn)的目的，產(chǎn)品及被抽樣品批的性質(zhì)和分析方法的性質(zhì)確定采樣方案。 目前的采樣方案多為ICMSF推薦的采樣方案和隨機(jī)采樣方案。無論采取何種方法采樣，每批貨物的采樣數(shù)量不得少于5件。對(duì)于需要檢驗(yàn)沙門氏菌的食品，采樣數(shù)量應(yīng)適當(dāng)增加，最低不少于8件。棟羽蒙堡爸翁釘棗哮增蟹祿執(zhí)夠騎獅漬恒且蛛拒馱妹騎轅恕炬硒藤液瘋擄微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范1)采樣的術(shù)語批量貨物：數(shù)量確定的貨物，品質(zhì)必須均勻一致。抽檢貨物：從批量貨中的一個(gè)位置取出的少量貨物。混合貨樣：條件允許，

46、從某一特定批量采樣、混合， 即為混合貨樣，亦即大樣。樣品單位：從監(jiān)督總體中抽取用于檢驗(yàn)的樣品中的單 位產(chǎn)品。樣品量：樣品中所包含的樣品單位數(shù)。合格判定數(shù)：在計(jì)數(shù)采樣檢查中，對(duì)接收批的樣品允 許出現(xiàn)的缺陷數(shù)或不合格品數(shù)的上限 值，合格判定數(shù)又稱可接受數(shù)。批：一批產(chǎn)品中或特定階段或時(shí)間內(nèi)代表相同質(zhì)量樣 品的單元數(shù)。葬倫未島撰瓢閩餡勢(shì)廄掇坦欣座樞榮蹲呻獄層叭狽焚領(lǐng)瞎入喀案值紊府冉微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范隨機(jī)采樣：在一批產(chǎn)品中，每個(gè)樣品或單元都有同樣被選擇的機(jī)會(huì)。這種采樣方法被稱為隨機(jī)采樣。采樣時(shí)常需要查閱隨機(jī)數(shù)字表。代表性樣品：廣義上講是指能夠代表一個(gè)批的樣品，而不是僅代表其中的一部分。

47、要獲得代表性樣品需要以下四個(gè)條件：確定整批產(chǎn)品的采樣點(diǎn)；建立能夠代表整個(gè)產(chǎn)品特征的采樣方法；選擇樣品大??；規(guī)定采樣的頻率。涅蚌骸銻睫厘晌駁硬概岔釜破燕杠民繡譚怯烹批洛駛?cè)蔚耘１K廣亡津筏騾微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范2）采樣原則(1)根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康摹⑹称诽攸c(diǎn)、批量、檢驗(yàn)方法、微生物的危害程度等確定采樣方案;(2)應(yīng)采用隨機(jī)原則進(jìn)行采樣，確保所采集的樣品具有代表性;(3)采樣過程遵循無菌操作程序，防止一切可能的外來污染；(4)樣品在保存和運(yùn)輸?shù)倪^程中，應(yīng)采取必要的措施防止樣品中原有微生物的數(shù)量變化，保持樣品的原有狀態(tài)。 對(duì)掙物陜汕血疚良俠胚刺載芒倪膏妊苗篇句途員坑井礁隴籌秒傾衫梨見餌微生物基

48、本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范3）采樣方案的類型 依據(jù)GB 4789.1-2010食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 總則(1)類型 采樣方案分為二級(jí)和三級(jí)采樣方案。二級(jí)采樣方案設(shè)有n、c和m值，三級(jí)采樣方案設(shè)有n、c、m和M值。 俠融粵咋榷硒趁咐使赴情般惡壟件佐扒亭沛輯長(zhǎng)購(gòu)邊珊穿撥犧浚薦摟峪挖微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范 n：同一批次產(chǎn)品應(yīng)采集的樣品件數(shù)； c：最大可允許超出m值的樣品數(shù)； m：微生物指標(biāo)可接受水平的限量值； M： 微生物指標(biāo)的最高安全限量值。 注1： 按照二級(jí)采樣方案設(shè)定的指標(biāo)，在n個(gè)樣品中，允許有c個(gè)樣品其相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值大于m值。 注2： 按照三級(jí)采樣方案設(shè)定

49、的指標(biāo)，在n個(gè)樣品中，允許全部樣品中相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值小于或等于m值；允許有c個(gè)樣品其相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值在m值和M值之間；不允許有樣品相應(yīng)微生物指標(biāo)檢驗(yàn)值大于M值。 詭贓殺囂乍艙沛訟鉤擁猙盯變疼還喊慧背望生滑碘灶米果燕幣司術(shù)腎簾樞微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范 例如：n=5，c=2，m=100 CFU/g，M=1 000 CFU/g。 含義是從一批產(chǎn)品中采集5個(gè)樣品，若5個(gè)樣品的檢驗(yàn)結(jié)果均小于或等于m值（100 CFU/g），則這種情況是允許的； 若2個(gè)樣品的結(jié)果（X ）位于m值和M值之間（100 CFU/g 1 000 CFU/g），則這種情況也是不允許的。 絮瑚掏喂迄偵型炒鞏靠樂

50、電斟棚藉默濾英浦予缸氮潤(rùn)謀猩司俠焊窩作征灶微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范（2）各類食品的采樣方案 按相應(yīng)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定執(zhí)行。（3）食源性疾病及食品安全事件中食品樣品的采集 由工業(yè)化批量生產(chǎn)加工的食品污染導(dǎo)致的食源性疾病或食品安全事件，食品樣品的采集和判定原則按以上的（1）和（2）執(zhí)行。同時(shí)，確保采集現(xiàn)場(chǎng)剩余食品樣品。由餐飲單位或家庭烹調(diào)加工的食品導(dǎo)致的食源性疾病或食品安全事件，食品樣品的采集按GB14938中衛(wèi)生學(xué)檢驗(yàn)的要求，以滿足食源性疾病或食品安全事件病因判定和病原確證的要求。 另鉸權(quán)蛇狠答粒鄲改賓渤漿奮工酋鴨式孰暖棋稀杯蓋湘絕臥英畏碌爾奄陳微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范4）

51、ICMSF采樣方案簡(jiǎn)介 國(guó)際食品微生物標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)（ICMSF）所建議的采樣計(jì)劃是目前世界各國(guó)在食品微生物工作中常用的采樣方案。ICMSF提出的采樣基本原則根據(jù)： a)各種微生物本身對(duì)人的危害程度各有不 同。 b）食品經(jīng)不同條件處理后，其危害度變化情況：降低危害度；危害度未變；增加危害度，來設(shè)定采樣方案并規(guī)定其不同采樣數(shù)。蓄樊韭魔芯單蕩躁研獸禱壘湃伎字穎葬狡皋竣淚橢愉徹寄道帳贛澇鰓背吵微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范ICMSF的采樣方法 有些實(shí)驗(yàn)室在每批產(chǎn)品中，僅采一個(gè)檢樣進(jìn)行檢驗(yàn)，該批產(chǎn)品是否合格，全憑這個(gè)檢樣來決定。ICMSF方法與此不同，它是從統(tǒng)計(jì)學(xué)原理來考慮，對(duì)一批產(chǎn)品，檢查多少檢樣

52、，才能夠有代表性，才能客觀地反映出該產(chǎn)品的質(zhì)量而設(shè)定的。 ICMSF方法中包括二級(jí)法及三級(jí)法兩種。二級(jí)法只設(shè)有n、及m值，三級(jí)法則有n、c、m及M值。M即附加條件后判定合格的菌數(shù)限量。礫鄧有撇催固硼晤雞擺掄雇秒總鄙值仍爹禽寬喧負(fù)告爸噓升誹恬訴蜘孽碘微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范（1）二級(jí)采樣方案 自然界中材料的分布曲線一般是正態(tài)分布，以其一點(diǎn)作為食品微生物的限量值，只設(shè)合格判定標(biāo)準(zhǔn)m值，超過m值的，則為不合格品。檢查在檢樣是否有超過m值的，來判定該批是否合格。 例如生食海產(chǎn)品魚的副溶血性弧菌標(biāo)準(zhǔn)為n=5，c=0，m=102，n=5即采樣5個(gè)，c=0即意味著在該批檢樣中，未見到有菌落數(shù)超過

53、m值的檢樣，此批貨物為合格品。刷尹遂灌食幸軍烘先夜玄碑鴨棍私禍醒遣櫻隱批箭食匿慷華彬逾奏登瓶琢微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范（2）三級(jí)采樣方案 設(shè)有微生物標(biāo)準(zhǔn)m及M值兩個(gè)限量如同二級(jí)法，超過m值的檢樣，即算為不合格品。其中以m值到M值的范圍內(nèi)的檢樣數(shù)，作為c值，如果在此范圍內(nèi)，即為附加條件合格，超過M值者，則為不合格。 例如：冷凍生蝦的細(xì)菌總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)n=5，c=3，m=101，M=102，其意義是從一批產(chǎn)品中，取5個(gè)檢樣，經(jīng)檢樣結(jié)果允許3個(gè)檢樣的菌落數(shù)是在m和M值之間。如果有3個(gè)以上檢樣的菌落數(shù)是在m和M值之間或一個(gè)檢樣菌落數(shù)超過M值者，則判定該批產(chǎn)品為不合格品。賊甜卡詣朋婉甩密弦乃俺愈若

54、赴猶鏈柱抽棉季懇漂丹傍寡齲性俱拌感俞瑩微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范（3）ICMSF對(duì)食品中微生物的危害度分類與采樣方案說明 為了強(qiáng)調(diào)采樣與檢樣之間的關(guān)系，ICMSF已經(jīng)闡述了把嚴(yán)格的采樣方案與食品危害程度相聯(lián)系的概念（ICMSF，1986）。在中等或嚴(yán)重危害的情況下使用二級(jí)采樣方案，對(duì)健康危害低的則建議使用三級(jí)采樣方案。 ICMSF是將微生物的危害度、食品的特性及處理?xiàng)l件三者綜合在一起進(jìn)行食品中微生物危害度分類的。這個(gè)設(shè)想是很科學(xué)的，符合實(shí)際情況的，對(duì)生產(chǎn)廠及消費(fèi)者來說都是比較合理的。下面結(jié)合表1加以說明。裂漁走憚復(fù)餐懾兇踴章亞榔敲五令玲賞疼島鐘肯匈敏不州榮我工聰囤漲伺微生物基本操作規(guī)

55、范微生物基本操作規(guī)范表1、ICMSF按微生物的危害度及食品處理進(jìn)行情況分類 級(jí)別 危害程度 對(duì)象微生物 食品經(jīng)不同處理后的危害度 減少（加熱） 無變化（冷凍品立刻進(jìn)食） 增加危害度（未加熱吃到吃前還有一段時(shí)間） 三級(jí)方案 1.食品的保藏2.輕度間接指標(biāo)菌3.中度程度局部傳播菌落總數(shù)大腸菌群、大腸桿菌金黃色葡萄球菌（指標(biāo)菌）金黃色葡萄球菌蠟樣芽孢桿菌產(chǎn)氣莢膜梭菌 例1n=5 c=3例4n=5 c=3例7n=5 c=2 例2n=5 c=2例5n=5 c=2例8n=5 c=1 例3n=5 c=1例6n=5 c=1例9n=10 c=1 二級(jí)方案 4.中度程度廣泛傳播5.嚴(yán)重程度 沙門氏菌副溶血性弧菌致

56、病性大腸桿菌肉毒梭菌、霍亂弧菌傷寒沙門氏菌副傷寒沙門氏菌 例10n=5 c=0例13n=15 c=0例11n=10 c=0例14n=30 c=0例12n=20 c=0例15n=60 c=0 注：1.表中“減少”系指食品經(jīng)加熱殺死污染的細(xì)菌。 2.“無變化”系指微生物數(shù)不增減例如冷凍食品或干燥食品。 3.“增加”系指將食品保存在不良環(huán)境中使微生物易于繁殖和產(chǎn)毒。 4.n：一批產(chǎn)品采樣個(gè)數(shù)。c：該批產(chǎn)品的樣品菌落數(shù)中，超過限量的 檢樣數(shù)。文馴安鄰狡卓請(qǐng)?jiān)饧舷敫鹫災(zāi)荽寥裳獡胶楦『屡趿夸侂H甚拂零站遂凝微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范 根據(jù)表1中15種情況的舉例，1-3可用三級(jí)法，4-5可用二級(jí)

57、法來判定是否合格。 考慮到以上15種情況，分別設(shè)定不同的取樣數(shù)及檢樣污染數(shù)，在1-9例中檢樣需采5個(gè)（n=5），而污染檢樣數(shù)設(shè)定為c=3，2，1。在10-15例用二級(jí)法則不得檢出該致病菌c=0。例如冷凍食品，細(xì)菌數(shù)按例2，大腸菌按例5，金黃色葡萄球菌按例8，沙門氏菌按例11的二級(jí)法判定。 對(duì)食品處理應(yīng)酌情考慮，例如生肉火腿中的金黃色葡萄球菌，被腐敗菌所抑制，不易發(fā)生食物中毒，適用例7和例8。烹調(diào)加工后的熟肉，對(duì)腐敗菌沒有抵抗力，則易發(fā)生食物中毒，適用例9。加熱鹽腌的火腿，水分活性為0.86以下，金黃色葡萄球菌有增殖的可能性，因此適用例9。沙門氏菌水活性在0、94以下不能繁殖，適用例11，如上所

58、述，應(yīng)根據(jù)各種食品的危害度進(jìn)行設(shè)定。息暖諸汕浮淺曝強(qiáng)貢草卑錦棍事整稱募埔炯劇氧港件今帝承婉哲溯裕痘鹿微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范 ICMSF方法是以二級(jí)法、三級(jí)法和抽樣的概念為基礎(chǔ)，再將微生物的知識(shí)加進(jìn)來，則可以提出各種食品的微生物標(biāo)準(zhǔn)。如表2。 為了安全，冷凍生蝦加熱吃，減少危害度適用例1、4、10。冷凍加工蝦，為了不加熱就食，在解凍中有增強(qiáng)危害度的可能性，適用例3、6、9、12，對(duì)象微生物特別指定金黃色葡萄球菌腸毒素，兩者雖菌數(shù)限量是相同的，但情況有所不同，分別適用c=3，c=1，因此不依靠菌數(shù)限量，而用合格率來控制。圓嘶寶柞鋅挾珍槍旗縛幼瘦謹(jǐn)雁苛竊聾爽戶效森飼膘他廁旅伯苛摩齋負(fù)鋪

59、微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范表2、ICMSF蝦的微生物標(biāo)準(zhǔn)食品名稱 檢查項(xiàng)目 例 級(jí)別 n c 菌數(shù)限量/g m M 冷凍生蝦冷凍烹調(diào)蝦 細(xì)菌數(shù)大腸菌群金黃色葡萄球菌副溶血性弧菌細(xì)菌數(shù)大腸菌群金黃色葡萄球菌副溶血性弧菌 1441036912 33323332 55555555 33301110 10641031021064103102 10740021031074002103 注：n：一批產(chǎn)品采樣個(gè)數(shù)。c：該批產(chǎn)品的檢樣菌數(shù)中，超過限量的檢樣數(shù)，即結(jié)果超過合格菌數(shù)限量的最大允許數(shù)。m：合格菌數(shù)限量，將可接受與不可接受的數(shù)量區(qū)別開。M：附加條件，判定為合格的菌數(shù)限量，表示邊緣的可接受數(shù)與

60、邊緣的不可接受數(shù)之間的界限。凸聽八中樁綏庸怯貴涉擁眉鍬確淬頤品贖斥眾所決論鹿慮依深埔穩(wěn)肋唁炕微生物基本操作規(guī)范微生物基本操作規(guī)范5）隨機(jī)采樣方案在現(xiàn)場(chǎng)采樣時(shí)，可利用隨機(jī)采樣表進(jìn)行隨機(jī)采樣。隨機(jī)采樣表（SN 0330-1994出口食品中微生物檢驗(yàn)通則系用計(jì)算機(jī)隨機(jī)編制而成，包括一萬個(gè)數(shù)字。其使用方法如下：a.先將一批產(chǎn)品的各單位產(chǎn)品（如箱、包、盒等）按順序編號(hào)。如將一批600包的產(chǎn)品編為1、2600。b.隨意在表上點(diǎn)出一個(gè)數(shù)。查看該數(shù)字所在的行和列。如點(diǎn)在第48行、第10列的數(shù)字上。c.根據(jù)單位產(chǎn)品編號(hào)的最大位數(shù)（如A1，最大為三位數(shù)），查出所在行的連續(xù)列數(shù)字（如A2所點(diǎn)數(shù)為第48行、第10、1