VEGF檢測在胸部惡性腫瘤中臨床意義備課講稿

1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。VEGF檢測在胸部惡性腫瘤中臨床意義-VEGF檢測在胸部惡性腫瘤中臨床意義馬晨光（黑龍江省醫(yī)院胸外科，150036）摘要：目的：探討檢測胸部惡性腫瘤患者外周血中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的臨床意義。方法：32例健康志愿者作為正常對照組，45例肺癌患者，30例食管癌患者。采用ELISA方法檢測外周血VEGF的含量，比較各分組間的差異。結(jié)果：肺癌、食管癌陽性觀察組血清VEGF陽性表達(dá)率及含量明顯高于正常對照組（P0.05）,VEGF的陽性表達(dá)率及含量在按不同的病理生理特征分組的肺癌、食管癌患者中表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)

2、學(xué)差異（P0.05）。結(jié)論：VEGF水平對肺癌、食管癌患者有診斷價(jià)值。血清VEGF水平與肺癌、食管癌的病理生理特征、惡性行為密切相關(guān)。檢測血清VEGF對于判定肺癌、食管癌病理生理特征有一定參考意義。VEGF可作為臨床常用檢測食管癌、肺癌的血清檢測物。關(guān)鍵詞：血管內(nèi)皮生長因子，肺癌，食管癌，ELISATheClinicalValueofDetectionofSerumLevelofVEGFinEsophagealCarcinomaMAChen-guang(TheProvincalHospitalofHeilongjiang150036)Abstract：Objective:Toresearcht

3、heclinicalvalueforthoracicmalignanttumorsbydetectionoftheserumlevelofVEGF.Methods:ThelevelofserumVEGFwasdeterminedbyusingenzyme-linkedimmunosorbentassayin45patientswithlungcarcinomaand30patientswithesophagealcarcinoma,comparedwiththelevelsofthecontrolsinwhichthereare32volunteersforhealthexamination,

4、andthentheresultswereanalyzed.Results:TheserumlevelsandpositiveratesofVEGFinthepositivegrouparehigherthanthatinhealthygroupwithstatisticsignificantdifference（P0.05）;TherearesignificantdifferenceintheserumlevelsandpositiveratesofVEGFinthedifferentgroupsdividedonpathophysiologiccharactersoflungcarcino

5、maandesophagealcarcinoma（P0.05）.Conclusion:ThedetectionofserumVEGFmaybevaluabletothediagnosisoflungcarcinomaandesophagealcarcinoma.TheserumlevelofVEGFinlungcarcinomaandesophagealcarcinomapatientswerestronglycorrelatedtothepathophysiologiccharactersandmalignantbehavioroftumor.Theremaybesomereferencev

6、aluefortheprognosisofthepathophysiologiccharactersoflungcarcinomaandesophagealcarcinomabythecombineddetectionofserumVEGF.KeyWords:VascularEndothelialGrowthFactor;Lungcarcinoma;Esophagealcarcinoma，enzymelinkedimmunosorbentassay肺癌、食管癌是常見的胸部惡性腫瘤，也是人類最常見的惡性腫瘤之一。我國是肺癌、食管癌的高發(fā)國家，近年來二者的發(fā)病率逐年升高。食管癌是消化道常見的惡性腫

7、瘤之一，高發(fā)年齡在6064歲。我國是世界上食管癌發(fā)病率和死亡率最高的國家，全世界每年食管癌新發(fā)病例約31.04萬，而我國占16.72萬，其中河南省林縣男性食管癌發(fā)病率高達(dá)478.87/10萬，是世界高發(fā)地區(qū)之一。肺癌是最常見的肺部原發(fā)性惡性腫瘤。世界上至少有35個(gè)國家的男性肺癌為各癌腫死因中第一位，女性僅次于乳腺癌的死亡人數(shù)。本病多在40歲以上發(fā)病，發(fā)病年齡高峰在6079歲之間。男女患病率為2.3:1。種族、家屬史與吸煙對肺癌的發(fā)病均有影響。在我國，肺癌也已在男性中占常見惡性腫瘤的第一位，在女性中占第二位。肺癌、食管癌發(fā)病隱匿，早期診斷比較困難，待患者自覺有明顯臨床癥狀時(shí)，往往已發(fā)展到中晚期，

8、而且預(yù)后很差，嚴(yán)重威脅人類的生命與健康，如何實(shí)施有效的早期篩選方案，探討腫瘤的發(fā)生和發(fā)展機(jī)理是目前研究者關(guān)注的重要問題。本研究試圖通過統(tǒng)計(jì)正常對照組及肺癌、食管癌患者的外周血VEGF含量，分析VEGF在正常對照組及肺癌、食管癌患者中含量和陽性表達(dá)情況，以及VEGF在不同病理生理分組中的差異，研究它們的臨床意義及相互關(guān)系，希望能夠?qū)EGF作為臨床上有參考意義的常規(guī)血清檢測物。1資料與方法1.1臨床資料實(shí)驗(yàn)組：全部病例均為我科從2006年9月至2009年1月收治，經(jīng)臨床明確診斷（包括鋇餐透視、胸部X線、胸部CT、氣管鏡、胃鏡、脫落細(xì)胞學(xué)、病理切片證實(shí)等）為肺癌、食管癌患者。并根據(jù)我國1997年肺

9、癌、食管癌臨床病理分期標(biāo)準(zhǔn)確定的臨床分期。剔除不符合標(biāo)準(zhǔn)病例，共75例，其中肺癌45例，食管癌30例。肺癌組年齡3679歲，平均60歲。腫瘤3cm患者19例，腫瘤3cm患者26例；按TNM分組：=1*ROMANI+=2*ROMANII期患者30例，=3*ROMANIII+=4*ROMANIV期患者15例；低分化癌組21例，中高分化癌組24例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組18例，已有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組27例。食管癌組年齡3975歲，平均58歲。腫瘤3cm患者13例，腫瘤3cm患者17例；按TNM分組：=1*ROMANI+=2*ROMANII期患者11例，=3*ROMANIII+=4*ROMANIV期患者19例；低分

10、化癌組10例，中高分化癌組20例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組12例，已有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組18例。正常對照組：共32例，來源于健康志愿者，男21例，女11例，3070歲。無心、肺、肝、腎主要臟器疾患，無家族腫瘤病史。剔除標(biāo)準(zhǔn)：近期有嚴(yán)重感染、手術(shù)、創(chuàng)傷史患者；服用類固醇藥物及有類風(fēng)濕患者；妊娠、月經(jīng)期婦女；已進(jìn)行過放、化療的肺癌、食管癌患者；貧血，Hb90g/L。1.2方法標(biāo)本的收集與保存VEGF檢測所需血清于手術(shù)治療前應(yīng)用加促凝劑的真空、分離膠采血管采取晨起空腹靜脈血3.5mL，室溫放置1015分鐘后，2500r/min離心10分鐘，分離血清，將標(biāo)本分別放入Eppendorf管中，于20保存待用。檢測方法1、

11、檢測試劑與方法VEGF檢測所需試劑盒購自博奧生物公司。應(yīng)用ELISA法檢測，檢測波長450nm。2、設(shè)備（1）酶標(biāo)儀：StatFax-2100酶標(biāo)儀。（2）血液分析儀：Sysmex公司SF-3000自動血液分析儀。（3）結(jié)果判定VEGF陽性界值采用正常人95%可信區(qū)間上限：107.6pg/mL（x+1.96s）；1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)應(yīng)用簡明統(tǒng)計(jì)10.3統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析處理。采用的統(tǒng)計(jì)方法為X2檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1VEGF的陽性表達(dá)情況通過上述試驗(yàn)方法、試劑及設(shè)備檢測血清VEGF含量，記錄檢測數(shù)值。將超過各項(xiàng)指標(biāo)上限的病例記為陽性病例。統(tǒng)計(jì)VEGF在正常對照組、肺癌組、食管癌組以及按不同病

12、理生理特征分組的各組中的陽性表達(dá)情況，詳見表1、2。表1VEGF在所有觀察對象的陽性表達(dá)情況Table1ThepositiveratesofserumVEGFinallobjectsofobservation類別nVEGF陽性n%p正常組32412.50肺癌組452760.00P0.05=0.0000食管癌組301653.33P0.05=0.00062.2VEGF的含量比較肺癌組、食管癌組與正常組比較：肺癌組、食管癌患者血清VEGF含量均較正常對照組顯著升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）不同病理生理特征分組的肺癌、食管癌患者比較：肺癌組：血清VEGF在淋巴結(jié)已轉(zhuǎn)移組及=3*ROMANIII+=

13、4*ROMANIV期組含量明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），而不同腫瘤大?。≒=0.139）及不同分化程度（P=0.714）VEGF含量無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。食管癌組：血清VEGF含量在腫瘤長度3cm組、=3*ROMANIII+=4*ROMANIV期組、已有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中含量升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），而不同分化程度（P=1.000）VEGF含量無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。表2VEGF在不同臨床病理生理分組的陽性表達(dá)情況Table2ThepositiveratesofserumVEGFinthedifferentgroupsgroupedbytheclinicalpathophysiolo

14、gicalcharacteristicsofthoracicmalignanttumors類別nVEGF陽性n%P肺癌組腫瘤大小3cm19947.373cm261869.23P0.05=0.1392TNM分期=1*ROMANI+=2*ROMANII期301343.33=3*ROMANIII+=4*ROMANIV期151493.33P0.05=0.0012分化低分化211257.14中高分化241562.50P0.05=0.7144淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移18633.33已轉(zhuǎn)移272177.78P0.05=0.0029食管癌組腫瘤大小3cm13323.083cm171376.47P0.05=0.0086TN

15、M分期=1*ROMANI+=2*ROMANII期11218.18=3*ROMANIII+=4*ROMANIV期191473.68P0.05=0.0068分化低分化10550.00中高分化201155.00P0.05=1.0000淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移12216.67已轉(zhuǎn)移181477.78P0.05=0.00222.3肺癌組與食管癌組比較肺癌組血清VEGF含量與食管癌組VEGF含量比較，二者無顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）。3討論腫瘤血管形成不但為腫瘤細(xì)胞生長提供條件,也使腫瘤細(xì)胞較容易地通過尚不成熟的新生血管進(jìn)入血流進(jìn)行遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。某些惡性腫瘤為了獲得足夠的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì),自身可以釋放一些化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)新

16、生血管的形成,血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VascularendothelialgrowthfactorVEGF)被認(rèn)為是最重要的物質(zhì)之一,VEGF是一種由腫瘤細(xì)胞分泌并特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的一種血管生長因子,對血管形成有較強(qiáng)誘導(dǎo)性1。VEGF是眾多血管生成因子中針對內(nèi)皮細(xì)胞特異性最高，促血管生成作用最強(qiáng)的有絲分裂素，起著中心調(diào)控作用，它直接參與誘導(dǎo)腫瘤的血管生成2,3，是腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)，近年來受到越來越多的重視。VEGF最早由Senger等在腫瘤細(xì)胞分泌物中發(fā)現(xiàn)。VEGF使血管通透性增加，可引起腫瘤血管中的蛋白質(zhì)外滲，有助于腫瘤生長、轉(zhuǎn)移，當(dāng)VEGF被抑制時(shí)，腫瘤新生血管及腫瘤生長將受到

17、抑制。血清中的VEGF可能是腫瘤細(xì)胞、血小板、白細(xì)胞共同分泌的結(jié)果，病例選擇中應(yīng)用剔除標(biāo)準(zhǔn)可一定程度上地減少腫瘤以外因素對測定結(jié)果的影響。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：肺癌患者血清VEGF含量及陽性表達(dá)較正常對照組顯著增高（P0.001），這可能是由于腫瘤細(xì)胞分泌的VEGF隨穿過血管壁的血液細(xì)胞進(jìn)入血液循環(huán);或是由于VEGF使血管壁通透性增加,從而彌散到血液中。據(jù)報(bào)道,VEGF和腫瘤血管計(jì)數(shù)可作為肺癌的獨(dú)立預(yù)后因素4,通過比較不同臨床病理特征的肺癌患者血清VEGF的含量。發(fā)現(xiàn)不同腫瘤大小及不同分化程度VEGF含量無顯著性差異,但血清VEGF含量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤臨床分期密切相關(guān),提示VEGF在肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

18、及臨床分期進(jìn)展過程中起重要作用。Ellis5等認(rèn)為,腫瘤細(xì)胞要完成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移必須經(jīng)歷以下幾個(gè)過程。腫瘤細(xì)胞進(jìn)入淋巴結(jié);腫瘤細(xì)胞從基質(zhì)脫落時(shí)細(xì)胞凋亡得到抑制;腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視;轉(zhuǎn)移灶中血管形成。由此可見,腫瘤細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移受到多個(gè)環(huán)節(jié)的影響,并可能與VEGF家族的其他成員VEGF-B，VEGF-D，VEGF-C及其他血管生長因子的調(diào)節(jié)有關(guān)6。文獻(xiàn)報(bào)道VEGF表達(dá)與肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)7。本研究發(fā)現(xiàn)血清VEGF含量在已有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中含量升高,提示VEGF可通過血循環(huán)而影響癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。我們推測,VEGF在促進(jìn)肺癌血管生成,促使血管增加的同時(shí)出現(xiàn)大量結(jié)構(gòu)和功能異常的腫瘤血管,由于這類

19、新生血管管壁不完整,缺乏基膜,而VEGF是已知最強(qiáng)的血管滲透劑,能增加微血管(特別是毛細(xì)血管后靜脈和小靜脈)的滲透性,加之瘤區(qū)缺乏有效的淋巴循環(huán),導(dǎo)致瘤內(nèi)及瘤周間質(zhì)水腫,使組織間隙變寬和開放,大量組織間液在回流過程中引導(dǎo)瘤細(xì)胞向毛細(xì)淋巴管方向運(yùn)動,最后隨組織液進(jìn)入毛細(xì)淋巴管,故最終導(dǎo)致淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移。Fontanini等8采用RT-PCR及原位雜交方法研究VEGF121mRNA，VEGF165mRNA及VEGF189mRNA在非小細(xì)胞肺癌的表達(dá)情況時(shí)發(fā)現(xiàn),在3種VEGF亞型中僅有VEGF121mRNA表達(dá)與肺門及縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。VEGF121是VEGF最主要的可溶形式9,因此我們認(rèn)為血清

20、VEGF含量可以預(yù)測肺癌淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況。此外本研究還發(fā)現(xiàn)隨著肺癌臨床分期的進(jìn)展,血清VEGF含量也隨之增高,提示血清VEGF含量可作為評價(jià)肺癌臨床分期進(jìn)展的一種有價(jià)值的指標(biāo)。目前國內(nèi)外學(xué)者紛紛研究證實(shí)VEGF是食管癌轉(zhuǎn)移的重要調(diào)節(jié)因子之一。研究發(fā)現(xiàn),VEGF水平與食管癌微血管密度、外浸程度、轉(zhuǎn)移及預(yù)后等密切相關(guān)10，11。Kitadai等檢測了119例食管癌中VEGF的表達(dá),結(jié)果VEGF表達(dá)率為59.7%,且VEGF的表達(dá)與腫瘤浸潤深度、腫瘤分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究得到了類似的結(jié)論。食管癌患者血清VEGF含量及陽性表達(dá)較正常對照組顯著增高（P0.001），且血清VEGF含量在腫瘤長度

21、3cm組、=3*ROMANIII+=4*ROMANIV期組、已有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中含量升高（P0.05），說明VEGF在食管癌中有過量的表達(dá)，并通過對微血管的生成促進(jìn)作用影響食管癌腫瘤的生長。因此，VEGF一方面促進(jìn)了腫瘤的血管新生，另一方面也間接促進(jìn)了腫瘤淋巴系統(tǒng)的增生。豐富的微血管系統(tǒng)和淋巴管網(wǎng)使腫瘤具有高度的增殖活性和侵襲性。腫瘤越大，表面積越大，其侵及附近微血管或淋巴管的可能性相對也越大。癌細(xì)胞可以直接侵入鄰近的微血管或淋巴管或通過靜脈一淋巴管交通支形成血路或淋巴路轉(zhuǎn)移。VEGF還可以誘導(dǎo)纖維蛋白溶解酶原激活劑及其在內(nèi)皮細(xì)胞上的受體，進(jìn)而通過纖維蛋白溶解酶系統(tǒng)以及金屬蛋白酶降解腫瘤邊緣的基

22、質(zhì)，擴(kuò)大原發(fā)腫瘤的侵襲性，增加淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性12。因此，在食管癌臨床病理分期中，隨著浸潤深度的增加和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)，VEGF呈升高趨勢，檢測食管癌患者血清VEGF水平方法不僅在食管癌診斷中有一定的意義，而且簡單易行，尚可較早地反映其發(fā)生進(jìn)展情況，有利于對治療措施的選擇和預(yù)后的判斷。研究證明VEGF與腫瘤的關(guān)系，為合理應(yīng)用抗VEGF藥物打造了腫瘤治療的一個(gè)嶄新平臺。抗VEGF治療是肺癌治療的一個(gè)嶄新領(lǐng)域,它具有特異性強(qiáng)、不易產(chǎn)生耐藥性、不受腫瘤細(xì)胞周期限制等優(yōu)點(diǎn),VEGF因其在腫瘤血管生成中的重要作用,而成為抗腫瘤血管生成的重要靶點(diǎn),具有良好的應(yīng)用前景。但是,抗腫瘤血管生成只能抑制腫瘤細(xì)胞

23、的生長和轉(zhuǎn)移,并不能完全消滅腫瘤細(xì)胞,一旦停藥腫瘤細(xì)胞又可恢復(fù)增殖,而且抗血管生成治療的靶向性問題、藥效監(jiān)測問題、與細(xì)胞毒藥物聯(lián)合使用的問題及最佳用藥時(shí)機(jī)等問題尚有待進(jìn)一步評價(jià)。相信隨著對肺癌與的深入研究及其相關(guān)學(xué)科的發(fā)展,這些問題將會得到解決,血管靶向治療將會成為治療肺癌最有前途的策略之一。參考文獻(xiàn)：1.HelenHan,JanFSilverman,TibethaS,etal.Vascularendothelialgrowthfactorexpressioninstagenon-smallcelllungcancercorrelateswithneoangiogenensisandapoor

24、prognosisJ.AnnalsofSurgicalOncology,2001,8:722.FongGH,RossantJ,GertsensteinM,BreitmanML.RoleoftheFlt-1receptortyrosinekinaseinregulatingtheassemblyofvascularendothelium.Nature.1995;376(6535):66-703.RisauW.What,ifanything,isanangiogenicfactor?CancerMetastasisRev.1996;15(2):1491514.FontaniniG,Boldrini

25、L,VignatiS,etal.Bcl-2andp53regularvascularndothelialgrowthfactor(vegf)-mediatedangiogenesisinnon-smallcelllungcarcinomaJ.EurJCancer,1998,34(5):7182725.5.EllisLM,FidlerI.AngiogenesisandmetastasisJ.EurJCancer,1996,32A(14):2451.6.NikiT,IbaS,TokunouM,etal.ExpressionofvascularendothelialgrowthfactorA,B,C,andDandtheirrelationshipstolymphnodestatusinlungadenocarcinomaJ.ClinicalCancerResearch,2000,6(6):2431.7.