定量檢驗方法學的分析性能驗證淺析

1、王青 女，1972年出生，遺傳學碩士，醫(yī)學實驗中心常規(guī)檢測實驗室負責人、技術主管， 多年來從事臨檢、生化、細胞遺傳等專業(yè)檢驗工作，熟練掌握各項檢驗專業(yè)技術及ISO15189 質量管理體系，具有較為扎實的醫(yī)學檢驗及遺傳學專業(yè)知識。依據(jù)衛(wèi)生部醫(yī)療機構臨床實驗室管理辦法第三十條款和CNAS-CL02： 2008醫(yī)學 實驗室質量和能力認可準則（IOS15189:2007）第5.5條款的相關要求，實驗室應對方法 學進行評價，以檢查其分析性能和對預期用途的適用性。近年來，醫(yī)學實驗中心在實驗室認 可的工作中，進行了大量的性能驗證試驗，累積了較豐富的實踐經(jīng)驗，本文從“5W+1HA個 方面，對定量檢驗方法學的性

2、能驗證進行匯總，供大家探討和交流。一、為什么要做性能驗證？性能驗證是為了確保實驗室開展的檢驗項目，所應用的檢測系統(tǒng)的分析性能或檢驗項 目的方法學能夠滿足檢測及臨床要求，從而保證患者標本檢測結果準確可靠。二、進行性能驗證的場所？按照實驗室管理辦法和認可準則的要求，醫(yī)療機構臨床實驗室應承擔所開展檢驗項目 的性能驗證工作。三、何時需要做性能驗證？1、以下情況應完成初次性能驗證：新安裝的儀器擬開展的項目；新開展項目；同一項 目的試劑變更廠家或檢驗方法發(fā)生變更時;儀器校準、發(fā)生故障維修后或更換主要的配件后， 可能對結果產(chǎn)生較大的影響時，可選擇其所開展的部分檢驗項目進行分析性能證。2、何時需要做性能評估/

3、評價？初次驗證后，對精密度、正確度及可報告范圍等性能參數(shù)至少每12個月進行一次評估， 可通過評估如CV、均值等室內質控數(shù)據(jù)的變化趨勢（批間精密度）、室間質評項目的結果 的可接受性（正確度）、臨床醫(yī)護人員對結果的反饋（可報告范圍）、小樣本的驗證等多種 方式進行。若評估的結果不可接受，則需重新進行性能驗證。四、哪些人員可以進行性能驗證試驗？性能驗證試驗應由實驗室有資質的檢驗人員完成，必要時可由技術支持人員協(xié)助完成 試驗；而性能驗證報告必須由資深的檢驗人員完成，并經(jīng)科室主任審核后歸檔保存。五、性能驗證包括哪些方面？定量項目性能驗證的內容包括但不限于：精密度（批內、批間）；正確度；檢測低限 （靈敏度）

4、；攜帶污染率；線性范圍；可報告范圍；生物參考區(qū)間；檢驗結果量值溯源；測 量不確定度；等。六、如何實施性能驗證？1、性能驗證試驗的準備工作1.1范圍、材料、方案：應確定定量檢測的項目；所需的儀器、配套試劑、校準品、質 控品等材料;制定完整的性能驗證方案(尤其是各項性能參數(shù)的判斷標準的制定及其依據(jù))。1.2試驗要求：儀器應進行校準或保養(yǎng)；要盡可能在相同條件下進行各項試驗；所有試 驗均需在室內質控結果在控的情況下方可進行。2、性能驗證試驗主要討論精密度、正確度、攜帶污染率、線性范圍、可報告范圍的試驗方法。2.1精密度主要包括批內精密度和批間精密度兩項2.1.1批內精密度標本選擇：選擇低、中、高三個濃

5、度或中、高兩個濃度的新鮮標本/質控品；試驗方法：連續(xù)重復測定20/21次；結果計算：計算后20次檢測結果的SD和CV；判斷標準：以能力驗證/室間質評評價界限作為允許總誤差(TEa)，批內精密度1/4TEa； 或者符合試劑說明書的要求。注意事項：若選擇標本，則其濃度應盡可能接近質控品或試劑說明書中評價該性能所提 供的標本濃度。2.1.2批間精密度標本選擇：選擇低、中、高三個濃度或中、高兩個濃度的新鮮標本/質控品；試驗方法：每天1次測試，連續(xù)測試20天；或每天2次測試，連續(xù)測試10天；或每 天4次測試，連續(xù)測定5天；結果計算：剔除離群值后，計算20次檢測結果的SD和CV；判斷標準：1/3TEa；或

6、者符合試劑說明書的要求。注意事項：若選擇標本，首先應考慮檢測物的穩(wěn)定性，濃度要求同批內精密度；若檢測 物不穩(wěn)定，則必須使用質控品進行該試驗。2.2 正確度可采用以下七種方法進行正確度評價：分析已知值的參考物質：因實驗室不易得到參考物質，較少使用。分析廠商或第三方提供的已經(jīng)賦值的質控品：因采用質控品進行正確度評價，尚存在 爭議，較少使用。加樣回收試驗：因大部分用于臨床診斷的檢驗項目為微量或痕量物質，試驗難度較大;不宜采用。方法學比對試驗；適用于引進新方法時，可以與原有的方法進行比較，最少分析20 個新鮮標本，要求濃度覆蓋線性范圍，用兩種方法同時測定同樣的樣品(偏倚1/2Tea)， 進行相關回歸分

7、析。分割樣本室間比對：要求與使用相同檢測方法的、質量保證措施較好的、或已獲認可 或的實驗室，或與使用配套分析系統(tǒng)的實驗室進行比對，結果滿意。分析室間質評物:最為常用。檢測衛(wèi)生部臨檢中心質評物，檢測結果均在允許范圍內。分析廠商提供的參考物質：當以上六種方法均難以實施時，此方法最為實用。選擇使 用A、B兩個不同批號校準品，使用A批號校準品進行校準，對B批號的校準品進行檢測， 連續(xù)測定6次，排除第1次的分析結果，計算其余5次檢測結果的平均值，要求每次檢測 結果和均值都在校準品定值可接受范圍內；并計算檢測均值與廠家賦值的偏倚，以B (廠家 提供的校準品B類不確定度)作為評價標準。2.3攜帶污染率(加樣

8、針)標本選擇：取高濃度室內質控品或高濃度新鮮標本，混合均勻后放置于1、2、3杯位 置，再取去離子水或生理鹽水放置于4、5、6杯位置；試驗方法：對以上6份標本連續(xù)進行檢測，測定值分別為H1、H2、H3、L1、L2、L3；結果計算：攜帶污染率=(L1-L3) x100% / (H3-L3)；判斷標準：生化檢驗項目2%。2.4線性評價標本選擇：選取接近線性范圍上限的高值標本與接近下限的低值標本；無法獲取合適的 標本可使用添加物或校準品；上述條件均無法滿足時，可選用滿足臨床需求的高值標本。試驗方法：標本分別按5： 0 (100%)、4： 1 (80%)、3： 2 (60%)、2： 3 (40%)、1：

9、 4 (20%)、0： 5 (0%)的比例進行稀釋，每個稀釋度重復測定3次計算均值。結果計算：將實測值與理論值作比較(偏離應小于10%)，計算Y= bX + a，驗證線性 范圍。判斷標準：b在0.971.03范圍內，a接近于0。2.5可報告范圍適用于實驗室開展的線性范圍不能滿足臨床標本檢測結果需求的定量檢驗項目。標本選擇：取一份接近線性范圍高限值濃度的病人標本，用去離子水、生理鹽水、低值 血清或廠商推薦的稀釋液進行系列稀釋，稀釋比例參照廠商提供的機內稀釋倍數(shù)。試驗方法：每個濃度重復測定2次計算均值。結果計算：每個濃度實際測定的均值和稀釋后的理論估計值，兩者進行差值相對百分數(shù) 計算，如果結果20%，此稀釋度為技術上的可接受限。可報告范圍的高限=可接受最大稀釋倍數(shù)x線性范圍（AMR）上限值；可報告范圍的低限：線性范圍的檢測低限或功能靈敏度為可報告