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文檔簡(jiǎn)介

1、基因工程全部公共課人教版The camelecow定向基因改造設(shè)想 設(shè)想一能否讓禾本科的植物也能夠固定空氣中的氮?能否讓細(xì)菌“吐出”蠶絲?設(shè)想二能否讓微生物產(chǎn)生出人的胰島素、干擾素等珍貴的藥物?設(shè)想三經(jīng)過多年的努力,科學(xué)家于20世紀(jì)70年代創(chuàng)立了可以定向改造生物的新技術(shù)基因工程。專題1 基因工程簡(jiǎn)介金湖二中生物教研組 請(qǐng)大家閱讀P1內(nèi)容,你認(rèn)為基因工程的理論基礎(chǔ)和技術(shù)基礎(chǔ)有哪些? 基因工程基礎(chǔ):(1)DNA的規(guī)則雙螺旋結(jié)構(gòu)是基因工程的物質(zhì)基礎(chǔ);(2)不同生物共用一套密碼子是理論基礎(chǔ);(3)轉(zhuǎn)移載體和工具酶的發(fā)現(xiàn)為基因工程的提供了技術(shù)基礎(chǔ)。幾點(diǎn)說明:(1)最早的基因工程 艾弗里的肺炎雙球菌的轉(zhuǎn)化

2、實(shí)驗(yàn),證明了DNA可以從一種生物個(gè)體轉(zhuǎn)移到另一個(gè)生物個(gè)體;(2)不同生物的DNA分子完成重組的理論基礎(chǔ):不同生物的DNA分子的結(jié)構(gòu)和組成成分一樣;(3)最早的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物1980年的轉(zhuǎn)基因老鼠。一 DNA重組技術(shù)的基本工具1、基因工程的概念 基因工程又叫基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)。 概念一:在生物體外,通過對(duì)DNA分子進(jìn)行人工“剪切”和“拼接”,對(duì)生物的基因進(jìn)行改造和重新組合,然后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行無性繁殖,使重組基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá),產(chǎn)生出人類所需要的基因產(chǎn)物。 概念二:按照人們的意愿,把一種生物的個(gè)別基因復(fù)制出來,加以修飾,然后放到另一種生物的細(xì)胞里,定向地改造生物的遺傳性狀。 從基因工程

3、概念上看,你認(rèn)為基因工程可分為幾步? 基因工程是在分子水平對(duì)DNA分子進(jìn)行的“剪切”和“拼接”,這需要專門的工具。二、基因操作的工具 1、限制性核酸內(nèi)切酶“分子手術(shù)刀”思考: 限制性內(nèi)切酶剪切的是DNA中的什么化學(xué)鍵? 限制性內(nèi)切酶的特性? DNA分子經(jīng)限制性內(nèi)切酶處理后形成的結(jié)構(gòu)叫什么名稱?(1)限制性內(nèi)切酶剪切的結(jié)構(gòu)注意: 限制性內(nèi)切酶破壞的是DNA骨架上的磷酸與脫氧核糖形成的化學(xué)鍵(磷酸二酯鍵),而不是堿基對(duì)之間的氫鍵。(2)限制性內(nèi)切酶的特性 一種限制性內(nèi)切酶只能識(shí)別一種特定的脫氧核苷酸序列,并且能在特定的切點(diǎn)是切割DNA分子。(3)分布: 主要在微生物中。 你認(rèn)為微生物中的限制性內(nèi)切

4、酶有什么作用?(4)結(jié)果: 產(chǎn)生黏性末端(堿基互補(bǔ)配對(duì))、平末端。(5)舉例: 大腸桿菌的一種限制酶(EcoR)能識(shí)別GAATTC序列,并在G和A之間切開形成黏性末端;Sma能識(shí)別CCCGGG序列,并在C和G之間切割形成平末端。練習(xí): 請(qǐng)大家看第4頁下面的DNA片段,如果此DNA片段被EcoR限制酶處理,請(qǐng)你標(biāo)出切點(diǎn),并寫出切割后的末端。 要從一個(gè)DNA分子中獲得一個(gè)所需要的基因,要有幾個(gè)切口?產(chǎn)生幾個(gè)末端?2、 DNA連接酶“分子縫合針” 看圖思考: DNA連接酶連接的是什么結(jié)構(gòu)? 請(qǐng)你說出DNA連接酶和DNA聚合酶的差異。 根據(jù)酶的來源不同,可以將DNA連接酶分為兩類: 從大腸桿菌中分離得

5、到:E.coliDNA連接酶,只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的粘性末端之間連接。 從T4噬菌體中分離到: T4連接酶,既可以“縫合”雙鏈DNA片段互補(bǔ)的粘性末端,又可以“縫合”雙鏈DNA片段的平末端,但連接平末端之間的效率比較低。3、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體“分子運(yùn)輸車” 閱讀課本相關(guān)內(nèi)容,回答問題: (1)運(yùn)載體的化學(xué)本質(zhì)是什么? (2)運(yùn)載體要具備哪些條件? (3)常使用的運(yùn)載體有哪些? (4)最常用的運(yùn)載體是什么?它存在于哪些細(xì)胞中? (1)運(yùn)載體具備的條件 能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制并保持穩(wěn)定; 具有多個(gè)限制酶的切點(diǎn),以便與外源基因連接; 具有某些標(biāo)記基因,便于篩選: 對(duì)受體細(xì)胞無害、易分離。(2)

6、常使用的運(yùn)載體 質(zhì)粒、噬菌體、動(dòng)植物病毒等; 其中,質(zhì)粒是最常用的運(yùn)載體。(3)質(zhì)粒 本質(zhì):細(xì)胞染色體(或擬核DNA分子)外能自主復(fù)制的小型環(huán)狀DNA分子; 質(zhì)粒的存在對(duì)宿主細(xì)胞無影響; 質(zhì)粒的復(fù)制只能在宿主細(xì)胞內(nèi)完成。判斷: 質(zhì)粒只存在于原核細(xì)胞中。思考: 基因工程用到的工具酶有哪些?1.以下說法正確的是 ( ) A、所有的限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列 B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運(yùn)載體 C、運(yùn)載體必須具備的條件之一是:具有多個(gè)限制酶切點(diǎn),以便與外源基因連接 D、DNA連接酶使黏性末段的堿基之間形成氫鍵C 練習(xí)2.不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由是 ( ) A、能復(fù)制 B、有多個(gè)限制酶切

7、點(diǎn) C、具有標(biāo)記基因 D、它是環(huán)狀DNAD3.有關(guān)基因工程的敘述中,錯(cuò)誤的是(多選) ( ) A、基因工程技術(shù)能定向地改造生物的遺傳性狀,培育生物新品種 B、重組DNA的形成在細(xì)胞內(nèi)完成 C、目的基因須由運(yùn)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞 D、質(zhì)粒都可作為運(yùn)載體B D4、在基因工程中,切割運(yùn)載體和含有目的基因的DNA片段,需使用 ( )A. 同種限制酶 B. 兩種限制酶C. 同種連接酶 D. 兩種連接酶A二 基因工程的基本操作程序 你認(rèn)為基因工程可分為哪幾步?1、目的基因的獲取2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4、目的基因的檢測(cè)與鑒定一、提取目的基因 目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因。 例如

8、,與生物抗逆性相關(guān)的基因、與優(yōu)良品質(zhì)相關(guān)的基因、與生物藥物和保健品相關(guān)的基因、與毒物降解相關(guān)的基因,以及與工業(yè)所需用酶相關(guān)的基因等,也可以是具有一些具有調(diào)控作用的因子。(一)將需要的基因直接從供體生物的細(xì)胞內(nèi)提取出來。供體生物細(xì)胞取出DNA用限制酶剪去多余部分目的基因限制酶目前被較廣泛提取使用的目的基因有:蘇云金桿菌抗蟲基因、人胰島素基因、人干擾素基因、種子貯藏蛋白基因、植物抗病基因等。(二)從基因文庫中獲取目的基因什么是基因文庫?什么是部分基因文庫?基因文庫是怎樣建立的?怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因?目的基因的有關(guān)信息與什么相聯(lián)系?(三)人工合成基因法PCR擴(kuò)增技術(shù)PCR (pol

9、ymerase chain reaction)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)。通過此技術(shù),可獲取大量的目的基因。PCR技術(shù)原理:前提:過程:PCR擴(kuò)增儀DNA雙鏈復(fù)制的基本原理一段已知目的基因的核苷酸序列目的基因DNA受熱變性,解鏈;引物與單鏈互補(bǔ)結(jié)合;合成鏈在DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸。(四)化學(xué)合成法 適用范圍: 已知核苷酸序列,基因的核苷酸數(shù)量較少。 過程: 根據(jù)已知的蛋白質(zhì)的氨基酸序列,推測(cè)出相應(yīng)的核苷酸序列,然后按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則,推測(cè)出它的結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列,在通過化學(xué)方法,以單核苷酸為原料合成目的基因。二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建 基因表達(dá)載體的構(gòu)

10、建是實(shí)施基因工程的第二步,也是基因工程的核心。(一)目的 使目的基因在受體細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定存在,并且可以遺傳給下一代,同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。1、基因表達(dá)載體的組成: 目的基因、啟動(dòng)子、終止子、標(biāo)記基因。編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)2、啟動(dòng)子: 一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段,位于基因的首端,是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位。3、終止子: 位于基因的尾端,也是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段,使轉(zhuǎn)錄在所需要的地方停止下來。4、標(biāo)記基因: 為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因,從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。思考:你認(rèn)為目的基因與運(yùn)載體的結(jié)合操作過程的怎樣進(jìn)行的? 用同一種限制性內(nèi)切酶處

11、理運(yùn)載體和質(zhì)粒,得到相同的黏性末端;再將目的基因和運(yùn)載體,在DNA連接酶在作用下進(jìn)行連接,形成了一個(gè)重組的DNA分子。思考:不同生物的DNA分子連接成功的基礎(chǔ)是什么?思考: 如果用同一種限制性內(nèi)切酶,處理質(zhì)粒和目的基因,并將產(chǎn)物放在一起用連接酶連接它們,最后可以產(chǎn)生多少種環(huán)狀的DNA分子? 你認(rèn)為它們是怎么組成的?三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 常用的受體細(xì)胞有哪些? 什么叫轉(zhuǎn)化? 怎樣才能將目的基因?qū)У绞荏w細(xì)胞中呢?(一)常用的受體細(xì)胞有: 動(dòng)物、植物、微生物。 (二)轉(zhuǎn)化: 目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。(三)目的基因?qū)胫参锛?xì)胞 1、常用方法:-農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

12、適用范圍: 雙子葉植物和裸子植物; 具體做法: 將目的基因插入到農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上的T-DNA中,利用農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用(當(dāng)植物體受損時(shí),傷口處的細(xì)胞會(huì)分泌大量的酚類化合物,吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞,這時(shí)農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞),就可以使目的基因進(jìn)入植物細(xì)胞,并將其插入植物細(xì)胞中的染色體DNA上,使目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)。2、其他方法: 基因槍法; 花粉管通道法; 說出三種方法的優(yōu)缺點(diǎn)。(二)將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞顯微注射技術(shù): 具體做法:(三)將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞 早期的基因工程,常用大腸桿菌做受體細(xì)胞的原因: 繁殖快,多為單細(xì)胞,遺傳物質(zhì)相對(duì)較少。 為

13、什么原核生物的繁殖比較快呢?大腸桿菌的轉(zhuǎn)化方法: 首先用Ca2+ (常用氯化鈣)處理細(xì)胞,使細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài),這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞。 第二步是將重組表達(dá)載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細(xì)胞混合,在一定的溫度下促進(jìn)感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子,完成轉(zhuǎn)化過程。四、目的基因的檢測(cè)和鑒定 目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后,是否可以穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳性狀,只有通過檢測(cè)與鑒定才能知道。這是檢查基因工程是否成功的一步。 請(qǐng)大家看書,看看需要檢測(cè)哪幾方面的內(nèi)容?怎么做? 首先,要檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA上是否插入了目的基因,這是目的基因能否在真核生物中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵。 檢測(cè)方法是采

14、用DNA分子雜交技術(shù)。 其次,還需要檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA,這是檢測(cè)目的基因是否發(fā)揮功能作用的第一步。 檢測(cè)方法是采用DNA分子雜交技術(shù)。 最后,檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)。 檢測(cè)方法是進(jìn)行抗原-抗體雜交。 第四,個(gè)體生物學(xué)水平的鑒定: 一個(gè)抗蟲或抗病的目的基因?qū)胫参锛?xì)胞后,是否賦予了植物抗蟲或抗病特性,需要做抗蟲或抗病的接種實(shí)驗(yàn),以確定是否具有抗性以及抗性的程度。 有的基因工程產(chǎn)品需要與天然產(chǎn)品的功能進(jìn)行活性比較,以確定轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的功能活性是否與天然產(chǎn)品相同。思考: 請(qǐng)你寫出目的基因在受體細(xì)胞中,遺傳信息的傳遞過程。 基因在不同生物的體內(nèi)控制合成的蛋白質(zhì)是一樣的,這說明了什么?

15、1、 基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的。在基因操作的基本步驟中,不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是 ( ) A、人工合成目的基因 B、目的基因與運(yùn)載體結(jié)合 C、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 D、目的基因的檢測(cè)和表達(dá)C2、水母發(fā)光蛋白由236個(gè)氨基酸構(gòu)成,其中有三種氨基酸構(gòu)成發(fā)光環(huán),現(xiàn)已將這種蛋白質(zhì)的基因作為生物轉(zhuǎn)基因的標(biāo)記。在轉(zhuǎn)基因技術(shù)中,這種蛋白質(zhì)的作用是( ) A.促使目的基因?qū)胨拗骷?xì)胞中 B.促使目的基因在宿主細(xì)胞中復(fù)制 C.使目的基因容易被檢測(cè)出來 D.使目的基因容易成功表達(dá)3、 農(nóng)業(yè)上大量使用化肥存在許多負(fù)面影響,“生物固氮”已成為一項(xiàng)重要研究課題,實(shí)驗(yàn)證明,生物固氮是某些微生物(如根

16、瘤菌、藍(lán)藻等)將空氣中的N2固定為NH3的過程。(1)與人工合成NH3所需的高溫、高壓條件相比,生物固氮的順利進(jìn)行是因?yàn)楦鼍?、藍(lán)藻體內(nèi)含有特定的 ,這類物質(zhì)的化學(xué)本質(zhì)是 。(2)人們正在著力研究轉(zhuǎn)基因固氮植物(如固氮水稻、固氮小麥等),某科學(xué)家將根瘤菌、細(xì)胞中的固氮基因,通過基因工程方法轉(zhuǎn)移到水稻植株細(xì)胞中,經(jīng)檢測(cè),轉(zhuǎn)基因水稻具備了固氮功能。據(jù)上述材料分析:固氮基因已經(jīng)整合到水稻細(xì)胞的 中。寫出水稻細(xì)胞中固氮基因得到表達(dá)的反應(yīng)式。酶蛋白質(zhì)DNA 轉(zhuǎn)錄 翻譯 DNA(固氮基因) RNA 蛋白質(zhì)4、干擾素是治療癌癥的重要物質(zhì),人血液中每升只能提取0.05g干擾素,因而其價(jià)格昂貴,平民百姓用不起。

17、但美國有一家公司用遺傳工程方法合成了價(jià)格低廉、藥性一樣的干擾素,其具體做法是:(1)從人的淋巴細(xì)胞中提取能指導(dǎo)干擾素合成的 ,并使之與一種叫做質(zhì)粒的DNA結(jié)合,然后移植到酵母菌內(nèi),從而用酵母菌來 。(2)酵母菌能用 方式繁殖,速度很快,所以,能在較短的時(shí)間內(nèi)大量生產(chǎn) 。利用這種方法不僅產(chǎn)量高,并且成本也較低。基因產(chǎn)生干擾素出芽干擾素三 基因工程的應(yīng)用一、植物基因工程碩果累累 植物基因工程技術(shù)主要用于提高農(nóng)作物的抗逆能力,以及改良農(nóng)作物的品質(zhì)和利用植物生產(chǎn)藥物等方面。1、抗蟲轉(zhuǎn)基因植物 方法: 目的基因包括:從某些生物中分離出具有殺蟲活性的基因,將其導(dǎo)入作物中,使其具有抗蟲性。Bt毒蛋白基因、蛋

18、白酶抑制劑基因、淀粉酶抑制劑基因、植物凝集素基因等例:1993年,我國農(nóng)業(yè)科學(xué)院的科學(xué)家成功地將蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因轉(zhuǎn)入棉植株,培育成了抗棉鈴蟲的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉。思考: 抗蟲棉要治蟲嗎? 為什么?2、抗病轉(zhuǎn)基因植物 抗病基因有哪些? 病毒外殼蛋白基因、病毒的復(fù)制酶基因、幾丁質(zhì)酶基因、抗毒素合成基因(抗真菌轉(zhuǎn)基因植物)。尋根問底 在抗病轉(zhuǎn)基因植物中,為什么使用病毒外殼蛋白基因可以抗病毒侵染?是否存在局限性? 一種假說認(rèn)為:CP基因在植物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)積累后,當(dāng)入侵的病毒裸露核酸進(jìn)入植物細(xì)胞后,會(huì)立即被這些外殼蛋白重新包裹,從而阻止病毒核酸分子的復(fù)制和翻譯。 另一種假說認(rèn)為:植物細(xì)胞內(nèi)積累的病毒外殼

19、蛋白會(huì)抑制病毒脫除外殼,使病毒核酸分子不能釋放出來。然而最近的研究表明,如果將病毒的外殼蛋白的AUG起始密碼缺失,使之不能被翻譯,或者將外殼蛋白基因變成反義RNA基因,整合到植物細(xì)胞染色體上,轉(zhuǎn)基因植物則有很好的抗性。因此,有人認(rèn)為抗性機(jī)理不是外殼蛋白在起作用,而是CP基因轉(zhuǎn)錄出RNA后,與入侵病毒RNA之間的相互作用起到了抗性作用。 存在一些問題: 轉(zhuǎn)基因植物對(duì)病毒的抗性有局限性,僅限于特定的病毒(被使用CP基因的病毒)或密切相關(guān)的病毒; 轉(zhuǎn)基因植物大多數(shù)只是發(fā)病延緩,一般為兩周,并非根治; 潛在著植物表達(dá)的外殼蛋白包被與另一種病毒形成新的雜合病毒的危險(xiǎn)。 3、抗逆轉(zhuǎn)基因作物4、利用轉(zhuǎn)基因改

20、良植物的品質(zhì) 方法: 將必需氨基酸含量多的蛋白質(zhì)編碼基因,導(dǎo)入植物中,或者改變這些氨基酸合成途徑中某種酶的活性。二、動(dòng)物基因工程前景廣闊1、用于提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度 目的基因:生長(zhǎng)素基因。實(shí)例:“超級(jí)小鼠”的培育 將大鼠生長(zhǎng)激素的基因分別注射到小白鼠的受精卵中,得到了體型巨大的“超級(jí)小鼠”。2、用于改善畜產(chǎn)品的品質(zhì)3、用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物思考討論:(1)用動(dòng)物乳腺作為反應(yīng)器,生產(chǎn)高價(jià)值的蛋白質(zhì)比工廠生產(chǎn)的優(yōu)越之處有哪些?A、產(chǎn)量高;B、質(zhì)量好;C、成本低;D、易提取。獲取目的基因(例如血清蛋白基因)構(gòu)建基因表達(dá)載體(在血清白蛋白基因前加特異表達(dá)的啟動(dòng)子)顯微注射導(dǎo)入哺乳動(dòng)物受精卵中形成胚胎將胚胎送

21、入母體動(dòng)物發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(只有在產(chǎn)下的雌性動(dòng)物個(gè)體中,轉(zhuǎn)入的基因才能表達(dá))(2)用基因工程技術(shù)實(shí)現(xiàn)動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器的操作過程是怎樣的? 為了保證產(chǎn)下的動(dòng)物是雌性個(gè)體,一般對(duì)受體細(xì)胞(受精卵)進(jìn)行選擇,選擇XX型的受精卵。但“乳房反應(yīng)器”仍有缺點(diǎn),只有當(dāng)個(gè)體成年后才能產(chǎn)生乳汁。 科學(xué)家從尿液中提取相關(guān)的基因產(chǎn)物,你認(rèn)為此種方法與“乳房反應(yīng)器”相比有什么優(yōu)點(diǎn)?、用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作器官移植的供體供體動(dòng)物:存在的難題:解決方法:豬免疫排斥將供體基因組導(dǎo)入某種基因調(diào)節(jié)因子,以抑制抗原決定基因的表達(dá),或設(shè)法除去抗原決定基因,再結(jié)合克隆技術(shù),培育出沒有免疫排斥反應(yīng)的轉(zhuǎn)基因克隆豬器官。、基因工程藥品異軍突起()工程菌:用基因工程的方法,使外源基因得到高效率表達(dá)的菌類細(xì)胞株系。()我國已生產(chǎn)的產(chǎn)品:白細(xì)胞介素-2、干擾素、乙肝疫苗等三、基因治療曙光初照 、基因治療的概念: 將健康的外源基因?qū)胗谢蛉毕莸募?xì)胞中,使該基因的表達(dá)的產(chǎn)物發(fā)揮功能,從而達(dá)到治療疾病的目的。思考: 如果要對(duì)色盲進(jìn)行基因治療,應(yīng)該把什么基因?qū)氲绞裁醇?xì)胞? 那么,個(gè)體的相關(guān)基因型呢?2、基因治療的類型(1)體外基因治療

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