非法酵革蘭陰性桿菌特征及鑒定思路內(nèi)容課件

1、非法酵革蘭陰性桿菌特征及鑒定思路張秀珍第1頁，共70頁。內(nèi)容非發(fā)酵細菌分類主要非發(fā)酵細菌特征非發(fā)酵細菌耐藥特征臨床最常分離非發(fā)酵細菌鑒定第2頁，共70頁。非法酵革蘭陰性桿菌感染特點引起臨床各科室 人體各部位感染鑒定比腸桿菌科復雜耐藥譜廣 臨床治療困難第3頁，共70頁。非發(fā)酵菌的分類和生物學特性不發(fā)酵葡萄糖有氧方式代謝 包括不同的科、屬、種缺乏糖酵解酶類代謝必須在有氧環(huán)境中進行 非發(fā)酵菌 Nonfermentative Bacilli不是細菌分類的正式名稱是對一大群細菌的統(tǒng)稱第4頁，共70頁。非發(fā)酵菌的分類和命名與腸桿菌科不同，非發(fā)酵菌不能簡單地歸于具有明顯特征的某一菌科，且很多非發(fā)酵菌的正確分

2、類問題仍未解決 主要的非發(fā)酵菌分為6個科 1 分類不明其余不屬于以上菌科的非發(fā)酵菌暫時歸類于分類學尚未明確的細菌第5頁，共70頁。非發(fā)酵細菌原分類: 假單孢菌科 奈瑟菌科 未分科第6頁，共70頁。非發(fā)酵細菌現(xiàn)代分類假單孢菌科 產(chǎn)堿桿菌科 甲基球菌科 根瘤菌科 黃桿菌科 莫拉菌科 未定第7頁，共70頁。臨床常見非發(fā)酵菌的分類 科 名 屬 名 假單胞菌科假單胞菌屬寡氧（窄食）單胞菌屬伯克菌屬甲基球菌科甲基桿菌屬產(chǎn)堿桿菌科產(chǎn)堿桿菌屬鮑特菌屬根瘤菌科土壤桿菌屬黃桿菌科黃桿菌屬金色桿菌屬穩(wěn)桿菌屬威克菌屬伯杰菌屬無色桿菌屬莫拉菌科莫拉菌屬不動桿菌屬分類不明玫瑰單胞菌屬人蒼白桿菌鞘氨醇菌屬第8頁，共70頁。

3、與鑒定方法相關的分組第一組 有動力,極鞭毛: 假單胞菌科 rRNA群IV 第二組 有動力,周鞭毛: 產(chǎn)堿桿菌科 產(chǎn)堿桿菌屬 第三組 無動力,OXI(+): 黃桿菌科 黃桿菌屬 華麗桿菌屬 穩(wěn)桿菌屬第四組 無動力,OXI（-） 不動桿菌屬第9頁，共70頁。非發(fā)酵菌的分類 假單胞菌科 rRNA I群rRNA III群 rRNA V群rRNA IV群rRNA II群假單胞菌屬伯克菌屬叢毛單胞菌屬短波單胞菌屬寡養(yǎng)（窄食）單胞菌屬有動力 極鞭毛第一組第10頁，共70頁。假單孢菌科根據(jù)rRNA-DNA同源性研究分為5組rRNA-I:假單孢菌屬 銅綠 熒光 惡臭 門多薩 產(chǎn)堿 斯氏 類產(chǎn)堿第11頁，共70頁

4、。假單胞菌屬生物學特性G-桿菌 直或微彎 一根或多根極鞭毛氧化利用葡萄糖氧化酶陽性第12頁，共70頁。rRNA II伯克菌屬:類鼻疽 ; 蔥頭;唐菖蒲; 皮氏;第13頁，共70頁。伯克菌屬生物學特性所有rRNAII群的細菌歸入一個新的菌屬伯克菌屬包括13個種 其中假鼻疽伯克菌蔥頭、唐昌蒲、皮氏伯克菌均以前稱為假單胞菌第14頁，共70頁。伯克菌屬生物學特性蔥頭伯克菌 G-桿菌 多根極鞭毛氧化利用葡萄糖氧化酶陽性 弱陽第15頁，共70頁。伯克菌屬生物學特性蔥頭伯克菌黃色菌落賴氨生長無特殊要求SXT 敏感 常用藥物 氨基糖甙類 天然耐藥酸陽性 植物病原菌蔥頭腐爛和人類的壞疽水源和潮濕表面第16頁，共

5、70頁。唐菖蒲伯克菌伯克菌屬生物學特性黃色無熒光菌落氧化酶陰性不分解麥芽糖ONPG 陽性尿酶陽性第17頁，共70頁。伯克菌屬生物學特性皮氏伯克菌生長緩慢3個生物型12根鞭毛針尖樣菌落第18頁，共70頁。伯克菌屬生物學特性類鼻疽伯克菌人和動物類鼻疽病 生長有特定區(qū)域 存在于赤道南北緯20度之間的土壤和不流動的水中，主要泰國和越南。大多數(shù)感染無癥狀，只能通過血清學診斷刺激性泥土味生長無特殊要求第19頁，共70頁。rRNA III叢毛菌科:叢毛單胞菌屬食酸菌屬第20頁，共70頁。叢毛單胞菌科生物學特性 具有特征性的長極叢鞭毛 食酸叢毛單胞菌最常分離 通過OF果糖 甘露醇 乙酰胺陽性 與其它菌相鑒別

6、唯一橘黃色吲哚反應 OF葡萄糖培養(yǎng)基上不產(chǎn)酸第21頁，共70頁。叢毛單胞菌屬生物學特性叢毛單胞菌屬土生單胞菌 不是人類致病菌食酸叢毛單胞菌 機會感染菌唯一橘黃色吲哚反應睪酮叢毛單胞菌屬 極為少見第22頁，共70頁。食酸菌屬食酸菌屬生物學特性敏捷食酸菌中泛食酸菌德氏食酸菌氧化酶陽性有動力氧化利用糖類臨床意義不明第23頁，共70頁。rRNA IV短波單胞菌屬缺陷短波單胞菌泡囊短波單胞菌第24頁，共70頁。短波單胞菌屬生物學特性短波單胞菌屬氧化酶陽性不分解糖 醇或反應很弱 短波 緊密螺旋單極鞭毛生長緩慢 48h 可見菌落 深黃到橘黃色素 七液苷陽性 區(qū)別于其他產(chǎn)堿假單胞菌臨床少見 體弱 免疫力低下患

7、者感染 菌血癥第25頁，共70頁。rRNA V寡養(yǎng)單胞菌屬或窄食單胞菌屬嗜麥芽寡氧單胞菌第26頁，共70頁。嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌名稱變化寡養(yǎng)單胞菌屬生物學特性1961年嗜麥芽假單胞菌 1983年嗜麥芽黃單胞菌1993年嗜麥芽寡養(yǎng)（窄食）單胞菌寡養(yǎng)(窄食)單胞菌屬第27頁，共70頁。寡養(yǎng)單胞菌屬生物學特性無溶血呈淡綠色或淺綠色有氨水味 血平板菌落粗糙菌落特點第28頁，共70頁。氧化酶陰性葡萄糖氧化緩慢麥芽糖快速氧化賴氨酸 DNA 陽性寡養(yǎng)單胞菌屬生物學特性生化反應第29頁，共70頁。耐藥特點寡養(yǎng)單胞菌屬生物學特性天然耐藥泰能SXT 敏感氨基糖甙類第30頁，共70頁。不定菌屬的非發(fā)酵菌金色單胞菌屬黃色

8、單胞菌屬（淺黃假單胞菌）淺金黃單胞菌棲稻黃色單胞菌（棲稻黃色假單胞菌）第31頁，共70頁。不定菌屬的非發(fā)酵細菌鞘氨醇希瓦菌屬 希瓦16個種深海羽田少動鞘氨醇菌 有意義單胞菌屬第32頁，共70頁。鞘氨醇單胞菌:16個 少動鞘氨醇有意義希瓦菌:希瓦 深海第33頁，共70頁。非發(fā)酵菌的分類第二組有動力 周鞭毛土壤桿菌屬醫(yī)學上唯一有意義的菌屬根瘤菌科 產(chǎn)堿桿菌科 產(chǎn)堿桿菌屬 鮑特菌屬第34頁，共70頁。非發(fā)酵菌的分類條件致病菌 院內(nèi)感染產(chǎn)堿桿菌屬木糖氧化產(chǎn)堿桿菌木糖氧化亞種脫硝亞種糞產(chǎn)堿桿菌皮氏產(chǎn)堿桿菌第35頁，共70頁。非發(fā)酵菌的分類產(chǎn)堿桿菌的主要生物學特性菌種硝酸鹽丙二木糖葡萄糖糞產(chǎn)堿-+-木糖氧

9、化亞種+脫硝亞種+-皮氏產(chǎn)堿桿菌-第36頁，共70頁。產(chǎn)堿桿菌屬生物學特性產(chǎn)堿桿菌屬糞產(chǎn)堿桿菌木糖氧化產(chǎn)堿桿菌木糖氧化亞種 脫硝亞種 皮氏產(chǎn)堿桿菌（1986年描 述）第37頁，共70頁。產(chǎn)堿桿菌屬生物學特性糞產(chǎn)堿桿菌 臨床標本中最常見菌落細小 邊緣不規(guī)則在碳水化合物培養(yǎng)基上強烈堿性反應還原亞硝酸鹽 不還原硝酸鹽第38頁，共70頁。黃桿菌科黃桿菌屬 金色桿菌屬穩(wěn)桿菌屬威克菌屬伯杰菌屬非發(fā)酵菌的分類第三組無動力 氧化酶陽性分類學不明 鞘氨醇菌屬寡源菌屬莫拉菌屬華麗桿菌屬第39頁，共70頁。最新分類變動很大 金色桿菌屬粘黃桿菌產(chǎn)吲哚黃桿菌大比目魚黃桿菌腦膜敗血黃桿菌大菱鲆黃桿菌黃桿菌科生物學特性第4

10、0頁，共70頁。被重新分為短穩(wěn)桿菌歸為新的屬Myroides，水生 約翰 食果膠嗜冷 嗜糖 琥珀黃桿菌 黃桿菌屬吲哚都是陰性芳香黃桿菌短黃桿菌在人類臨床標本中尚未發(fā)現(xiàn)黃桿菌科生物學特性第41頁，共70頁。嗜醇鞘氨醇桿菌黃桿菌科分類及生物學特性臨床標本中遇到的已有新的歸屬的種 腦膜敗血金色桿菌IIb黃桿菌（伯杰手冊歸入金粉黃桿菌） 短穩(wěn)黃桿菌多食鞘氨醇桿菌第42頁，共70頁。第IV組 無動力 氧化酶陰性 不動桿菌屬第43頁，共70頁。不動桿菌的分類主要生物學特性新一版伯杰手冊 醋酸鈣不動桿菌開始被歸于奈瑟菌科但最近又被歸于莫拉菌科DNA-DNA雜交 營養(yǎng)特征17個基因種利用生化特征 生長試驗可區(qū)

11、分其中 16個基因種 7個基因種有菌名第44頁，共70頁。不動桿菌的分類主要生物學特性只有7個基因種有菌名：基因種1醋酸鈣 基因種2 鮑曼基因種4溶血 基因種5 瓊氏 基因種7 約翰遜 基因種8 洛菲不動桿菌其余基因種未命名第45頁，共70頁。不動桿菌的分類主要生物學特性生物學特性血瓊脂菌落圓形 光滑 邊緣整齊灰白色一般無色素 有的產(chǎn)生黃褐色色素 G-球桿菌 常成對排列 不易脫色常染成假陽性 拉絲試驗容易成假陰性有的種產(chǎn)生溶血第46頁，共70頁。不動桿菌的主要生物學特性氧化酶陰性 觸酶反應不定吲哚 H2S 甲基紅 VP反應均陰性不產(chǎn)生賴、鳥氨酸脫羧酶和精氨酸雙水解酶有的種能產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶所

12、有種不能還原硝酸鹽大多數(shù)能利用枸櫞酸鹽無動力，硝酸鹽還原陰性第47頁，共70頁。非發(fā)酵菌的生物學特性G-桿菌 球桿菌氧化酶大多陽性 少數(shù)陰性 多數(shù)菌屬有動力 少數(shù)無動力極生 周生鞭毛 無鞭毛OF糖大多氧化型 少數(shù)產(chǎn)堿或不利用第48頁，共70頁。非發(fā)酵菌的鑒定臨床標本中最常見 銅綠鮑曼不動 嗜麥芽窄食單胞菌選擇少數(shù)關鍵性試驗便可容易鑒定快速為臨床醫(yī)生提供信息 簡便法第49頁，共70頁。非發(fā)酵菌的鑒定 分組法非銅綠 鮑曼不動 嗜麥芽必須增加其他試驗進行種的鑒定根據(jù)動力和氧化酶將各種臨床上重要的非發(fā)酵菌分為四個部分第50頁，共70頁。非法酵革蘭陰性桿菌的共同特點在中國蘭或麥康開選擇培養(yǎng)基上呈不發(fā)酵乳

13、糖的菌落(中國蘭上粉紅色)氧化酶大多陽性有鞭毛或無鞭毛革蘭陰性桿菌或球桿菌不能發(fā)酵糖色素第51頁，共70頁。鑒定非發(fā)酵革蘭陰性桿菌的基本步驟初始菌落識別:在中國蘭或麥康開培養(yǎng)基上呈不分解乳糖的菌落 氧化酶革蘭染色色素確認非發(fā)酵細菌O/F 鞭毛染色選擇鑒定系統(tǒng)API 20NE ATB VIEK2Compact等第52頁，共70頁。臨床常見非發(fā)酵革蘭陰性細菌的耐藥特征銅綠假單孢菌不動桿菌嗜麥芽窄食單孢菌第53頁，共70頁。 綠膿桿菌耐藥機制膜蛋白缺失使通透性下降高產(chǎn)ampC酶; 產(chǎn)ESBL;產(chǎn)金屬酶泵出機制第54頁，共70頁。銅綠假單孢菌銅綠假單胞菌的細胞外膜上沒有大多數(shù)革蘭陰性細菌所具有的典型的

14、高滲透性孔蛋白，它的孔蛋白通道對小分子物質(zhì)的滲透速度僅為典型孔蛋白通道的1%。 第55頁，共70頁。產(chǎn)KPC酶國內(nèi)：已在腸桿菌科的多個菌屬中有報道。肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌、大腸埃希菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、沙門菌屬、弗勞地檸檬酸桿菌和銅綠假單胞菌等。該類酶除陰溝腸桿菌可有染色體介導外，其他各類細菌均可為質(zhì)粒介導，已成為臨床治療難題第56頁，共70頁。如何檢測?產(chǎn)KPC酶的菌株用常規(guī)藥敏試驗不容易檢出。CLSI關于碳青霉烯類的判斷標準： 厄他培南2g/ml 亞胺培南、美羅培南4g/ml 因此，MIC2g/ml 或4g/ml的菌株仍可判斷為敏感的警惕：在常規(guī)藥敏中如遇第三、第四代頭孢菌素以及其他的-內(nèi)酰

15、胺類耐藥的菌株均應該進行稀釋法測定碳青霉烯類的對這些菌株的MIC。第57頁，共70頁。檢測KPC酶的最佳底物厄他培南是檢測KPC酶的最佳底物。建議1：可將該藥列為常規(guī)藥敏試驗的品種建議2：對所有具有ESBLs/AmpC酶樣表型（即對第三、第四代頭孢菌素耐藥）的腸桿菌科細菌采用紙片法或MIC法（E-試驗）進行厄他培南（和其他碳青霉烯類）的測定。如MIC為2或4g/ml應視作有產(chǎn)KPC酶和其他碳青酶霉烯酶的可能。這時應與臨床醫(yī)師聯(lián)系，并將該菌株送往參考試驗室作進一步的研究。第58頁，共70頁。改良的Hodge 試驗0.5麥氏濁度單位大腸埃希菌 ATCC25922涂布MH平板中間貼亞胺培南（10g）

16、紙片接種待檢菌的無菌接種環(huán)自 紙片外緣向平板邊緣劃線35過夜培養(yǎng)結(jié)果判斷：亞胺培南抑菌圈內(nèi)出現(xiàn)待檢菌矢狀生長者為產(chǎn)碳青霉烯酶 菌株PCR 擴增試驗、DNA測序證實為某種KPC酶E coli ATCC25922KPC+？KPC -KPC+？第59頁，共70頁。不動桿菌的耐藥機制對多種窄譜內(nèi)酰胺酶耐藥由于TEM1和CARB型內(nèi)酰胺酶對新型三代頭孢菌素耐藥是因為產(chǎn)大量染色體頭孢菌素酶和超廣譜的TEM酶第60頁，共70頁。 不動桿中最主要的碳青霉烯酶是D類酶 OXA-23、24、25、26、27、40、49、51、 54、55、58、60該酶能水解亞胺培南、青霉素，但不水解三代頭孢菌素.不動桿菌主要耐

17、藥機制第61頁，共70頁。不動桿菌中還產(chǎn)IMP或VIM型金屬酶，該酶水解底物范圍廣，包括碳青霉烯類、青霉素類和頭孢菌素抗生素，不被克拉維酸等酶抑制劑抑制，但能被EDTA、2-巰基丙酸抑制 第62頁，共70頁。嗜麥芽窄食單胞菌常感染嚴重衰弱和免疫力低下病人在醫(yī)院水龍頭、污水排水孔呼吸機濕化器均可分離到可引起菌血癥、心內(nèi)膜炎、醫(yī)院獲得性肺炎、尿路感染、皮膚、軟組織靜脈放置插管是引起菌血癥的主要原因，死亡率達4169第63頁，共70頁。嗜麥芽窄食單胞菌的耐藥機制細胞壁對抗生素的親和力極差膜蛋白對氨基糖甙滲透力低下藥泵外排機制產(chǎn)二種內(nèi)酰胺酶L1 內(nèi)酰胺酶L2內(nèi)酰胺酶（金屬酶） （頭孢菌素酶）第64頁，共70頁。細菌定植的定義定植是個”相對”的概念 定植 感染宿主因素細菌本身因素第65頁，共70頁。下呼吸道感染中,