天然藥物化學(xué)實驗教案(共41頁)

1、 天然藥物(yow)化學(xué)實驗 教案(jio n)首頁題實驗一 硅膠、氧化鋁薄層板的制備與應(yīng)用編號1課時2一、教學(xué)目的通過本實驗的學(xué)習(xí)，使學(xué)生掌握薄層色譜制備、操作及活度測定方法。二、重點與難點重點是學(xué)生能夠熟練進行硅膠及氧化鋁薄層板制備及操作方法，并掌握相應(yīng)活度測定方法。實施步驟方法教 學(xué) 內(nèi) 容時間講解和演示操作一、 實驗?zāi)康亩?實驗原理三、 儀器、材料與試劑四、 實驗步驟5min15min10min60min板書設(shè)計一、實驗?zāi)康耐ㄟ^本實驗的學(xué)習(xí)：1學(xué)習(xí)薄層軟板和硬板的制備方法；2. 熟悉薄層色譜法的操作步驟；3. 掌握軟板和硬板活度定級測定方法。二、實驗原理薄層色譜是把吸附劑(或載體)均

2、勻地鋪在一塊玻璃板或塑料板上形成薄層，在此薄板上進行色譜分離，按分離機制可分為吸附，分配，離子交換和凝膠過濾色譜等。薄層色譜多數(shù)情況是一種吸附層析，利用吸附劑對化合物吸附能力的不同而達到分離，吸附劑吸附能力的大小與化合物極性大小有關(guān)?；衔飿O性大，被吸附劑吸附得牢，Rf值小，反之，化合物極性小，Rf值大。一個化合物在某種吸附劑上Rf值的大小主要取決于展開劑的極性大小，即展開劑極性大，化合物Rf值大，展開劑極性小，化合物的Rf值小。 Rf= 薄層板根據(jù)在制備過程中是干法制板還是濕法制板分為二種。干法制板為軟板，濕法制板為硬板。 薄層板吸附能力強弱用活度表示，其與含水量密切相關(guān)，含水量越大，活性級

3、別增大，吸附力減弱，反之，則相反。測定方法采用Brockmann法。利用不同染料測定Rf值，然后根據(jù)其來測定薄層板活度。表1氧化鋁活度和偶氮染料Rf值的關(guān)系偶 氮 染 料氧化鋁活度級（Rf值）級級級級偶 氮 苯0.590.740.850.95對甲基偶氮苯0.160.490.690.89蘇 丹 黃0.100.250.510.78蘇 丹 紅0.000.100.330.56對氨基偶氮苯0.000.030.030.19表2硅膠活度和偶氮染料Rf值的關(guān)系偶 氮 染 料硅膠活度級（Rf值）級級級級偶 氮 苯0.610.700.830.86蘇 丹 黃0.180.300.530.64蘇 丹 紅0.110.13

4、0.400.50對氨基偶氮苯0.040.070.200.20三、儀器、材料與試劑四、實驗步驟1、薄層板制備（1）濕法制板（2）干法制板2、偶氮染料配制3、點樣4、展開5、實驗記錄及結(jié)論五、注意事項：1、軟板制作不宜過快及停頓；2、點樣量應(yīng)合適，同時展開劑不宜過度，不能淹沒起始線；3、軟板操作要小心振動及風吹等。六、實驗報告按照實驗報告要求認真填寫，并認真完成下次實驗的預(yù)習(xí)實驗二 槐米中蘆丁的提取、分離與鑒定（一）課外作業(yè)1.吸附劑活度與吸附性強弱關(guān)系？2.什么是Rf值？其影響因素有哪些？3.根據(jù)試驗中用到的五種偶氮染料，試判斷其極性大小順序并解釋與Rf值的關(guān)系。后附講稿(jinggo)共 頁實

5、驗(shyn)一 硅膠(u jio)、氧化鋁薄層板的制備與應(yīng)用一、實驗(shyn)目的通過本實驗的學(xué)習(xí)：1學(xué)習(xí)薄層軟板和硬板的制備方法；2. 熟悉薄層色譜法的操作步驟；3. 掌握軟板和硬板活度定級測定方法。二、實驗原理薄層色譜是色譜法中應(yīng)用最普遍的方法之一，具有分離速度快，效率高等特點。適用于微量樣品的分離鑒定，天然藥物化學(xué)成分的研究中得到了越來越廣泛的應(yīng)用和發(fā)展。薄層色譜是把吸附劑(或載體)均勻地鋪在一塊玻璃板或塑料板上形成薄層，在此薄板上進行色譜分離，按分離機制可分為吸附，分配，離子交換和凝膠過濾色譜等。薄層色譜多數(shù)情況是一種吸附層析，利用吸附劑對化合物吸附能力的不同而達到分離，吸附劑吸附

6、能力的大小與化合物極性大小有關(guān)?；衔飿O性大，被吸附劑吸附得牢，Rf值小，反之，化合物極性小，Rf值大。一個化合物在某種吸附劑上Rf值的大小主要取決于展開劑的極性大小，即展開劑極性大，化合物Rf值大，展開劑極性小，化合物的Rf值小。 Rf= 薄層板根據(jù)在制備過程中是干法制板還是濕法制板分為二種。干法制板為軟板，濕法制板為硬板。 薄層板吸附能力強弱用活度表示，其與含水量密切相關(guān)，含水量越大，活性級別增大，吸附力減弱，反之，則相反。測定方法采用Brockmann法。利用不同染料測定Rf值，然后根據(jù)其來測定薄層板活度。表1氧化鋁活度和偶氮染料Rf值的關(guān)系偶 氮 染 料氧化鋁活度級（Rf值）級級級級偶

7、 氮 苯0.590.740.850.95對甲基偶氮苯0.160.490.690.89蘇 丹 黃0.100.250.510.78蘇 丹 紅0.000.100.330.56對氨基偶氮苯0.000.030.030.19表2硅膠活度和偶氮染料Rf值的關(guān)系偶 氮 染 料硅膠活度級（Rf值）級級級級偶 氮 苯0.610.700.830.86蘇 丹 黃0.180.300.530.64蘇 丹 紅0.110.130.400.50對氨基偶氮苯0.040.070.200.20三、儀器、材料(cilio)與試劑儀器：層析缸、玻璃板、玻璃棒、容量瓶、膠布(jiob)、毛細管、研缽、天平(tinpng)、烘箱等。試劑：硅

8、膠（薄層用）、氧化鋁（薄層用）、CCL4（A.R）、偶氮苯、對甲基偶氮苯、蘇丹黃、蘇丹紅、對氨基偶氮苯、0.8%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）。四、實驗步驟1、薄層板制備（1）濕法制板取硅膠G3g，置研缽中加0.8%羧甲基纖維素鈉溶液10ml，研磨均勻，放置片刻，隨即用藥匙取一定量，分別倒在玻璃板上，輕輕振動玻璃板，使薄層面平整均勻，水平放置，待薄層發(fā)白近干，于烘箱中110烘干活化30min，冷后貯于干燥器內(nèi)備用。不同規(guī)格的玻璃板所用硅膠重量不同。（2）干法制板取表面光滑，直徑均一的玻璃棒一支，依據(jù)所制備薄層的寬度、厚度要求，在玻璃棒兩端各包上橡皮膠，也可以套上塑料管或橡皮管，一般以0.25（

9、用于分析分離）1mm（用于制備分離）為宜。在一端已包好的橡皮膠上，再多包56層橡皮膠或一段橡皮管，作為涂鋪時的固定邊，以防止滑動時邊緣不整齊。操作時，將氧化鋁粉均勻地鋪在玻璃板上，再用玻棒壓在玻板上將吸附劑自一端推向另一端，推移時，不宜太快，也不應(yīng)中途停頓，否則厚薄不均勻，影響層析效果。2、偶氮染料配制 偶氮苯30mg、對甲基偶氮苯、蘇丹黃、蘇丹紅、對氨基偶氮苯各20mg，以CCL4定容于50ml容量瓶中。3、點樣以鉛筆尖或毛細管尖在薄層板一端13cm處，輕輕觸及薄層再作起始線標記，間隔lcm左右點上5個可以看清的小點，然后分別用毛細管蘸取各種染料分別點在原點上，點樣的斑點直徑不得超過0.5c

10、m。4、展開將點樣的軟板輕輕置于預(yù)先加入重蒸餾四氯化碳的層析槽中（事先墊高層析槽的下行端），勿使展開劑與薄層板接觸，蓋好槽蓋放置半小時，以進行飽和。半小時后，調(diào)換層析槽下支撐物，再墊高層析槽的上行端，使薄層板與容器底部交角為1040之間，令展開劑流集于層析槽的下行端，使與薄層板相接觸（以不淹沒點樣原點為度）以進行展層，當展開劑展至薄層板全長的三分之二時，即可取出薄層板， 迅速量出前沿至原點的總長度和原點至各個色斑的長度，依以下公式計算各色點的比移值（Rf）。硬板則用正己烷乙酸乙酯（9:1）作為展開劑，薄層板與容器夾角要求不高。Rf=5、實驗記錄(jl)及結(jié)論 記錄(jl)斑點位置、計算Rf值，

11、根據(jù)(gnj)表1、2中數(shù)據(jù)查詢活度。五、注意事項：1、軟板制作不宜過快及停頓；2、點樣量應(yīng)合適，同時展開劑不宜過度，不能淹沒起始線；3、軟板操作要小心振動及風吹等。六、實驗報告按照實驗報告要求認真填寫，并認真完成下次實驗的預(yù)習(xí)實驗二 槐米中蘆丁的提取、分離與鑒定（一）學(xué)習(xí)蘆丁的提取及精制方法。 天然(tinrn)藥物化學(xué)實驗 教案(jio n)首頁題實驗二 槐米中蘆丁的提取、分離與鑒定（一）編號2課時4一、教學(xué)目的通過本實驗的學(xué)習(xí)，使學(xué)生掌握蘆丁的提取及精制的原理和操作方法。二、重點與難點重點掌握蘆丁的提取及精制的原理和操作方法。實施步驟方法教 學(xué) 內(nèi) 容時間講解和演示操作一、 實驗?zāi)康亩?/p>

12、 實驗原理三、 儀器、材料與試劑四、 實驗步驟5min20min10min145min板書設(shè)計一、實驗?zāi)康?通過蘆丁的提取與精制掌握堿-酸法提取黃酮類化合物的原理及操作。2掌握蘆丁的一種提取、精制方法及提制過程中防止甙水解的方法。二、實驗原理：本實驗主要是利用蘆丁中含有較多的酚羥基，可溶于堿中，加酸酸化后又可析出蘆丁結(jié)晶的性質(zhì)，采用堿溶酸沉法提取，并用蘆丁對冷、熱水的溶解度相差懸殊的特性進行精制。三、儀器、材料與試劑四、實驗步驟（一）提?。海ǘ┚疲何濉⒆⒁馐马棧?本實驗采用堿溶酸沉法從槐米中提取蘆丁，收率穩(wěn)定，且操作簡便。在提取前應(yīng)注意將槐米略搗碎，使蘆丁易于被熱水溶出。槐花中含有大量粘液

13、質(zhì)，加入石灰乳使生成鈣鹽沉淀除支。pH應(yīng)嚴格控制在8-9，不得超過10。因為在強堿條件下煮沸，時間稍長可促使蕓香甙水解破壞，使提取率明顯下降。酸沉一步pH為2-3，不宜過低，否則會使蕓香甙形成鹽溶于水，降低了收率。2提取過程中加入硼砂水的作用：即能調(diào)節(jié)堿性水溶液的pH，又能保護蕓香甙分子中的鄰二酚羥基不被氧化，亦保護鄰二酚羥基不與鈣離子絡(luò)合，使蕓香甙不受損失。3蕓香甙的提取方法除了用堿溶酸沉法外，還可利用蕓香甙在冷水及沸水中的溶解度不同，采用沸水提取法。又報道將生產(chǎn)工藝改進為95%乙醇回流提取后回收醇得浸膏，然后將粗浸膏經(jīng)除去脂溶性雜質(zhì)后，用水洗凈，過濾，干燥即得蕓香甙，可提高收率696%，并

14、降低了成本。因此可根據(jù)不同原料采用各種不同方法提取。4槲皮素以乙醇重結(jié)晶時，如所用的乙醇濃度過高（90以上），一般不易析出結(jié)晶。此時可于乙醇溶液中滴加適量蒸餾水，使呈微濁狀態(tài)，放置，槲皮素即可析出。六、實驗報告按照實驗報告要求認真填寫，并認真完成下次實驗的預(yù)習(xí)實驗二 槐米中蘆丁的提取、分離與鑒定（二）蘆丁的水解及槲皮素精制，同時了解槲皮素乙?；锏闹苽浞椒?。課外作業(yè) 1本實驗提取過程中應(yīng)注意哪些問題？2根據(jù)蘆丁的性質(zhì)還可采用何種方法進行提??？簡要說明理由。后附講稿(jinggo)共 頁實驗(shyn)二 槐米中蘆丁的提取、分離(fnl)與鑒定（一）蘆丁(l dn)（Rutin）廣泛存在于植物界

15、中，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)含蘆丁的植物至少在70種以上，如煙葉、槐花、蕎麥和蒲公英中均含有。尤以槐花米（為植物Sophora japonica的未開放的花蕾）和蕎麥中含量最高，可作為大量提取蘆丁的原料?；被诪槎箍浦参锘被ǖ奈撮_放花蕾。味苦性涼，具清熱、涼血、止血之功?；被ǖ闹饕瘜W(xué)成分為蘆丁，又名蕓香甙，含量可達12-16%。蘆丁是由槲皮素（Quercetin）3位上的羥基與蕓香糖（Rutinose）為葡萄糖（Glucose）與鼠李糖（Rhamnose）組成的雙糖脫水合成的苷。為淺黃色粉末或極細的針狀結(jié)晶，含有三分子的結(jié)晶水，熔點為174178，無水物188190。溶解度：冷水中為1:10000；熱水中1

16、:200；冷乙醇1:650；熱乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于堿而呈黃色。蘆丁具有維生素P的作用。可降低毛細管前壁的脆性和調(diào)節(jié)滲透性，有助于保持及恢復(fù)毛細血管的正常彈性，臨床上用作毛細管脆性引起的出血癥，并常用作防治高血壓病的輔助治療劑?，F(xiàn)在國處也常用蘆丁作食品及飲料的染色劑。一、實驗?zāi)康?通過蘆丁的提取與精制掌握堿-酸法提取黃酮類化合物的原理及操作。2掌握蘆丁的一種提取、精制方法及提制過程中防止甙水解的方法。二、實驗原理：本實驗主要是利用蘆丁中含有較多的酚羥基，可溶于堿中，加酸酸化后又可析出蘆丁結(jié)晶的性質(zhì)，采用堿溶酸沉法提取，并用蘆丁對冷

17、、熱水的溶解度相差懸殊的特性進行精制。三、儀器、材料與試劑槐米、活性炭、石灰乳、0.4硼砂水溶液、2的硫酸溶液、濃鹽酸、正丁醇、冰醋酸、蒸餾水、1的氫氧化鈉溶液、1的三氯化鋁乙醇溶液、1槲皮素乙醇溶液、95乙醇、廣泛pH試紙、中速層析濾紙等。四、實驗步驟（一）提?。悍Q取槐米30g，在乳缽中研碎后，投入300ml0.4硼砂溶液的沸水溶液中煮沸2-3分鐘，在攪拌下加入石灰乳調(diào)pH9，煮沸40分鐘（注意添加水，保持原有體積，保持pH89），趁熱傾出上清液，用棉花過濾（或用四層紗布過濾）。殘渣加100ml水，加石灰乳調(diào)pH9，煮沸30分鐘，趁熱用棉花過濾（或用四層紗布過濾），二次濾液合并。濾液保持在6

18、0，加濃HCl，調(diào)pH2-3，放置過夜，待析出結(jié)晶，過濾，濾餅用蒸餾水洗至pH5-6，抽干，置空氣中晾干，得粗制蘆丁，稱重，計算得率。（二）精制：將蘆丁粗品懸浮于蒸餾水中，煮沸至蘆丁全部溶解，加少量活性炭，煮沸5-10分鐘，趁熱抽濾，冷卻后即可析出結(jié)晶，抽濾至干，置空氣中晾干，或6070干燥，得精制蘆丁，稱重，計算得率。五、注意事項：1本實驗采用堿溶酸沉法從槐米中提取蘆丁，收率穩(wěn)定，且操作簡便。在提取前應(yīng)注意將槐米略搗碎，使蘆丁易于被熱水(r shu)溶出?；被ㄖ泻写罅空骋嘿|(zhì)，加入石灰乳使生成鈣鹽沉淀除支。pH應(yīng)嚴格控制在8-9，不得(bu de)超過10。因為在強堿條件(tiojin)下煮

19、沸，時間稍長可促使蕓香甙水解破壞，使提取率明顯下降。酸沉一步pH為2-3，不宜過低，否則會使蕓香甙形成鹽溶于水，降低了收率。2提取過程中加入硼砂水的作用：即能調(diào)節(jié)堿性水溶液的pH，又能保護蕓香甙分子中的鄰二酚羥基不被氧化，亦保護鄰二酚羥基不與鈣離子絡(luò)合，使蕓香甙不受損失。3蕓香甙的提取方法除了用堿溶酸沉法外，還可利用蕓香甙在冷水及沸水中的溶解度不同，采用沸水提取法。又報道將生產(chǎn)工藝改進為95%乙醇回流提取后回收醇得浸膏，然后將粗浸膏經(jīng)除去脂溶性雜質(zhì)后，用水洗凈，過濾，干燥即得蕓香甙，可提高收率696%，并降低了成本。因此可根據(jù)不同原料采用各種不同方法提取。4槲皮素以乙醇重結(jié)晶時，如所用的乙醇濃

20、度過高（90以上），一般不易析出結(jié)晶。此時可于乙醇溶液中滴加適量蒸餾水，使呈微濁狀態(tài)，放置，槲皮素即可析出。六、實驗報告按照實驗報告要求認真填寫，并認真完成下次實驗的預(yù)習(xí)實驗二 槐米中蘆丁的提取、分離與鑒定（二）蘆丁的水解及槲皮素精制，同時了解槲皮素乙?；锏闹苽浞椒?。 天然(tinrn)藥物化學(xué)實驗 教案(jio n)首頁題實驗三 槐米中蘆丁的提取、分離與鑒定（二）編號3課時4一、教學(xué)目的通過本次學(xué)習(xí)，使學(xué)生掌握黃酮苷水解制備黃酮苷元的方法。二、重點與難點重點了解蘆丁水解制備槲皮素的原理及方法。實施步驟方法教 學(xué) 內(nèi) 容時間講解和演示操作一、 實驗?zāi)康亩?實驗原理三、 儀器、材料與試劑四、

21、 實驗步驟5min25min10min140min板書設(shè)計一、實驗?zāi)康恼莆拯S酮甙水解生成甙元的方法及二者之間的分離。二、實驗原理：蘆丁是由槲皮素（Quercetin）3位上的羥基與蕓香糖（Rutinose）為葡萄糖（Glucose）與鼠李糖（Rhamnose）組成的雙糖脫水合成的苷。蘆丁可被稀酸水解，生成槲皮素及葡萄糖、李糖，并能通過紙層析鑒定。蕓 香 甙三、儀器、材料與試劑四、實驗步驟蘆丁的水解：槲皮素精制：糖樣品制備：五、注意事項：用乙醇重結(jié)晶槲皮素時，若乙醇濃度過高，則不易析出結(jié)晶，此時，可在乙醇溶液中滴加適量蒸餾水使呈微濁狀態(tài)，則槲皮素可大量析出結(jié)晶。六、實驗報告按照實驗報告要求認真填

22、寫，并認真完成下次實驗的預(yù)習(xí)實驗二 槐米中蘆丁的提取、分離與鑒定（三）蘆丁、槲皮素及糖（葡萄糖、鼠李糖）的主要性質(zhì)和鑒定方法。課外作業(yè)試解釋蕓香苷水解過程中出現(xiàn)的混濁澄清混濁現(xiàn)象。后附講稿(jinggo)共 頁實驗(shyn)三 槐米中蘆丁的提取、分離(fnl)與鑒定（二）一、實驗(shyn)目的掌握黃酮甙水解生成甙元的方法及二者之間的分離。二、實驗原理：蘆丁是由槲皮素（Quercetin）3位上的羥基與蕓香糖（Rutinose）為葡萄糖（Glucose）與鼠李糖（Rhamnose）組成的雙糖脫水合成的苷。為淺黃色粉末或極細的針狀結(jié)晶，含有三分子的結(jié)晶水，熔點為174178，無水物188190

23、。溶解度：冷水中為1:10000；熱水中1:200；冷乙醇1:650；熱乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于堿而呈黃色。蘆丁可被稀酸水解，生成槲皮素及葡萄糖、李糖，并能通過紙層析鑒定。蕓 香 甙三、儀器、材料與試劑槐米、活性炭、石灰乳、0.4硼砂水溶液、2的硫酸溶液、濃鹽酸、正丁醇、冰醋酸、蒸餾水、1的氫氧化鈉溶液、1的三氯化鋁乙醇溶液、1槲皮素乙醇溶液、95乙醇、廣泛pH試紙、中速層析濾紙等。四、實驗步驟蘆丁的水解：取蘆丁1g，研碎，加2硫酸水溶液80ml，小火加熱，微沸回流30-60min，并及時補充蒸發(fā)掉的水分。在加熱過程中，開始時溶液呈

24、渾濁狀態(tài)，約10min后，溶液由渾濁轉(zhuǎn)為澄清，逐漸析出黃色小針狀結(jié)晶，即水解產(chǎn)物槲皮素，繼續(xù)加熱至結(jié)晶物不再增加時為止。抽濾，保留濾液40ml，以檢查濾液中的單糖。槲皮素精制：所濾得的槲皮素粗晶水洗至中性，加70乙醇80ml加熱回流使之溶解，趁熱抽濾，放置析晶。抽濾，得精制槲皮素。減壓下110干燥，可得槲皮素無水物。糖樣品制備：取上述濾除槲皮素保留的水解母液40ml，加氫氧化鋇細粉約3g中和至pH7，自然過濾，除去生成的硫酸鋇沉淀，濾液濃縮至1ml，供薄層色譜點樣用。五、注意事項：用乙醇重結(jié)晶槲皮素時，若乙醇濃度過高，則不易析出結(jié)晶，此時，可在乙醇溶液中滴加適量蒸餾水使呈微濁狀態(tài)，則槲皮素可大

25、量析出結(jié)晶。六、實驗報告按照實驗報告要求認真填寫(tinxi)，并認真完成下次實驗的預(yù)習(xí)實驗二 槐米中蘆丁的提取(tq)、分離與鑒定（三）蘆丁(l dn)、槲皮素及糖（葡萄糖、鼠李糖）的主要性質(zhì)和鑒定方法。 天然藥物(yow)化學(xué)實驗 教案(jio n)首頁題實驗四 槐米中蘆丁的提取、分離與鑒定（三）編號4課時4一、教學(xué)目的通過本實驗的學(xué)習(xí)，使學(xué)生掌握黃酮類化合物的主要性質(zhì)和鑒定方法。二、重點與難點重點：使學(xué)生掌握蘆丁、槲皮素及糖（葡萄糖、鼠李糖）的主要性質(zhì)和鑒定方法。實施步驟方法教 學(xué) 內(nèi) 容時間講解和演示操作一、 實驗?zāi)康亩?實驗原理三、 儀器、材料與試劑四、 實驗步驟5min20min

26、10min145min板書設(shè)計一、實驗?zāi)康氖煜ぬJ丁、槲皮素的結(jié)構(gòu)性質(zhì)、檢識方法和薄層色譜或紙層析鑒定方法。二、實驗原理： 利用吸附薄層色譜或紙色譜法的分離原理，蘆丁與對照品在同一條件下進行展開，顯色，以達到鑒定蘆丁的目的。通過專屬的化學(xué)顯色反應(yīng)，確定蘆丁成分的類型。三、儀器、材料與試劑四、實驗步驟1. 顯色反應(yīng)鹽酸-鎂粉試驗：取蘆丁少許置于試管中，加5乙醇2ml，在水浴中加熱溶解，滴加濃鹽酸2滴，再加鎂粉約50mg，即產(chǎn)生劇烈的反應(yīng)。溶液逐漸由黃色變?yōu)榧t色。2. 點滴顯色反應(yīng)取蘆丁及槲皮素的甲醇溶液分別點在濾紙上，揮發(fā)除去溶劑，然后分別點下列試劑，觀察并記錄顯色前后顏色及熒光變化。1）1%三氯

27、化鐵乙醇溶液2）2%三氯化鋁乙醇溶液（365nm下觀察）3）氫氧化鈉溶液3. 苷和苷元的薄層色譜鑒定吸附劑 硅膠G（1040u）-0.4%CMC水液制板，105110活化1小時展開劑 氯仿-甲醇-甲酸（15：5：1）供試品 實驗產(chǎn)品1蕓香苷醇溶液及1槲皮素醇溶液對照品 1蕓香苷醇溶液及1槲皮素醇溶液顯色 a. 先在可見光下觀察，然后在紫外光下觀察（365nm） b. 經(jīng)氨氣熏蒸后再觀察； c. 噴三氯化鋁試劑前后觀察顏色變化（365nm紫外燈下）。記錄圖譜，并計算Rf值。4. 糖的紙色譜檢識：取上述蘆丁水解后的母液20ml，加入氫氧化鋇細粉（約2.6g）中和至pH7，濾除生成的硫酸鋇沉淀。濾液

28、中水浴中濃縮至12ml，供紙色譜點樣用。支持劑：新華層析濾紙（中速、20cm7cm）樣 品：水解濃縮液對照品：a. 葡萄糖標準品水溶液 b. 鼠李糖標準品水溶液展開劑：正丁醇：冰醋酸：水（4：1：5上層）顯 色：a. 噴苯胺-鄰苯二甲酸試劑，于105加熱10min，顯棕色或棕紅色斑點。記錄圖譜，并計算Rf值。五、注意事項： 及時記錄實驗數(shù)據(jù)，同時在實驗過程中要注意紫外線傷害。六、實驗報告按照實驗報告要求認真填寫，并認真完成下次實驗的預(yù)習(xí)大黃中游離蒽醌類成分的提取、分離與鑒定（一）。課外作業(yè) 1.如何證明蘆丁中只含有葡萄糖和鼠李糖？后附講稿(jinggo)共 頁實驗(shyn)四 槐米中蘆丁的提

29、取(tq)、分離與鑒定（三）一、實驗(shyn)目的熟悉蘆丁、槲皮素的結(jié)構(gòu)性質(zhì)、檢識方法和薄層色譜或紙層析鑒定方法。二、實驗原理： 利用吸附薄層色譜或紙色譜法的分離原理，蘆丁與蘆丁對照品在同一條件下進行展開，顯色，以達到鑒定蘆丁的目的。通過專屬的化學(xué)顯色反應(yīng)，確定蘆丁成分的類型。三、儀器、材料與試劑槐米、活性炭、石灰乳、0.4硼砂水溶液、2的硫酸溶液、濃鹽酸、正丁醇、冰醋酸、蒸餾水、1的氫氧化鈉溶液、1的三氯化鋁乙醇溶液、1槲皮素乙醇溶液、95乙醇、廣泛pH試紙、中速層析濾紙、硫酸，鎂粉、三氯化鋁、三氯化鐵等。四、實驗步驟1. 顯色反應(yīng)鹽酸-鎂粉試驗：取蘆丁少許置于試管中，加5乙醇2ml，在水

30、浴中加熱溶解，滴加濃鹽酸2滴，再加鎂粉約50mg，即產(chǎn)生劇烈的反應(yīng)。溶液逐漸由黃色變?yōu)榧t色。2. 點滴顯色反應(yīng)取蘆丁及槲皮素的甲醇溶液分別點在濾紙上，揮發(fā)除去溶劑，然后分別點下列試劑，觀察并記錄顯色前后顏色及熒光變化。1）1%三氯化鐵乙醇溶液2）2%三氯化鋁乙醇溶液（365nm下觀察）3）氫氧化鈉溶液3. 苷和苷元的薄層色譜鑒定吸附劑 硅膠G（1040u）-0.4%CMC水液制板，105110活化1小時展開劑 氯仿-甲醇-甲酸（15：5：1）供試品 實驗產(chǎn)品1蕓香苷醇溶液及1槲皮素醇溶液對照品 1蕓香苷醇溶液及1槲皮素醇溶液顯色 a. 先在可見光下觀察，然后在紫外光下觀察（365nm） b.

31、經(jīng)氨氣熏蒸后再觀察； c. 噴三氯化鋁試劑前后觀察顏色變化（365nm紫外燈下）。記錄圖譜，并計算Rf值。4. 糖的紙色譜檢識：取上述蘆丁水解后的母液20ml，加入氫氧化鋇細粉（約2.6g）中和至pH7，濾除生成的硫酸鋇沉淀（可用滑石粉助濾）。濾液中水浴中濃縮至12ml，供紙色譜點樣用。支持劑：新華層析濾紙（中速、20cm7cm）樣 品：水解濃縮液對照品：a. 葡萄糖標準品水溶液 b. 鼠李糖標準品水溶液展開劑：正丁醇：冰醋酸：水（4：1：5上層）顯 色：a. 噴苯胺(bn n)-鄰苯二甲酸試劑(shj)，于105加熱(ji r)10min，顯棕色或棕紅色斑點。記錄圖譜，并計算Rf值。五、注意

32、事項： 及時記錄實驗數(shù)據(jù)，同時在實驗過程中要注意紫外線傷害。六、實驗報告按照實驗報告要求認真填寫，并認真完成下次實驗的預(yù)習(xí)大黃中游離蒽醌類成分的提取、分離與鑒定（一）。天然藥物化學(xué)實驗 教案首頁課題實驗五 大黃中游離蒽醌類成分的提取、分離與鑒定（一）編號5課時4一、教學(xué)目的通過本實驗的學(xué)習(xí)，使學(xué)生掌握植物總RNA的純化及溶解的原理和方法。二、重點與難點重點是熟練掌握植物總RNA的純化及溶解的方法實施步驟方法教 學(xué) 內(nèi) 容時間講解和演示操作實驗?zāi)康膶嶒炘韮x器、材料與試劑實驗步驟5min10min10min155min板書設(shè)計一、實驗?zāi)康?掌握蒽醌苷元的提取方法雙相酸水解法。2. 掌握pH梯度萃

33、取法的原理及操作技術(shù)。二、實驗原理：1.提取原理雙相酸水解法2分離原理pH梯度法三、儀器、材料與試劑四、實驗步驟1大黃總蒽醌苷元的提取EMBED ChemDraw.Document.4.52總蒽醌苷元的分離與精制1）大黃酸的分離與精制2）大黃素的分離與精制3）蘆薈大黃素的分離和精制五、注意事項：大黃中的蒽醌類成分大部分與糖結(jié)合，以蒽醌的形式存在于植物組織中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有機溶劑，用苯時應(yīng)注意苯蒸氣的揮發(fā)，嚴防中毒；所得的氯仿液中如帶有酸水液，應(yīng)該用分液漏斗分出棄去，并用蒸餾水回洗一次除去酸性以免影響梯度萃取。氯仿提取液放置中如有沉淀析出，可濾取之，

34、該沉淀多為大黃素，余液進行下一步分離試驗用。 分離萃取時一定注意乳化層的分出，不要混入，并且每步最好用新鮮CHCl3，回洗堿水液?；叵匆簯?yīng)棄去，可除去混入堿液中的大黃素甲醚和大黃酚。留取5ml的三氯甲烷提取液做總樣，供最后層析鑒定用。六、實驗報告：認真填寫本次實驗報告按照實驗報告要求認真填寫，并認真完成下次實驗的預(yù)習(xí)大黃中游離蒽醌類成分的提取、分離與鑒定（二）利用硅膠色譜法進行大黃酚及大黃素甲醚的分離方法，以及蒽醌類化合物鑒定技術(shù)。課外作業(yè)簡述液液萃取的原理，溶劑選擇原則和操作技術(shù)。什么是雙相酸水解？pH梯度萃取法的原理是什么？該法適用于哪些中藥成分的分離？分離大黃中總蒽醌苷元的合適pH緩沖溶

35、液是如何確定的？后附講稿(jinggo)共 頁實驗(shyn)五 大黃中游離蒽醌類成分(chng fn)的提取、分離與鑒定（一）大黃記載于神農(nóng)本草經(jīng)等許多文獻中，用于泄下(xi xi)、健胃、清熱、解毒等。 自古以來，大黃在植物性瀉下藥中占有重要位置，是一位很早就被各國藥典所收載的世界性生藥。大黃的種類繁多，優(yōu)質(zhì)大黃是蓼科植物掌葉大黃（Rheum palmatclm L），大黃（R. officinale Baill）及唐古特大黃（R. tangutium Maxim.et Regll）的根莖及根，大黃中含有多種游離的羥基蒽醌類化合物以及它們與糖所形成的苷。已經(jīng)知道的羥基蒽醌主要有下列五種：R

36、1R2名 稱晶 形熔 點-H-COOH大黃酸(Rhein)黃色針晶318320-H-CH2OH蘆薈大黃素(Aloe-emodin)橙色細針晶206208-H-CH3大黃酚(Chyrsophanol)金色片狀結(jié)晶196-CH3-OH大黃素(Emodin)橙色針晶256257-CH3-大黃素甲醚(Physcion)磚紅色針晶207 大黃中蒽醌苷元，其結(jié)構(gòu)不同，因而酸性強弱也不同。大黃酸連有-COOH，酸性最強；大黃素連有-OH，酸性第二；蘆薈大黃素連有芐醇-OH，酸性第三；大黃素甲醚和大黃酚均具有1,8-二酚羥基，前者連有-OCH3和-CH3，后者只連有-CH3，因而后者酸性排在第四位。一、實驗?zāi)?/p>

37、的1掌握蒽醌苷元的提取方法雙相酸水解法。2. 掌握pH梯度萃取法的原理及操作技術(shù)。二、實驗原理：1.提取原理雙相酸水解法雙相酸水解法，為一相為與酸水不相容的有機溶劑，另一相為酸水，加熱回流水解的方法。由于大黃中的羥基蒽醌類化合物多以苷的形式存在，所以首先要將苷水解成苷元，本實驗利用硫酸和三氯甲烷為雙相酸水解的溶劑，采用加熱回流發(fā)，提取大黃中的游離蒽醌類化合物。根據(jù)苷元不溶于水，可溶于乙醚，三氯甲烷等親脂性有機溶劑的性質(zhì)，在加熱回流過程中，稀硫酸可將蒽醌苷水解成苷元，游離出來后溶于三氯甲烷，從而提取出來。2分離原理pH梯度法 根據(jù)蒽醌苷元酸性強弱不同，選用不同的pH堿液進行分步萃取，以分離酸度不

38、同的蒽醌苷元。大黃酸連有-COOH，酸性最強；大黃素連有-OH，酸性第二；蘆薈大黃素連有芐醇-OH，酸性第三；大黃素甲醚和大黃酚均具有1,8-二酚羥基，前者連有-OCH3和-CH3，后者只連有-CH3，因而后者酸性排在第四位。三、儀器、材料(cilio)與試劑實驗試劑(shj)及試藥：大黃(dihung)藥材粗粉2Kg，氯仿500ml 10瓶，濃硫酸2瓶，濃鹽酸2瓶，冰醋酸，苯，乙酸乙酯，碳酸鈉（5% Na2CO3溶液3000ml），碳酸氫鈉（5% NaHCO3溶液3000ml），氫氧化鈉（5% NaOH溶液1000ml），氫氧化鉀，醋酸鎂試劑等。實驗儀器設(shè)備：500ml圓底燒瓶10個，冷凝回

39、流管10只，500ml分液漏斗10只，500ml燒杯20只，100-250ml量筒10只，常壓漏斗（5-10cm斗徑10只），定性濾紙（10cm）2盒，毛細管點樣器1盒，玻璃噴瓶4套，廣譜PH試紙5盒，紗布一卷，多孔水浴鍋5臺，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀2臺四、實驗步驟總蒽醌苷元的提取、分離工藝流程1大黃總蒽醌苷元的提取 大黃粉50g，置于500ml燒瓶中，加20%硫酸溶液100ml和三氯甲烷250ml，水浴回流提取4h，放置，冷卻后過濾，殘渣棄去，三氯甲烷提取液置于分液漏斗中，分出酸水層，得三氯甲烷提取液。2總蒽醌苷元的分離與精制1）大黃酸的分離與精制將含有總游離蒽醌的氯仿液移至500ml的分液漏斗中，加P

40、H8緩沖液（5% NaHCO3溶液）200ml振搖萃取多次，靜置至徹底分層，放出氯仿液后，倒出堿水液至置250ml燒杯中，攪拌下加20%HCl酸化至PH=3，待黃色沉淀析出完全后，過濾、少量水洗沉淀至洗出液為中性，干燥，干燥后的樣品加冰醋酸10ml加熱使溶，趁熱過濾，濾液靜置，析出黃色針晶為大黃酸，過濾，用少量冰醋酸淋洗結(jié)晶，即得純品。2）大黃素(hun s)的分離與精制將提過大黃(dihung)酸的氯仿液繼續(xù)移至分液漏斗中，用PH10緩沖液（5%NaCO3溶液(rngy)）300ml振搖萃取2次（2次，每次150ml，至堿液無色），徹底分層后，分出堿水層于500ml錐形瓶中，攪拌下并用20%

41、HCl酸化至PH=2，析出棕黃色沉淀，抽濾，少量水洗沉淀至洗出液為中性，干燥，用15ml丙酮加熱使溶，趁熱過濾，析出橙色大針晶，過濾后，用少量丙酮淋洗結(jié)晶，即得大黃素純品。3）蘆薈大黃素的分離和精制余下氯仿液移至分液漏斗后，加5%NaCO3:5%NaOH (9:1) 堿水液200ml振搖萃取2次，堿水液加HCl酸化，析出的沉淀過濾水洗干燥，用10ml乙酸乙酯重結(jié)晶，得黃色針晶的蘆薈大黃素純品。五、注意事項：大黃中的蒽醌類成分大部分與糖結(jié)合，以蒽醌的形式存在于植物組織中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有機溶劑，用苯時應(yīng)注意苯蒸氣的揮發(fā)，嚴防中毒；所得的氯仿液中如帶有酸

42、水液，應(yīng)該用分液漏斗分出棄去，并用蒸餾水回洗一次除去酸性以免影響梯度萃取。氯仿提取液放置中如有沉淀析出，可濾取之，該沉淀多為大黃素，余液進行下一步分離試驗用。 分離萃取時一定注意乳化層的分出，不要混入，并且每步最好用新鮮CHCl3，回洗堿水液?；叵匆簯?yīng)棄去，可除去混入堿液中的大黃素甲醚和大黃酚。留取5ml的三氯甲烷提取液做總樣，供最后層析鑒定用。六、實驗報告： 按照實驗報告要求認真填寫，并認真完成下次實驗的預(yù)習(xí)大黃中游離蒽醌類成分的提取、分離與鑒定（二）利用硅膠色譜法進行大黃酚及大黃素甲醚的分離方法，以及蒽醌類化合物鑒定技術(shù)。天然藥物化學(xué)實驗 教案首頁課題實驗六 大黃中游離蒽醌類成分的提取、分

43、離與鑒定（二）編號6課時4一、教學(xué)目的通過本實驗的學(xué)習(xí)，使學(xué)生掌握硅膠柱色譜的操作技術(shù)及蒽醌類化合物的化學(xué)鑒定及色譜鑒定技術(shù)。二、重點與難點重點是熟練掌握硅膠柱色譜的操作技術(shù)。實施步驟方法教 學(xué) 內(nèi) 容時間講解和演示操作一、 實驗?zāi)康亩?實驗原理三、 儀器、材料與試劑四、 實驗步驟5min10min10min155min板書設(shè)計一、實驗?zāi)康?. 通過大黃酚及大黃素甲醚的分離試驗，掌握硅膠柱色譜的操作技術(shù)。2. 掌握蒽醌類化合物的化學(xué)鑒定及色譜鑒定技術(shù)。二、實驗原理 大黃中游離蒽醌的極性大小順序為：大黃酸大黃素蘆薈大黃素大黃素甲醚大黃酚。前三種可用pH梯度萃取法分離。 大黃酚和大黃素甲醚酸性相

44、近，但極性不同，可用硅膠柱色譜法進行分離。 總蒽醌及各種分離成分可用色譜法進行鑒別。同時硅膠柱色譜洗脫液可用色譜法鑒別后，合并單一成分的洗脫液。三、儀器、材料與試劑四、實驗步驟1. 硅膠柱色譜分離大黃酚及大黃素甲醚（1）裝柱：取一玻璃層析柱，垂直固定在鐵架臺上，在管的下端墊入少量棉花，裝入100200目硅膠（約1/3高，濕法裝柱）。（2）上樣：將樣品置于小蒸發(fā)皿中，用少量石油醚分散，另加用3倍量硅膠拌和均勻，并于水浴上緩緩蒸去溶劑。然后將含有樣品的硅膠裝入色譜柱的上端，并蓋一圓形濾紙。（3）洗脫：將色譜柱活塞打開，洗脫劑為石油醚（沸程30-60）-乙酸乙酯（251）混合液。（4）收集：洗脫液3

45、ml一份，分別收集，用硅膠薄層板跟蹤檢查，合并相同成分，回收溶劑，用甲醇重結(jié)晶，分別得到大黃素甲醚好大黃酚精制品。薄層色譜檢查條件：硅膠G-CMC-Na薄層板，石油醚-乙酸乙酯（9:1）展開，可見光下顯示黃色斑點，紫外光下顯示亮黃色斑點，氨氣熏，顯示紅色斑點。2. 游離蒽醌類化合物的鑒定1）.化學(xué)檢識：分別取總蒽醌提取物少許，用乙醚溶解，做如下反應(yīng)：A：堿液試驗：取試液1ml，加10%NaOH數(shù)滴，觀察顏色。B醋酸鎂反應(yīng)：取試樣1ml，加醋酸鎂試劑數(shù)滴，觀察現(xiàn)象。2）.薄層鑒定：吸附劑：硅膠-CMC-Na板展開劑：石油醚-乙酸乙酯-甲酸（15:5:1）上層溶液。展開方式：上行展開。顯色：可見光

46、下顯示黃色斑點，記錄斑點出現(xiàn)位置；濃氨水熏蒸，顯示紅色斑點。觀察記錄斑點位置，記錄圖譜并計算Rf。五、注意事項：大黃中的蒽醌類成分大部分與糖結(jié)合，以蒽醌的形式存在于植物組織中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有機溶劑，用苯時應(yīng)注意苯蒸氣的揮發(fā)，嚴防中毒；六、實驗報告：認真填寫本次實驗報告按照實驗報告要求認真填寫，并認真完成下次實驗的預(yù)習(xí)牡丹皮中丹皮酚的提取、分離與鑒定。課外作業(yè)1.五種游離羥基蒽醌化合物的酸性和極性與結(jié)構(gòu)有什么關(guān)系？Rf值順序如何？后附講稿(jinggo)共 頁實驗(shyn)六 大黃中游離蒽醌類成分的提取(tq)、分離與鑒定（二）一、實驗(shyn)

47、目的1. 通過大黃酚及大黃素甲醚的分離試驗，掌握硅膠柱色譜的操作技術(shù)。2. 掌握蒽醌類化合物的化學(xué)鑒定及色譜鑒定技術(shù)。二、實驗原理 大黃中游離蒽醌的極性大小順序為：大黃酸大黃素蘆薈大黃素大黃素甲醚大黃酚。前三種可用pH梯度萃取法分離。 大黃酚和大黃素甲醚酸性相近，但極性不同，可用硅膠柱色譜法進行分離。 總蒽醌及各種分離成分可用色譜法進行鑒別。同時硅膠柱色譜洗脫液可用色譜法鑒別后，合并單一成分的洗脫液。 三、儀器、材料與試劑 實驗試劑及試藥：大黃藥材粗粉2Kg，氯仿500ml 10瓶，濃硫酸2瓶，濃鹽酸2瓶，冰醋酸，苯，乙酸乙酯，碳酸鈉（5% Na2CO3溶液3000ml），碳酸氫鈉（5% Na

48、HCO3溶液3000ml），氫氧化鈉（5% NaOH溶液1000ml），氫氧化鉀，醋酸鎂試劑等。實驗儀器設(shè)備：500ml圓底燒瓶10個，冷凝回流管10只，500ml分液漏斗10只，500ml燒杯20只，100-250ml量筒10只，常壓漏斗（5-10cm斗徑10只），定性濾紙（10cm）2盒，毛細管點樣器1盒，玻璃噴瓶4套，廣譜PH試紙5盒，紗布一卷，多孔水浴鍋5臺，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀2臺。四、實驗步驟1. 硅膠柱色譜分離大黃酚及大黃素甲醚（1）裝柱：取一玻璃層析柱，垂直固定在鐵架臺上，在管的下端墊入少量棉花，裝入100200目硅膠（約1/3高，濕法裝柱）。（2）上樣：將樣品置于小蒸發(fā)皿中，用少量石油

49、醚分散(fnsn)，另加用3倍量硅膠拌和(bn hu)均勻，并于水浴上緩緩蒸去溶劑。然后將含有樣品的硅膠裝入色譜柱的上端，并蓋一圓形濾紙。（3）洗脫：將色譜(s p)柱活塞打開，洗脫劑為石油醚（沸程30-60）-乙酸乙酯（251）混合液。（4）收集：洗脫液3ml一份，分別收集，用硅膠薄層板跟蹤檢查，合并相同成分，回收溶劑，用甲醇重結(jié)晶，分別得到大黃素甲醚好大黃酚精制品。薄層色譜檢查條件：硅膠G-CMC-Na薄層板，石油醚-乙酸乙酯（9:1）展開，可見光下顯示黃色斑點，紫外光下顯示亮黃色斑點，氨氣熏，顯示紅色斑點。2. 游離蒽醌類化合物的鑒定1）.化學(xué)檢識：分別取總蒽醌提取物少許，用乙醚溶解，做

50、如下反應(yīng)：A：堿液試驗：取試液1ml，加10%NaOH數(shù)滴，觀察顏色。B醋酸鎂反應(yīng)：取試樣1ml，加醋酸鎂試劑數(shù)滴，觀察現(xiàn)象。2）.薄層鑒定：吸附劑：硅膠-CMC-Na板展開劑：石油醚-乙酸乙酯-甲酸（15:5:1）上層溶液。展開方式：上行展開。顯色：可見光下顯示黃色斑點，記錄斑點出現(xiàn)位置；濃氨水熏蒸，顯示紅色斑點。觀察記錄斑點位置，記錄圖譜并計算Rf。五、注意事項：大黃中的蒽醌類成分大部分與糖結(jié)合，以蒽醌的形式存在于植物組織中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有機溶劑，用苯時應(yīng)注意苯蒸氣的揮發(fā)，嚴防中毒；所得的氯仿液中如帶有酸水液，應(yīng)該用分液漏斗分出棄去，并用蒸餾水

51、回洗一次除去酸性以免影響梯度萃取。氯仿提取液放置中如有沉淀析出，可濾取之，該沉淀多為大黃素，余液進行下一步分離試驗用。 分離萃取時一定注意乳化層的分出，不要混入，并且每步最好用新鮮CHCl3，回洗堿水液。回洗液應(yīng)棄去，可除去混入堿液中的大黃素甲醚和大黃酚。留取5ml的三氯甲烷提取液做總樣，供最后層析鑒定用。六、實驗報告：按照實驗報告要求認真填寫，并認真完成下次實驗的預(yù)習(xí)牡丹皮中丹皮酚的提取、分離與鑒定。天然(tinrn)藥物化學(xué)實驗 教案(jio n)首頁課題實驗七 牡丹皮中丹皮酚的提取、分離與鑒定編號7課時4一、教學(xué)目的通過本實驗的學(xué)習(xí)，使學(xué)生掌握用水蒸氣蒸餾法提取丹皮酚的方法及其檢識方法。

52、二、重點與難點重點使學(xué)生掌握用水蒸氣蒸餾法提取丹皮酚的方法實施步驟方法教 學(xué) 內(nèi) 容時間講解和演示操作一、 實驗?zāi)康亩?實驗原理三、 儀器、材料與試劑四、 實驗步驟5min20min10min145min板書設(shè)計一、實驗?zāi)康模簂、掌握用水蒸氣蒸餾法提取丹皮酚的方法。2、掌握丹皮酚的色譜檢識和定性檢識。二、實驗原理：丹皮酚具有揮發(fā)性，可隨水蒸氣蒸餾，又因在冷水中難溶故放冷后析出結(jié)晶。三、儀器、材料與試劑牡丹皮、蒸餾瓶、回流冷凝管、電爐、無水硫酸鈉、氯化鈉、95%乙醇等。四、實驗步驟1. 丹皮酚的提取分離取市售丹皮100g，粉碎，加入450m1蒸餾水、10ml乙醇和40克氯化鈉，浸潤1h后，進行

53、水蒸氣蒸餾，收集蒸餾液約300ml，將蒸餾液放冷，靜置過夜，有白色針狀結(jié)晶析出，濾取結(jié)晶，干燥，稱重。如結(jié)晶不純，可加入95乙醇至全部溶解(約為粗晶的15倍)，抽濾，濾液中加入4倍量的蒸餾水，使溶液呈乳白色，靜置后則有大量白色針狀結(jié)晶析出，若在提取過程中得不到白色結(jié)晶，只有油珠狀物質(zhì)沉出，可在蒸餾液中加入少量晶種，摩擦瓶壁后，即有較大量的丹皮酚結(jié)晶析出。也可用乙醚萃取蒸餾液幾次，合并萃取液后，加無水硫酸鈉脫水，回收乙醚至少量，放置析晶，抽濾，結(jié)晶用少量水洗23次，置干燥器中干燥后稱重。2. 丹皮酚的鑒定 1）升華法產(chǎn)品粉末微量升華，后在顯微鏡下觀察，可見長柱形或針狀及羽狀晶簇，于結(jié)晶上滴加三氯

54、化鐵溶液，則結(jié)晶溶液呈暗紫色，此為丹皮酚反應(yīng)。2）顯色反應(yīng) (1)三氯化鐵反應(yīng)取丹皮酚結(jié)晶少許，滴加5三氯化鐵醇溶液，觀察現(xiàn)象。 (2)與濃硝酸反應(yīng)取丹皮酚結(jié)晶少許，滴加濃硝酸數(shù)滴，觀察現(xiàn)象。 3）薄層色譜鑒別五、注意事項：1. 丹皮因產(chǎn)地、采收季節(jié)的不同，丹皮酚含量差異較大，春秋季節(jié)采收含量高，以四川產(chǎn)的含量較高，實驗時可以根據(jù)含量加減提取的藥材量。 2. 丹皮酚易溶于熱水而難溶于冷水，若采用一般裝置，由于初餾液中的丹皮酚濃度過大，遇冷易析出結(jié)晶，固著于冷凝管內(nèi)壁，加入乙醇可把固著于冷凝管內(nèi)壁的丹皮酚溶解而流人接收瓶中。 3. 加入氯化鈉可明顯提高蒸餾速度，縮短攝取時間。六、實驗報告按照實驗

55、報告要求認真填寫，并認真完成下次實驗的預(yù)習(xí)茶葉中提取咖啡因。課外作業(yè)在蒸餾前為什么在水中加入乙醇和氯化鈉？在溶解后的丹皮酚乙醇溶液中為什么加入適量水？后附講稿(jinggo)共 頁實驗(shyn)七 牡丹皮(dn p)中丹皮酚的提取、分離與鑒定牡丹皮為毛莨科植物(zhw)牡丹Paeonia suffruticosa Andr的干燥根皮。本品具有清熱涼血，活血化瘀的作用，用于溫毒發(fā)斑，吐血，夜熱早涼，無汗骨蒸，經(jīng)閉痛經(jīng)，腫痛瘡毒，跌打損傷等癥。其主要成分有：丹皮酚(含量l.9一2)、牡丹酚甙(丹皮酚甙)、牡丹酚原甙(丹皮酚原甙(含量5一6)、牡丹酚新甙、芍藥甙。尚含揮發(fā)油約0.150.4及植物甾

56、醇等。除此外，含丹皮酚的植物還有矮牡丹Paeonia suffruticosa Andrvar spontanea Rehd的根皮，紫斑牡丹PpapaveraceaAndr的根皮，黃丹皮Ppotanini Kom，四川牡丹Pszechuanica Fang，徐長卿Cynanchum pariculatum(Bge)Kitag。 丹皮中主要成分的物理性質(zhì) l、丹皮酚(paeonol)：C9H10O3，白色針狀結(jié)晶，mp49.550.5，稍溶于水，具有揮發(fā)性，能隨水蒸氣蒸餾，能溶于乙醇、乙醚、丙酮、氯仿、苯等。UV EtOH(max)nm(1g )：29l(4.01)，274(4.17)，316(

57、3.84) 2、丹皮酚甙(paeonoside)：C15H20O8，無色柱狀結(jié)晶(乙醇)，mp8l82，20為39.33(c6.0，H20)，可溶于水、醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于氯仿、苯等。 3、丹皮酚原甙(paeonolide)：C20H28O12，無色柱狀結(jié)晶(乙醇乙酸乙酯)，mpl57158，20為18.20。(c0.36，H20)，可溶于水、醇、丙酮、乙酸乙酯，難溶于苯、石油醚等。一、實驗?zāi)康模簂、掌握用水蒸氣蒸餾法提取丹皮酚的方法。2、掌握丹皮酚的色譜檢識和定性檢識。二、實驗原理：丹皮酚具有揮發(fā)性，可隨水蒸氣蒸餾，又因在冷水中難溶故放冷后析出結(jié)晶。三、儀器、材料與試劑牡丹皮、蒸餾瓶、

58、回流冷凝管、電爐、無水硫酸鈉、氯化鈉、95%乙醇等。四、實驗步驟1. 丹皮酚的提取分離取市售丹皮100g，粉碎，加入450m1蒸餾水、10ml乙醇和40克氯化鈉，浸潤1h后，進行水蒸氣蒸餾，收集蒸餾液約300ml，將蒸餾液放冷，靜置過夜，有白色針狀結(jié)晶析出，濾取結(jié)晶，干燥，稱重。如結(jié)晶不純，可加入95乙醇至全部溶解(約為粗晶的15倍)，抽濾，濾液中加入4倍量的蒸餾水，使溶液呈乳白色，靜置后則有大量白色針狀結(jié)晶析出，若在提取過程中得不到白色結(jié)晶，只有油珠狀物質(zhì)沉出，可在蒸餾液中加入少量晶種，摩擦瓶壁后，即有較大量的丹皮酚結(jié)晶析出。也可用乙醚萃取蒸餾液幾次，合并萃取液后，加無水硫酸鈉脫水，回收乙醚

59、至少量，放置析晶，抽濾，結(jié)晶用少量水洗23次，置干燥器中干燥后稱重。2. 丹皮酚的鑒定 1）升華法產(chǎn)品粉末微量升華，后在顯微鏡下觀察，可見長柱形或針狀及羽狀晶簇，于結(jié)晶上滴加三氯化鐵溶液，則結(jié)晶溶液呈暗紫色，此為丹皮酚反應(yīng)。2）顯色(xin s)反應(yīng) (1)三氯化鐵反應(yīng)(fnyng)取丹皮(dn p)酚結(jié)晶少許，滴加5三氯化鐵醇溶液，觀察現(xiàn)象。 (2)與濃硝酸反應(yīng)取丹皮酚結(jié)晶少許，滴加濃硝酸數(shù)滴，觀察現(xiàn)象。 3）薄層色譜鑒別 薄層析：硅膠GCMCNa板 點樣：丹皮酚供試品和對照品的乙醇溶液 展開劑：環(huán)己烷乙酸乙酯(3：1) 展開方式；上行展開，展距10cm。 顯色：噴以鹽酸酸化的5三氯化鐵醇溶

60、液，熱風吹至斑點顯色清晰。 觀察記錄：記錄圖譜及斑點顏色。五、注意事項：1. 丹皮因產(chǎn)地、采收季節(jié)的不同，丹皮酚含量差異較大，春秋季節(jié)采收含量高，以四川產(chǎn)的含量較高，實驗時可以根據(jù)含量加減提取的藥材量。 2. 丹皮酚易溶于熱水而難溶于冷水，若采用一般裝置，由于初餾液中的丹皮酚濃度過大，遇冷易析出結(jié)晶，固著于冷凝管內(nèi)壁，加入乙醇可把固著于冷凝管內(nèi)壁的丹皮酚溶解而流人接收瓶中。 3. 加入氯化鈉可明顯提高蒸餾速度，縮短攝取時間。六、實驗報告按照實驗報告要求認真填寫，并認真完成下次實驗的預(yù)習(xí)茶葉中提取咖啡因。天然藥物化學(xué)實驗 教案首頁課題實驗八 茶葉中提取咖啡因編號9課時4一、教學(xué)目的通過本實驗的學(xué)