第七章農(nóng)藥及其代謝產(chǎn)物測定分解

1、第七章農(nóng)藥及其代謝產(chǎn)物測定分解農(nóng)藥（pesticides）是指一大類主要用于防治農(nóng)作物病蟲害和殺滅林業(yè)、畜牧業(yè)、公共場所、建筑物和家庭蟲害的化學(xué)物。 Introduction - Definition A pesticide is any substance or mixture of substances intended for preventing , destroying , repelling , or mitigating any pest. A pest is any harmful, destructive, or troublesome animal, plant or mi

2、croorganism. （the U.S EPA） 分類（用途） 殺蟲劑 殺螨劑 殺鼠劑 殺菌劑 除草劑 脫葉劑 植物生長調(diào)節(jié)劑等 有機(jī)磷類 有機(jī)氯類 氨基甲酸酯類 按成分和分子結(jié)構(gòu) 脒類 有機(jī)氟類 無機(jī)類 擬除蟲菊酯類第一節(jié) 有機(jī)磷農(nóng)藥第二節(jié) 有機(jī)氯農(nóng)藥第三節(jié) 擬除蟲菊酯類殺蟲劑第四節(jié) 殺蟲脒有機(jī)磷農(nóng)藥大多為磷酸酯類 (organophosphates)或硫代磷酸酯類 (thio-organophosphates)化合物包括磷酸酯類、硫代磷酸酯類、磷酰胺類、硫代磷酰胺類、焦磷酸酯類和硫代焦磷酸酯類等化合物。第一節(jié) 有機(jī)磷農(nóng)藥R2R1O(or S)PX有機(jī)磷農(nóng)藥的通式結(jié)構(gòu)與其生物活性有一定關(guān)

3、聯(lián)：如堿性基團(tuán)中乙氧基比甲氧基毒性大；酸性基團(tuán)中強酸根比弱酸根毒性大，磷酸酯可直接與膽堿酯酶共價結(jié)合，毒作用迅速，而硫代磷酸酯，須經(jīng)代謝、氧化脫硫，才能與膽堿酯酶結(jié)合發(fā)揮毒作用，毒作用相對較弱，但往拄持續(xù)時間較長。堿性基團(tuán)：烷氧基、苯基、烷胺基等酸性基團(tuán)：-F、-CN、-OCN、-SCN、烷基、烷氧基、硫代烷基、芳香基、芳氧基等商品化的有機(jī)磷農(nóng)藥有近百種，一半以上是有機(jī)磷農(nóng)藥與其他農(nóng)藥的混合制劑。有機(jī)磷農(nóng)藥絕大部分為殺蟲劑，少數(shù)為殺菌劑、除草劑等。我國目前生產(chǎn)的有機(jī)磷農(nóng)藥主要品種有對硫磷、甲基對硫磷、馬拉硫磷、樂果、氧樂果、敵百蟲、敵敵畏、內(nèi)吸磷、甲胺磷、乙酰甲胺磷、殺螟硫磷、辛硫磷、三唑磷和

4、久效磷、稻豐散、異稻瘟凈、磷胺、草甘磷等。一、理化特性有機(jī)磷農(nóng)藥多數(shù)為淡黃色或棕黃色油狀液體，少數(shù)為白色結(jié)晶，有大蒜樣臭味。大部分有機(jī)磷農(nóng)藥沸點較高，但是在常溫下即可揮發(fā)、產(chǎn)生蒸氣，逸散入空氣。 一般難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑和植物油。多數(shù)在水中易發(fā)生水解，尤其在堿性條件下；對光、氧、熱較穩(wěn)定。 表7-1 常用有機(jī)磷農(nóng)藥的理化性質(zhì)、毒性分類及ADI名稱分子式分子量感官特征沸點或熔點（）WHO毒性分類ADI（mg/kg體重）備注內(nèi)吸磷、1059（Demeton）C8H19O3PS2258.34淺黃色油狀液體沸點：134a0.0003甲基內(nèi)吸磷、甲基1059（Demeton-S-methyl）C6H

5、15O3PS2320.29黃色油狀液體沸點：131b0.0003敵敵畏（Dichlorvos）C4H7Cl2O4P220.98無色油狀沸點：74b0.0004敵百蟲（Trichlorfon）C4H7Cl2O4P257.45無色結(jié)晶粉末熔點：83840.01樂果（Dimethoate）C5H12NO3PS2299.26純品白色固體熔點：51520.002工業(yè)品黃褐色油狀馬拉硫磷（Malathion）C10H19O6PS2330.36黃色油狀沸點：1560.3工業(yè)品：褐色油狀對硫磷（Parathion）C10H14NO5PS291.27純品無色無臭液體沸點：157162a0.004工業(yè)品淡黃色油狀

6、有蒜臭甲基對硫磷（Para- thion methyl）C8H10NO5PS263.21純品白色結(jié)晶熔點：36 沸點：158a0.003工業(yè)品淡黃色油狀稻豐散（Phenthoate）C12H17O4PS2320.37黃至棕褐色液體0.003工業(yè)品純度95%磷胺（Phosphamidon）C10H19NO5P299.69淺黃油狀沸點：162a0.0005注：WHO分類：a，極度有害；b，高度有害；，中等有害；，輕度有害。ADI，Acceptable Daily Intake，每日可接受攝入量。class LD50 for the rat (mg/kg Body Weight) oral derm

7、al solidsliquidssolidsliquidsaExtremely hazardous5 20 10 40bHighly hazardous550202001010040400Moderately hazardous50500200200010010004004000Slightly hazardous500200010004000+Unlikely to present hazard in normal use20003000The WHO Recommended Classification of Pesticides by Hazard級 別經(jīng)口LD50（mg/kg） 經(jīng)皮L

8、D50 （mg/kg）吸入LC50（mg/m3,2h）劇毒52020高毒5502020020200中（等）毒5050020020002002000低毒微毒50050005000200050005000200050005000我國農(nóng)藥急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)二、代謝和生物監(jiān)測指標(biāo)有機(jī)磷農(nóng)藥可經(jīng)消化道、呼吸道和皮膚吸收，可分布在肝、腎、肺、脂肪中。 有機(jī)磷農(nóng)藥在體內(nèi)主要通過氧化、還原、水解和結(jié)合等方式進(jìn)行代謝轉(zhuǎn)化，少量可與蛋白質(zhì)共價結(jié)合 。有機(jī)磷農(nóng)藥的氧化作用包括 脫硫作用、脫烷基作用、脫烷?；饔?、脫芳香基作用，硫酯基的氧化和單鏈氧化作用。氧化作用的后果往往使農(nóng)藥的毒性增強。 有機(jī)磷農(nóng)藥的水解作用常使農(nóng)

9、藥的毒性降低。在氧化、水解之后進(jìn)一步在轉(zhuǎn)移酶的作用下可以結(jié)合上羧酸、醇、酚、氨基，亞氨基等基團(tuán)而排泄。主要由尿、少量由糞便、呼出氣排出。有機(jī)磷農(nóng)藥的生化作用主要是 對膽堿酯酶的抑制。中毒表現(xiàn): 中樞及周圍神經(jīng)系統(tǒng)障礙。 體內(nèi)有兩類ChE乙酰膽堿酯酶(AChE) 亦稱真性ChE，具有水解Ach的特殊功能。主要分布于神經(jīng)系統(tǒng)及紅細(xì)胞表面(由神經(jīng)細(xì)胞及幼稚紅細(xì)胞合成)，對神經(jīng)傳導(dǎo)起作用的是真性ChE丁酰膽堿酯酶(BuChE) 也稱假性（擬）ChE，存在于血清、唾液腺及肝臟中(在肝臟中合成)，分解丁酰膽堿的作用較強，分解丙酰膽堿及乙酰膽堿的作用較弱 有機(jī)磷中毒時，兩類ChE都可被抑制Ach和ChE的生

10、理（2）AChE有兩個活性中心 陰離子部位和酶解部位陰離子部位與Ach中帶有正電荷的氮(N)結(jié)合酶解部位與Ach中的乙?；械奶荚?C)結(jié)合，形成膽堿和乙酰化膽堿酯酶乙?；憠A酯酶在乙酰水解酶的作用下水解，乙酰基形成乙酸，膽堿酯酶恢復(fù)原來狀態(tài)AchE分解Ach示意圖-（3）有機(jī)磷對ChE的抑制作用有機(jī)磷化合物+ChE磷?；憠A酯酶Ach蓄積毒蕈堿樣癥狀煙堿樣癥狀中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀有機(jī)磷酸酯對ChE活性的抑制示意圖對硝基酚O-對硝基苯基-M樣作用 興奮M受體， 心血管抑制，腺體分泌增加，平滑肌痙攣，瞳孔縮小，膀胱及子宮收縮，肛門括約肌松弛等N樣作用 N受體受到興奮，作用與煙堿相似，小劑量興奮，大

11、劑量抑制、麻痹中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂。 主要是使大腦先興奮后抑制，突出表現(xiàn)為驚厥、昏迷和對呼吸中樞的抑制。生物檢測標(biāo)志物血液中有機(jī)磷農(nóng)藥的濃度可作為有機(jī)磷農(nóng)藥的接觸生物標(biāo)志物。由于有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)入生物體內(nèi)后能很快抑制膽堿酯酶活性，并具有一定的特異性。故常用膽堿酯酶活性來反映機(jī)體與有機(jī)磷農(nóng)藥的接觸程度，或中毒深度。三、樣品采集及保存有機(jī)磷農(nóng)藥測定 肘靜脈血 + 0.1mol/L鹽酸溶液，冰凍貯存膽堿酯酶活性測定 FeCl3比色法，DTNB光度法 取末梢血 + pH7.4磷酸緩沖液，混勻、加塞。4冰箱保存，盡快測定。四、血液中有機(jī)磷農(nóng)藥的測定 GCHPLCGC-MS氣相色譜法1原理 血液中有機(jī)磷農(nóng)藥在

12、酸性條件下被環(huán)己烷萃取，經(jīng)PT-C18色譜柱凈化，濃縮后，再以2%SE-30為固定相、氮氣為載氣的玻璃填充柱分離，F(xiàn)PD檢測，保留時間定性，峰高或峰面積定量。 2.色譜條件 p115 用丙酮將100g/ml的有機(jī)磷農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，進(jìn)樣2l。以保留時間定性，峰高或峰面積定量，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 將酸處理過的血樣從冷藏箱中取出，恢復(fù)至室溫，取8.0ml（相當(dāng)于2ml血樣），置于10ml具塞刻度離心管中，加2ml環(huán)己烷振蕩萃取，于2000r/min離心10min，收集上清液，將上清液通過已用環(huán)己烷處理過的PT-C18色譜預(yù)處理柱凈化，再重復(fù)萃取、凈化二次，收集凈化液，在氮氣流下?lián)]發(fā)定容至0

13、.10ml。取15l進(jìn)樣。從標(biāo)準(zhǔn)曲線（色譜圖）上查得農(nóng)藥種類和濃度。 注意事項弱極性化合物，可作為有機(jī)磷農(nóng)藥通用的固定相。 SPME(固相微萃取)直接將經(jīng)環(huán)己烷處理過的微量固相萃取器萃取頭插入血樣，平衡2min30min(視血樣有機(jī)磷農(nóng)藥濃度而定)，然后將SPME針管插入氣相色譜儀的進(jìn)樣口。可免去繁瑣的萃取凈化過程，且可減少采血量。3.色譜柱也可用寬口徑石英毛細(xì)管色譜柱。 固相微萃取關(guān)鍵在于選擇石英纖維上的涂層（吸附劑），要使目標(biāo)化合物能吸附在涂層上，而干擾化合物和溶劑不吸附，一般是：目標(biāo)化合物是非極性時選擇非極性涂層；目標(biāo)化合物是極性時選擇極性涂層。 采樣方法是將固相微萃取針管（不銹鋼套管）

14、穿過樣品瓶密封墊，插入樣品瓶中。然后推出萃取頭，將萃取頭浸入樣品（浸入方式）或置于樣品上部空間（頂空方式），進(jìn)行萃取。萃取時間大約2-30min，以達(dá)到目標(biāo)化合物吸附平衡為準(zhǔn)。最后縮回萃取頭，將針管拔出。 五、全血膽堿酯酶活性的測定 乙酰膽堿酯酶（真性膽堿酯酶） 丁酰膽堿酯酶（擬膽堿酯酶）有機(jī)磷農(nóng)藥中毒時，主要是乙酰膽堿酯酶活性受抑制。 體內(nèi)的膽堿酯酶當(dāng)受一種以上有機(jī)磷農(nóng)藥影響、且又不明是何（幾）種有機(jī)磷農(nóng)藥時，可考慮采用哪些測定方法？全血膽堿酯酶活性的測定GC-MS思考測定方法：有簡易測定法、滴定法、酸度法和比色法等，其中較為常用的是三氯化鐵分光光度法 。電化學(xué)分析法、熒光法以及放射測量法（

15、一）三氯化鐵分光光度法 1. 原理 乙酰膽堿 膽堿和乙酸剩余的乙酰膽堿 + 堿性羥胺 乙酰羥胺 + 三氯化鐵 紅棕色羥肟酸鐵絡(luò)合物血液膽堿酯酶水解被水解的乙酰膽堿酸性終止反應(yīng)后剩余的乙酰膽堿顏色深淺與剩余乙酰膽堿的量成正比，于波長520nm比色定量反應(yīng)式如下： 用血色素管取40I耳垂血，注入盛有的比色管中；靜脈血，注入預(yù)先含肝素鈉抗凝劑的比色管中，混勻，置于4冰箱中可保存l周。 （1）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制（2）樣品測定P116中間4.注意事項 1采血時不應(yīng)擠壓耳垂。因為本法是同時測定血球真性膽堿酯酶和血清假性膽堿酯酶；測得的血液膽堿酯酶活性值中，真性膽堿酯酶占85。水解的溫度和時間對測定結(jié)果影響很大

16、，應(yīng)嚴(yán)格控制。 T：370.5 時間：準(zhǔn)確反應(yīng)30min3加堿性羥胺溶液和1+2鹽酸時，必須嚴(yán)格控制振搖時間，使反應(yīng)徹底，否則影響測定結(jié)果。 4加三氯化鐵溶液形成的棕色羥肟酸鐵絡(luò)合物易褪色，故必須在20min內(nèi)比色完畢。 5計算膽堿酯酶活性百分?jǐn)?shù)，應(yīng)以本地區(qū)正常人全血膽堿酯酶活性為基準(zhǔn)。各地區(qū)測定正常值，例數(shù)不應(yīng)少于30人。 （二）DTNB分光光度法 硫代乙酰膽堿 硫代膽堿 黃色化合物（412nm波長進(jìn)行分光光度法測定）膽堿酯酶水解乙酸+ DTNB5,5二硫代雙（2硝基苯甲酸）2.樣品采集和保存 取10l末梢血，置于盛有3ml 的試管中，混勻、加塞，置冰瓶中運輸，或在4冰箱中保存，宜盡快分析測

17、定。 3.樣品測定 4.注意事項 P117第二節(jié) 有機(jī)氯農(nóng)藥有機(jī)氯農(nóng)藥（Organochlorine pesticides）是指一類氯化烴類的農(nóng)藥，包括有機(jī)氯殺蟲劑、殺螨劑和殺菌劑。 有機(jī)氯農(nóng)藥主要有三類，即滴滴涕(DDT)和DDT類似物；六氯苯類：六六六、林丹等；環(huán)戊二烯類：艾氏劑、狄氏劑、氯丹等絕大多數(shù)性質(zhì)穩(wěn)定，在正常環(huán)境條件下不易降解，易于在生物體內(nèi)蓄積。 危害主要表現(xiàn)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和對肝臟的作用。 我國從1983年起禁止生產(chǎn)有機(jī)氯農(nóng)藥，1985年起禁止使用。 一、理化性質(zhì)多數(shù)為白色或淡黃色至棕黃色結(jié)晶或蠟狀固體，氯丹為淡黃色液體。一般揮發(fā)性不大在正常環(huán)境條件下不易分解，有較高的化學(xué)穩(wěn)定

18、性，但遇堿易分解失效；水中溶解度極低，而可溶于有機(jī)溶劑、植物油和脂肪組織中。 名稱分子式分子量感官特征熔點蒸氣壓溶解度備注滴滴涕（DDT）（ClC6H4）2CHCCl3354.5白色晶體無味、幾乎無嗅108.51092.5310-5Pa（20）水1g/L，分配比a有兩個異構(gòu)體p.p，-；o，p，-林丹C6H6Cl6290.8無色晶體112.80.43410-5kPa（20）水10mg/L（20），分配比a（對數(shù)值）3.23.7為六六六的-異構(gòu)體，含量99%.艾氏劑C12H8Cl6364.9純制劑為無色晶體104104.58.6mP（20）水27g/L（27），溶于丙酮、二甲苯600g/L工業(yè)品

19、為黃棕色至暗棕色，熔點4960，純度90%狄氏劑C12H8OCl6380.9淺黃至亮黃薄片1751760.4 mP（20）水186g/L（20），溶于芳烴、丙酮等工業(yè)品純度95%異狄氏劑C12H8Cl6O380.9白色至亮黃色晶體22623036Pa（25）水0.23mg/L（25），易溶于芳烴、丙酮等為狄氏劑異構(gòu)體，產(chǎn)品純度不低于92%七氯C10H5Cl7373.3白色晶體，有輕度樟腦氣味930.13310-5 kPa（25）水0.056mg/L丙酮750g/L二甲苯1020g/L工業(yè)品級含七氯7274%，-氯丹2022%，九氯48%，熔點4674氯丹C10H6Cl8409.8 粘稠的亮黃色

20、至琥珀色液體-氯丹104105，-氯丹1061070.13310-5 kPa（25）不溶于水，溶于多種有機(jī)溶劑工業(yè)級氯丹至少有26種成分，主要成分是-氯丹、-氯丹，其次是七氯和九氯。表7-2 主要有機(jī)氯農(nóng)藥的理化性質(zhì)二、代謝和生物監(jiān)測指標(biāo)有機(jī)氯農(nóng)藥可以通過呼吸道、消化道和皮膚吸收。有機(jī)氯農(nóng)藥在脂肪組織中濃度最高，且成為有機(jī)氯農(nóng)藥及其代謝物的主要蓄積場所。有機(jī)氯農(nóng)藥及其代謝產(chǎn)物的主要經(jīng)腸道和泌尿系統(tǒng)排出，其次是泌乳。 生物監(jiān)測樣品常用血樣、乳汁、耵聹和脂肪組織。 三、樣品采集和保存1血樣 取肘靜脈血樣。皮膚經(jīng)消毒后再用丙酮或己烷擦拭，待干后用干燥的1次性注射器或真空抽血管取血48ml，置干燥的具

21、塞試管中，于冰瓶中送實驗室。對急性過度暴露，一般應(yīng)立即采樣。如作為一般暴露監(jiān)測，對采樣時間沒有嚴(yán)格要求。血樣在冷藏條件下可保存3天。 人乳采集時需脫離污染環(huán)境，在無污染條件下采集。采樣時先用75%酒精消毒乳房皮膚，再用丙酮或正己烷擦拭，待干后才取樣。用清潔并已消毒過的吸奶器吸取乳汁，置干燥并消毒過的試管中。立即封口后送檢。如不能立即檢驗則需冷藏，并于24h內(nèi)檢測完畢，否則需冷凍保存。 脂肪組織樣本一般均經(jīng)由外科手術(shù)取樣，或者取自實驗動物，或尸體材料。通常取乳房或腹部的脂肪組織。取下后置于內(nèi)部放有冰塊的消毒小玻璃瓶中，并在30min內(nèi)進(jìn)行分析測定。如不能及時測定，則宜在零度以下保存。保存時間越久

22、，所需保存的溫度越低，最低保存溫度可達(dá)-70。 4耵聹 在耳廓皮膚消毒后，用圓頭小鑷子直接經(jīng)外耳道鑷取耵聹，置于經(jīng)消毒的小燒杯中，于冰瓶中送實驗室。其他處理與脂肪組織樣本相同。 尿樣的采集和保存方法參考第一章第二節(jié)有關(guān)內(nèi)容。樣品血樣尿樣人乳脂肪組織耵聹采集消毒后用丙酮或己烷擦拭，取肘靜脈血4-8ml，具塞試管冰瓶中運輸。采樣后立即測定尿比重或肌酐，密封。脫離污染環(huán)境，75%酒精消毒后丙酮或己烷擦拭，吸奶器吸取乳汁，具塞試管送檢。手術(shù)取樣或尸體材料，乳房或腹部脂肪，冰瓶保存。消毒后圓頭小鑷子采樣，冰瓶中運輸。保存冷藏下保存3天，否則冷凍保存立即測定，否則4保存，-20 可長期保存。如不立即測定，

23、冷藏，24h測定完畢，否則冷凍保存。30min內(nèi)分析，否則0 保存。同脂肪三、樣品采集和保存四、人體組織和人乳中有機(jī)氯農(nóng)藥的測定各種生物材料樣品中有機(jī)氯農(nóng)藥的測定方法一般都采用氣相色譜-電子捕獲檢測器法（GC-ECD）。GC-ECD測定有機(jī)氯農(nóng)藥1原理：生物材料中的有機(jī)氯農(nóng)藥經(jīng)取樣、有機(jī)溶劑浸提、凈化、濃縮后，用色譜柱分離、ECD檢測，以保留時間定性、峰高或峰面定量。樣品處理：提?。航n法，搗碎法，索氏提取法，加速溶劑萃取法，液液萃取法，蒸餾法凈化：柱色譜法，液-液萃取法，皂化法，磺化法，紙色譜法和薄層色譜法，固相萃取法，凝膠滲透色譜法濃縮：直接水浴濃縮法，氣流吹蒸濃縮法，減壓蒸餾濃縮法 （1

24、）樣品處理 （2）樣品測定（外標(biāo)法定性定量； 內(nèi)標(biāo)法：二氯苯并葑酮）用組織搗碎機(jī)將人體組織（脂肪組織）樣品絞碎，取絞碎均勻的樣品2.00g置乳缽中，加約8g無水硫酸鈉（以樣品碾后呈干粉狀為度）與樣品一起碾磨。碾磨后移入100ml具塞錐形瓶中，加10ml石油醚，于震蕩器上震蕩30min。然后抽濾。殘渣再用約10ml石油醚分3次洗滌，洗滌液并入濾液。將濾液置于50ml分液漏斗中，加入2ml硫酸。振蕩30s、靜置、分層后棄去下層液。將上層液從分液漏斗上口倒入另一50ml分液漏斗中，用少量石油醚洗滌原分液漏斗，并入洗液。加入20ml 20g/L硫酸鈉溶液，振蕩30s、靜置、分層棄去下層水溶液，用濾紙吸

25、除漏斗頸內(nèi)外水。然后將有機(jī)相通過一高約34cm、直徑1cm，內(nèi)置無水硫酸鈉的小柱，最后再用3ml石油醚洗滌小柱，收集洗滌液，并用濃縮器濃縮至約0.5ml，再用石油醚溶解并稀釋至1.0ml，供氣相色譜測定。取20.0mg樣品置于乳缽中，加約0.1g無水硫酸鈉（以樣品碾后呈干粉狀為度）與樣品一起碾磨。以下處理步驟除所用試劑相應(yīng)減少外與脂肪組織相同。3.人乳取勻質(zhì)奶樣置于50ml離心管中，加入20ml 1：1丙酮/己烷溶液，用超聲波振蕩器振蕩1min。以2000r/ min離心5min，分出有機(jī)相。在殘渣中再用10ml 1：1丙酮/己烷溶液重復(fù)提取一次。合并提取液于50ml比色管中。在比色管中加入5

26、g無水硫酸鈉，不時顛倒攪混，以脫水。30min后用漏斗過濾，漏斗頸內(nèi)填充玻璃棉，漏斗中鋪無水硫酸鈉適量。再依此重復(fù)過濾、脫水一次。將濾液在45下，緩緩?fù)ㄈ隢2氣，以揮去有機(jī)溶劑。所得殘留物即奶脂。稱重，并計算奶脂百分含量。用己烷分?jǐn)?shù)次洗出奶脂（控制量約為50mg脂肪/ml己烷），定容至。將洗出液置具塞試管中，加入5ml濃硫酸，上下顛倒25次左右，去塞，用聚乙烯薄膜封口，離心（2000rpm）3分鐘。取己烷層供色譜分析。4.血液與尿液血液與尿液樣品的預(yù)處理方法基本上與人乳樣品預(yù)處理方法相同，只是取樣量和所用各種試劑量需根據(jù)樣品用量按比例作相應(yīng)改動。（2）樣品測定取處理后的樣品10l注入色譜柱。常

27、采用外標(biāo)法對樣品進(jìn)行定性定量測定。 將色譜純標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分別用己烷溶解并稀釋至10ug/ml有機(jī)氯農(nóng)藥，作為貯備液。臨用時配制成，2，10，50，200，1000 ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)系列，取2l進(jìn)樣。4注意事項（1）所用玻璃器具需徹底清洗，最后用丙酮或己烷沖洗，以去除污染。（2）萃取處理后的樣品要徹底脫水，否則在揮干時油水相混不易排除水分，要去除水分則要提高揮干溫度，而使低沸點有機(jī)氯農(nóng)藥嚴(yán)重?fù)p失。（3）樣品加硫酸凈化量要足。操作時顛倒混合，不宜振蕩混合，否則會產(chǎn)生膠狀混懸物，不易離心分離。第三節(jié) 擬除蟲菊酯類殺蟲劑擬除蟲菊酯類 (Synthetic pyrethroids) 是仿效天然除蟲菊化學(xué)結(jié)構(gòu)

28、的合成農(nóng)藥，其分子由菊酸和醇兩部分構(gòu)成。 擬除蟲菊酯主要用于農(nóng)業(yè)、家庭用殺蟲劑現(xiàn)我國使用的有20幾種，常用的有氯氰菊酯、溴氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯菊酯和胺菊酯等。一、理化特性絕大多數(shù)為粘稠油狀液體，呈黃色或黃褐色，也有少數(shù)為白色結(jié)晶。易溶解于多種有機(jī)溶劑，難溶于水，大多不易揮發(fā)，在酸性溶液中穩(wěn)定，遇堿則分解失效。在化學(xué)結(jié)構(gòu)上包含多個異構(gòu)體。 根據(jù)分子結(jié)構(gòu)中是否含有氰基，可分為型（分子中不含-氰基）和型（在-碳原子位置含-氰基） 型化合物的基本結(jié)構(gòu) 型化合物的基本結(jié)構(gòu)氯菊酯 氯氰菊酯目前以型使用較多，屬中等毒性；型因不含氰基，毒性低，被用作衛(wèi)生殺蟲劑，常配制成氣霧劑或電熱殺蚊劑。其它分類：構(gòu)型順式

29、、反式 旋光性左旋、右旋1.接觸機(jī)會： 生產(chǎn)、分裝、運輸、銷售及施藥過程 二、代謝和生物監(jiān)測指標(biāo)經(jīng)呼吸道、皮膚及消化道吸收，迅速分布到各器官組織。主要經(jīng)肝臟代謝后，生成水溶性代謝產(chǎn)物由尿排出，少部分以原型排出。反式異構(gòu)體的代謝轉(zhuǎn)化主要靠水解反應(yīng)，順式異構(gòu)體的代謝轉(zhuǎn)化則主要靠氧化反應(yīng)?；衔锏目臻g構(gòu)型會影響擬除蟲菊酯的降解速率：反式異構(gòu)體被酯酶水解速度快，而順式異構(gòu)體被氧化酶水解的速度慢。另外含有氰基也使水解速度減慢。生物標(biāo)志物擬除蟲菊酯的原型排泄迅速，停止接觸12h后尿中即難以測出，但擬除蟲菊酯的代謝產(chǎn)物可檢測出的時間則比較長。生物監(jiān)測常用 尿中代謝物含量 推測擬除蟲菊酯的接觸量。因為體內(nèi)代謝

30、快，故只有大量接觸時才檢測血中的擬除蟲菊酯濃度。毒性擬除蟲菊酯類農(nóng)藥一般屬中等毒或低毒類，但對魚類毒性很高，有一定的蓄積性。有些品種還具有三致作用。 型主要中毒癥狀：T癥候群 型主要中毒癥狀：C癥候群擬除蟲菊酯具神經(jīng)毒性，使中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性增高，毒作用機(jī)制尚未完全闡明。 三、樣品采集及保存經(jīng)口途徑的暴露或皮膚吸收：收集24h尿樣一次接觸大量擬除蟲菊酯：采集靜脈血分析。四、尿中代謝物的GC-MS測定 1.原理： 尿樣加入內(nèi)標(biāo)物2-苯氧苯酸，用硫酸酸化后，樣本中擬除蟲菊酯代謝物經(jīng)C18固相萃取柱萃取，用甲醇、硫酸洗脫，然后用毛細(xì)管氣相色譜-質(zhì)譜儀進(jìn)行分析。采用空白尿樣配制標(biāo)準(zhǔn)濃度系列，用內(nèi)標(biāo)法工

31、作曲線進(jìn)行測定。 2.儀器操作參考條件 氣相色譜條件m)，保持柱前壓為145 kPa（1086mmHg）。采用程序升溫。質(zhì)譜條件：采用選擇性離子檢測器對擬除蟲菊酯代謝物的質(zhì)量碎片進(jìn)行檢測。 3.樣品處理和測定 取適量尿樣（10ml）加入(200l)2-苯氧苯酸（2-PBA）應(yīng)用液(10mg/ l)，再加入(2ml)濃)硫酸(95-97%)，在90（恒溫箱）加熱1h，以使結(jié)合的羧酸酸解。然后把樣本冷卻至室溫，使酸化的尿樣通過事先已制備好的C18柱，用6ml去離子水洗滌柱子，然后將柱子真空干燥510min。用3ml甲醇將樣品洗脫至含有1ml 98%濃硫酸的小玻璃瓶中，把洗脫液放在水浴中加熱至75，

32、保溫1h，使代謝物完全衍生化。 取出并冷卻到室溫后，加入2 ml 正己烷和3ml 飽和氯化鈉溶液，蓋上蓋子，混和10 min，離心5min，把1.5ml己烷提取液轉(zhuǎn)移至2ml小瓶中。加入200ul甲苯，以保住易揮發(fā)的酯類，用緩速的N2氣流使提取液體積減少至100ul。進(jìn)樣量為1ul。各種擬除蟲菊酯類代謝物的標(biāo)準(zhǔn)系列濃度范圍為0.5200g/L。以各個擬除蟲菊酯代謝物質(zhì)量碎片峰面積之和與內(nèi)標(biāo)物（2-苯氧苯酸）質(zhì)量碎片峰面積之和的比與對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)濃度繪制工作曲線。樣品根據(jù)各質(zhì)量碎片保留時間定性，以各質(zhì)量碎片峰面積之和定量。4.注意事項 1. C18固相萃取柱在通過每個尿樣后，要用水淋洗，然后必須干燥

33、后再洗脫，以防尿樣水溶性基體對測定的干擾。國產(chǎn)X-5樹脂柱處理生物材料樣品、以毛細(xì)管氣相色譜儀或氣相色譜-質(zhì)譜儀測定生物材料中（不包括尿液）擬除蟲菊酯的方法。第四節(jié) 殺蟲脒脒類農(nóng)藥(formamidines)是廣譜殺蟲、殺螨劑。 殺蟲脒(chlordimeform) 雙甲脒(amitraz) 單甲脒(mono-formamidine)。 殺蟲脒N-(2-甲基-4-氯苯基)-N，N-二甲基甲脒；氯苯脒；殺螨脒；克死螨 一、理化特性殺蟲脒劑型分基型和鹽酸鹽型?；蜑榘咨Y(jié)晶，有氨樣氣味，是中等強度的堿性物質(zhì)，在強酸介質(zhì)中相當(dāng)穩(wěn)定，遇弱酸、弱堿易水解成對氯鄰甲苯胺。 鹽酸鹽型為白色或為黃色粉末狀結(jié)晶

34、。二、代謝和生物監(jiān)測指標(biāo)職業(yè)接觸，主要通過呼吸道和皮膚吸收。在生活中，大多通過消化道攝入。入體內(nèi)主要分布在肝、腎、脂肪中。在甲酰胺酶的作用下，主要降解為對氯鄰甲苯胺。殺蟲脒和對氯鄰甲苯胺主要從尿中排出，少量也可從膽汁及乳汁中排出。 殺蟲脒屬中等毒類，中毒癥狀以紫紺、嗜睡和出血性膀胱炎三大癥候群為其特點。 接觸殺蟲脒的正常人，最初尿中無殺蟲脒和對氯鄰甲苯胺，接觸4h后，則能普遍檢出，接觸8h到停止接觸后12h為排泄高峰。故測定尿中殺蟲脒和對氯鄰甲苯胺的含量可作為生物監(jiān)測指標(biāo)。 三、樣品采集及保存采集班后尿樣或者次日晨尿200ml，貯存于聚乙烯塑料瓶中，立即測定尿比重。尿液按1001 比例加入鹽酸

35、，于4冰箱內(nèi)可保存2周。四、尿中殺蟲脒和對氯鄰甲苯胺的測定重氮-偶合分光光度法氣相色譜法高效液相色譜法 （一）重氮-偶合分光光度法 尿中的殺蟲脒在堿性條件下水解為對氯鄰甲苯胺，對氯鄰甲苯胺經(jīng)重氮偶合反應(yīng)，生成紅色偶氮染料，于550nm波長，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行分光光度測定。2.樣品處理和測定 3 注意事項 (1)個別樣品在萃取后經(jīng)飽和氯化鈉溶液洗滌仍有較多的泡沫狀物時，就不宜再進(jìn)行洗滌，可加入適量無水硫酸鈉脫水，使醚層分出。放出醚層到另一分液漏斗中，再加適量石油醚洗滌無水硫酸鈉12次，合并醚層，再作反萃取。 (2)樣品置902水浴中進(jìn)行水解時，應(yīng)塞緊試管塞，以免蒸汽沖開管塞。試管從水浴中取出后，須冷至室溫方可打開管塞，以防待測物逸失。(3)加亞硝酸鈉溶液時不要沾污試管口，否則會因污染而產(chǎn)生混濁或黃褐色。 (二)氣相色譜法 在堿性條件下，尿樣中結(jié)合態(tài)殺蟲脒與對氯鄰甲苯胺轉(zhuǎn)化成基型，用石油醚定量萃取、經(jīng)緩流速氮氣吹干，用硝基苯作內(nèi)標(biāo)、正己