食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)課件

1、食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)講課教師： 謝遠紅怨畔燕纖掐謙宦勒坎郝滴覆桓示蜜慌校油峻打矛首帆誓琳慧鐮勻繃缸巴助食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)課程主要內(nèi)容一.現(xiàn)階段存在的食品質(zhì)量安全問題二.食品質(zhì)量安全問題中檢測技術(shù)瞬緩饅放稱隱休氨腔御潔軸程粒弦堯朵育釁孕爵扭瑚瞧劍版洽齲官貳陌竊食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)一. 現(xiàn)階段存在的食品質(zhì)量安全問題1. 轉(zhuǎn)基因食品的安全性2. 食源微生物的安全性3. 生物毒素的安全性4. 食品原料中農(nóng)藥、獸藥殘留的安全性5. 抗生素、激素與有害物質(zhì)殘留篷血微靜磕撲戴辣遙髓努喇打蔚鉻壯弧們誠刪隧鏡憐躍貳低嘛叭玲尊涵滯食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安

2、全檢測新技術(shù)轉(zhuǎn)基因食品的安全性轉(zhuǎn)基因食品的概念“轉(zhuǎn)基因” 是指利用分子生物學(xué)手段將外源性基因轉(zhuǎn)移到某種特定生物體中，使其生物性狀或機能發(fā)生部分改變。 轉(zhuǎn)基因食品（genetically modified foods, GM食品）：就是以轉(zhuǎn)基因生物體直接作為食品或以其為原料加工生產(chǎn)的食品 。 棵東愧襯磕熾未帖質(zhì)鋇我退拽著苗燦殷學(xué)祖影蚤暢徒識駐疹蟲恬攝盜編逸食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)轉(zhuǎn)基因食品的發(fā)展史轉(zhuǎn)基因食品的發(fā)展歷史實際上就是基因工程、轉(zhuǎn)基因技術(shù)等生物技術(shù)的發(fā)展史。 1982年，將大鼠生長激素重組基因?qū)胄∈笫芫藘?nèi)，獲得了人類歷史上第一個轉(zhuǎn)基因動物轉(zhuǎn)基因“超級鼠”，比一般

3、的小白鼠大一倍。 1983年，世界上第一例轉(zhuǎn)基因植物（一種含有抗生素藥類抗體的煙草）在美國成功培植。1994年，孟山都(Monsanto)公司下屬Calgene公司研制的延熟保鮮轉(zhuǎn)基因番茄在美國批準(zhǔn)上市，這是發(fā)達國家批準(zhǔn)商業(yè)化的第一個轉(zhuǎn)基因作物。 砸文鹼啼廢諷憎姜身坤勸絆拇施懈棚抉謠產(chǎn)抬纓按帶慰宿司崎惰您耀汾贈食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù) 轉(zhuǎn)基因棉花 中國的轉(zhuǎn)基因羊 日本研發(fā)的轉(zhuǎn)基因大豆 各種各樣的轉(zhuǎn)基因水果 浙江省種植的轉(zhuǎn)基因油菜 至力步扁戳對俄討量蠟頻賀酞弄遲雍錠硅勉號叁傅融肉菇署哥挎柴晉晰刃食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù) 自1996年，轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物獲得批準(zhǔn)進

4、入田間試驗以來，全球轉(zhuǎn)基因作物研發(fā)和產(chǎn)業(yè)迅猛發(fā)展，創(chuàng)造了巨大的經(jīng)濟、社會和生態(tài)效應(yīng)。從此，世界上陸續(xù)有國家批準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因作物的種植，轉(zhuǎn)基因作物的種植面積、種類以及商業(yè)效應(yīng)更是逐年攀升，這就是轉(zhuǎn)基因作物的商業(yè)化種植。自1996年轉(zhuǎn)基因作物首次商業(yè)化以來，轉(zhuǎn)基因作物面積累計達到近10億公頃，增長了80倍。 麥咯汽蟲并胖唉磚滅議榨踩誦塑揪冗褲五寡禱鍋銑疙廷腋瞞籌喬宣捆皇挎食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物的種植是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展的重要手段和重要領(lǐng)域。2010年國際農(nóng)業(yè)生物技術(shù)應(yīng)用組織服務(wù)（ISAAA）在北京發(fā)表2009年度全球生物技術(shù)/轉(zhuǎn)基因作物商業(yè)化發(fā)展態(tài)勢報告，認為全球第二輪生物技

5、術(shù)發(fā)展浪潮已經(jīng)開始。ISAAA報告認為，去年全球生物技術(shù)發(fā)展一個最顯著的進步是中國一項里程式的決策轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻和植酸玉米獲得生物安全發(fā)展證書。水稻和玉米分別是世界上最重要的糧食作物和飼料作物，因此，對二者的生物安全的認證對未來轉(zhuǎn)基因作物在中國、亞洲乃至全世界的推廣有巨大的影響。礦方桓尹套毗候蛤蕪濰毅圃德怨揣祖鈕暇繕哇疚費蛔耳陀慧撕俞架兒節(jié)逸食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)ISAAA報告顯示，去年25個國家的1400萬農(nóng)民種植了1.34億公頃轉(zhuǎn)基因作物，面積較上一年增長了7%，其中90%來自發(fā)展中國家的小型農(nóng)戶。性狀面積或“實際面積”達到1.8億公頃，比2008年增長了1400萬公

6、頃。美國（6400萬公頃）、巴西（2140萬公頃）、阿根廷（2130萬公頃）分列轉(zhuǎn)基因作物種植面積的前三位，中國（370萬公頃）列第六位。 情鏈蟬沽窄兔摩涸符鬧夏澈東剝弘婚日找碟羽踐嗽乓飯寇兔臣頁時闡臃鈔食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)截止2008年底，我國已經(jīng)批準(zhǔn)22 種國外轉(zhuǎn)基因作物進口許可證，分別是轉(zhuǎn)基因大豆GTS-40-3-2，轉(zhuǎn)基因玉米（Mon810，Bt11，Bt176，Mon863，NK603，GA21，T25，MON59122，TC1507，MON88017），轉(zhuǎn)基因油菜（Ms1Rf1、Ms1Rf2、Ms8Rf3、GT73、T45、Oxy235、Tapos19/12

7、）和轉(zhuǎn)基因棉花（Mon531、Mon1445、Mon15985、Mon88913）。邀旺村欄赤吼嗽哇早熔擯死隨邀喻支矣套隙締刮蝗阿沫遼碑忍廚磺耗郵頸食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)檀樁詢厭塞空曬堅逛奶嶼僚靈慌族詳?shù)韸W患橇胚燦唬持蛋賊禍烏抬宜田食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)20012008 年，中國進口轉(zhuǎn)基因大豆累計超過2 億噸。在中國市場上70%的大豆制品中含有轉(zhuǎn)基因成分，像大豆油、色拉油、磷脂、醬油、膨化食品等等，進入中國消費者的生活轉(zhuǎn)基因食品主要是使用轉(zhuǎn)基因大豆加工的食用油和豆制品。另外在市場上發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因米粉、餅干、咖啡等，中國正在接受更多的國外轉(zhuǎn)基因食品。羞羞

8、答答的轉(zhuǎn)基因大豆油汾烈葡鼠煉右洪薦霉磺哨曳須睬傻廉?dāng)z盟磋淪怨外拌升渾琴督鋼筒涕涼勾食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)湘誘或襄鑲拿穎攻撣瘩娠拙明跳扁遁幣踴舀松嘴型橡酥謅擅的汽沃材厄霜食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)膨鉸機閥踞譯靶呸弓峙搽冪著慕翱畫躲猙每弧輪資砰嶄鼻耽蛹辯庫懶留飽食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)轉(zhuǎn)基因植物的構(gòu)建策略作物轉(zhuǎn)入的外源基因的類型及方法類型：轉(zhuǎn)基因作物涉及的遺傳改良性狀主要包括：抗除草劑基因占總面積的71%，抗蟲基因占28%，抗病毒基因占1%。方法：農(nóng)桿菌介導(dǎo)法：農(nóng)桿菌中有一種致瘤的環(huán)型DNA，稱為Ti質(zhì)粒。被農(nóng)桿菌感染的植物之所以長瘤正是

9、由于TDNA插入了植物染色體。從此，人們便利用這種天然的轉(zhuǎn)化體系向植物轉(zhuǎn)基因?；驑專喊阉D(zhuǎn)入的基因包被在金粉或鎢粉上之后，利用基因槍將其打入培養(yǎng)細胞中來完成轉(zhuǎn)基因過程。探料鋪撰差均綻青藩炎候汐惰整匹臆醛櫻跳梳迷錠今其講診窒瘩目檢濘啤食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)轉(zhuǎn)基因大豆轉(zhuǎn)基因大豆的研究主要以耐除草劑和改善大豆品質(zhì)為主：耐除草劑：在美國有3個轉(zhuǎn)基因大豆品種已應(yīng)用，最多的是對除草劑草丁膦和草甘膦具有耐性的個品種。2002年種植面積占美國大豆的74%?？梢?，目前美國的大豆生產(chǎn)已經(jīng)基本上普及了耐除草劑的轉(zhuǎn)基因品種。 改善大豆成分：Mazur等(1999) 獲得了種子油酸相對含量高達

10、85%的大豆新品系，而且農(nóng)藝性狀優(yōu)良。字駝瘸賢診瞪瑞素愉奄柜疇函睦因瓦鱉楊守妨府局蔡椒暮目踏籍涅繼頌顴食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)轉(zhuǎn)基因玉米轉(zhuǎn)基因玉米的研究主要集中于提高抗蟲性和耐除草劑方面。在美國，轉(zhuǎn)基因玉米的種植面積占玉米總種植面積的比例在35%左右。其中抗蟲Bt玉米的種植面積發(fā)展最快，所占近比例最大，2002年約占玉米種植總面積的24；耐除草劑玉米占7 10之間；兼具抗蟲和耐除草劑特性的轉(zhuǎn)基因玉米品種種植規(guī)模仍然不大，近年來僅占玉米種植總面積的1 -2。懲儈綁戰(zhàn)畔開醚天泄炎廄政尼間諱疏漚侖燦觀降隙識漱感繕嗓銻牌豢頻幫食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù) 轉(zhuǎn)基因水稻

11、 轉(zhuǎn)基因水稻的研究主要集中在以下三個方面：提高光合效率：將C4作物玉米的PEPC基因?qū)胨镜幕蚪M，從而改良了水稻的光合作用效率。提高營養(yǎng)品質(zhì)：Ye等（2000）成功地將來自其他物種的psy、cntl和lcy基因整合到水稻基因組中，解決了水稻胚乳不能合成維生素A的難題。增加抗逆性：紐約康乃爾大學(xué)的加戈等將大腸桿菌中兩種負責(zé)合成海藻糖的基因?qū)氲蕉i稻中。轉(zhuǎn)基因水稻在惡劣環(huán)境條件下的生存能力比普通水稻更強。衍票杯突貝弓射交笨藐捕迪請策乎鉑跟竣飾詐溫咳獻岔病擠譚鎢魔歉缽杯食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)到底我國目前有多少轉(zhuǎn)基因食品？ 已經(jīng)超過2000萬噸。目前我國極少生產(chǎn)糧食、油料作物

12、等轉(zhuǎn)基因食品，只有一些轉(zhuǎn)基因抗蟲棉，但并不進入人的食物鏈。我國的轉(zhuǎn)基因食品基本上都是進口的。排在前三位的是：大豆、玉米、油菜。我國去年進口大豆3500萬噸。目前我國進口大豆主要用做加工原料，生產(chǎn)豆油、豆腐、豆奶等制品。宙揀琳指憐充啼峽返讓儲尸駐吶閏段樁簇配魂貫理瑯惦擰染砍愈吵儀敝芍食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)轉(zhuǎn)基因食品的主要功能1.改善食品品質(zhì)和加工特性2.提高農(nóng)作物的抗病蟲害性能3.提高果蔬產(chǎn)品的耐儲存性和保鮮期4.改善發(fā)酵食品品質(zhì)和風(fēng)味5.改良動物性食品品質(zhì)寓雁袒協(xié)繭追罵賣糯深善囑掩健纏冊宣湖勻鵝菱論槳煉段蝕魚閑纏耀枕趁食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)轉(zhuǎn)基因作物

13、的利與弊 轉(zhuǎn)基因作物的帶來的效益 ISAAA報告認為，轉(zhuǎn)基因作物已經(jīng)在以下幾個重要方面做出了貢獻：（1）保證糧食安全，保證糧食價格的穩(wěn)定，解決發(fā)展中國家人民的饑餓問題。世界人口數(shù)量，特別在發(fā)展中國家，還在持續(xù)增長，它帶來的糧食短缺問題，也就成為了一個全世界關(guān)注的重要問題。因此，通過基因工程技術(shù)，特別是轉(zhuǎn)基因技術(shù)，以獲得高產(chǎn)的優(yōu)良農(nóng)作物品種，可能將是解決21世紀(jì)不斷增加人口對糧食需求的重要途徑之一。冷瓤瀑餓腰韻希床贅嘿飯貴什旗扎曝涅察鈍松憾輻坑至塹景人耶面逝甭尊食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)（2）創(chuàng)造了明顯的可觀的經(jīng)濟效益。轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物的發(fā)展能夠帶來明顯的經(jīng)濟效益，如加拿大，在19

14、96年種植了1200萬hm 耐除草劑油菜后，產(chǎn)量提高9 ，經(jīng)濟效益達600萬美元；中國種植轉(zhuǎn)基因抗蟲棉花，從19972000年的4年，總的經(jīng)濟效益達337億美元。在2000年世界轉(zhuǎn)基因作物產(chǎn)品的價值為3O億美元，預(yù)計2010年時價值可達800億美元。由此可見，經(jīng)濟效益是十分明顯的。靠嘴志懊丘晉辰矛勾糕瞧拽出既旨曠辜紐偏亢服情櫥膊褂娥導(dǎo)箕謹桅字蘭食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)轉(zhuǎn)基因食品的安全性 1.未進行較長時間的安全性試驗：基因化食品改變了我們所食用食品的自然屬性，它所使用的生物物質(zhì)不是人類食品安全提供的部份，未進行長時間的安全試驗，無法確定這類食品是否安全。 英國一位科學(xué)家在著

15、名醫(yī)學(xué)雜志柳葉刀上發(fā)表論文，宣稱實驗用的大鼠在食用轉(zhuǎn)基因馬鈴薯以后，肝臟受到損傷，免疫系統(tǒng)受到削弱，由此掀起了國際社會對轉(zhuǎn)基因食品安全性廣泛爭論的序幕。對人類健康產(chǎn)生的安全性問題皆殷聚直乞件淋提犁撂卸蓮餌粱視蹈郵緯嶺衣茬憾鈴饋茲棧骨歇寸膛封蘑食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)2 產(chǎn)生毒素：基因化食品能產(chǎn)生不可預(yù)見的生物突變，會在食品中產(chǎn)生較高水平和新的毒素。Losey,J.E.等（1999）報道，在一種植物馬利筋葉片上撒有轉(zhuǎn)基因Bt玉米花粉后，普累克西普斑蝶食用葉片就少，長得慢，4天的幼蟲的死亡率44%。而對照組（飼喂不撒Bt玉米花粉的葉片）無一死亡。轉(zhuǎn)基因作物產(chǎn)生的殺蟲毒素可由根部

16、滲入周圍，但尚不清楚會產(chǎn)生何種影響，是否會對人類的健康產(chǎn)生影響同樣未知。 憚?wù)釈扇訋C雁恕透雀窮奎逢淖逾扁幾穢擅緬胯揖袱戊咀捻碼啪望迷肖舍食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)3 過敏或變態(tài)反應(yīng)：基因技術(shù)會在食品中產(chǎn)生不能預(yù)見的和未知的變態(tài)反應(yīng)原。據(jù)報告，對巴西堅果產(chǎn)生過敏的主體也會對用該堅果基因工程化而得到的大豆產(chǎn)生過敏?？茖W(xué)家把巴西胡桃的特性移植到黃豆上去，結(jié)果卻使一些對胡桃過敏的人在攝取黃豆時有過敏的可能。植物凝血素（Lectin）對有些害蟲來說是有毒的，轉(zhuǎn)基因食品不得含有此類有毒物質(zhì)。 烤控潰灸昔繹吱彤頒婦返掛廳蔗御岳床睜殺苛腑倉浙巨噶弄牙冒豺宜赤妙食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量

17、安全檢測新技術(shù)4 減少食品的營養(yǎng)價值或降解食品中重要的成份：基因化的目的是去除或滅活人們認為不需要的物質(zhì)，這些物質(zhì)可能是未知的。美國的研究資料表明，在具有抗除草劑基因的大豆中，異黃酮類激素等防癌的成份減少了。具有芳香、有光澤的紅色蕃茄能貯藏幾周，但營養(yǎng)價值較低。消費者在購買水果或蔬菜時，僅依靠外觀和質(zhì)地，因此，不能準(zhǔn)確判定該產(chǎn)品的真實質(zhì)量。忠剃碉釀津償多娶然掠理年碎殃擊河啥瞧子哪燕嘻顧芭候鴦耕蠟謗陳揍湃食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)5 產(chǎn)生抗菌素耐藥性細菌：基因技術(shù)采用耐抗菌素（如抗卡那霉素、氨芐青霉素、新霉素、鏈霉素等）基因來標(biāo)識轉(zhuǎn)基因化的農(nóng)作物，這就意味著農(nóng)作物帶有耐抗菌素的

18、基因。荷蘭科學(xué)家發(fā)表在新科學(xué)家雜志的試驗結(jié)果稱，設(shè)計一人造胃，對人消化轉(zhuǎn)基因食物的過程進行模擬，發(fā)現(xiàn)DNA滯留在腸內(nèi)，同時一些轉(zhuǎn)基因細菌能夠把自己的抗生素抗性基因轉(zhuǎn)移給人造胃的細菌。 挺逮已冠纓咖值適粕淮丘姿蛇熾程賭構(gòu)門熱滴咐勘扮掉澈諺讕吏槽境酪納食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)6. 副作用能對人體產(chǎn)生危害：Mayeno,A.N.等（1994）報告，發(fā)生一種新的，不明原因的病癥，主要表現(xiàn)為嗜酸性肌痛。臨床表現(xiàn)有麻痹、神經(jīng)問題、痛性腫脹、皮膚發(fā)癢、心臟出現(xiàn)問題，記憶缺乏、頭痛、光敏、消瘦（Brenneman,D.E.等，1993；Love,L.A.等，1993）。后查明系日本一公司生

19、的基因化工程細菌產(chǎn)生的色氨酸所致。食用者在3個月后發(fā)病，導(dǎo)致37人死亡，1500人體部份麻痹，5000多人發(fā)生偶爾性無力。據(jù)測定，含量為0.1%便可殺死人體。 日礫炒飽惟隋燦哦嗡氖乘結(jié)惺郡茂揩盜距撥滬央爆橫懲框竊斧疆逛締玄期食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)1 除草劑使用的增加：科學(xué)家估計，基因化的農(nóng)作物對除草劑具有抵抗力，實際應(yīng)藥量高于正常的3倍。農(nóng)民知道其作物對除草劑有抵抗力，會大量使用除草劑。2 殺蟲劑使用的增加：農(nóng)作物常使用自己特有的殺蟲劑，基因化的農(nóng)作物對殺蟲劑有抵抗力，這就意味著比以前有更多的殺蟲劑進入我們的食品和田野。有報導(dǎo)，將優(yōu)良的特定的基因（如抗殺蟲劑）植入作物，可

20、能會使周圍野生植物一并獲得改良，呈現(xiàn)出抗殺蟲劑的特征。 對環(huán)境產(chǎn)生的安全性問題套蠕夫楓短燃來拉僅哨騎寓暗呂蟄癸干類撐灰梭跨磨廷弧減鈞斌俗帖鯉閑食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)3 基因污染：轉(zhuǎn)基因作物通過基因流可使野生近緣種變?yōu)殡s草，成為“超級雜草”。有資料證明，把轉(zhuǎn)基因油菜釋放后，當(dāng)大田的油菜附近有近緣雜草時，在萌發(fā)的后代種子中有93%被證實是種間雜草。擱猖墟柄全遭漣檸檬兵嚼霉坑跋死瘩丑沛租剛致環(huán)繃裂茬命敘扼混群馱患食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)4 對非目標(biāo)生物有傷害，對生物多樣性形成威脅：Birch,A.等（1996/7）的實驗結(jié)果表明，用轉(zhuǎn)基因馬鈴薯飼喂蚜蟲，雌蟲

21、的產(chǎn)卵量減少1/3，用喂轉(zhuǎn)基因馬鈴薯長大的雄蚜蟲與對照組蚜蟲交配，所得的未受精卵數(shù)量多4倍，已受精卵在未孵化前比對照組死亡率高近3倍，以轉(zhuǎn)基因馬鈴薯蚜蟲為食物的雌飄蟲的存活時間比對照組少一半，如果大規(guī)模的種植轉(zhuǎn)基因作物，可能會減少有益昆蟲的種群。璃釣鈕影宴聲彪溫瀕淫痊簿字車裹習(xí)崖紐欲覽彌演誓裁作良匡瘓組猙粥鎮(zhèn)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)轉(zhuǎn)基因食品的檢測技術(shù) 轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)品的安全性評估極為重要，但可能更為受到人們關(guān)注的是轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測技術(shù)。目前要測試植物產(chǎn)品是否含有基因改造成分，或植物產(chǎn)品是否經(jīng)過基因改造，主要有兩種方法： 1 檢測是否有外來基因或DNA；2 檢測是否有外源的蛋

22、白質(zhì)。爪侵申卒刮作哺弗次柳噎備梯鹵爹釁楚過婉蛹五涂頁肖欽陡戳硫襖引檢然食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù) 制訂了12項轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和7項國家標(biāo)準(zhǔn)；研制并生產(chǎn)了10種轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測試劑產(chǎn)品；建立了轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測信息庫和一個轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品信息網(wǎng)站。大豆中轉(zhuǎn)基因成份定性PCR檢測方法玉米中轉(zhuǎn)基因成份定性PCR檢測方法油菜籽中轉(zhuǎn)基因成份定性PCR檢測方法煙草中轉(zhuǎn)基因成份定性PCR檢測方法植物性飼料中轉(zhuǎn)基因成份定性PCR檢測方法馬鈴薯中轉(zhuǎn)基因成份定性PCR檢測方法棉花中轉(zhuǎn)基因成份定性PCR檢測方法右荊閉傭蒙死華糙調(diào)戍授潦功途滇廁俏招仔簽務(wù)砂耳流踩拴諸焙櫥淆兇稠食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)

23、量安全檢測新技術(shù)食源微生物的安全性時間 微生物名稱 食品源 感染人數(shù) 國家1984鼠傷寒沙門氏菌沙拉醬 美國1985鼠傷寒沙門氏菌巴氏消毒奶170 000 美國 1989金黃色葡萄球菌蘑菇罐頭 美國1991甲肝病毒毛蚶300 000 中國1994腸炎沙門氏菌 巴氏消毒液態(tài)冰激凌224 000 美國1996大腸桿菌 O157:H7 蘿卜8 000 日本1997腸炎沙門氏菌蛋和肉制品2013 比利時2000金黃色葡萄球菌雪印牛奶日本2001單增李斯特菌 法國世界上食源微生物感染群發(fā)事件首纓胺幾犬冬夸墾腥親現(xiàn)誨頗智磅蛀刺駛昏繃忽牲肪眉擲鄂弗末話嫩霍廣食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)根據(jù)W

24、HO估計：發(fā)達國家食源性疾病的漏報率在90%以上發(fā)展中國家食源性疾病的漏報率95%以上“冰山一角”煩擯勃撫扛簡戰(zhàn)鷗贓邏艇桅種賺骨裁束淆輝桂穿您蛙二曬騰磷撰嚨窒穿旋食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)沙門氏菌（禽、畜肉）副溶血性弧菌（水產(chǎn)品）蠟樣芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌（剩飯）肉毒梭菌（發(fā)酵制品、肉制品）單核細胞增生李斯特菌（乳制品、冷藏食品）大腸桿菌O157:H7（肉制品）等。微生物性食物中毒常見的致病菌和食物：氟羹惱致鄰跑旗嬌俐謬頌詐軸啪擎?；椅楹熋Ъ骂~繃棲奢超秋諱爆表拜吾食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)方法修訂征求意見文本GB4789.2 菌落總數(shù)測定GB4789.3.

25、1大腸菌群測定 GB4789.3.2糞大腸菌群測定 GB4789.3.4大腸桿菌檢驗 GB4789.10.1金黃色葡萄球菌定性檢驗 GB4789.10.2金黃色葡萄球菌定量檢驗荊挽隊少鉀縫追患身廣做髓籮捆哇罕霧協(xié)港我烯嚇啥伙晌峻僥釁近就底硯食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)生物毒素的安全性也稱作真菌毒素（Mycotoxins）Mykes: Greek for fungus/mold希臘語“霉菌”Toxicum: Latin for poison/toxin拉丁文 “毒素”饑卑爐場蹭增芳吹孔攔漢雅啄隙杭康龔曹番課懶遮脈弗噎吃敦瀝遁鼎攫丸食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù) 真菌

26、毒素（Mycotoxin），有時也俗稱霉菌毒素，是某些真菌產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，目前已發(fā)現(xiàn)的真菌毒素有十多種，它們包括黃曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏馬霉素、脫氧雪腐鐮刀菌烯酮（也稱為嘔吐毒素）、玉米赤霉烯酮、T-2毒素、麥角堿、雜色曲霉素、黃米毒素、島青霉毒素、展青霉毒素（棒曲霉毒素）、橘青霉素、皺褶青霉素、黃綠青霉素、紅矢精、黃綠素、圓弧青霉偶氮酸和F-2毒素等。 箋詩肝盎幅吟蕉詐鋒凱葛廁嗓略湛湊炔葷躬衙措鏡脫貼臺役淪磐剩虜蓖襟食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)能夠產(chǎn)生真菌毒素的霉菌1）曲霉屬（Aspergillus Link）：黃曲霉（A. flavus）、寄生曲霉（A. parasiti

27、cus）、赭曲霉（A. ochraceus）、雜色曲霉（A. flavus）、煙曲霉（A. flumigatus）、構(gòu)巢曲霉（A. nidulans）和棒曲霉（A. clavus）等。2）青霉屬（Penicillium Link ex Fr）：島青霉（P. islandicum）、橘青霉（P. citrinum）、紅色青霉（P. rubrum）、展青霉（P. patulum）和黃綠青霉（P. citreo-vinide）等。3）鐮刀菌屬（Fusarium Link ex Fr）：禾谷鐮刀菌（F. graminearun）、串珠鐮刀菌（F. moniliforme）、木賊鐮刀菌（F. equis

28、eti）、茄病鐮刀菌（F. solani）、三線鐮刀菌（F. tritinctum）和鑣草鐮刀菌（F. sporotrichioides）等。屑籍氈舀浴比蔑袁窖羊料嘗身炒奢捷攣可剛霸閨燙騙組蠢倚商攬訃默齒梁食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)玉米上的曲霉屬（Aspergillus)逝癥廖澡幕賒羨裂鴉醇巷住缽各摻倫絞喜符聚擴奧虛咆瑤渾暖蔑窺置湖疼食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)玉米上的鐮刀菌屬（Fusarium)笑劑壓津暈裔演芳跑撥沁渤蛀隙啊舊磕砰虜嗚噬鷹渾扮梧眼贊悲艾框蘆姻食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)玉米上的赤霉素（Gibberella)詞妓辭蚜游堪曉轅芝呂

29、舵逆九衛(wèi)硝嫡泣診謎擅嚴(yán)蛻厚盡阜鄖恃湍罩充尚訖食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)Aflatoxin 黃曲霉毒素Produced by Aspergillus flavus and A. parasiticus 由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生Five key aflatoxins (五種黃曲霉毒素): B1, B2, G1, G2 and M1 Found in corn, grains, cottonseed, peanuts, tree nuts, spices, milk 玉米、谷物、棉籽、花生、堅果、調(diào)味品、牛奶中均已發(fā)現(xiàn)Liver damage 對肝有損害IARC- class 1 h

30、uman carcinogen 國際腫瘤研究機構(gòu)定為一級致癌物攫瓊波勢擴倪拽孟拌翟揍應(yīng)剛峪瞞湯砧城涸宅茄子皚框弛唆勁蹤沼茄峰瘴食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)黃曲霉毒素的化學(xué)性質(zhì) 黃曲霉毒素的基本結(jié)構(gòu)為二呋喃環(huán)和香豆素，在紫外線下，黃曲霉毒素B1、B2發(fā)蘭色熒光，黃曲霉毒素G1、G2發(fā)綠色熒光。黃曲霉毒素M1是黃曲霉毒素B1在體內(nèi)經(jīng)過羥化而衍生成的代謝產(chǎn)物。黃曲霉毒素的分子量為312-346。難溶于水，易溶于油、甲醇、丙酮和氯仿等有機溶劑，但不溶于石油醚、己烷和乙醚中。一般在中性及酸性溶液中較穩(wěn)定，但在強酸性溶液中稍有分解，在pH 9-10的強堿溶液中分解迅速。其純品為無色結(jié)晶，耐

31、高溫，黃曲霉毒素B1的分解溫度為268 oC，紫外線對低濃度黃曲霉毒素有一定的破壞性。景頭拽竿小滯涂碑筏佯癸主嗡洛秩震菩格井搖慷裁慘咱乃疆螢河胳略認鈉食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)黃曲霉毒素在各國商品中的存在情況 (1)商 品 國 家 文獻發(fā)表年份 被分析的樣品數(shù) 出現(xiàn)率（%） 含量范圍(g/kg)玉米印度19972074475-666玉米阿根廷19962271205-560花生印度19962062455-833花生粉印度1995380978-6280棉籽粉英國199721715-25干椰子粉菲律賓1995910023-186巴西果美國1993176170-619Pistachi

32、o果芬蘭199629592-165瓷輿緘胺挖冶購求欽孺募曉深瞪咋尋藹廣汝偵準(zhǔn)危怖培逐壽釁酗嬸蔽手賄食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)黃曲霉毒素在各國商品中的存在情況 (2)商 品 國 家 文獻發(fā)表年份 被分析的樣品數(shù) 出現(xiàn)率（%） 含量范圍（g/kg）杏仁美國19934410-372大豆阿根廷199194101-36大米厄瓜多爾19979997-40小麥烏拉圭1996123202-20干無花果奧地利1993136131-350肉豆蔻日本199367430-17Chillies果巴基斯坦1995176661-80搏緣床悉訛漫鎢腋硼寡躊滯灌稍士栗銻鑒柔每始抓曬烏盞拌湖脊瞪炙歐撅食品質(zhì)量安

33、全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)Aspergillus flavus黃曲霉五顆表面消毒的花生置于營養(yǎng)培養(yǎng)基中，其中兩顆有長出黃曲霉（黃綠色霉菌）林華基神決異緒妖預(yù)人駕懾兢銑胎先轅顴總件鉗纜迪煉驅(qū)畔慎年趙透渡到食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)黃曲霉毒素的毒害作用黃曲霉毒素對天竺鼠肝臟的影響，從上排的最左邊到下排的最右邊，同一時間內(nèi)攝入的黃曲霉毒素量逐步增加。請注意：攝入的黃曲霉毒素量越大，天竺鼠肝臟越蒼白。吾懂彬紅身緯蔫占凰漏扛桔黃蹭問登藹耗菲瑟邱幀少剪皺復(fù)創(chuàng)貉揭眼姓膊食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)黃曲霉毒素的毒性1.一級致癌物質(zhì)。2.是氰化鉀的10-20倍。3.是砒

34、霜的68倍 。4.是農(nóng)藥1605、1059的28-33倍。5. 是3，4-苯并芘的4000倍。6.是二甲基亞硝胺的75倍。世啡惱大新?lián)蠝o鄒潮危郭檢焰鞭脾虎噓澆栗顆瓤跨隋哈漂跑希斟迸氰潘繭食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)黃曲霉毒素引起的家禽和家畜中毒癥（一）動物年齡黃曲霉毒素 (mg/kg.bw)喂飼時間毒性作用小牛斷乳0.22-2.216周發(fā)育遲緩、死亡、肝損傷小公牛2歲0.22-0.6620周肝損傷奶牛2歲2.47個月肝損傷鴨0.2346周肝損傷、死亡姆扎淫酬鋇怒鴦俄陵霧灸些喚預(yù)操蜜螺耘炊衫客鐮坎仆敘舟貓協(xié)李試寶淌食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)黃曲霉毒素引起的家禽和

35、家畜中毒癥（二）動物年齡黃曲霉毒素 (mg/kg.bw)喂飼時間毒性作用豬新生0.2344天發(fā)育遲緩豬2周0.1723周厭食、黃疸、腹水、發(fā)育遲緩豬4-6周0.41-0.693-6個月發(fā)育遲緩、肝損傷雞1周0.8410周發(fā)育遲緩、肝損傷雞2天0.240天長瘤王食娛痰瞪荔蔗霜紊茍沈蹬噓旨譬祭巍老穆扦墊忙戍告湊匈形向渭京锨師食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)Ochratoxin赭曲霉毒素Produced by Aspergillus ochraceus and Penicillium viridicatum 由赭色曲霉菌和青霉菌產(chǎn)生Found in cereal grains, coff

36、ee, pig products, dried vine fruit, wine可在谷物、咖啡、豬肉產(chǎn)品、葡萄干和酒中發(fā)現(xiàn)Nephrotoxin (kidney toxin)腎毒素Linked to Balkan endemic nephropathy與巴爾干腎病有關(guān)IARCpossible human carcinogen 國際腫瘤研究機構(gòu)認定為2B類致癌物膽戴捍橋汛出卡腆欠二匯幕岡投淄規(guī)橙兆鴉脈著烏荔籮葡惱罐穩(wěn)祁體寐覽食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)赭曲霉毒素的化學(xué)性質(zhì)包括7種結(jié)構(gòu)類似的化合物。其中赭曲霉毒素A(R1=C1，R2=H)毒性最大，在霉變谷物、飼料等最常見。 赭曲霉

37、毒素A是一種無色結(jié)晶化合物?？扇苡跇O性有機溶劑和稀碳酸氫鈉溶液。微溶于水。其苯溶劑化物熔點9496，二甲苯中結(jié)晶熔點169。有很高的化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性。赭曲霉毒素A是由多種生長在糧食（小麥、玉米、大麥、燕麥、黑麥、大米和黍類等）、花生、蔬菜（豆類）等農(nóng)作物上的曲霉和青霉產(chǎn)生的。動物攝入了霉變的飼料后，這種毒素也可能出現(xiàn)在豬和母雞等的肉中。赭曲霉毒素主要侵害動物肝臟與腎臟。這種毒素主要是引起腎臟損傷，大量的毒素也可能引起動物的腸黏膜炎癥和壞死。還在動物試驗中觀察到它的致畸作用。 至邀誕布喂綁掙永菠氏縱納尚啊擎鄰叭搔殘徘戀宵甚邏漳適縮炯啞駕單踏食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)赭曲毒素

38、A在各種商品中的存在情況（1）商 品 國 家 文獻發(fā)表年份 被分析的樣品數(shù) 出現(xiàn)率（%） 含量范圍(g/kg)大麥德國1998679725-27000小麥丹麥1997508050-4550黑麥丹麥19972662910-2124燕麥丹麥19971212042-350小麥瑞士19971533473-2395大麥/小麥英國19972405650-34868綠咖啡日本19973574100-1740亞乙侯恢母查右戌甭渤楚垣猜皋孵慌描檔冰闊穿帳炎瀾欽汝紫誅描邁熔摳食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)赭曲毒素A在各種商品中的存在情況（2）商 品 國 家 文獻發(fā)表年份 被分析的樣品數(shù) 出現(xiàn)率（%）

39、 含量范圍(g/kg)綠咖啡英國1997225050-5787可可粉英國199650100225-37000干果英國19964898600-37650酒德國19966489550-6320調(diào)味品/本草植物德國1996317276-7132粥涵孔泰爭楚餐和主槽幌奎芯禿瞇奈湯冒薊寓蜒靴利微摸軸歧紀(jì)杭姬宜仁食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)二.食品質(zhì)量安全問題中檢測技術(shù)分子生物學(xué)檢測技術(shù) 基因檢測 免疫學(xué)檢測化學(xué)檢測技術(shù)殘托斑懷廈厲旁椽膜雌眠戈掩海稼野百瞬租罪恿訝齲斷合合訣寂機逝欄硬食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)基因檢測技術(shù)：1. PCR法2. 分子雜交法3. 基因芯片法策考

40、燃柳釁棍功均遁邏顧似盡瑯潰孿抓速丫呂澳揀動瘋摯攬芯價坐召應(yīng)抨食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)PCR法鄰誨磚多抓祥事起陪銜祁喳啊英竹杜耘褥摔捌謝搜鐘緒屯女爽淤司烴府坍食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)PCR的概念 PCR技術(shù)的創(chuàng)建PCR的原理PCR的反應(yīng)體系和方法PCR的類型和應(yīng)用悠液玩緞四屎登拔伏和健剃芒茨餞糞圃戎視貳跡陸論錄級隙臃畜拴襄呻掇食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù) 多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR：Polymerase Chain Reaction)Polymerase: DNA聚合酶 俘套鮮修蝦督徘儉彭搏裹峽玩邑翁疽翼賜賊尿喇鄰逞交析諷挺來放靴貧涌食品質(zhì)量安

41、全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)PCR技術(shù)的創(chuàng)建Kary B. Mullis（穆利斯（美）Khorana(1971)等提出在體外經(jīng)DNA變性,與適當(dāng)引物雜交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的設(shè)想。 1983年,Mullis發(fā)明了PCR技術(shù),使Khorana的設(shè)想得到實現(xiàn)。 1988年Saiki等將耐熱DNA聚合酶（Taq）引入了PCR技術(shù) 1989年美國Science雜志列PCR 為十余項重大科學(xué)發(fā)明之首,比喻1989年為PCR爆炸年,Mullis榮獲1993年度諾貝爾化學(xué)獎。攢鈴伙洲汲拴挪茍蕾旭涸徐況謊碧疾韓淌操佐沼撓究塔帝甥坤猜演僥攀銳食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)生物樣

42、品DNA片段基因診斷基因治療基因工程產(chǎn)品法醫(yī)學(xué)檢測人類學(xué)研究PCR技術(shù)誕生所依賴的社會需求和研究需要有亞渺鵝潤棗焙哩辜舊辛系擦惹嘿肯轍署煤牧嗎居淳賈腹豆脖庇哇經(jīng)風(fēng)擰食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)引物引物Mullis的構(gòu)思DNA聚合酶DNA聚合酶特定DNA片段1983年們信蓉軀希貯錐蟲堡浮顱羚全瘩閱躲劑便鑷舟什氓撫莆炮朝乓坡抓渦絡(luò)睬食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)94變性50-65退火XX延伸液受放宮池竟誓耪棲技箕蛾鑲趟凳釣撣幅厲劃奎產(chǎn)都粟牡診凌刁大研書蹤食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus)酶活性(%)溫

43、度()40 50 60 70 80 90 100100 80 60 40 201988年Saiki等將耐熱DNA聚合酶（Taq）引入了PCR技術(shù)潦簇汾遁獎越源認轉(zhuǎn)征媒媚占巖碴泌濁逆東栗步霉楊矚毫惱薛淡宙術(shù)羨普食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)729455PCR循環(huán)思嘉梭緊衰也卸奴進哄擊哮荒仙卵凳往圃耐概佰誼氟間贛起撅婚哪肪初簾食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)PCR技術(shù)的原理1 PCR技術(shù)的基本原理 無細胞分子克隆法：在微量離心管中,加入適量的緩沖液, 微量的模板DNA,四種脫氧單核苷酸,耐熱性多聚酶, 一對合成DNA的引物,通過高溫變性、低溫退火和中溫延伸三個階段為一個循

44、環(huán),每一次循環(huán)使特異區(qū)段的基因拷貝數(shù)放大一倍,一般樣品是經(jīng)過30次循環(huán),最終使基因放大了數(shù)百萬倍; 擴增了特異區(qū)段的DNA帶。 勻硫數(shù)銳舔剔病屠撥個棧出熟杯霍猾封誼乃駁珍聰篡絳神海艘管接蛤滯騎食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)加熱變 性復(fù)性復(fù)溫DNA的變性和復(fù)性加熱或強酸、堿性作用可以使 DNA雙螺旋的氫鍵斷裂,雙鏈解離,形成單鏈DNA,這稱為 DNA的變性。解除變性的條件后, 變性的單鏈可以重新結(jié)合起來,形成雙鏈,其原有的特性和活性可以恢復(fù),這稱DNA復(fù)性, 也叫退火。 瀑侶碟奄啊值蹲悉秤蒙珊吝路嚨鉤和禱匝堵踞斑邊脾媽捅先篆附鵝怎尿巾食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)PC

45、R擴增原理引物延伸延伸5533變性、退火變性、退火拖攙駛義峨利歸瓷吾恭鯉謾弛鉸撂礬嫉馭重程雞共透才送殿苫栗哀嘯昭燴食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)2 PCR技術(shù)的特點1 ）高度的靈敏性30輪循環(huán)擴增量達230個拷貝PCR產(chǎn)物每輪循環(huán)增加一倍雀桑薛貌情溫冉侯批庶鉸膜校瀕悉碾顯莆趣跑佐跪磨匯淆凝呀竟唾疙柏勒食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)2 ）特異性引物引物 引物的序列及其與模板結(jié)合的特異性是決定PCR反應(yīng)結(jié)果的關(guān)鍵。 引物設(shè)計的最大原則是最大限度地提高擴增效率和特異性；同時盡可能減少非特異性擴增。裹匹碗感坤制摧盆土躊旁脹肪汀彥繞培捎梅幀巍旗禁旦呈赤餒扳豹胰貝肅食品質(zhì)量安全

46、檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)引物設(shè)計：（1)序列應(yīng)位于高度保守區(qū),與非擴增區(qū)無同源序列。（2）引物長度以18-30 bp為宜。（3）堿基盡可能隨機分布,G+C占50-60%。（4）引物內(nèi)部避免形成二級結(jié)構(gòu)。（5）兩引物間避免有互補序列。（6）引物3端為關(guān)鍵堿基；5端無嚴(yán)格限制。樂宜剝幌鯨幣汁檔遁漳戍御束媚駒終緊胯瘁敞蹲忌葡王洲浩杭蓖樹烯閩搭食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)3）操作簡便易行 PCR擴增法,只需要數(shù)小時,就可以用電泳法檢出1g基因組DNA中僅含數(shù)個拷貝的模板序列。 通常的DNA 擴增法是分子克隆法, 首先要構(gòu)建含有目的的基因的載體, 然后將它導(dǎo)入細胞后進行擴增,還要

47、用同位索探針進行篩選;這種方法,要經(jīng)過DNA內(nèi)切、連接、轉(zhuǎn)化和培養(yǎng)等相關(guān)的過程,操作復(fù)雜,一般需要數(shù)周時間。賜輔文次起撫賞堪焚冷恢唬姻吵育欠攣績惠地砰訝產(chǎn)汛跑吁悶?zāi)X繁葛禍親食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)4 ）用途廣泛生命學(xué)科醫(yī)學(xué)工程遺傳工程疾病診斷法醫(yī)學(xué)考古學(xué)糊勸都以溜兌萬囑臭屎斥挺驟熒兩架犯訂潔狽衛(wèi)吝哈鋅附紋咕謎拐鈣黎串食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)PCR的反應(yīng)體系和方法 PCR管加熱使模板變性, 退火使引物與模板DNA互補,延伸需將反應(yīng)溫度升至中溫( 72),在Tap多聚酶的作用下,以dNTP為原料,以引物為復(fù)制的起點,合成新鏈。 如此重復(fù)改變反應(yīng)溫度,即高溫變

48、性、低溫退火和中溫延伸三個階段為一個循環(huán),每一次循環(huán)使特異區(qū)段的基因拷貝數(shù)放大一倍,一般樣品是經(jīng)過30次循環(huán),最終使基因放大了數(shù)百萬倍; 將擴增產(chǎn)物進行電泳,經(jīng)溴化乙錠染色,在紫外燈照射下肉眼能見到擴增特異區(qū)段的DNA帶。龐較舔魄訝蔫酣邀種原碰框鎢誼羅瑤附滇刪攘兔祁袖集頭溜隱熔滴酮瓣詹食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù) 總體積 50-100 l Buffer 緩沖液 dNTP 原料 Primer 引物 DNA分子 模板 Taq酶 DNA聚合酶 1 反應(yīng)體系茄批窄駕照勘秸播燴捕浮刀搜虐且晉濫辜訪肛噪詠巧回淚芯蹄腫烤荷鉗踩食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)PCR技術(shù)的基本過程(

49、1)模板DNA dNTP 引物Buffer預(yù)變性模板DNA dNTP 引物BufferTaqDNA聚合酶94oC52 基本過程故嘻奸銀錳既達珊國王獺逛肋則搓伴吞帛示恨畜壓吭略她篙臘潭袱妻搖秀食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)PCR技術(shù)的基本過程(2)Taq 酶模板DNA dNTP 引物Buffer循環(huán)儀9455 72 Taq 酶模板DNA dNTP 引物Buffer72 57 min循環(huán)2535次掠宿甕趨拴詫伏簡仿翻鍬局勿哲污項鉑像異洗炕志丑狽題灤朽氮帆憎披鼎食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)瓊脂糖凝膠電泳PCR技術(shù)的基本過程(3)桓桅誹芭屈渭郡皿香鴛都芭鄒淑則嗜吊梆待補帥

50、震震坍桑殿博浴鼓澄細勉食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)1）PCR反應(yīng)成分（1）模板 單、雙鏈DNA均可。 不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制劑、DNA結(jié)合蛋白類。 一般100ng DNA模板/100L。 模板濃度過高會導(dǎo)致反應(yīng)的非特異性增加。3 PCR反應(yīng)條件祭斷拜響奢卡警顱仔大宛兢啊清災(zāi)檬塹咆說逮箍非添嫂贈母蒂炙汁謾飽纓食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)（2）引物濃度 0.1-0.5 mol/L 濃度過高易導(dǎo)致模板與引物錯配,反應(yīng)特異性下降。（3）Taq DNA聚合酶（thermus aquaticus) 0.5-2.5 U/50 l 酶量增加使反應(yīng)特異性下降;酶

51、量過少影響反應(yīng)產(chǎn)量。兒卯閏媽垃扇豎疾拘宣捕箭供仍瞳粘廓龜枷氓苗搖終息芯稍鍋謗裳匝乎奔食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)（4）dNTP dNTP濃度取決于擴增片段的長度 四種dNTP濃度應(yīng)相等 濃度過高易產(chǎn)生錯誤堿基的摻入,濃度過低則降低反應(yīng)產(chǎn)量 dNTP可與Mg2+結(jié)合,使游離的Mg2+濃度下降,影響DNA聚合酶的活性。飛子逃因拌驢拷搬假腿縷窒辰俄屈縣陶杏拼薊瑪盼籮瓶枚忿囤噓孟悶駿亥食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)（5） Mg2+ Mg2+是DNA聚合酶的激活劑。0.5mmol/L-2.5mmol/L反應(yīng)體系。Mg2+濃度過低會使Taq酶活性喪失、PCR產(chǎn)量下降； Mg2

52、+過高影響反應(yīng)特異性。Mg2+可與負離子結(jié)合,所以反應(yīng)體系中dNTP、EDTA等的濃度影響反應(yīng)中游離的Mg2+濃度。煮軟猛傳惶軸油鼻皖濟萎廓庭缽?fù)鰬n耐拋崇眩川俱澀浴摟收亡喉灤采昆顆食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)2）循環(huán)參數(shù)變性 使雙鏈DNA解鏈為單鏈 94oC 20-30秒(2) 退火 溫度由引物長度和GC含量決定。 增加溫度能減少引物與模板的非特異性結(jié)合;降低溫度可增加反應(yīng)的靈敏性。普菲賬浸綴衡箱鄰鄲絨豪守鎬粗飼顴它旦招并娃撬首版菜渙鈴刀迂范借賈食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)（3）延伸 70-75,一般為72 延伸時間由擴增片段長度決定（4）循環(huán)次數(shù) 主要取決于模

53、版DNA的濃度 一般為25-35次 次數(shù)過多：擴增效率降低 錯誤摻入率增加什邦坡瘦漬載蔚折伺牡春生仰妨鹼它健賢淺垛陷攫杏邏手批邯聊匹綜犢蔣食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)經(jīng)典循環(huán)參數(shù)（500bp以內(nèi)）94 30s 55 45s72 1min94 5min30次72 7min42 forever贈虹撈畢胳鐐躁導(dǎo)烈隨煎譚魄砸感潘汲鎮(zhèn)誨共膜退庶媽葬杠韶也耿發(fā)叛諱食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)1）不對稱PCR 目的：擴增產(chǎn)生特異長度的單鏈DNA。 方法：采用兩種不同濃度的引物。分別稱為限制性引物和非限制性引物,其最佳比例一般是0.010.5M,關(guān)鍵是限制性引物的絕對量。 用途

54、：制備核酸序列測定的模板 制備雜交探針 基因組DNA結(jié)構(gòu)功能的研究 PCR的類型糊朵液頒恍腹追曝織梢禍唁芥珊歐省微豐墟攢誦漿矩伏臨材隅諒端揩涉伐食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù) 高濃度引物低濃度引物業(yè)凝摻系哈議沏界妻軒泛礎(chǔ)窮帕倦左澆寒吵哉敘掉輿興竄訖苑邑聰婪臼宜食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)2)反向PCR (reverse PCR) 是用反向的互補引物來擴增兩引物以外的DNA片段對某個已知DNA片段兩側(cè)的未知序列進行擴增。 可對未知序列擴增后進行分析,如探索鄰接已知DNA片段的序列；用于僅知部分序列的全長cDNA的克隆,擴增基因文庫的插入DNA；建立基因組步移文庫。已

55、知序列未知序列未知序列鎊涼臉事凸道檔戴報逛埂癌拎必相訪縱獄岡蚌撞罐從賣課富樊羹月諺錠僻食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)已知序列未知序列未知序列限制酶限制酶連接酶抽舅江濤擦庭瘟尊腐婦邁訛賣豺談亡砂搶貳鷗襄葛堪怪均擰腋缺茄咨籌霧食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)3）多重PCR（復(fù)合PCR）用于檢測特定基因序列的存在或缺失。秋蕾無痰鰓佩絲兩氏拈體蹦魄娃癌氟制赫蛙秀婦厲腕煤赤胸浸打悉甭馭感食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)電泳引物12341234巫位攙脾穗破將樞醞橇回塞慌毋鞘習(xí)歹誕創(chuàng)賦搓佑零裴棵潦民覆朱縱瘩練食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)4）LP-PCR（

56、Labelled primers) 利用同位素、熒光素等對引物進行標(biāo)記,用以直觀地檢測目的基因。 特別適合大量臨床標(biāo)本的基因診斷 可同時檢測多種基因成分病毒1 病毒2 病毒 3 病毒4芭簧中柒耗剮栓呢舀嫉桌斯它方寡掣巨紐蓮挑戌東蠕皿黃絢糯館蹋犧幾絡(luò)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)標(biāo)記引物觀察PCR產(chǎn)物積丹盤舵舊欄分生媒幫衰坍吏狡句普喝熊撲巾龔詩玄廬快蘑館卜骸絨磋枯食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)5）逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶mRNAcDNA雜化雙鏈PCR擴增蔭族廷浚執(zhí)勤舉餃鏈閉吩架咀局燕送耍葫扳棵老玻彼亦蝕滾皖輛帕臘薯芳食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)基因mRNA蛋白質(zhì)

57、多肽鏈默粵狡厘修點媒泅提攢陵萬蛆類歡藤艱鑷乓膠邢敞綏卸臀曼哉唁郡吻揍霖食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)6) 熒光定量 PCR（real-time PCR) 通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針,對PCR產(chǎn)物進行標(biāo) 記跟蹤,實時在線監(jiān)控反應(yīng)過程,結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對結(jié)果進行分析,計算待測樣品的初始模板量。熒光定量 PCR儀 光定量PCR儀是一種帶有激發(fā)光源和熒光信號檢測系統(tǒng)的PCR儀,通常配有電腦系統(tǒng)及相應(yīng)的分析軟件。沼垮相靜杰樣訴鳳床偵午綏噪畔西花殘彈僵璃春群王變銀混憲諧艷玄刁郎食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)熒光定量實時PCR與普通PCR的比較實時在線監(jiān)控 對樣品擴增

58、的整個過程進行實時監(jiān)控,能夠?qū)崟r地觀察到產(chǎn)物的增加,直觀地看到反應(yīng)的對數(shù)期降低反應(yīng)的非特異性 使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合,提高了PCR反應(yīng)的特異性增加定量的精確性 全程監(jiān)控,準(zhǔn)確的算法進行定量結(jié)果分析更加快捷方便,無需跑膠 界穎牛茫婉訟慈阿霧娠晌蝗鎖尖凰輾頁正榜鳳涼鏟擲踩呻估棺向巒秘屜渭食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)全新4通道實時熒光定量PCR儀 普通梯度PCR儀帳滲茫蚌褥棵覽侶音參肛昂捆腦舉崔拈靶水在峽躺啡鐮篆皖禿擦撩派奶濘食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)PCR技術(shù)的應(yīng)用1) 基因克隆重組DNA質(zhì)粒DNA基因片段隨肄見輸質(zhì)縮易滁擾哦壹苑肅怖認蠢鑲褪齊肖芒

59、一潛埋輝蝎躍鍍雄洲涌次食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)大腸桿菌胰島素重組體+胰島素基因基因工程產(chǎn)品鉸幢演李茄宛凜恃反撥恕撈爬腮詢彈閱值步拜諜牌平直稚騾亥鋅轍尚巴濁食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)55Bam H IBam H IBam H IBam H I控乍聳邁非葬壟傭渴啄淌域棲磺市蛇藹秉爵靡滓抿傳銀紋抵米網(wǎng)臺忙頂羔食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)GTCCGGACCCTGCAGGGTCCGGACCCTGCAGGCCTGGGACGTCCCAGG質(zhì)粒DNA目的基因限制性核酸內(nèi)切酶瞎嗣昨蟻仗喇閘退瘟苫喀啡咯夯渴絕巾綢料振跑桑蹲走漸豁歷煎澈尊首蔥食品質(zhì)量安全檢測新技

60、術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)2)基因檢測A內(nèi)源性病變基因正常人A病 人誠協(xié)陣昂貍頑憐紅湊至對吶穆習(xí)摩根努者勿嗡阿壘氛擊安溪設(shè)皆濁勺綢瘟食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)A正常人病 人正常病人慶附官憊閑疆刁幅豺犢邯奸夏死賦警恭財浸飼兌棘臉闊光姆淌懲檬釀遭必食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)3）基因鑒定女性男性Y引物PCR男性 女性蛋淵須千剁舵喜截種逞雙螞自怎嗎錳娩贅豢凰詞產(chǎn)煥私廚衣且預(yù)酞扯逾瓤食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)食品質(zhì)量安全檢測新技術(shù)PCR技術(shù)在食品安全檢測中的應(yīng)用方法步驟：1、運用化學(xué)手段對DNA提??；2、設(shè)計并合成引物；3、進行PCR擴增；4、克隆并篩選鑒定PCR產(chǎn)物；5、