酵母抽提物滋味物質(zhì)分析課件

1、校長(zhǎng): 譚向勇/教授2010/06/07北京工商大學(xué)工作匯報(bào) 酵母抽提物中滋味物質(zhì)分析北京工商大學(xué)宋煥祿2013/05/09概述在食品工業(yè)中，酵母抽提物作為提供肉湯味、肉味風(fēng)味的咸味食品配料，被用于肉制品、湯料、醬和方便食品中。有關(guān)酵母抽提物中風(fēng)味物質(zhì)，以往的研究大都集中在其揮發(fā)性的氣味成分上。Farmer教授團(tuán)隊(duì)對(duì)3種不同的YE膏進(jìn)行了分析，結(jié)果表明，2-甲基-3-呋喃硫醇、2-甲基-3-甲硫基呋喃、3-甲硫基丙醛、1-辛烯-3-酮、二甲基三硫化物以及一些吡嗪、噻吩是關(guān)鍵的氣味活性化合物。這3種YE產(chǎn)品由于其加工處理及生產(chǎn)批次的不同，其氣味化合物的種類及強(qiáng)度均有差異，說(shuō)明YE中的風(fēng)味前驅(qū)物（

2、flavor precursor）的變化對(duì)最終產(chǎn)品的風(fēng)味起到了較大影響。Schieberle教授團(tuán)隊(duì)比較了自制YE與商品YE加熱后產(chǎn)生的關(guān)鍵氣味活性化合物進(jìn)行了比較，結(jié)果表明，YE制備方法的不同引起了兩種YE加熱后關(guān)鍵風(fēng)味成分的明顯差異。尤其是，YE風(fēng)味前驅(qū)物之一的氨基酸含量的不同與一些關(guān)鍵氣味活性化合物的濃度，直接相關(guān)，例如燒烤味/咖啡味的2-呋喃甲硫醇濃度與半胱氨酸含量成正比，但是爆米花味的2-乙?；?1-吡咯啉的濃度與其前驅(qū)物鳥(niǎo)氨酸含量并不成線性關(guān)系。因此，弄清YE中的風(fēng)味前驅(qū)物的種類及濃度，及其對(duì)加熱后所產(chǎn)生的關(guān)鍵氣味活性化合物的影響是非常必要的。但是迄今為止，人們對(duì)酵母抽提物中滋味活

3、性物質(zhì)的知識(shí)非常有限。蛋白質(zhì)水解產(chǎn)生的L-谷氨酸和L-天門冬氨酸，與核酸降解產(chǎn)生的琥珀酸、5-肌苷酸、5-鳥(niǎo)苷酸一起使用會(huì)產(chǎn)生顯著的協(xié)同效應(yīng)，對(duì)酵母抽提物的鮮味有很大的貢獻(xiàn)。一些肽類、核苷酸衍生物、美拉德反應(yīng)產(chǎn)物是具有濃郁鮮味或醇厚味的增味劑，使得其能夠增加相關(guān)食品的美妙感覺(jué)，而同時(shí)又降低了谷氨酸單鈉鹽（味精）、核苷酸鈉鹽、NaCl的加量，從而導(dǎo)致了鈉離子攝入量的降低，起到了增鮮、增濃厚味、減鹽、減少味精加量的作用，這符合當(dāng)今的營(yíng)養(yǎng)健康理念，順應(yīng)了時(shí)代發(fā)展的潮流。因此，開(kāi)展這樣的研究，對(duì)于揭示食品美味的化學(xué)本質(zhì)，為生產(chǎn)健康食品提供扎實(shí)的科學(xué)基礎(chǔ)，意義重大。. 酵母抽提物中風(fēng)味前驅(qū)物分析滋味是食

4、品感官質(zhì)量最重要的屬性之一，主要是通過(guò)舌頭的味蕾感知，其次是自由神經(jīng)末梢，是水溶性物質(zhì)刺激味覺(jué)感受器再經(jīng)過(guò)味覺(jué)神經(jīng)傳入到大腦的味覺(jué)中樞，經(jīng)分析整合產(chǎn)生的化學(xué)感應(yīng)。滋味一般由甜味、咸味、苦味、酸味和鮮味5種基本味覺(jué)構(gòu)成。YE中主要滋味物質(zhì)主要有氨基酸、還原糖、核苷酸、硫胺素和多肽等，一方面它們本身具有滋味，賦予產(chǎn)品良好的口感，如鮮味、醇厚味等；一方面也可以作為風(fēng)味前驅(qū)物，參與美拉德反應(yīng)，產(chǎn)生揮發(fā)性的肉香味物質(zhì)，使產(chǎn)品具有誘人的香氣。3、Gouda 干酪中濃厚味( kokumi) 物質(zhì)T. Hoffman等用凝膠過(guò)濾色譜（GPC）、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）技術(shù)結(jié)合感官評(píng)定手段，對(duì)

5、成熟期為44周的Gouda干酪中的水溶性物質(zhì)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，其中的含-谷氨酸的二肽如-Glu-Glu、-Glu-Gly、-Glu-Gln、-Glu-Met、-Glu-Leu和-Glu-His是首次鑒定出的關(guān)鍵濃厚味（kokumi）物質(zhì)。本研究主要對(duì)YE中主要滋味活性化合物進(jìn)行含量的測(cè)定，重在與滋味感官評(píng)價(jià)相結(jié)合，分析滋味活性物質(zhì)對(duì)YE滋味感官的貢獻(xiàn)以及作為調(diào)味增鮮作用的主要原因。1. 滋味感官評(píng)價(jià)方法10個(gè)評(píng)價(jià)員（4男6女，23-50歲），有超過(guò)200h的感官評(píng)價(jià)經(jīng)驗(yàn)， 表3.1為香味感官評(píng)價(jià)參考標(biāo)準(zhǔn)。稱取樣品3g，溶于20g蒸餾水中，用嘴品嘗（不咽），采用10分制（0-2 弱，3-4

6、較弱，5-6中， 7-8 較強(qiáng)，9-10 強(qiáng)）對(duì)各滋味特征進(jìn)行打分。室溫條件下，對(duì)每組樣品評(píng)價(jià)后休息3min以免疲勞，并重復(fù)三次。滋味特征滋味定義整體滋味強(qiáng)度風(fēng)味 (嘴-味覺(jué)品嘗)基礎(chǔ)/特征肉滋味基礎(chǔ)肉味：肉湯味特征肉味：煮的豬肉、牛肉和雞肉香鮮味與8 mmol/L谷氨酸鈉在口腔中產(chǎn)生的滋味特征相似或相同酸味與0.08%乙酸口腔中產(chǎn)生的滋味特征相似或相同甜味與5%果糖在口腔產(chǎn)生的滋味特征相似或相同苦味與0.08%咖啡因在口腔產(chǎn)生的滋味特征相似或相同咸味與 0.1%氯化鈉在口腔產(chǎn)生的滋味特征相似或相同不良滋味澀味、金屬味或者令人不愉悅的滋味表1 滋味感官評(píng)價(jià)參考標(biāo)準(zhǔn)圖1 滋味感官評(píng)價(jià)結(jié)果如圖1所

7、示，特征風(fēng)味YE的整體滋味強(qiáng)度較高于基礎(chǔ)風(fēng)味YE，具體表現(xiàn)在肉味、鮮味和咸味。YE中，肉味、鮮味和咸味占主導(dǎo)地位，其次為甜味、酸味、以及極少的苦味和不良滋味。樣品來(lái)源安琪酵母股份有限公司的樣品：非肉味YE（LA00、LB05）、各種肉味YE（TB、TP、TC）。2. 游離氨基酸的測(cè)定樣品處理：（1）稱量樣品并移入50mL容量瓶中 （2）用3%磺基水酸溶液溶解樣品并定容 （3）搖勻樣品溶液后過(guò)濾，離心，上機(jī) 分析儀器：日立L-8900氨基酸分析儀 氨基酸名稱LALBTBTPTC天門冬氨酸Asp1.3080.9910.5030.4540.464蘇氨酸Thr0.8480.6490.2880.3170

8、.303絲氨酸Ser1.0240.7810.3370.3680.344谷氨酸Glu4.2313.6733.8113.6083.651甘氨酸Gly0.6320.5340.4200.5460.513丙氨酸Ala4.1923.6381.1931.1821.325纈氨酸Val1.4001.1880.5170.5430.511蛋氨酸Met0.4530.3630.1360.1500.135異亮氨酸Ile1.1040.8740.3970.4550.408亮氨酸leu2.0471.6220.7400.7721.449酪氨酸Tyr1.0160.7990.3890.4080.355苯丙氨酸Phe1.0150.78

9、60.3780.3870.371賴氨酸Lys1.0700.8400.3540.3930.375組氨酸His0.3230.2490.0880.1290.096精氨酸Arg1.2421.2210.4480.5270.424脯氨酸Pro0.4050.3180.1460.1550.123總和22.3118.52610.14510.39410.847表3 具有基礎(chǔ)風(fēng)味和特征肉香味YE中游離氨基酸含量（g/100g）從表3可以看到，基礎(chǔ)風(fēng)味型YE(LA和LB)總氨基酸含量較高，分別為22.31g/100g和18.526g/100g，特征風(fēng)味即豬肉、牛肉、雞肉風(fēng)味YE(TB、TP和TC)中總AA含量相當(dāng)，在

10、10-11g/100g。另外，5種YE中鮮味氨基酸Glu含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它氨基酸，最高LA中4.231g/100g，最低TP中3.608g/100g，這可能就是YE作為調(diào)味增鮮的一個(gè)重要原因。其次是甜味氨基酸Ala，最高LA中4.192 g/100g，最低TP中1.132g/100g。圖2 游離氨基酸的柱狀分析圖3. 游離核苷酸的測(cè)定（1）基本原理： IMP與GMP在紫外光區(qū)域均有特征吸收，而且最大吸收波長(zhǎng)相近，因此，它們的吸收光譜重疊干擾嚴(yán)重，這樣不能利用單一物質(zhì)的定量分析方法來(lái)對(duì)其進(jìn)行分析，只能根據(jù)雙波長(zhǎng)測(cè)定的加和性原理，在適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng) 1和 2，分別測(cè)定混合物的吸光度及等量IMP、GMP的吸

11、光度，利用雙波長(zhǎng)分光光度法原理計(jì)算混合物中的IMP、GMP、I+G的含量。 分析儀器：UV-2550紫外分光光度計(jì) 比耳定律：A= *b*C 式中：A 為吸光度值；為吸收系數(shù)；b為吸收池厚度（1cm)；C 為物質(zhì)濃度 “若各組份的吸光性符合比耳定律，則其總吸光度為各組分吸光度之和”-吸光度加和性原理 （2）樣品前處理 A）稱取m=3g樣品，加入6ml 0.6M的高氯酸溶液； B）在4、8000r/min離心，過(guò)濾； C）用2M的氫氧化鉀調(diào)節(jié)pH 5.4，同樣條件下離心，過(guò)濾； D）冰箱放置，備用。 （3）吸光系數(shù)的計(jì)算A）分別精確稱取1.0000 g的IMP與GMP，溶于純水中，定容到1 00

12、0 mL，B）準(zhǔn)確吸取4mL，加入25mL 0.1molL HCI溶液，再用純水定容到250 mL配成標(biāo)準(zhǔn)溶液，C）分別在250 nm、280nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸收值同時(shí)干燥失重測(cè)定. 表4. IMP及GMP的相關(guān)測(cè)定數(shù)據(jù) 名稱 質(zhì)量 g 水分含量 % 濃度 % A250 A280 IMP 1.0003 22.93 0.00123 0.269 0.054 GMP 1.0006 18.82 0.00130 0.359 0.254 = 218.6992 = 43.9024 = 276.1538 = 195.3846 根據(jù)本實(shí)驗(yàn)條件,從而推算出IMP與GMP在I+G混合物中的含量為：YE波長(zhǎng)（nm）含量

13、（%）回收率（%）250280GMPIMPGMPIMPLA0.0580.0415.7600.072100.29100.96LB0.0560.0344.4391.469104.27104.89TB0.0630.0138.0036.088101.45101.98TP0.0570.0313.8182.400105.65107.23TC0.0510.0273.2742.33399.1299.68表5 雙波長(zhǎng)紫外法測(cè)得YE中核苷酸二鈉的含量（g/100g)表5顯示，GMP含量占3.2748.003%，IMP含量占0.0726.088%。且所測(cè)的五種YE中，GMP含量均高于IMP含量，并且GMP閾值（0.

14、 125%）較低于IMP（0.025%），相對(duì)鮮度GMP（16000）遠(yuǎn)大于IMP（4000），這也決定了更高含量的GMP對(duì)YE的整體鮮味貢獻(xiàn)更大。 I+G總含量在5.60714.091%，特征牛肉風(fēng)味YETB中I+G總含量最高，特征雞肉風(fēng)味YETC 中I+G總含量最低。GMP回收率為99.12%108.34%。IMP回收率為99.68107.23。穩(wěn)定性試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果基本不變， RSD 均 2.0，說(shuō)明樣品穩(wěn)定性良好。重復(fù)性試驗(yàn)中GMP、IMP、I+G的 RSD 分別為0.4、0.6、0.3，均2.0。說(shuō)明樣品重復(fù)性良好。4. 還原糖的測(cè)定4.1 實(shí)驗(yàn)原理 DNS（3,5-二硝基水楊酸）法4.

15、2 實(shí)驗(yàn)步驟4.2.1樣品中還原糖的提取準(zhǔn)確稱取2gYE，放在100ml燒杯中，先加10ml蒸餾水?dāng)嚢瑁蠹尤?0ml蒸餾水，混勻，于50 恒溫水浴中保溫20min，不時(shí)攪拌，使還原糖浸出后，過(guò)濾，將濾液全部收集在50ml的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，即為還原糖提取液。4.2.2 回收率的測(cè)定取等量樣品，加入1mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照同樣處理方法提取還原糖，定容，在540nm處測(cè)定吸光度。樣品吸光度含量回收率（%）LA0.4341.728100.98LB0.2260.900109.32TB 0.6312.512112.61TP0.4781.903101.34TC 0.6092.42497.3

16、4表5 DNS法測(cè)定YE中還原糖的含量（g/100g）標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=0.628X，R2=0.9998。測(cè)得還原糖含量TB最高為2.512g/100g，LB最低為0.900 g/100g。特征風(fēng)味YE（TB、TP和TC）還原糖含量要高于基礎(chǔ)風(fēng)味型YE（LA和LB）。回收率在97.34112.61%，預(yù)處理方法達(dá)到較好效果。. 酵母抽提物中滋味肽的分離與鑒定1. 概述滋味肽，也稱呈味肽，是指從食物中提取或由氨基酸合成得到的對(duì)食品風(fēng)味具有一定貢獻(xiàn)的分子質(zhì)量低于5000Da的寡肽類，包括特征滋味肽和風(fēng)味前體肽。滋味肽存在于肉類、奶酪、海鮮、水果或蔬菜等各種食物中，無(wú)論對(duì)于加工食品還是未經(jīng)加工食品的

17、風(fēng)味都非常重要。滋味肽的分離純化方法很多，根據(jù)分子量大小，可以選擇超濾、離心等進(jìn)行初步純化，然后可以用層析、離子交換、凝膠等進(jìn)行精制層析，并通過(guò)高效液相等進(jìn)一步分離純化。本研究結(jié)合滋味分析新技術(shù)即比較滋味稀釋分析，找出最大稀釋因子比的餾分對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，并對(duì)鑒定的多肽在熱反應(yīng)后產(chǎn)生的香味活性化合物進(jìn)行了初步探索。2. 滋味肽的分離2.1 樣品前處理稱取YE（LA）10g，加入100ml高純水，充分溶解。4冷凍離心20min，取上清液移入蒸發(fā)皿中，薄膜密封后，扎出多數(shù)小孔， 在-80冷凍干燥。每次準(zhǔn)確稱取干燥粉末0.010g，定容于10mL容量瓶中，進(jìn)樣。2.2 凝膠色譜純化 凝膠色譜純化依據(jù)

18、被分離物的分子量大小不同來(lái)進(jìn)行分離的一種色譜技術(shù)。當(dāng)混合肽溶液通過(guò)凝膠柱時(shí)，相對(duì)分子質(zhì)量較大的肽段先出來(lái)，分子量小的物質(zhì)后出來(lái)。肽分離柱Sephadex peptide 10300mm，柱體積為24mL，洗脫劑為純水，流速確定為0.3mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，上樣量為100L（樣品濃度：1mg/100L)。蛋白質(zhì)溶液在238 nm處的光吸收的強(qiáng)弱，與肽鍵的多少成正比。因此可以用標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液配制一系列50500 mg/mL已知濃度的5.0 mL蛋白質(zhì)溶液，測(cè)定238 nm的光吸收值A(chǔ)238，以A238為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。未知樣品的濃度即可由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得。2.

19、4 比較滋味稀釋分析(cTDA)將各組餾分冷凍干燥后，稱量0.010g兩份，一份溶入蒸餾水 (2ml，TDAwater)，一份溶入谷氨酸鈉溶液（3mmol/L，TDAMSG )。以2n依次稀釋，直至能夠品嘗到鮮味的最大稀釋倍數(shù)，即為滋味稀釋因子（TD factor）。3. 滋味肽的鑒定 3.1 樣品前處理準(zhǔn)確稱量篩選出的干燥成粉的餾分0.010g，用蒸餾水定容于10mL容量瓶中，然后用注射器吸取2.0mL過(guò)濾膜于進(jìn)樣瓶，待測(cè)。3.2 HD-MS 進(jìn)行LC-MS/MS分析的條件液相條件：nanoACQUITY UPLC超高效液相色譜系統(tǒng)配備自動(dòng)進(jìn)樣器，富集柱為Symmetry C18，180m

20、x 20mm，5m顆粒。分析柱為nanoACQUITY UPLC 超高效液相色譜鍵合乙烷雜顆粒柱BEH C18，75m 250mm, 1.7 m顆粒。柱溫35C ，流速200nl/min， 流動(dòng)相A為含0.1%甲酸的水溶液，流動(dòng)相B為含0.1%甲酸的乙腈。梯度是 1% 到40% B 80min，到80%B 10min，80%B 停留10min，平衡20min到起始1%B。質(zhì)譜條件：Synapt High Definition Mass Spectrometry 質(zhì)譜儀，離子化方式是納升電噴霧正離子，DDA方式數(shù)據(jù)采集模式，每次掃描中兩個(gè)強(qiáng)度最高的離子進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析。圖1 凝膠色譜圖No.I.

21、 A0.1150.1020.0560.0450.0340.0230.0850.0120.0030.026II. A0.4450.4130.2030.2160.1820.1320.3250.0890.0110.145表1 各餾分吸光度圖2 各餾分cTDA結(jié)果圖1是通過(guò)凝膠色譜在254nm波長(zhǎng)下按照2mL為一單位分離出的餾分，但其峰面積的大小并不能真正反映出各餾分含肽量的高低，所以需要對(duì)各餾分進(jìn)行含肽量的測(cè)定。選用紫外檢測(cè)方法，在特定的波長(zhǎng)下，各餾分吸光度的大小在一定程度上反映了各餾分中含肽量的高低，由表1可知，兩種測(cè)定方法基本達(dá)到了一致效果，如吸光度較大的三組餾分(0.115和0.445)(0.

22、102和0.413)(0.085和0.325)。此外，圖2結(jié)果表明，餾分和的TDfactorMSG/TDfactorWater比值最大為16，說(shuō)明這兩組餾分鮮味較強(qiáng)，但是由于餾分最先由凝膠色譜分離出來(lái)，相對(duì)分子質(zhì)量較大，可能含有蛋白或者其他大分子量的雜質(zhì)，由此，選擇餾分進(jìn)行鮮味增強(qiáng)肽的鑒定。篩選出的鮮味較強(qiáng)的餾分，經(jīng)LC-MS/MS共鑒定出四條寡肽，分別為四肽：Asn-Pro-Gly-Va五肽：Gly-Ala-Ser-Ser-Thr七肽：Tyr-Glu-Asp-Val-Asp-Val-Lys十肽：Thr-Glu-Glu-Ile-Ala-Pro-Gly-Thr-Pro-Ser。表3和表4是各個(gè)肽

23、-美拉德體系中產(chǎn)生的香味活性化合物的鑒定結(jié)果。結(jié)果顯示，無(wú)論是四肽、五肽、七肽，還是十肽，當(dāng)它們和木糖的熱反應(yīng)時(shí)，產(chǎn)物中都含有二甲基三硫化物、3,5-二甲基-1,2,4-三唑、5-甲基-2-苯基-2-己醛，而LA直接加熱產(chǎn)物中則無(wú)，說(shuō)明它們的生成與肽和木糖有關(guān)。4. 肽對(duì)香味活性化合物的影響4.1 反應(yīng)條件肽-美拉德反應(yīng)體系組成如表3，反應(yīng)溫度120，時(shí)間90min，反應(yīng)結(jié)束后迅速冷卻至5060，倒于20mL玻璃瓶中，待測(cè)。肽體系木糖/mgLA/gAsn-Pro-Gly-Val1-1+601-2+1.21-3+60+1.2Gly-Ala-Ser-Ser-Thr2-1+602-2+1.22-3+

24、60+1.2Tyr-Glu-Asp-Val-Asp-Val-Lys3-1+603-2+1.23-3+60+1.2Thr-Glu-Glu-Ile-Ala-Pro-Gly-Thr-Pro-Ser4-1+604-2+1.24-3+60+1.2表2 肽-美拉德反應(yīng)體系4.2 GC-MS分析氣相條件：DB-WAX毛細(xì)管柱（30m0.250mm0.25m)，載氣為氦氣(純度99.99%)，恒定流速為1.2 mL/min，分流比10：1，進(jìn)樣口250。柱溫箱升溫程序?yàn)椋撼跏紲囟?0，保持3 min，以5/min升溫到200，保持0min，再以15/min升溫到260，保持3 min。質(zhì)譜條件：質(zhì)譜接口280

25、，電離方式為EI，電子能量為70eV，離子源230，四級(jí)桿溫度為150，溶劑延遲3min，質(zhì)譜掃描范圍40600aum?；衔锩Q體系LA1-11-21-32-12-22-32-甲基丙醛0.2080.8420.330.061.0343-甲基丁醛1.4850.0991.4330.0990.2180.9195.55乙酸乙酯0.2130.1630.0260.12二甲基二硫醚0.1450.0320.2390.0150.0550.1190.291吡嗪0.03甲基吡嗪0.1160.0530.0140.2912,6-二甲基吡嗪0.0890.0160.1962,4,5-三甲基噻唑0.1040.3070.225

26、二甲基三硫醚0.2310.0280.5570.3044-乙基-2,5-二甲基噻唑0.1380.0775-乙基2,4-二甲基噻唑0.421乙酸0.0940.3460.509糠醛0.26421.1661.3740.39711.5680.2273.2372-乙酰呋喃0.1210.1120.0310.193苯甲醛1.0970.5832.8730.1490.2911.2241.3395-甲基-糠醛0.0620.1810.0783，5-二甲基-1,2,4-三硫雜環(huán)戊烷0.3240.3590.0270.3030.0930.259苯乙醛0.5310.3471.1710.2110.4530.5551.9043-

27、噻吩甲醛0.1150.2760.1132-(甲二硫基)甲基-呋喃0.0630.370.1630.0340.3610.3385-甲基-2-噻吩甲醛0.270.3730.2361-糠基吡咯0.0320.168茴香腦0.2180.3863-戊基呋喃0.0710.1690.631愈創(chuàng)木酚0.2110.6750.301亞乙基苯烯醛0.140.2780.4750.060.1910.9471H-吡咯-2-甲醛0.0310.1235-甲基-2-苯基-2-己醛0.1730.3160.0470.1410.0260.407-亞糠基-糠甲基硅烷0.1210.0880.0250.732吲哚嗪0.1220.033表3 肽-美拉德反應(yīng)測(cè)定結(jié)果1化合物名稱體系LA1-11-21-32-12-22-32-甲基丙醛0.2080.5710.0890.8330.1253-甲基丁醛1.4850.1571.6233.9370.0601.4010.992乙酸乙酯0.2170.1540.1870.0580.156二甲基二硫醚0.1450.1290.0660.0730.0460.2320.117吡嗪0.03甲基吡嗪0.1160.