藥物分析第04章分析樣品前處理

1、藥物分析第04章分析樣品前處理采用一定的方法,使待測(cè)藥物或待測(cè)元素轉(zhuǎn)化為適宜的狀態(tài)后，再進(jìn)行分析測(cè)定。前處理對(duì)象：1. 含鹵素元素（F、Cl、Br、I）2.金屬元素（Ca、Fe、Hg、Zn、Sn 、Bi)3.含As、P、S等元素4.生物樣本以上藥物在進(jìn)行鑒別、檢查及含量測(cè)定前,需要經(jīng)過(guò)不同方法處理后,方可進(jìn)行測(cè)定.2第一節(jié) 體外樣品分析前處理一、前處理樣品分類有機(jī)鹵素藥物1 鹵素與脂肪鏈的碳原子相連結(jié)合不牢固2 鹵素與芳環(huán)相連結(jié)合牢固 1 金屬離子不直接與碳原子相連，在溶液中可直接離解出金屬離子. 2 金屬離子直接與碳原子以共價(jià)鍵相連，結(jié)合狀態(tài)比較牢固，在溶液中不能直接離解出金屬離子.含金屬有

2、機(jī)藥物31. 常見的含鹵素有機(jī)藥物三氯叔丁醇六氯對(duì)二甲苯泛影酸4膽影酸碘苯酯I5碘他拉酸碘番酸磺溴酞鈉6諾氟沙星醋酸氟輕松7硬脂酸鎂富馬酸亞鐵酒石酸銻鉀2. 常見的含金屬元素的有機(jī)藥物8葡萄糖酸銻鈉9 根據(jù)鹵素或金屬在分子中結(jié)合牢固程度不同處理方法而異.不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法直接測(cè)定法經(jīng)水解后測(cè)定法經(jīng)氧化還原后測(cè)定法濕法破壞法干法破壞法氧瓶燃燒法前處理方法10（1 ）金屬離子不直接與碳原子相連乳酸鈣1 直接測(cè)定法 例1：乳酸鈣含量測(cè)定 0.3g+水100ml 放冷+NaOH 15ml EDTA滴定 鈣紫紅素指示劑二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法211(2)金屬離子直接與碳原子以共

3、價(jià)鍵相連富馬酸亞鐵 例2：富馬酸亞鐵含量測(cè)定 富馬酸亞鐵溶于熱硫酸,同時(shí)分解釋放出亞鐵離子,可選用鈰量法進(jìn)行測(cè)定.鄰二氮菲為指示劑.12原理Fe2+ + Ce4+ Ce3+ + Fe3+ Fe2+ + e-Fe3+紅色淺藍(lán)色OOCCHOHCCO+Fe2+13將含鹵素的有機(jī)藥物溶于適當(dāng)溶劑（如乙醇）中,加氫氧化鈉溶液或硝酸銀溶液后,加熱回流使其水解,將有機(jī)結(jié)合的鹵素,經(jīng)水解作用轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)機(jī)的鹵素離子,然后選用間接銀量法進(jìn)行測(cè)定.（1）直接回流后測(cè)定法2 經(jīng)水解后測(cè)定法14CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH 回流(CH3)2-CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2ONaCl

4、+ AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3 三氯叔丁醇15 六氯對(duì)二甲苯（Hexachloro-p-xylene） +6AgNO3+6H2O 加入AgNO3加熱回流完全后,可用硫氰酸銨標(biāo)準(zhǔn)溶液直接滴定剩余的硝酸銀,以求得含量. 6AgCl + 6NO3 - +6 H+16 例：硬脂酸鎂與定量硫酸共沸、水解生成硬脂酸和硫酸鎂，剩余的酸以氫氧化鈉滴定. 也適用于金屬原子與脂肪鏈的碳原子相連,結(jié)合不牢固藥物.（2） 用硫酸水解后測(cè)定法原理：Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4 MgSO4 + 2 C17 H35COOH2NaOH +

5、H2SO4 Na2SO4 + 2H2O 17（1）堿性還原后測(cè)定 鹵素結(jié)合于芳環(huán)上,由于分子碘的結(jié)合較牢固,需在堿性溶液中加還原劑（如鋅粉）,加熱回流,使碳-碘鍵斷裂,形成無(wú)機(jī)碘化物后測(cè)定. 3 經(jīng)氧化還原后測(cè)定法泛影酸（鹵素原子與芳環(huán)相連,化學(xué)鍵牢固） +3NaI+2CH3COONa+3Na2ZnO2+3H2O NaI+AgNO3 AgI +NaNO3曙紅鈉為吸附指示劑黃色玫瑰紅色+11NaOH +3Zn18在醋酸酸性條件下加還原劑鋅粉,加熱回流,使碳-碘鍵斷裂,形成無(wú)機(jī)碘化物后用銀量法測(cè)定. 如：碘番酸含量測(cè)定（2）酸性還原后測(cè)定用四溴酚酞乙酯作指示劑， AgNO3滴定。黃色沉淀綠色19（

6、3）利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測(cè)定含量含銻藥物Sb5+具有氧化性,在酸性下氧化KI定量析出I2，可用Na2S2O3 滴定.例如：葡萄糖銻鈉 20 有機(jī)鹵素及金屬的藥物結(jié)構(gòu)中的鹵素或金屬離子與碳原子結(jié)合牢固者,用上述方法難以成為無(wú)機(jī)的化合物,此時(shí)必須采用有機(jī)破壞的方法,使之轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)機(jī)化合物,方可進(jìn)行測(cè)定.三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法1 濕法破壞法2 干法破壞法3 氧瓶燃燒法21 根據(jù)所用試劑的不同，濕法破壞可分為以下幾種：硝酸-高氯酸法 破壞力強(qiáng),不適于含氮雜環(huán)硫酸-硫酸鹽法 常用于含砷、銻有機(jī)藥物硝酸-硫酸法 適于大多數(shù)有機(jī)物質(zhì)破壞1 濕法破壞法221 取樣量 含金屬元素在10 100g范

7、圍內(nèi),取樣10 g 生物樣品血樣10 15ml；尿樣50ml2 所用儀器凱氏燒瓶3 空白試驗(yàn)4 通風(fēng)櫥中進(jìn)行 濕法破壞法注意事項(xiàng)：23 適用于含氮雜環(huán),以及某些不能用硫酸破壞的有機(jī)藥物，但不適于含汞、砷藥物的測(cè)定.2 干法破壞將有機(jī)物灼燒灰化以達(dá)到分解目的. 常加無(wú)水碳酸鈉或輕質(zhì)氧化鎂以助灰化.1 應(yīng)控制溫度420以下2 灰化必須完全3 經(jīng)本法破壞后，所得灰分往往不易溶解，不要輕易棄去。注意事項(xiàng)243 氧瓶燃燒法 氧瓶燃燒法是將有機(jī)藥物放入充滿氧氣的密閉燒瓶中進(jìn)行燃燒,并將燃燒所產(chǎn)生的欲測(cè)物質(zhì)（氣態(tài)）吸收于適當(dāng)吸收液中,然后根據(jù)欲測(cè)物質(zhì)的性質(zhì),采用適當(dāng)分析方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測(cè)定.特點(diǎn) 快

8、速分解有機(jī)藥物的簡(jiǎn)單方法. 不需復(fù)雜設(shè)備,能使有機(jī)結(jié)合中的待測(cè)元素定量地分解成無(wú)機(jī)離子狀態(tài). 適用于含鹵素及硫、磷、硒等藥物的鑒別、檢查和含量測(cè)定,特別適用于微量樣品的測(cè)定.25（1）儀器裝置26（2）操作加吸收液通氧燃燒吸收測(cè)定取樣10-20mg27（3）注意事項(xiàng) . 充氧氣要充分 使樣品燃燒完全,一般急速通氧氣12分鐘,通氣管應(yīng)接近液面，使瓶?jī)?nèi)空氣排盡，燃燒完全時(shí)沒有黑色炭化物. 吸收完全應(yīng)充分振搖,燃燒瓶看不到煙霧.Cl、F白色煙霧 Br棕色 I紫色放置15min，用少量水沖洗瓶塞及鉑絲。28. 吸收液的選擇氟 水 氯 NaOH溶液溴 H2O2-NaOH NaOH-硫酸肼飽和溶液碘 Na

9、OH硫酸肼飽和溶液硫 NaOH或H2O2 硒 硝酸溶液. 防爆 樣品燃燒時(shí),溫度很高,燃燒瓶?jī)?nèi)壓力很大,有爆炸的可能性,必須采取防護(hù)措施.防護(hù)措施 戴防護(hù)眼鏡瓶外包濕毛巾29（4）鹵素化合物的燃燒產(chǎn)物氟化物、氯化物氟或氯以離子狀態(tài)存在，吸收后可直接測(cè)定.溴化物碘化物 溴化物或碘化物,燃燒后以多種價(jià)態(tài)存在,吸收后應(yīng)轉(zhuǎn)化為統(tǒng)一價(jià)態(tài)再測(cè)定.30（5）實(shí)例-碘苯酯的含量測(cè)定燃燒吸收加溴醋酸溶液加甲酸、加KI 滴定 31將 - 、 2 氧化為 O3 2Na +Br2 = 2NaBr+ 2 2+5Br2+6H2O = 2H O3 +10HBr2 溴-醋酸氧化劑： 2+ 2Na2S203 2Na +Na2S

10、4066H+ + 5- + O3- 3 2 + 3H2O1 燃燒吸收R- CO2+H2O+Na + 2+Na O3+NaClO3 加甲酸：除去過(guò)量的溴4 加KI 滴定321. 氧瓶燃燒法中的裝置有( )A. 磨口硬質(zhì)玻璃錐形瓶 B. 磨口軟質(zhì)玻璃錐形瓶C. 鉑絲 D. 鐵絲 E. 鋁絲2選擇氧瓶燃燒法所必備的實(shí)驗(yàn)物品( )A. 磨口硬質(zhì)玻璃錐形瓶 B. 鉑絲 C. 普通濾紙D. 氫氣 E. 無(wú)灰濾紙3. 氧瓶燃燒法可用于( )A. 含鹵素有機(jī)藥物的含量測(cè)定B. 醚類藥物的含量測(cè)定C. 檢查甾體激素類藥物中的氟D. 檢查甾體激素類藥物中的硒E. 芳酸類藥物的含量測(cè)定33第二節(jié) 體內(nèi)樣品分析預(yù)處理

11、方法生物樣本： 生物體的任何臟器、組織、體液均可作為生物樣本.常用樣本: 血液（血漿、血清或全血）、尿液、唾液、毛發(fā)（一）樣品采集 1 血漿或血清樣品處理適用：有機(jī)藥物藥動(dòng)學(xué)研究、生物利用度測(cè)定、治療藥物檢測(cè)等樣品處理方法：（）去蛋白質(zhì) （）分離純化濃集（）儀器分析 （ 4 ）綴合物水解34（1）去蛋白質(zhì) 加入與水混溶的有機(jī)溶劑蛋白質(zhì)脫水沉淀 加入中性鹽“鹽析”沉淀蛋白質(zhì) 加入強(qiáng)酸與蛋白質(zhì)陽(yáng)離子(銨基)形成不溶性鹽沉淀 加入重金屬鹽與蛋白質(zhì)陰離子(羧基)形成不溶性鹽沉淀 超濾法半透膜濾除可溶性生物大分子 酶水解法蛋白分解酶分解蛋白質(zhì) 加熱法蛋白質(zhì)變性凝固35液-液萃取法固-相萃取被測(cè)組分濃集（

12、3）分離純化與濃集（4）化學(xué)衍生 使藥物變成具有被分離的性質(zhì)提高檢測(cè)靈敏度增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性 提高對(duì)光學(xué)異構(gòu)體分離能力362 尿液處理適用：藥物劑量回收、腎清除率和生物利用度測(cè)定、藥物代謝研究 尿中藥物多數(shù)呈綴合狀態(tài),為測(cè)定尿液中藥物總量,需將綴合物中藥物釋出. 酸水解 酶水解綴合物的水解3 毛發(fā)（頭發(fā)）適用：微量元素測(cè)定方法：有機(jī)破壞法 濕法破壞 干法破壞 氧瓶燃燒法371.在藥物干燥失重和熾灼殘?jiān)鼫y(cè)定中，恒重是指連續(xù)兩次操作后所得的重量差A(yù).等于0 B0.1mg C. 0.3mg D. 1mg E. 3mg 2.中國(guó)藥典中規(guī)定，稱取“2.0g”是指A.稱取重量為B.稱取重量為C.稱取重量為D.稱取重量為3.中國(guó)藥典凡例中規(guī)定的“極易溶解”系指溶解1g溶質(zhì)所需溶劑的體積為：A.不到1mL B. 1mL不到10mL C. 10mL不到30mLD. 30mL不到100mL 384.中國(guó)藥典凡例中規(guī)定的“水浴”系指水浴溫度為：A.1030 B. 4050 C. 7080 D. 98100和LOQ是考察藥物分析方法的：A.專屬性 B.準(zhǔn)確度 C.靈敏度 D.精密度6.藥物分析的各項(xiàng)效能指標(biāo)中，用于原料藥中雜質(zhì)的限度檢查方法，對(duì)