藥物分析 第9章 甾體激素類(lèi)藥物分析

1、藥物分析 第9章 甾體激素類(lèi)藥物分析多氫菲菲環(huán)戊烷甾體激素的基本母核多氫菲并環(huán)上雙鍵的表示方法： 用“”表示，雙鍵的位置寫(xiě)在的右上角。雙鍵位置環(huán)上取代基構(gòu)型表示方法： 構(gòu)型：與母核連接的取代基，指向環(huán)平面的前面時(shí)，為構(gòu)型，用實(shí)線(xiàn)表示“” 構(gòu)型：與母核連接的取代基，指向環(huán)平面的背面時(shí)，為構(gòu)型，用虛線(xiàn)表示“” 4 5 1,4 5(10) 椅式全反式剛性骨架 最穩(wěn)定面下鍵： 鍵面上鍵： 鍵 處于 平伏鍵的取代基空間位阻小，易受試劑進(jìn)攻， 直立鍵受角甲基位阻的影響，試劑難以進(jìn)攻。C11位的直立鍵受兩個(gè)角甲基的雙重影響，最難被試劑進(jìn)攻。以下主要基團(tuán)可供分析：1.4-3-酮，C20酮基DABC123456

2、7891011121314151617181920212.C11： 或3.C17：，環(huán)上的酚羥基5.鹵素(-F)，酯基 甾體激素(1) 腎上腺皮質(zhì)激素(氫化可的松、潑尼松、醋酸地塞米松、曲安奈德)(皮質(zhì)酮)(2) 雄性激素及 蛋白同化激素 (苯丙酸諾龍)(睪酮)(3)孕激素(黃體激素)(黃體酮)(4)雌激素(卵泡激素)雌二醇炔雌醇?xì)浠傻乃?hydrocortisone 又名：可的松;皮質(zhì)醇;氫化皮質(zhì)酮;氫可的松 (1)腎上腺皮質(zhì)激素C17 -醇酮基-3-酮 -3-酮 C17 -醇酮基還原性UV羰基試劑反應(yīng)IR與羰基試劑反應(yīng)氫化可的松 hydrocortisone 可的松-3-酮 C17 -醇

3、酮基（皮質(zhì)酮）（corticosterone）-3-酮 C17 -醇酮基氫化潑尼松： 在氫化可的松結(jié)構(gòu)上1，2位間引入雙鍵 C17 -醇酮基-3-酮 醋酸地塞米松-3-酮 C17 -醇酮基916醋酸地塞米松主要結(jié)構(gòu)特征（1）含有21個(gè)C ，A環(huán)4-3-酮結(jié)構(gòu)（,-不飽和酮），有紫外吸收 （2）D環(huán)的C17上-醇酮基，有還原性。 （3）10位、13位-甲基， 11位羥基、羰基等受立體效應(yīng)影響， 無(wú)利用價(jià)值；人工合成品：1、2位間有雙鍵，6，9位引入鹵素，16或16位引入甲基，16位引入羥基。（2）雄性激素及蛋白同化激素 睪丸素的衍生物 C17 b羥基-3-酮 雄性激素-3-酮 （睪酮 testo

4、sterone）甲睪酮丙酸睪酮-3-酮 丙酸睪酮蛋白同化激素（苯丙酸諾龍）（nandrolone phenylpropionate）在睪丸素基礎(chǔ)上結(jié)構(gòu)修飾得到，如雄性激素及蛋白同化激素結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： 雄性激素母核含有19個(gè)C，蛋白同化激素的C10位無(wú)角甲基，母核含有18個(gè)C，A環(huán)的4-3-酮，有紫外吸收；C17位b羥基或由它們形成的酯 （3）孕激素甲酮基與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)孕酮黃體激素（黃體酮）（progesterone）-3-酮 17（黃體酮）（progesterone）供分析官能團(tuán)：含有21個(gè)C ， A環(huán)的4-3-酮結(jié)構(gòu)有紫外吸收；D環(huán)的C17上有甲酮基 （四）雌激素苯環(huán)UV，與重氮苯磺酸鹽反

5、應(yīng)卵泡激素（雌二醇）（estradiol）3雌激素乙炔基（炔雌醇）（ethinylestradiol）Ag+雌酮含有18個(gè)C，A環(huán)為苯環(huán)，3位上有酚羥基，D環(huán)17位：b羥基、-乙炔基可供分析結(jié)構(gòu)特征：A環(huán)的C3-酚羥基及17位羥基。雌激素的結(jié)構(gòu)特征口服避孕藥，如炔諾酮、異炔諾酮、安宮黃體酮等 炔諾酮（norethisterone）異炔諾酮炔諾孕酮（norgestrel）A環(huán)有4-3-酮結(jié)構(gòu)； 有的第17位有羥基和乙炔基； 第10位無(wú)甲基。 甾體激素 碳原子數(shù) A環(huán) 17位取代基 腎上腺皮質(zhì)激素 21 4-3-酮 C17-醇酮基或羥基雄性激素 、同化激素19 4-3-酮 -OH；-CH3 孕激素

6、 21 4-3-酮 甲酮基 雌激素 18 苯環(huán)、C3-酚OH -OH ；-CC 乙炔特殊官能團(tuán)情況甾體激素類(lèi) 藥物鑒別(1)呈色反應(yīng)A.與強(qiáng)酸呈色反應(yīng) B.官能團(tuán)呈色反應(yīng)(堿性四氮唑藍(lán)試液、硫酸苯肼、亞硝基鐵氰化鈉等)(2)沉淀反應(yīng)A.斐林試劑反應(yīng) 生成Cu2OB.銀氨溶液反應(yīng)生成AgC. AgNO3溶液反應(yīng)生成AgCl(3)衍生化反應(yīng)(生成酯、肟、縮氨基脲等)(4)水解產(chǎn)物反應(yīng)(如醋酸可的松用EtOH制KOH及H2SO4使生成醋酸乙酯的香氣鑒別)(5)UV法(6)IR法(7)TLC法(8)HPLC法炔雌醇 和黃體酮 250)制衍生物測(cè)熔點(diǎn)與硫酸的呈色反應(yīng)橙紅黃綠熒光絮狀玫瑰紅H2O甾體激素母

7、核能與H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl等強(qiáng)酸呈色。 最常用的是H2SO4。炔雌醇 IR33003000cm-119001650cm-137503300cm-1衍生化反應(yīng)炔雌醇m.p.201黃體酮雙肟m.p.238官能團(tuán)呈色反應(yīng)(1). C17-醇酮基的呈色反應(yīng)：具還原性、能與氧化劑堿性酒石酸銅試液、氨制硝酸銀試液、堿性四氮唑試液反應(yīng)而呈色。(2). 酮基的呈色反應(yīng)：C3-酮基和C20-酮基均能與異煙肼、2,4-二硝基苯 肼、硫酸苯肼等羰基試劑呈色。(3). 甲酮基的反應(yīng)：亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)是黃體酮類(lèi)專(zhuān)屬鑒別方法， 在一定條件下，黃體酮顯藍(lán)紫色，其他常用甾體激素不顯色或顯淡橙色。(6)

8、. 有機(jī)氟的呈色反應(yīng)：含氟藥物破壞后，與茜素氟藍(lán)及硝酸亞鈰起 呈色反應(yīng)。(4). 酚羥基的呈色反應(yīng)：雌激素類(lèi)C3位酚羥基與重氮苯磺酸反應(yīng)生成紅色偶氮染料（5）炔基的沉淀反應(yīng) 遇硝酸銀試液生成白色炔銀沉淀(7). 酯的反應(yīng)：甾體激素多以羧酸酯類(lèi)用藥 水解 游離羧酸 產(chǎn)生羧酸 特臭。醋酸可的松用EtOH制KOH及H2SO4使生成醋酸乙酯的香氣鑒別腎上腺皮質(zhì)激素類(lèi)藥物特征反應(yīng)。 -醇酮基有強(qiáng)還原性，與氧化劑作用，被氧化成水合醛。 C17 -醇酮基的還原性TTC：氯化三苯四氮唑（又叫紅四氮唑RT） BT：藍(lán)四氮唑 用于腎上腺皮質(zhì)激素類(lèi)藥物鑒別和含量測(cè)定。 三苯甲瓚氯化三苯四氮唑 （TTC）H深紅2,3

9、,5-Triphenyltatrazolium chlorideRed tatrazoline RT(Formazan)與堿性酒石酸銅的反應(yīng)Cu2O紅斐林試劑與異煙肼的反應(yīng)C3-酮基C20-酮基H+（縮合）羥胺 、氨基脲、異煙肼、硫酸苯肼2,4-二硝基苯肼如醋酸可的松、氫化可的松等，其甲醇或乙醇溶液加新制的硫酸苯肼試液，加熱顯黃色。甲睪酮異煙肼異煙腙與異煙肼的反應(yīng)與亞硝基鐵氰化鈉的反應(yīng)其他甾體激素橙色或不顯色具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類(lèi)C17甲酮基黃體酮藍(lán)紫色間二硝基苯、芳香醛黃體酮本反應(yīng)是黃體酮的靈敏、專(zhuān)屬性鑒別反應(yīng)活潑次甲基反應(yīng)（Zimmermann 反應(yīng)） 羰基鄰位的次甲基叫活潑次

10、甲基。 羰 基 C3、C11、C20 次甲基C2、C12、C21羰基 C17 次甲基C16 雌酮 可的松間二硝基苯雌酮 有機(jī)氟化物的反應(yīng)藍(lán)紫NaOH硝酸亞鈰茜素氟藍(lán)F-藍(lán)紫色與硝酸銀反應(yīng)乙炔基的反應(yīng)白炔雌醇與硫酸的反應(yīng)H2SO4醇制香水解反應(yīng) 特殊雜質(zhì) 檢查(1) 游離磷酸鹽(加鉬酸比色測(cè)定)(2)有機(jī)溶劑殘留甲醇和丙酮(GC法檢查)(3)乙炔基 雌酮(炔雌醇中)目視比色(4) 硒氧瓶燃燒后用鹽酸羥胺還原，UV法測(cè)A(5)其他甾體：TLC高低濃度對(duì) 照法(堿性四氮唑藍(lán)試液顯色) HPLC法不加校正因子的主成分自身對(duì)照法雜質(zhì)檢查游離磷酸 原理： 硒來(lái)源 合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫劇毒原理處

11、理 其他甾體 與標(biāo)示藥物結(jié)構(gòu)不同的甾體化合物都稱(chēng)為“其他甾體”特殊雜質(zhì)檢查來(lái)源原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物方法*TLC法（高低濃度對(duì)比法）*HPLC法（主成分自身對(duì)照法)特點(diǎn)*可能存在多個(gè)其他甾體*結(jié)構(gòu)類(lèi)似地塞米松磷酸鈉中其他甾體檢查 采用AgNO3-NaOH滴定法 電位滴定法 指示電極：玻璃電極參比電極：飽和甘汞電極(玻璃套管內(nèi)裝 飽和KNO3液)電極系統(tǒng)：玻璃-KNO3鹽橋-飽和甘汞藥典附錄中表示： 中氫置換法“乙炔基”的檢查(1)UV法(2)GC法(3)HPLC法(4) 四氮唑比色法皮質(zhì)激素C17-醇酮基(COCH2OH)具有還原性，在強(qiáng)堿性溶液中能將四氮唑鹽定量地還原為有色物，再測(cè)A

12、值。(5)異煙肼比色法甾體激素C3-及別的位置上酮基都能在酸性條件下與羰基試劑異煙肼縮合形成黃色異煙腙，在一定波長(zhǎng)下有最大吸收。(6)Kober反應(yīng)比色法 雌激素與H2SO4EtOH共熱呈色，用水或稀硫酸稀釋后重新加熱發(fā)生顏色改變，并在515nm附近有最大吸收。H+甾體激素藥物 含量？異煙肼法(Isonicotinic acid hydrazide)INH4-3-酮Isonicotinic acid HydrazideC3酮基及某些其他位置上的酮基能與羰基試劑異煙肼在酸性條件下形成黃色異煙腙，在一定波長(zhǎng)下具有最大吸收，可用于定量。反應(yīng)條件 （1）溶劑：無(wú)水乙醇，無(wú)水甲醇 （2）酸的種類(lèi)、濃度及

13、異煙肼的濃度 常用HCl HCl：異煙肼=2M:1M時(shí)，獲最大吸收度。 HCl濃度： （1000ml醇中含濃HCl） 異煙肼濃度：0.0365mol/L (0.5mg/ml) 甲睪酮異煙肼異煙腙 甾體激素與異煙肼的縮合反應(yīng)為可逆反應(yīng)，所以含水量升高可促使反應(yīng)逆轉(zhuǎn)而水解，使吸收度降低（H2OA） 在該反應(yīng)條件下， 對(duì)43酮具有一定的專(zhuān)屬性 C20酮基反應(yīng)慢， C17酮基反應(yīng)慢； C11酮基不反應(yīng) 43酮：室溫下，30反應(yīng)完全Kober反應(yīng)比色法炔雌醇片 Kober反應(yīng)缺點(diǎn)： （1）條件較難控制，易出雙色黃+紅 （2）重現(xiàn)性較差： 呈色強(qiáng)度和穩(wěn)定性受試劑濃度、組成、反應(yīng)時(shí)間和溫度的影響。 甾體激素

14、提取物中其他物質(zhì)及制劑中穩(wěn)定劑，賦形劑,溶劑對(duì)測(cè)定有干擾。 515第二步反應(yīng)465450 500 550nmAKober 反應(yīng)吸收光譜第一步反應(yīng) 采用本法測(cè)定炔雌醇片及復(fù)方炔諾酮片、復(fù)方炔諾孕酮滴丸、復(fù)方左炔諾孕酮片中的炔雌醇的含量中國(guó)藥典含量測(cè)定特點(diǎn) 用樣量少，靈敏度高，分離效果好，快速RPHPLC 各國(guó)藥典常采用 可消除其他甾體的干擾中國(guó)藥典2005年版 內(nèi)標(biāo)法 + 校正因子填充劑 C18 流動(dòng)相 甲醇-水（70：30）醋酸地塞米松內(nèi)標(biāo) 甲睪酮炔雌醇內(nèi)標(biāo) 醋酸甲地孕酮黃體酮內(nèi)標(biāo) 己烯雌酚丙酸睪酮及其注射液內(nèi)標(biāo) 苯丙酸諾龍醋酸地塞米松片UV法皮質(zhì)激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素-3-酮 240nm（）苯環(huán) 280nm（）雌激素 醋酸地塞米松注射液四氮唑比色法常用的四氮唑鹽I. 氯化三苯四氮唑（TTC） 也稱(chēng)紅四氮唑（RT） 深紅II. 藍(lán)四氮唑（BT） 暗藍(lán) 皮質(zhì)激素C17- -醇酮基具有還原性，在強(qiáng)堿性溶液中能將四氮唑鹽定量地還原為有色甲瓚。1、原理三苯甲瓚氯化三苯四氮唑 （TTC）H深紅2,3,5-Triphenyltatrazolium chlorideRed tatrazoline RT(Formazan)對(duì)照品法2、測(cè)定方法4045暗3、測(cè)定條件（1）基團(tuán)影響：一般認(rèn)為：C11上的酮基反應(yīng)速度快于C11位上的羥基，C21上的羥基酯化后較其母體羥基的反應(yīng)速度慢