免疫檢測與防治課件

1、第11講 免疫學(xué)檢測技術(shù) 的基本原理免疫學(xué)檢測方法： 依據(jù)免疫學(xué)理論設(shè)計的測定抗原、抗體、免疫細胞及細胞因子的實驗方法。 一、基本原理 抗原與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合，并呈現(xiàn)某種反應(yīng)現(xiàn)象，如凝集或沉淀，以此檢測抗原或抗體。第一節(jié) 體外抗原抗體結(jié)合反應(yīng) 的特點及其影響因素抗原抗體反應(yīng)的特點 1.抗原抗體結(jié)合的特異性 抗原抗體結(jié)合除空間構(gòu)型互補外，還以氫鍵、靜電引力、范德華力和疏水鍵等非共價方式結(jié)合，一定條件下復(fù)合物可解離成游離狀態(tài)，且仍保持原有性質(zhì)。 2.抗原抗體結(jié)合的可逆性 復(fù)合物解離度主要取決于特異性抗體超變區(qū)與相應(yīng)抗原表位三維空間構(gòu)型的互補程度，互補程度越高，分子間距越小，作用力越大，兩者結(jié)合越

2、牢固，不易解離；反之，則容易發(fā)生解離。 3.抗原抗體結(jié)合的比例與濃度 抗原與抗體結(jié)合比例合適，則可形成肉眼可見的大結(jié)合物；反之形成肉眼不可見的小結(jié)合物。 4.抗原抗體反應(yīng)的階段性 第二階段：可見反應(yīng)階段。數(shù)分鐘、數(shù)小時至數(shù)日，因素影響多。第一階段：特異結(jié)合階段。僅幾秒到幾分鐘、尚無可見反應(yīng)；抗原抗體反應(yīng)的主要影響因素1.抗原和抗體濃度、比例2.電解質(zhì)3.溫度 4.酸堿度二、血清學(xué)反應(yīng)的種類 1.凝集反應(yīng)細菌、細胞等顆粒性抗原與相應(yīng)的抗體，或表面包被抗原的顆粒狀物質(zhì)與相應(yīng)的抗體在電解質(zhì)存在的條件下結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團現(xiàn)象。 2.沉淀反應(yīng)毒素、組織浸液以及血清中的蛋白等可溶性抗原與相應(yīng)抗體反

3、應(yīng)后，出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物。3.免疫標記技術(shù)用酶、熒光素、同位素等物質(zhì)標記抗體或抗原進行抗原抗體反應(yīng)，檢測抗原或抗體的技術(shù)。如免疫酶技術(shù)、免疫熒光技術(shù)、放射免疫測定。第一抗體抗原第一抗體抗原第二抗體生物酶第一抗體抗原-第二抗體顯色 第二節(jié) 免疫細胞的測定 淋巴細胞是機體內(nèi)主要的免疫細胞，檢測其數(shù)量和功能是了解機體免疫狀態(tài)的重要手段。 一 、淋巴細胞的分離 常用ficoll（淋巴細胞分離液）密度梯度離心除去紅細胞、粒細胞而獲得外周血單個核細胞（PBMC），再經(jīng)吸附除去單核細胞而得到淋巴細胞。若要分離T細胞，可用尼龍毛柱、抗CD3單抗、E花結(jié)試驗等分離。二、免疫細胞細胞的鑒定 根據(jù)細胞的某些標志，

4、采用免疫熒光法、磁珠分離法、流式細胞術(shù)等方法可確定細胞不同類型和比例。（一）T細胞功能測定 1. T細胞增殖試驗 植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）等絲裂原及抗CD3單抗等能非特異性激活培養(yǎng)的T細胞，使其轉(zhuǎn)化成淋巴母細胞的試驗。 淋巴細胞功能測定 在該增殖過程中，細胞DNA、RNA、蛋白質(zhì)的合成增加，細胞形態(tài)改變。也可檢測特異性抗原致敏的T細胞。 （1）氚標記的胸腺嘧啶核苷摻入法：該法靈敏、可靠，應(yīng)用廣泛，但需特殊儀器（液體閃爍儀），易有放射性污染。 （2）MTT法：該法操作簡單，無放射性污染，但敏感性相對較差。 淋巴細胞功能測定2. 細胞毒試驗： Tc、NK細胞對靶細胞有直接殺傷作

5、用，可根據(jù)待檢效應(yīng)細胞的性質(zhì)，選用相應(yīng)的靶細胞。 （1）51Cr釋放法：用51Cr標記靶細胞，記數(shù)儀測定釋放的51C活性。 （2）MTT法：其原理與增殖試驗相同，但甲 生成量與靶細胞溶解破壞水平呈負相關(guān)。 （3）乳酸脫氫酶釋放法：細胞受損致膜通透性改變，乳酸脫氫酶釋放到培養(yǎng)液中。 3 細胞因子檢測： CK的檢測有助于了解其在免疫調(diào)節(jié)中的作用，鑒定分離的淋巴細胞，監(jiān)測某些疾病狀態(tài)的細胞免疫功能。常用的檢測方法有以下三種：（1）ELISA法：（2）生物活性測定法：（3）聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）： 淋巴細胞功能測定 4 皮膚實驗 正常機體對某種抗原產(chǎn)生細胞免疫后，用相同抗原做皮膚試驗時出現(xiàn)以局部紅腫為

6、特征的DTH。細胞免疫正常時出現(xiàn)陽性反應(yīng)，細胞免疫低下則呈陰性反應(yīng)。 該方法簡便，可幫助診斷某些病原微生物感染（如結(jié)核桿菌、麻風(fēng)桿菌等）及免疫缺陷病等。 淋巴細胞功能測定（二）B細胞功能測定 B細胞介導(dǎo)體液免疫，檢查B細胞的數(shù)量與功能是確定體液免疫是否正常的重要手段。1 B細胞增殖試驗2 抗體形成細胞的測定：吸附有特異性抗原的SRBC與抗體形成細胞分泌的Ig特異性結(jié)合后活化補體，溶解SRBC。又稱溶血空斑試驗。第12講 免疫學(xué)防治 “國防建設(shè)”學(xué)習(xí)要求：1.掌握人工主動免疫與人工被動免疫的概念；掌握死疫苗和活疫苗概念以及特性；2.熟悉疫苗的基本要求。免疫學(xué)防治：應(yīng)用免疫學(xué)理論預(yù)防和治療疾病，包

7、括免疫預(yù)防和免疫治療。一、疫苗1.定義：為預(yù)防、控制傳染病的發(fā)生和流行，用于人體預(yù)防接種的生物制品。包括疫苗、菌苗和類毒素。2.基本要求：安全實用有效對絕大多數(shù)人群有保護性作用，使用后群體抗感染能力強，理想的疫苗：同時誘導(dǎo)細胞和體液免疫，維持時間長。接種程序簡單，無嚴重不良反應(yīng)，便于運輸和儲存，價格低?；钜呙缫筮z傳性狀穩(wěn)定，無返祖、致癌和致畸作用，無熱原性和過敏原?？垢腥究鼓[瘤計劃生育防止免疫病理損傷3.疫苗應(yīng)用二、免疫預(yù)防方式免疫預(yù)防自然免疫：顯性或隱性感染， 胎兒從母親獲得人工免疫：人工主動免疫 人工被動免疫免疫預(yù)防自然免疫：顯性或隱性感染， 胎兒從母親獲得人工免疫：人工主動免疫 人工被

8、動免疫（一）人工主動免疫1.定義：用疫苗接種機體，使之產(chǎn)生 特異性免疫，從而預(yù)防感染的措施。2.疫苗滅活疫苗（死疫苗）與減毒活疫苗活疫苗：人工的方法使病原體減毒或從自然界篩選病原體無毒株或微毒株所制成的活的微生物制劑。也稱減毒活疫苗，卡介苗，甲肝疫苗。死疫苗：選用免疫原性強的病原微生物，經(jīng)人工大量培養(yǎng)，經(jīng)理化方法將其殺死后制成的疫苗。無毒力，但仍保持其免疫原性。傷寒、百日咳、鉤端螺旋體、斑疹傷寒、乙型腦炎等疫苗死疫苗與活疫苗特點的比較含義：細菌外毒素經(jīng)0.30.4%甲醛處理。類毒素特點：失去毒性而仍保留其免疫原性。新型疫苗亞單位疫苗、合成肽疫苗、基因工程疫苗。食用轉(zhuǎn)基因植物以預(yù)防接種已初步成功

9、。含義：細菌外毒素經(jīng)0.30.4%甲醛處理。類毒素特點：失去毒性而仍保留其免疫原性。（二）人工被動免疫1.定義：給人體注射含特異性抗體的免疫血清或細胞因子等制劑，以治療或緊急預(yù)防感染的措施。2.制劑抗毒素：細菌外毒素或類毒素免疫動物制備的血清。注意：對人而言既是抗體也是抗原，因而要防止超敏反應(yīng)的發(fā)生，使用前需皮試。舉例：破傷風(fēng)抗毒素，白喉抗毒素人免疫球蛋白制劑：混合血漿或胎盤血中分離制成的免疫球蛋白濃縮劑。舉例：肝炎、麻疹、脊髓灰質(zhì)炎。細胞因子和單克隆抗體： IFN- IFN-、 G-CSF、GM-CSF、 IL-2，人源單抗。舉例：腫瘤、艾滋病有效預(yù)防手段。（三）人工主動與被動免疫的特點比較3.計劃免疫 第三節(jié) 免疫治療 針對異常的免疫狀態(tài)，應(yīng)用免疫制劑、免疫調(diào)節(jié)藥物或其他措施來調(diào)節(jié)或重建免疫功能，以達到治療疾病的目的。免疫增強療法免疫抑制療法感染、腫瘤超敏反應(yīng)、自身免疫病、移植排斥反應(yīng)、嚴重炎癥免疫重建療法再障、免疫缺陷主動免疫治療被動免疫治療刺激或增強機體免疫系統(tǒng)，使機體自身產(chǎn)生抵抗疾病的能力輸注免疫效應(yīng)細胞或分子，發(fā)揮治療疾病的作用又稱 過繼免疫療法特異性免疫療法非特異性免疫療法主動被動主動被動瘤苗抗體、TIL佐劑（卡介苗）LAK、細胞因子可用