實驗十三 IMVIC實驗

1、實驗十一 吲哚試驗 甲基紅試驗 伏-普試驗 1一.實驗?zāi)康暮鸵?.了解IMViC的原理及方法。 2.掌握IMVIC在腸道菌群鑒定中的作用2二.基本原理 1、甲基紅試驗（ M.R試驗） 某些細(xì)菌（如大腸桿菌、志賀氏菌、產(chǎn)氣桿菌等）分解葡萄糖產(chǎn)生多種有機(jī)酸，導(dǎo)致培養(yǎng)基PH值下降。培養(yǎng)后期，產(chǎn)氣腸桿菌可接著利用有機(jī)酸，將其降解為非酸性末端產(chǎn)物，如丙酮酸、乙醇等，導(dǎo)致培養(yǎng)基PH值回升。 甲基紅 中性：紅色 酸性：黃色32、吲哚試驗有些細(xì)菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚。吲哚與對二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，就會形成紅色的玫瑰吲哚。 大腸桿菌吲哚反應(yīng)陽性，產(chǎn)氣腸桿菌陰性。43、乙酰甲基甲醇試驗（

2、V-P試驗） 某些細(xì)菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液中能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強(qiáng)堿環(huán)境下，被空氣中氧氣氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱V.P.（+）反應(yīng)。 5三.材料儀器 1.活材料：大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、土壤分離菌 2.培養(yǎng)基 葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基、蛋白胨水培養(yǎng)基 3.試劑 甲基紅試劑、吲哚試劑、V.P.試劑。 4.器材 接種環(huán)、酒精燈、恒溫培養(yǎng)箱 6四.實驗內(nèi)容及方法1.試管標(biāo)記：M.R.、吲哚、V.P.培養(yǎng)液試管各一支，標(biāo)記上所要接種的菌種。 2.接種：以無菌操作分別接種少量菌苔至以上各相應(yīng)試管中。 3.培養(yǎng)：置37恒溫箱中培養(yǎng)，在培養(yǎng)

3、48h后觀察結(jié)果。 7五.實驗結(jié)果 M.R.試驗結(jié)果觀察 于M.R.培養(yǎng)液中，各加入23滴甲基紅指示劑，注意沿管壁加入，仔細(xì)觀察培養(yǎng)液上層，若培養(yǎng)液上層變成紅色，即為陽性反應(yīng)；若仍呈黃色，則為陰性反應(yīng)，分別用“”或“”表示。 8吲哚試驗結(jié)果觀察 取吲哚試管，加入40滴乙醚，搖動數(shù)次，靜置5-10分鐘，待乙醚上升后，沿管壁徐徐加入5滴吲哚試劑，等量V.P.試劑，搖勻，以使空氣中的氧溶入，在乙醚和培養(yǎng)物之間產(chǎn)生紅色環(huán)狀物為陽性反應(yīng)，記錄為吲哚試驗陽性結(jié)果（用“”表示）； 若無紅色環(huán)狀物出現(xiàn)者記錄為吲哚試驗陰性結(jié)果（用“”表示）。 9V.P.試驗結(jié)果觀察 取V.P.試管，加入等量（20滴）V.P.試劑（40%的KOH和5%的-萘酚），搖勻，以使空氣中的氧溶入，靜置于37恒溫箱中保溫30min后，若培養(yǎng)液呈紅色，記錄為V.P.試驗陽性