白介素的抗腫瘤機(jī)

1、白細(xì)胞介素12的抗腫瘤機(jī)理(j l)研究斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院外科宗康拉共一百三十九頁(yè)內(nèi)容提要(ni rn t yo)白介素12的抗腫瘤效果白介素12的抗腫瘤機(jī)理白介素12可能的臨床(ln chun)應(yīng)用白介素12的歷史白介素12在國(guó)外的現(xiàn)狀白介素12申報(bào)國(guó)內(nèi)腫瘤治療的可行性共一百三十九頁(yè)白介素12的抗腫瘤效果(xiogu)共一百三十九頁(yè)Interleukin 12 (IL-12) 白介素12由抗原呈遞細(xì)胞在受到外源物質(zhì)（包括內(nèi)毒素）刺激時(shí)分泌屬于“危險(xiǎn)信號(hào)”之一：和外源侵入相關(guān)修飾T細(xì)胞或者NK細(xì)胞，決定后天免疫走向先天免疫與后天獲得性免疫之間的銜接因子刺激靶細(xì)胞g-干擾素分泌（Th1型免疫應(yīng)答）

2、至今發(fā)現(xiàn)的最有效的抗腫瘤單因子作用(zuyng)與范圍與內(nèi)毒素十分相似單獨(dú)用藥可以治愈小腫瘤（90%)2) 腫瘤體積減?。ㄉ僖?jiàn))3) 治愈 （罕見(jiàn))治療(zhlio)0-30 天 腫瘤細(xì)胞如何做腫瘤治療效果試驗(yàn)共一百三十九頁(yè)白介素單獨(dú)使用的最佳治療(zhlio)效果實(shí)例白介素單獨(dú)治療一般只對(duì)某些初期建立的小腫瘤（3周）的大腫瘤負(fù)擔(dān)（15毫米直徑，%體重）一般無(wú)法治愈白介素配合(pih)化療在某些腫瘤模型有出奇的療效共一百三十九頁(yè)白介素12 結(jié)合(jih)化療治療32天小鼠MCA207腫瘤模型：治療前共一百三十九頁(yè)環(huán)磷酰胺加白介素12（Cy+IL-12)治療(zhlio)一周共一百三十九頁(yè)環(huán)磷酰

3、胺加白介素12治療(zhlio)2周共一百三十九頁(yè)環(huán)磷酰胺加白介素12治療(zhlio)3周共一百三十九頁(yè)環(huán)磷酰胺加白介素12治療(zhlio)4周共一百三十九頁(yè)環(huán)磷酰胺加白介素12治療(zhlio)5周共一百三十九頁(yè)環(huán)磷酰胺加白介素12治療(zhlio)6周共一百三十九頁(yè)通過(guò)白介素12提高(t go)化療的抗腫瘤效果no RxCy aloneIL-12 aloneCy+IL-12共一百三十九頁(yè)18天腹腔實(shí)體(sht)MCA207腫瘤 共一百三十九頁(yè)14天靜脈注射建立(jinl)的肺擴(kuò)散腫瘤模型共一百三十九頁(yè)Cy+IL-12在腹腔及肺擴(kuò)散腫瘤(zhngli)模型中的治療效果接瘤途徑(tjng)

4、治療（起始天數(shù)）治愈率（存活天）i.p.腹腔i.p.腹腔i.v.肺擴(kuò)散對(duì)照Cy+IL-12 (18)Cy+IL-12 (14)0/5 (20-27)0/5 (21-31)5/5 (90)8/8 (90)i.v.肺擴(kuò)散對(duì)照共一百三十九頁(yè)IL-12和Cy+IL-12在Sa1腹水腫瘤模型中的治療(zhlio)效果100%50%0%對(duì)照(duzho)IL-12CyCy+IL-12010203040接種治療存活率天數(shù)共一百三十九頁(yè)白介素12的抗腫瘤機(jī)理(j l)研究共一百三十九頁(yè)Cy+IL-12的抗腫瘤作用(zuyng)是Th1型T免疫應(yīng)答宿主(szh)治愈率正常T細(xì)胞受體敲除鼠（T細(xì)胞缺失）裸鼠（T和

5、B細(xì)胞缺失）咖瑪干擾素敲除鼠（Th 1型缺失）白介素-4敲除鼠（Th 2型缺失）10/100/50/200/2010/10共一百三十九頁(yè)與腫瘤排斥所對(duì)應(yīng)(duyng)的強(qiáng)免疫反應(yīng)CD4CD8治療(zhlio)之前治療之后共一百三十九頁(yè)白介素12啟動(dòng)的抗腫瘤免疫(miny)細(xì)胞分布例子(l zi)1例子2T細(xì)胞巨嗜細(xì)胞共一百三十九頁(yè)巨噬細(xì)胞可能是靶效應(yīng)(xioyng)細(xì)胞的證據(jù)T 細(xì)胞(xbo)染色TUNEL自殺細(xì)胞染色H&E組織學(xué)染色巨嗜細(xì)胞染色共一百三十九頁(yè)白介素12啟動(dòng)的抗腫瘤免疫應(yīng)答對(duì)腫瘤增生(zngshng)的抑制對(duì)照(duzho)治療溴嘧啶標(biāo)記腫瘤增生共一百三十九頁(yè)環(huán)磷酰胺加白介素是

6、否對(duì)所有(suyu)腫瘤有效？有效(yuxio)腫瘤模型:C57B/6: MC203, MCA205, MCA207, FBL-3BALB/c: CT26, CSA1M, OV-HMA/J: Sa1無(wú)效腫瘤模型:C57BL/6: MCA101,B16, LLC, Pan02, EL-4C57BL/6: autochthonous primary tumorsBALB/c: 4T1, S180共一百三十九頁(yè)為什么白介素12在有的腫瘤治療(zhlio)模型里如此有效，但在其他腫瘤治療(zhlio)模型幾乎無(wú)效？共一百三十九頁(yè)對(duì)白介素12有無(wú)應(yīng)答的腫瘤模型(mxng)對(duì)比共一百三十九頁(yè)免疫(miny

7、)型腫瘤與共存(預(yù)存)免疫的概念共一百三十九頁(yè)免疫型腫瘤就是(jish)能夠在接種后不久自動(dòng)誘發(fā)宿主免疫識(shí)別的腫瘤識(shí)別的結(jié)果腫瘤生長(zhǎng)與抗腫瘤免疫共存共一百三十九頁(yè)什么(shn me)是共存（預(yù)存）免疫？腫瘤與抗腫瘤免疫之間的平衡宿主免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤抗原有特異性識(shí)別腫瘤通過(guò)提供抗原維持這個(gè)免疫應(yīng)答(yngd)這個(gè)免疫應(yīng)答對(duì)腫瘤有遏制作用應(yīng)答的性質(zhì)屬于Th1型細(xì)胞應(yīng)答共一百三十九頁(yè)預(yù)存免疫(miny)的狀態(tài)決定IL-12或Cy+IL-12療效共一百三十九頁(yè)免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)試驗(yàn)(shyn)步驟正常(zhngchng)供體小鼠腫瘤疫苗腫瘤接種排斥接種T細(xì)胞缺失受體小鼠腫瘤接種14 day 輸入T細(xì)胞T ce

8、llIL-12/Cy+IL-12 治療治療效果?2 day共一百三十九頁(yè)預(yù)存免疫(miny)在白介素12治療中的關(guān)鍵作用 輸入(shr)細(xì)胞治療治愈率無(wú)未分化T細(xì)胞腫瘤特異T細(xì)胞IL-12生理鹽水IL-12IL-12Cy+IL-120/100/80/81/109/1210/10Cy+IL-120/5未分化T細(xì)胞未分化T細(xì)胞腫瘤特異T細(xì)胞腫瘤特異T細(xì)胞生理鹽水受體：帶MCA207腫瘤14天的T細(xì)胞缺失小鼠共一百三十九頁(yè)荷瘤鼠作為T細(xì)胞(xbo)供體（預(yù)存免疫）的試驗(yàn)供體細(xì)胞治療(zhlio)手段治愈率生理鹽水IL-12IL-12Cy+IL-12Cy+IL-120/50/53/50/55/55/5

9、荷瘤0天脾臟T cellCy+IL-120/5受體：帶MCA207腫瘤14天的T細(xì)胞缺失小鼠荷瘤10天脾臟T cell荷瘤10天脾臟T cell荷瘤10天脾臟T cell荷瘤28天脾臟T cell荷瘤28天脾臟T cell荷瘤28天脾臟T cell生理鹽水共一百三十九頁(yè)預(yù)存免疫(miny)是決定荷瘤鼠對(duì)白介素12治療應(yīng)答與否的關(guān)鍵條件為什么？共一百三十九頁(yè)白介素12受體表達(dá)(biod)特征未分化T細(xì)胞不表達(dá)白介素12 受體（不受影響）激活的T細(xì)胞表達(dá)白介素12受體表達(dá)為激活后的37天內(nèi)，以后(yhu)不再表達(dá)共一百三十九頁(yè)環(huán)磷酰胺加白介素12療效解釋上的一個(gè)困惑(knhu)如果對(duì)白介素12應(yīng)答

10、好壞由受體表達(dá)決定，那化療是如何提高白介素12受體表達(dá)的？共一百三十九頁(yè)傳統(tǒng)(chuntng)的解釋腫瘤晚期免疫受到抑制抑制性T細(xì)胞（Treg）生成T細(xì)胞不表達(dá)白介素12受體對(duì)白介素12單獨(dú)治療不應(yīng)答化療藥殺死Treg抑制性T細(xì)胞由于代謝較高，對(duì)化療藥敏感去除抑制性T細(xì)胞之后釋放(shfng)了被抑制的抗腫瘤應(yīng)答抗腫瘤T細(xì)胞被激活，表達(dá)白介素12 受體共一百三十九頁(yè)去除免疫抑制在我們的腫瘤模型(mxng)中不起關(guān)鍵作用其他解釋？化療對(duì)腫瘤的殺傷導(dǎo)致抗原釋放激活預(yù)存免疫共一百三十九頁(yè)化療(hu lio)激活抗腫瘤免疫？我們做的是化療還是免疫治療？共一百三十九頁(yè)預(yù)存免疫的狀態(tài)決定化療療效免疫參與對(duì)

11、化療療效的貢獻(xiàn)(gngxin)化療的療效在沒(méi)有免疫功能的情況下會(huì)不同嗎？無(wú)法在人體內(nèi)進(jìn)行對(duì)比但可以在試驗(yàn)小鼠體內(nèi)進(jìn)行對(duì)比共一百三十九頁(yè)T細(xì)胞對(duì)腫瘤發(fā)展(fzhn)與化療療效的影響治療開(kāi)始(kish)后天數(shù)腫瘤大小正常鼠+環(huán)磷酰胺T細(xì)胞敲除鼠+環(huán)磷酰胺正常鼠+對(duì)照T細(xì)胞敲除鼠+對(duì)照共一百三十九頁(yè)阿霉素與建擇在正常與T細(xì)胞(xbo)缺失鼠中的療效對(duì)比治療開(kāi)始(kish)后天數(shù)腫瘤大小正常鼠+阿霉素T細(xì)胞敲除鼠+阿霉素正常鼠+建擇T細(xì)胞敲除鼠+建擇共一百三十九頁(yè)相似(xin s)的療效差異用T細(xì)胞清除抗體也能看到治療(zhlio)開(kāi)始后天數(shù)腫瘤大小環(huán)磷酰胺環(huán)磷酰胺+ 抗CD4/CD8阿霉素阿霉素+抗

12、CD4/CD8抗CD4/CD8共一百三十九頁(yè)大腫瘤模型中T細(xì)胞(xbo)對(duì)化療療效的貢獻(xiàn)治療(zhlio)開(kāi)始后天數(shù)腫瘤大小正常鼠+環(huán)磷酰胺T細(xì)胞敲除鼠+環(huán)磷酰胺共一百三十九頁(yè)化療是如何(rh)激活抗腫瘤免疫的呢？藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接殺傷是必要條件排除去抑制解釋：殺死抑制性T細(xì)胞（Treg）直接殺傷導(dǎo)致抗原短期集中釋放釋放的腫瘤抗原不足以啟動(dòng)全新的抗腫瘤應(yīng)答(yngd)，但可以激活預(yù)存的抗腫瘤應(yīng)答(yngd)共一百三十九頁(yè)其他(qt)化療藥與白介素12的聯(lián)合使用療效化療(hu lio)+IL-12治愈率（%）阿霉素（全身）80100環(huán)磷酰胺阿霉素（瘤內(nèi)，脂質(zhì)體）060100建擇（全身）020建

13、擇（瘤內(nèi)，自由體）20405氟0長(zhǎng)春堿0腫瘤模型：24周MCA207皮下腫瘤， 1017毫米直徑治療：化療單次給藥，3天后開(kāi)始白介素12（隔天一次x3次）化療或者白介素12單獨(dú)對(duì)照0%治愈率共一百三十九頁(yè)藥物必須對(duì)腫瘤細(xì)胞(xbo)有足夠的直接殺傷藥物(yow)及劑量對(duì)體細(xì)胞及腫瘤的殺傷療效（與對(duì)照比較）環(huán)磷酰胺25mg/kg10%無(wú)環(huán)磷酰胺50mg/kg30%弱環(huán)磷酰胺75mg/kg50%強(qiáng)環(huán)磷酰胺125mg/kg70%強(qiáng)阿霉素10mg/kg 全身70%90%100%100%100%白細(xì)胞10%50%70%50%?阿霉素5mg/kg瘤內(nèi)50%10%?顯建擇150mg/kg全身30%?無(wú)建擇5

14、0mg/kg瘤內(nèi)30%90天）共一百三十九頁(yè)獲得性耐藥的免疫(miny)解釋治療(zhlio)開(kāi)始后天數(shù)腫瘤大小正常鼠免疫缺失鼠既然抗腫瘤免疫貢獻(xiàn)了療效的很大部分，當(dāng)這個(gè)應(yīng)答不再啟動(dòng)時(shí)就會(huì)造成療效明顯下降共一百三十九頁(yè)耐藥與抗腫瘤應(yīng)答(yngd)的關(guān)聯(lián)耐藥的荷瘤鼠體內(nèi)看不到化療后的免疫應(yīng)答Winn氏法測(cè)試(csh)：沒(méi)有抗腫瘤靶效應(yīng)細(xì)胞存在體外與樹(shù)突細(xì)胞共培養(yǎng)：沒(méi)有伽瑪干擾素分泌瘤內(nèi)T細(xì)胞浸潤(rùn)：明顯減少為什么抗腫瘤免疫不再激活？預(yù)存免疫“衰竭”自身抗原的主動(dòng)耐受其他？共一百三十九頁(yè)補(bǔ)充預(yù)存免疫(miny)不能扭轉(zhuǎn)耐藥的試驗(yàn)預(yù)存免疫(miny)二次化療二次化療過(guò)繼后二次化療一次化療后時(shí)間腫瘤大小

15、結(jié)論：預(yù)存免疫衰竭不是耐藥的原因共一百三十九頁(yè)免疫耐受的可能(knng)耐受是機(jī)體保護(hù)自身免疫攻擊的有效機(jī)制耐受與否取決于機(jī)體對(duì)抗原外源性的判斷外源性侵入往往伴隨機(jī)體分泌“危險(xiǎn)信號(hào)”沒(méi)有危險(xiǎn)信號(hào)情況下的免疫應(yīng)答自身抗原？腫瘤本質(zhì)上是自身組織，不能誘發(fā)(yuf)危險(xiǎn)信號(hào)在沒(méi)有危險(xiǎn)信號(hào)條件下的抗腫瘤的應(yīng)答有可能被機(jī)體看作自身免疫共一百三十九頁(yè)支持免疫耐受解釋的試驗(yàn)觀察（干預(yù)化療療效(lioxio)的細(xì)胞過(guò)繼試驗(yàn)）化療(hu lio)開(kāi)始后天數(shù)腫瘤大小細(xì)胞過(guò)繼環(huán)磷酰胺未分化脾細(xì)胞耐藥脾細(xì)胞非耐藥脾細(xì)胞共一百三十九頁(yè)如何防止耐受提高(t go)療效？防止機(jī)體把抗腫瘤應(yīng)答看作自身免疫引入“危險(xiǎn)信號(hào)”？危

16、險(xiǎn)信號(hào)一般由細(xì)菌及病毒(bngd)誘導(dǎo)陀樣受體（Toll like receptor）產(chǎn)生內(nèi)毒素是典型的危險(xiǎn)信號(hào)誘發(fā)因子內(nèi)毒素誘發(fā)的危險(xiǎn)信號(hào)之一就是白介素12化療后提供內(nèi)毒素或者白介素12可以“欺騙”機(jī)體，把抗腫瘤應(yīng)答誤認(rèn)為是抗外源侵入應(yīng)答共一百三十九頁(yè)白介素12與化療聯(lián)合使用的其他(qt)例子（與局部阿霉素聯(lián)合使用）化療開(kāi)始(kish)后天數(shù)腫瘤大小IL-12阿霉素9天+IL-12阿霉素3天+IL-12共一百三十九頁(yè)為什么白介素12的用藥(yn yo)時(shí)間很關(guān)鍵？白介素12必須在化療之后提供(tgng)T細(xì)胞激活后表達(dá)白介素12受體化療之后最佳使用期：27天內(nèi)白介素12受體表達(dá)短暫：24天白

17、介素12修飾過(guò)的T細(xì)胞不受抑制調(diào)控白介素12不能改變已經(jīng)接受負(fù)調(diào)控的T細(xì)胞（不表達(dá)白介素12受體）共一百三十九頁(yè)局部(jb)阿霉素加白介素12在MCA203腫瘤模型里的治療試驗(yàn)局部化療可以(ky)用來(lái)評(píng)判化療的直接殺傷與化療激活的免疫殺傷各自對(duì)療效的貢獻(xiàn)但環(huán)磷酰胺是前體藥物，不能局部給藥阿霉素脂質(zhì)體可以局部給藥如果化療一個(gè)病灶并激活免疫，對(duì)遠(yuǎn)端病灶會(huì)有什么療效？雙側(cè)接種的MCA203腫瘤模型可以用來(lái)回答以上問(wèn)題共一百三十九頁(yè)白介素12與化療聯(lián)合使用的其他例子(l zi)（MCA203腫瘤模型）化療開(kāi)始(kish)后天數(shù)腫瘤大小化療側(cè)非化療側(cè)阿霉素IL-12阿霉素+IL-12共一百三十九頁(yè)局部(

18、jb)建擇加樹(shù)突細(xì)胞加白介素12在低免疫性腫瘤Pan02模型中的療效治療(zhlio)開(kāi)始后天數(shù)腫瘤大小建擇+DC+IL-12, 6/10建擇+DC+IL-12, 4/10建擇+IL-12無(wú)治療對(duì)照共一百三十九頁(yè)為什么白介素12與化療的聯(lián)合治療在某些(mu xi)情況下極為有效？化療集中釋放的大量腫瘤抗原激活預(yù)存免疫活化的T細(xì)胞表達(dá)白介素12受體外源提供的白介素12模擬危險(xiǎn)信號(hào)機(jī)體認(rèn)為激活的免疫應(yīng)答是抗外源侵入(qnr)白介素12修飾的T細(xì)胞不再受抑制性調(diào)控抗腫瘤的應(yīng)答得以擴(kuò)大和持續(xù)共一百三十九頁(yè)化療加白介素12啟動(dòng)(qdng)的抗腫瘤免疫與持續(xù)化療的關(guān)系環(huán)磷酰胺單藥加白介素12只需一個(gè)療程與

19、目前臨床持續(xù)化療的實(shí)踐不符合后續(xù)化療對(duì)免疫的打擊？臨床應(yīng)用問(wèn)題：需要改變現(xiàn)有的化療程序嗎？試驗(yàn)?zāi)Ｐ停篊y+IL-12激活免疫其他化療制造外周血白細(xì)胞下降觀察療效(lioxio)及腫瘤局部免疫細(xì)胞變化共一百三十九頁(yè)其他手段(shudun)對(duì)Cy+IL-12療效的干擾試驗(yàn)無(wú)治療(zhlio)Cy+IL-12+建擇+5Fu +抗CD4/8 干擾藥物：Cy+IL-12結(jié)束時(shí)（7天）開(kāi)始建擇：每三天一次，每次2毫克， 一共4次5Fu ：5Fu 每天2毫克加葉酸（1.25毫克），8天（半數(shù)毒性致死）抗CD4/8：200微克抗體連續(xù)2天.以后每周一次x2周腫瘤大小外周血脾臟4M110M2.9M132M35M

20、2.1M0.2M33M2.3M92M共一百三十九頁(yè)結(jié)論(jiln)白介素12啟動(dòng)的抗腫瘤應(yīng)答一旦啟動(dòng)后有很強(qiáng)的持續(xù)和抗抑制能力共一百三十九頁(yè)免疫對(duì)腫瘤宿主生存的支持腫瘤晚期，惡液質(zhì)以及(yj)免疫紊亂白介素12的抗惡液質(zhì)與抗腫瘤綜合效果共一百三十九頁(yè)腫瘤(zhngli)晚期的現(xiàn)象出現(xiàn)惡液質(zhì)（消瘦衰竭代謝內(nèi)分泌紊亂）停止對(duì)治療的應(yīng)答（手術(shù)和其他減負(fù)治療）腫瘤發(fā)展加速腫瘤生長(zhǎng)本身造成的？有些(yuxi)病人只有腫瘤標(biāo)志物但幾乎看不到復(fù)發(fā)病灶癌癥病人死于腫瘤的直接作用嗎？除了功能性占位，腫瘤如何致死？共一百三十九頁(yè)有惡液質(zhì)的癌癥病人死于免疫紊亂(wnlun)而非腫瘤腫瘤可以誘發(fā)惡液質(zhì)的產(chǎn)生惡液質(zhì)，而

21、非腫瘤，導(dǎo)致晚期癥狀惡液質(zhì)是獨(dú)立致死疾病(jbng)惡液質(zhì)的本質(zhì)是系統(tǒng)炎癥（免疫紊亂）抑制系統(tǒng)炎癥可以抑制惡液質(zhì)和死亡抗腫瘤免疫應(yīng)答是最好的惡液質(zhì)抑制和調(diào)控手段惡液質(zhì)的發(fā)生標(biāo)志著抗腫瘤免疫的消退共一百三十九頁(yè)惡液質(zhì)的臨床表現(xiàn)體重下降（肌肉和脂肪(zhfng)萎縮）厭食，惡心，嘔吐弓背，眼窩塌陷精力及體力萎靡，喪失活動(dòng)欲望胸腹水，水腫（肝臟功能低下）低燒，白細(xì)胞及中性粒細(xì)胞增加，特異免疫低下凝血異常（DIC，內(nèi)出血）代謝紊亂心肺及其他器官衰竭共一百三十九頁(yè)實(shí)驗(yàn)室與臨床的脫節(jié)(tu ji)：缺少合適的動(dòng)物模型絕大多數(shù)動(dòng)物腫瘤模型不形成惡液質(zhì)腫瘤負(fù)擔(dān)可以達(dá)到基本上與體重相似而不會(huì)致死(zh s)極個(gè)

22、別早期惡液質(zhì)模型主要以體重下降為表現(xiàn)缺少有臨床表現(xiàn)且腫瘤負(fù)擔(dān)不大的模型CHX207惡液質(zhì)模型：皮下中小腫瘤導(dǎo)致惡液質(zhì)及死亡共一百三十九頁(yè)為什么惡液質(zhì)模型如此(rc)重要？大多數(shù)癌癥病人死于惡液質(zhì)的直接或間接作用傳統(tǒng)治療（手術(shù)，放化療）有可能加速惡液質(zhì)病人的死亡（醫(yī)生的忌諱）在非惡液質(zhì)模型中開(kāi)發(fā)的藥物不適用惡液質(zhì)狀態(tài)下的治療（加速死亡）惡液質(zhì)與特異抗腫瘤免疫(miny)之間相互排斥共一百三十九頁(yè)問(wèn)題出在認(rèn)識(shí)(rn shi)上惡液質(zhì)是癌癥晚期的結(jié)果還是原因？腫瘤(zhngli)生長(zhǎng)進(jìn)入晚期惡液質(zhì)死亡傳統(tǒng)觀念新觀念腫瘤生長(zhǎng)進(jìn)入晚期惡液質(zhì)死亡共一百三十九頁(yè)惡液質(zhì)和非惡液質(zhì)模型(mxng)的對(duì)比體重(t

23、zhng)變化%接種后生長(zhǎng)天數(shù)惡液質(zhì)模型非惡液質(zhì)模型共一百三十九頁(yè)惡液質(zhì)模型(mxng)的發(fā)病率，生存期及體重變化惡液質(zhì)發(fā)病率發(fā)病(f bng)后生存率體重變化率發(fā)病率：14天50%；18天70%生存率：70%死于發(fā)病后310天共一百三十九頁(yè)腫瘤負(fù)擔(dān)：發(fā)病(f bng)（兩天內(nèi)7%體重下降）共一百三十九頁(yè)腫瘤負(fù)擔(dān)(fdn)：死亡共一百三十九頁(yè)體重，大小，脂肪(zhfng)，肌肉比較正常(zhngchng)荷瘤鼠惡液質(zhì)荷瘤鼠共一百三十九頁(yè)宿主怎么就死于一個(gè)不大的皮下腫瘤？腫瘤誘發(fā)的惡液質(zhì)導(dǎo)致宿主進(jìn)入晚期(wnq)和死亡共一百三十九頁(yè)惡液質(zhì)的本質(zhì)是什么？怎么導(dǎo)致宿主(szh)死亡？惡液質(zhì)是一個(gè)臨床

24、而不是病理(bngl)表述惡液質(zhì)的機(jī)理一直不清楚早期認(rèn)為是由于某些免疫因子（白介素6）惡液質(zhì)致死的原因不清楚（代謝紊亂？）近期臨床上觀察到伴隨系統(tǒng)炎癥（因果不清）共一百三十九頁(yè)什么是系統(tǒng)(xtng)炎癥？先天免疫和獲得性免疫系統(tǒng)炎癥是先天免疫亢奮的表現(xiàn)由大量體細(xì)胞急性(jxng)死亡啟動(dòng)無(wú)法過(guò)渡到獲得性免疫（缺少抗原）系統(tǒng)炎癥疾?。杭毙裕耗摱景Y；器官缺血灌注，無(wú)感染創(chuàng)傷（手術(shù)）慢性：乙肝；艾滋?。环谓Y(jié)核；慢性腎衰竭；某些慢性關(guān)節(jié)炎和心臟??；糖尿病等慢性頑疾粒細(xì)胞總數(shù)及比例升高，T細(xì)胞總數(shù)及比例下降共一百三十九頁(yè)惡液質(zhì)和系統(tǒng)(xtng)炎癥：伴隨還是機(jī)理？白細(xì)胞T細(xì)胞(xbo)中性粒細(xì)胞細(xì)胞正常

25、值共一百三十九頁(yè)抑制炎癥(ynzhng)能防止或逆轉(zhuǎn)惡液質(zhì)嗎？傳統(tǒng)炎癥抑制手段：激素：強(qiáng)地松非激素類：塞來(lái)昔布化療(hu lio)藥物：建擇，環(huán)磷酰胺免疫調(diào)控獲得性免疫與先天免疫之間的關(guān)系抗腫瘤免疫的雙重意義共一百三十九頁(yè)激素（強(qiáng)地松）對(duì)惡液質(zhì)發(fā)病和死亡(swng)的影響發(fā)病率死亡率強(qiáng)地松= 5mg/kg/天 x 10天共一百三十九頁(yè)A塞來(lái)昔布抑制惡液質(zhì)的進(jìn)展并延長(zhǎng)(ynchng)生存BC發(fā)病(f bng)后天數(shù)接種后后天數(shù)接種后后天數(shù)生存期體重變化腫瘤大小對(duì)照組治療組治療組對(duì)照組塞來(lái)昔布：發(fā)病兩天后開(kāi)始，5毫克/天x10天共一百三十九頁(yè)吉西他濱（建擇）的抗炎癥(ynzhng)及惡液質(zhì)效果生存

26、期體重(tzhng)變化腫瘤大小發(fā)病后天數(shù)接種后天數(shù)對(duì)照組治療組建擇：發(fā)病兩天后開(kāi)始給藥，1毫克x2天共一百三十九頁(yè)吉西他濱抗炎癥(ynzhng)效果T細(xì)胞(xbo)粒細(xì)胞白細(xì)胞總數(shù)（百萬(wàn)）3.98.31.91.0共一百三十九頁(yè)觀察結(jié)果抑制炎癥可以(ky)逆轉(zhuǎn)惡液質(zhì)癥狀延長(zhǎng)生存結(jié)論系統(tǒng)炎癥是造成惡液質(zhì)和死亡的原因共一百三十九頁(yè)T細(xì)胞對(duì)惡液質(zhì)發(fā)病率即病程(bngchng)的影響 發(fā)病率 生存率對(duì)照(duzho)鼠T細(xì)胞缺失共一百三十九頁(yè)T細(xì)胞(xbo)對(duì)惡液質(zhì)發(fā)病率即體重的影響 沒(méi)有(mi yu)T細(xì)胞的小鼠 正常小鼠 不誘導(dǎo)惡液質(zhì)的腫瘤共一百三十九頁(yè)通過(guò)提高抗腫瘤免疫可以(ky)防止惡液質(zhì)的發(fā)

27、生和發(fā)展嗎？試驗(yàn)一：通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)在惡液質(zhì)發(fā)生前輸入抗腫瘤T細(xì)胞，觀察惡液質(zhì)的發(fā)病率變化試驗(yàn)二：某些化療藥物(yow)（環(huán)磷酰胺）的抑制炎癥與激活免疫綜合作用試驗(yàn)三：白介素12的抗惡液質(zhì)的直接與間接作用共一百三十九頁(yè)通過(guò)(tnggu)輸入抗腫瘤T細(xì)胞來(lái)抑制惡液質(zhì)發(fā)病率生存率無(wú)輸入(shr)未分化T細(xì)胞抗腫瘤T細(xì)胞抗腫瘤T細(xì)胞未分化T細(xì)胞無(wú)輸入腫瘤接種后天數(shù)發(fā)病率%生存率%共一百三十九頁(yè)環(huán)磷酰胺的綜合抗炎癥(ynzhng)及免疫激活效果生存率抗腫瘤體重(tzhng)變化對(duì)照組CyCy+抗CD4/CD8CyCy+抗CD4/CD8對(duì)照組CyCy+抗CD4/CD8共一百三十九頁(yè)days after tu

28、mor inocdays after cachexia onsetdays after cachexia onsetIL-12對(duì)照組days after tumor inoc體重(tzhng)變化白介素12的抗惡液質(zhì)效果(xiogu)高劑量（100ng）生存率對(duì)照組IL-12腫瘤大小體重變化共一百三十九頁(yè)體重(tzhng)/生存率腫瘤(zhngli)大小IL-12對(duì)照組白介素12的抗惡液質(zhì)效果低劑量（20ng）共一百三十九頁(yè)跟蹤(gnzng)研究以及結(jié)論白介素12具有直接與間接抗惡液質(zhì)的作用白介素12的直接抗惡液質(zhì)作用不需要通過(guò)T細(xì)胞，但需要通過(guò)伽瑪干擾素白介素12的間接抗惡液質(zhì)作用是通過(guò)抑制

29、惡液質(zhì)后激活抗腫瘤特異性免疫應(yīng)答(yngd)進(jìn)一步抑制腫瘤白介素12的抗惡液質(zhì)作用不需要大劑量，但需要常劑量（每天一次）共一百三十九頁(yè)白介素12的臨床應(yīng)用(yngyng)分析共一百三十九頁(yè)白介素12的開(kāi)發(fā)(kif)歷史1989年完成分子鑒定1990年申請(qǐng)分子和應(yīng)用專利（抗腫瘤和感染）1991發(fā)表抗腫瘤動(dòng)物實(shí)驗(yàn)19921994 開(kāi)展早期臨床實(shí)驗(yàn)（一期和二期）1994年出現(xiàn)嚴(yán)重臨床副作用（兩例死亡）19962005年開(kāi)展后期臨床試驗(yàn)2005年白介素12供應(yīng)中斷(zhngdun)2008美國(guó)NIH啟用最后一批過(guò)期白介素122010年白介素12專利過(guò)期共一百三十九頁(yè)白介素12早期(zoq)臨床試驗(yàn)GI

30、/Wyeth做的一期臨床40腫瘤病人（腎癌，黑色素癌，直腸癌）身體狀況良好（Karnofsky指數(shù)70）31000ng/kg/day 靜脈給藥，每周5天，隔周重復(fù)，一共兩次一個(gè)CR（melanoma)，一個(gè)PR(RCC) MTD為500ng/kg毒副作用：感冒癥狀（發(fā)燒，惡心，嘔吐，厭食，懶惰）口瘡肝臟轉(zhuǎn)胺酶升高(shn o)血液白細(xì)胞，淋巴細(xì)胞暫時(shí)下降（3080）共一百三十九頁(yè)白介素12早期(zoq)臨床試驗(yàn)Roche做的準(zhǔn)一期臨床10例黑色素瘤病人(bngrn)皮下給藥，每周一次，500ng/kg有混和臨床療效，但達(dá)不到PR標(biāo)準(zhǔn)毒副作用：感冒癥狀肝臟轉(zhuǎn)胺酶升高血液白細(xì)胞，淋巴細(xì)胞暫時(shí)下降共

31、一百三十九頁(yè)白介素12早期(zoq)臨床試驗(yàn)Roche做的一期臨床28例腎癌病人皮下給藥，每周一次，100-1250ng/kgMTD為1000ng/kg1PR（500ng/kg）毒副作用：感冒癥狀（發(fā)燒，惡心，嘔吐，厭食，懶惰）口瘡肝臟轉(zhuǎn)胺酶升高血液白細(xì)胞，淋巴細(xì)胞暫時(shí)(znsh)下降（3080）共一百三十九頁(yè)白介素12早期(zoq)臨床試驗(yàn)Roche做的二期臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)80例，實(shí)際30例腎癌病人皮下給藥，每周一次，逐漸上升到1250ng/kg2例PR沒(méi)有明顯的毒副作用試驗(yàn)由于達(dá)不到(b do)預(yù)期的臨床療效而停止共一百三十九頁(yè)白介素12的二期臨床(ln chun)事故GI做的二期臨床(ln

32、chun)17腎癌病人500ng/kg靜脈給藥，每周5天12個(gè)病人在兩次注射之后發(fā)生4級(jí)副作用2個(gè)病人最終死于副作用（胃腸道出血和結(jié)腸炎）共一百三十九頁(yè)白介素12二期臨床事故(shg)的原因二期省略了預(yù)備(ybi)注射（pre-dosing)步驟預(yù)備注射是在連續(xù)注射之前一周單獨(dú)給藥預(yù)備注射降低了連續(xù)給藥時(shí)的血液伽馬干擾素水平動(dòng)物（小鼠和猴子）試驗(yàn)可以證明預(yù)備注射降低毒副作用的意義實(shí)際問(wèn)題是只要控制伽馬干擾素水平就可以防止白介素12的毒副作用共一百三十九頁(yè)白介素12后期(huq)臨床試驗(yàn)自從事故發(fā)生后，兩家公司均對(duì)高劑量白介素12的臨床應(yīng)用產(chǎn)生懷疑(huiy)此后的白介素12腫瘤臨床試驗(yàn)多為學(xué)術(shù)

33、機(jī)構(gòu)以研究為目的進(jìn)行的中低劑量試驗(yàn)新的動(dòng)物試驗(yàn)表明低劑量的白介素12有時(shí)也可以起到抗腫瘤效果共一百三十九頁(yè)白介素12后期(huq)臨床試驗(yàn)降低給藥頻率，但保持(boch)500ng/kg給藥量28個(gè)腎癌病人每周兩次（第一，四天）靜脈注射一個(gè)PR三個(gè)SD停藥后仍觀察到持續(xù)的腫瘤消退沒(méi)有嚴(yán)重毒副作用因?yàn)榀熜c伽馬干擾素的持續(xù)誘發(fā)相關(guān)，認(rèn)為增加白介素2可能會(huì)提高療效（后來(lái)證明是錯(cuò)誤的）共一百三十九頁(yè)白介素12后期(huq)臨床試驗(yàn)皮下注射，降低(jingd)單次藥量，增加頻率15個(gè)腎癌，黑色素癌及大腸癌病人每周三次，每次50，100，300ng/kg1CR（50ng/kg),1PR(300ng/kg

34、)毒副作用：白細(xì)胞，淋巴細(xì)胞和中性淋巴細(xì)胞抑制肝臟轉(zhuǎn)胺酶升高Beta2-微球蛋白及C反應(yīng)蛋白升高(系統(tǒng)炎癥）共一百三十九頁(yè)白介素12后期(huq)臨床試驗(yàn)低劑量白介素12與疫苗結(jié)合黑色素癌抗原Melan-A的片段IL-12:0100ng/kg,第一，第22天（靜脈(jngmi)或皮下）Melan-A肽段：第1，8，15，22，57gp100試驗(yàn)：IL-12:30ng/kg與肽段同時(shí)，同點(diǎn)皮內(nèi)注射gp100:兩周一次（x2)到四周一次(x2)到八周一次沒(méi)有明顯毒副作用沒(méi)有明顯白介素12與臨床效果的對(duì)應(yīng)共一百三十九頁(yè)白介素12臨床(ln chun)失敗的主要原因沒(méi)有掌握白介素12 的最佳使用條件沒(méi)

35、有在T細(xì)胞激活時(shí)給藥排除任何接受放化療的病人沒(méi)有給藥依據(jù)白介素12受體表達(dá)不明：沒(méi)有任何測(cè)試給藥劑量錯(cuò)誤高劑量造成NK細(xì)胞激活，T細(xì)胞抑止大量游離(yul)伽馬干擾素的副作用明顯共一百三十九頁(yè)白介素12在抗病毒方面(fngmin)的臨床試驗(yàn)抗艾滋?。℉IV）一期臨床試驗(yàn)65個(gè)艾滋病毒感染者CD4細(xì)胞數(shù)300 x106皮下注射，30-300ng/kg, 一周兩次（共4周）沒(méi)有明顯毒副作用沒(méi)有明顯的抗病毒效果體外細(xì)胞特異(ty)免疫功能沒(méi)有明顯變化共一百三十九頁(yè)白介素12在抗病毒方面(fngmin)的臨床試驗(yàn)抗慢性丙肝病毒（HCV）的I/II期臨床試驗(yàn)（Roche)60個(gè)慢性丙肝病人皮下注射，30-500ng/kg,每周一次，一共10周毒副作用同以前報(bào)道過(guò)的相同，不嚴(yán)重，與劑量有關(guān)根據(jù)劑量有17-53的病人病毒RNA量下降50%肝臟轉(zhuǎn)胺酶沒(méi)有明顯下降沒(méi)有完全病毒轉(zhuǎn)陰的情況(qngkung)療效比不上a干擾素（10轉(zhuǎn)陰）共一百三十九頁(yè)白介素12在抗病毒方面(fngmin)的臨床試驗(yàn)抗慢性(mn xng)丙肝病毒（HCV）的臨床試驗(yàn)（GI）225個(gè)抗a干擾素的慢性丙肝病人皮下注射，500ng/kg,每周兩次，一共12周百分之三的