醫(yī)學(xué)專題血庫操作規(guī)程

1、血庫操作規(guī)程朱士偉 2015-3-262021/7/20 星期二目錄ABO血型鑒定（玻片法、試管法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程5RhD血型鑒定（玻片法、試管法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程9ABO血型正反定型及RhD血型（微柱凝膠卡式法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程11交叉配血試驗(yàn)（鹽水法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程15凝聚胺交叉配血試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程17交叉配血試驗(yàn)（微柱凝膠卡式法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程19新生兒溶血?。℉DN）血型血清學(xué)檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程22不規(guī)則抗體篩選標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程26孕婦血清中紅細(xì)胞血型抗體效價測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程29醫(yī)用低速離心機(jī)（X5型）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程31低速離心機(jī)（160C型）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程33HHW型電熱恒溫水浴箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程35HYC-3

2、60型醫(yī)用冷藏箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程36200型血液冷藏箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程38低溫保存箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程402021/7/20 星期二FYQ型免疫微柱孵育器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程42TD-3A血型血清學(xué)用離心機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程43WGH-I數(shù)碼恒溫解凍箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程44HXC-608型醫(yī)用血液冷藏箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程45PH-A恒溫擺動保存箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程47LX-18X血小板運(yùn)輸箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程48GZR-II型高頻熱合器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程50XS生物顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程51室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程52血庫室間質(zhì)評標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程60血庫配制自備試劑的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程63血標(biāo)本接收及處理標(biāo)準(zhǔn)操作程序65血液入庫操作規(guī)程66血液儲存操作規(guī)程67血液出庫

3、操作規(guī)程69病毒滅活冰凍血漿、冷沉淀凝血因子復(fù)溶操作規(guī)程70血液報廢操作規(guī)程71實(shí)驗(yàn)室醫(yī)療廢棄物處理操作規(guī)程72 2021/7/20 星期二ABO血型鑒定（玻片法、試管法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程3、原理：根據(jù)紅細(xì)胞上有或無A抗原或/和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型4種。可利用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過正、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。所謂正定型，是用已知抗-A和抗-B分型血清來測定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的A抗原或/和B抗原；所謂反定型，是用已知A細(xì)胞和B細(xì)胞來測定血清中有無相應(yīng)的抗-A或/和抗-B。4、試劑4.1血清抗A、抗B；4.2 5%A、B及0型試劑紅細(xì)胞鹽水懸液；4.3受檢者血清或血漿；4.4受檢者

4、5%紅細(xì)胞鹽水懸液;2021/7/20 星期二5、樣本采集及處理 用一次性EDTA-K2真空采血管抽取靜脈血1ml，將標(biāo)示有患者姓名、性別、年齡、住院號、病室/門急診、床號等信息的標(biāo)簽貼在標(biāo)本管上，由醫(yī)護(hù)人員或?qū)ｉT人員將患者標(biāo)本送交血庫。6、操作步驟6. 1玻片法 （正定型）6.1.1分型血清 l 滴于鑒定卡內(nèi)，再各加受檢者 5紅細(xì)胞懸液 1 滴，混和。 6.1.2 將鑒定卡不斷輕輕轉(zhuǎn)動，使血清與細(xì)胞充分混勻，連續(xù)約 15 min，以肉眼觀察有無凝集(或溶血)反應(yīng)。 6.2 試管法 （正定型）6.2.1取潔凈小試管2支，分別標(biāo)明抗A，抗B，用滴管分別加抗A、抗B分型血清各1滴于試管底部，再以滴

5、管分別加入受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混合。6.2.2反定型：另取潔凈小試管3支，分別標(biāo)明A，B和O細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清1滴于試管底部，再分別以滴管加入A，B和O型5%試劑紅細(xì)胞懸液1滴，混合。立即以1000r/min離心1min。6.2.3將試管輕輕搖動，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現(xiàn)象。如肉眼不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。7、結(jié)果判斷：凝集為陽性（+），不凝集為陰性（-）2021/7/20 星期二8、干擾：8.1分型血清質(zhì)量性能符合要求，用畢后應(yīng)放冰箱保存，以免細(xì)菌污染。 8.2試劑紅細(xì)胞以3個健康者同型新鮮紅細(xì)胞混和，用生理鹽水洗滌

6、1次，以除去存在于紅細(xì)胞中的抗體及可溶性抗原。8.3試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。8.4操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)是否漏加血清。8.5按理IgM抗-A和抗-B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍在室溫（2024）內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，37可使反應(yīng)減弱。8.6離心時間不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防止假陽性或假 陰性結(jié)果。8.7觀察時應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。8.8判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對、記錄，避免筆誤。2021/7/20 星期二9、凝強(qiáng)度判斷:觀察結(jié)果應(yīng)仔細(xì)，首先注意有無凝集，再按下述

7、情況說明凝集強(qiáng)度：9.1 4：紅細(xì)胞凝聚成一大塊，血清透明清晰。9.2 3：紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。9.32：紅細(xì)胞凝集分散成多個小塊，可見游離紅細(xì)胞。9.41：肉眼可見大顆粒，周圍有較多紅細(xì)胞。9.5 ：鏡下可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多紅細(xì)胞。9.6混合凝集視場（MF,mixed field）：鏡下可見數(shù)個紅細(xì)胞凝集，大多數(shù)紅細(xì)胞分散分布為MF。陰性（）：鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。2021/7/20 星期二ABO血型正反定型及RhD血型（微柱凝膠卡式法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程4.2原理：本試驗(yàn)采用排阻層析原理，即在微柱凝膠介質(zhì)中，紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，形成紅細(xì)胞免疫復(fù)合物，在一

8、定離心條件下，該復(fù)合物不能通過凝膠間隙而浮于膠表面或懸于膠中；如無相應(yīng)抗體結(jié)合，則不能形成紅細(xì)胞免疫復(fù)合物，在一定離心條件下，分散的紅細(xì)胞可以通過凝膠間隙沉于微柱腔底部。ABO血型基礎(chǔ)血型抗原與抗血清反應(yīng)與A1，B細(xì)胞反應(yīng)抗-A抗-B抗-A,BA1BAA+0+0+/+BB0+/+0ABAB+00OH000+/+/+2021/7/20 星期二4.2.1Rh血型Rh血型系統(tǒng)包括的主要血型抗原：C,c,E,e,D Cde=R1 Cde=R2 CcDdee=R1r與抗-D陽性反應(yīng)的紅細(xì)胞為Rh陽性。5、樣本采集和處理：5.1受血者血樣為EDTA-K2抗凝血。抽取受血者靜脈血12ml于專用管（紫色頭管）

9、內(nèi)，離心分離出血漿。5.2將細(xì)胞配成0.8%的懸液備用。 6、 試劑：6.10.9%的生理鹽水；6.2長春博迅公司的血型定型試劑卡；6.3長春博迅公司的0.8%的A、B型試劑紅細(xì)胞懸液；2021/7/20 星期二8、操作程序：8.1工作準(zhǔn)備：8.1.1將0.8%A、B型試劑紅細(xì)胞懸液室溫平衡。準(zhǔn)備樣本，標(biāo)記卡。8.1.2 0.8%樣本紅細(xì)胞制備：將8l壓積紅細(xì)胞加到1ml生理鹽水中充分混勻。8.1.3 將50lA1、B標(biāo)準(zhǔn)反定細(xì)胞加入血型卡的第5-6管中，將待檢者血漿或血清50l加到血型卡的第5-6管中。將0.8%樣本紅細(xì)胞分別加入到血型卡的第1-4管中，各50l。8.1.4將血型卡放入血型血

10、清學(xué)專用離心機(jī)離心5分鐘后，判斷結(jié)果，并作好記錄。2021/7/20 星期二9、結(jié)果判斷： 100%的紅細(xì)胞沉在微管的底部+/-100%的紅細(xì)胞沉在微管的下端1/3之內(nèi)1+80%的紅細(xì)胞沉在微管的下端2/3之內(nèi)2+80%的紅細(xì)胞沉在微管的上端2/3之內(nèi)3+80%的紅細(xì)胞沉在微管的上端1/3之內(nèi)4+凝集的細(xì)胞全部處于微管的頂部d.p.雙群Hemo.溶血。 2021/7/20 星期二醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床用血管理辦法 4+ 3+ 2+ 1+ +/- - 溶血 雙群2021/7/20 星期二12、注意事項(xiàng)：12.1每日實(shí)驗(yàn)前，先取出標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞和微柱凝膠卡，放置一段時間到室溫，以防冷凝集。12.2實(shí)驗(yàn)前將卡離心5

11、分鐘。必須標(biāo)注血型卡。12.3血型卡封口已損壞時，管中干涸，或有氣泡時，卡不可使用。12.4紅細(xì)胞濃度要在0.8%左右，不可太濃或太稀。12.5纖維蛋白可吸附部分紅細(xì)胞，應(yīng)將血樣充分離心。12.6反定管先加樣，以便標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞與血清或血漿反應(yīng)。先加細(xì)胞后加血漿。12.7正反定型對照，確定結(jié)果及A亞型。正定型結(jié)果若為弱陽性，應(yīng)懷疑為ABO亞型，可重做完全測試，正反結(jié)果不符時，請?jiān)O(shè)計實(shí)驗(yàn)分析。2021/7/20 星期二12.8質(zhì)控（ctl）為陽性時，請先用生理鹽水洗細(xì)胞，再做血型。12.9嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)程序操作可檢出弱抗原，血型亞型。12.10某些藥物，疾病可導(dǎo)致弱陽性及正反定型不符。12.11細(xì)菌及異常

12、血清蛋白可影響結(jié)果。12.12禁用嚴(yán)重溶血標(biāo)本，它會強(qiáng)烈干擾結(jié)果的判讀。嚴(yán)禁使用非抗凝血標(biāo)本配制紅細(xì)胞懸液，以免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。12.13被酶處理過的紅細(xì)胞會產(chǎn)生非特異性凝集，禁用被污染的標(biāo)本和材料。12.14卡配套的專用離心機(jī)，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確。2021/7/20 星期二交叉配血試驗(yàn)（鹽水法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程4.2原理：天然類血型抗體與對應(yīng)紅細(xì)胞抗原相遇，在室溫下的鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)凝集反應(yīng)。通過離心，觀察受血者血清與供血者紅細(xì)胞以及受血者紅細(xì)胞與供血者清之間有無凝集現(xiàn)象，判斷供血、受血者之間有無ABO血型不合的情況。5、樣本采集及處理 血樣本為血漿（EDTA-K2抗凝）。抽取受血者靜脈血34ml，

13、3000轉(zhuǎn)/分離心2分鐘，分離出血漿，并將紅細(xì)胞配成2%鹽水懸液。將供血者血樣以同樣方法分離血清（血漿），并配制2%紅細(xì)胞懸液。配血所用受血者血樣必需是輸血前3天內(nèi)的。2021/7/20 星期二6、操作步驟：6.1 取潔凈小試管2支，1支標(biāo)明受血者血清（PS）+供血者細(xì)胞（DC）；另1支標(biāo)明供血清（DS）+受血者細(xì)胞（PC）。6.2 按標(biāo)記主側(cè)管放受血者血清1滴，加供血者紅細(xì)胞懸液1滴。次側(cè)管放供血者血清1滴，加受血者紅細(xì)胞懸液1滴，混勻，以1000r/min離心1min，輕輕側(cè)動試管，觀察結(jié)果。6.3觀察結(jié)果：先觀察試管上層液有無溶血，再斜持試管輕輕側(cè)動或輕輕彈動，觀察管底反應(yīng)物有無凝集（必

14、要時用顯微鏡觀察）。冬季室溫較低，應(yīng)將試管保溫，以防冷凝集素引起的凝集反應(yīng)。7、結(jié)果判斷：ABO同型配血，主側(cè)和次側(cè)均無溶血、無凝集表示無輸血禁忌，可以輸血。異型配血時，主測無凝集，次測凝集，無溶血， 可以輸給少量。輸異型血時， 如次測不凝集，不可以輸血，應(yīng)重新復(fù)查血型或追查其原因。2021/7/20 星期二凝聚胺交叉配血試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程4.2原理：針對不規(guī)則抗體的檢出及鑒定多采用紅細(xì)胞的凝聚反應(yīng)試驗(yàn)，而凝聚反應(yīng)試驗(yàn)的成效則與分布紅細(xì)胞表面之電荷以及抗體的親和性息息相關(guān)。凝聚胺法是利用低離子介質(zhì)（LIM）來降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度，進(jìn)而減少紅細(xì)胞之間距，以促進(jìn)紅細(xì)胞和血清（血漿）中的抗體發(fā)生特異性結(jié)

15、合；接著加入凝聚胺（polybrene）此種多價陽離子聚合物來中和紅細(xì)胞上的陰性電荷，使細(xì)胞間發(fā)生非特異性凝聚；最后加入重懸液，使之中和由凝聚胺所引起之非特異凝聚，倘若沒有凝聚發(fā)生，則判定為陰性；若有凝集，則得知存在特殊性之抗原抗體反應(yīng)，則判定為陽性。6、試劑：臺灣 貝索的試劑盒：1)低離子溶液（LIM）2)聚凝胺溶液（POLYBRENE）3)懸浮液（RESUSPENDING）2021/7/20 星期二7、操作步驟7.1 取試管兩支,分別標(biāo)明主次側(cè)管,主側(cè)管加入受血者血清兩滴,再加入25%獻(xiàn)血者紅細(xì)胞懸液1滴,次側(cè)管反之。7.2每支試管中加入0.7mlLIM液,混勻;再各加入2滴POLYBRE

16、NE液,混勻。7.3 3400轉(zhuǎn)離心10秒，棄上清液，不要瀝干，讓管底殘留約0.1ml液體。7.4輕搖試管，目測紅細(xì)胞有無凝集，若無凝集則必須重作。7.5加2滴resuspeneing液，輕搖試管混合并同時觀察結(jié)果。2021/7/20 星期二8、結(jié)果判斷立即目測并鏡檢觀察凝集狀態(tài)。如果30秒內(nèi)凝集散開，代表是由polybrene引起的非特異性聚集，配血結(jié)果相合。若凝集不散開，則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性凝集，配血結(jié)果不相合。若反應(yīng)可疑，可進(jìn)一步用顯微鏡觀察。2021/7/20 星期二10、注意事項(xiàng)10.1可以用含EDTA之血漿代替血清使用。10.2 若病人血清含肝素多，如洗腎患者，則應(yīng)加入雙

17、倍量的Polybrene液和肝素。10.3試劑使用前，應(yīng)恢復(fù)室溫再做。10.4在冬天氣溫極低的情況下，操作交叉配血試驗(yàn)，由于某些病人血清可能含有冷凝集素等因素而導(dǎo)致假陽性結(jié)果出現(xiàn)。若有懷疑，建議在最后滴加RESUSPENDING液時將試管立即置于370C水浴中,輕輕轉(zhuǎn)動試管混合,并在30秒內(nèi)觀察結(jié)果。2021/7/20 星期二0.8%-1%樣本紅細(xì)胞制備：加20l樣本壓積紅細(xì)胞懸浮于2ml0.9%的生理鹽水中。紅細(xì)胞懸液的配制懸液濃度（%）壓積紅細(xì)胞（滴）鹽水（滴）2 1 2 ml（40） 5 1 0.8 ml（16） 10 1 0.4 ml（8） 20 1 0.2 ml（4）2021/7/20 星期二不規(guī)則抗體篩選標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程6.3微柱凝膠抗人球蛋白法篩選紅細(xì)胞不規(guī)則抗體6.3.1試劑：生理鹽水，、號不規(guī)則抗體篩選細(xì)胞（0.5-0.8%的濃度），博迅的不規(guī)則抗體篩查卡。6.3.2儀器：離心機(jī)，微柱凝膠卡專用孵育器及離心機(jī)。6.3.3操作程序：微柱凝膠抗人球蛋白法篩選紅細(xì)胞不規(guī)則抗體的具體方法如微術(shù)凝膠配血法，具體操作如下：1）將準(zhǔn)備好的檢測卡做好標(biāo)記； 2）將0.5-0.8%、篩檢紅細(xì)胞各50l分別加入對應(yīng)的微管中; 3）將待檢者血清各50l分別加入、