纖維素酶在葛根有效成分提取中的應用

1、纖維素酶在葛根有效成分提取中的應用一、總設計思路發(fā)現(xiàn)問題，結合已有成果，總結經(jīng)驗分析總結查閱相關文獻資料含量檢測、成分分析設計工藝流程確定研究對象二、選題基礎有效成分植物藥材的有效成分被包裹在細胞壁中細胞壁主要成分是纖維素，大量的纖維素阻礙了有效成分的溶出。細胞壁纖維素酶解提取過程 酶解破壁 有效成分的提取 纖維素酶解提取 提高提取率加速有效成分釋放將植物組織溫和分解選用纖維素酶4.3.2.1.酶解優(yōu)點兩種提取方法的比較萃取時間長需要使用大量溶劑受植物細胞壁纖維組織的 屏障作用提取率較低（尤其是以富含纖維素的根、莖、皮類藥材為原料提取時,纖維素的屏障作用更為突出） 酶處理法可使細胞壁發(fā)生不同程

2、度的改變,如軟化、膨 脹和崩潰等可改變細胞壁的通透性有利于壁內(nèi)的藥效成分溶出,從而提高藥效成分的提取率。 .傳統(tǒng)的水、酸、堿、有機溶劑提取方法 三、確定實驗對象葛根是一味常用的藥材，為豆科植物野葛或甘葛藤干燥根。葛根多為根部用藥，常為斜切或縱切的塊片，其切面粗糟，纖維性強，對根部入藥藥材酶解法提取的研究有較好的代表性，因此本次實驗選取野葛根藥材最為研究對象進行實驗設計。葛根素（葛根黃素）1.大豆黃酮（大豆苷元）2.大豆黃酮苷（大豆苷）3.非黃酮類成分如尿囊素等4.葛根主要含黃酮類化合物，含量達12%四、實驗設計1. 制備供試液 20g葛根粗粉 加入100mL乙醇回流提取1.5h， 抽濾（再重復

3、兩次）藥 渣 60%乙醇回流提取4次 合并乙醇溶液，減壓濃縮浸 膏 用少量甲醇溶解， 除去不溶物定容于100mL量瓶中（一）測定纖維素酶對葛根總黃酮的影響 分別取5mL甲醇溶液兩份（A,B） A：用甲（乙）醇定容至25ml作為對照組； B：將甲醇蒸干15mLpH4.8的磷酸鹽緩沖液超聲溶解于25mL三角瓶中加入75mg纖維素酶 50水浴2.5h，水浴蒸干用甲醇超聲溶解，定容于25mL量瓶中。 .處理1.薄層色譜分析.液相或液質聯(lián)用3.檢測 按照2005年中華人民共和國藥典一部葛根項下方法進行薄層色譜檢查和HPLC法進行比較。提取物未經(jīng)任何處理提取物加酶處理3小時測定結果通過薄層比較未發(fā)現(xiàn)兩實驗

4、組的斑點有明顯變化 ；通過高效液相測定，對照組與實驗組的譜圖上顯示峰數(shù)目、保留時間等參數(shù)均有很大變化（二）測定纖維素酶對葛根的作用2g葛根粗粉 25mL水 30mL甲醇超聲25min,過濾 藥渣 加入30mL甲醇超聲25min 合并甲醇溶液 蒸干 用甲醇溶解定容于25mL量瓶中 2g葛根粗粉 緩沖液25mL100mg纖維素酶 50水浴5h 同法處理定容于25mL量瓶中 1.薄層色譜分析2.總黃酮含量測定3.液相或液質聯(lián)用檢測 原藥材未經(jīng)酶解原藥材經(jīng)酶解后測定結果通過薄層比較未發(fā)現(xiàn)兩實驗組的斑點有明顯變化 ；通過高效液相測定，對照組與實驗組的譜圖上顯示峰數(shù)目、保留時間等參數(shù)均有很大變化 由于缺少

5、對照品，總黃酮含量并未測定，因此無法確定提取率是否增加實驗特色實驗設置了兩個對照組進行比較分析，較全面的考慮了可能的影響因素： 這是本實驗研究的獨特性此外，實驗中應用三種檢測方法分別進行對照分析，這與已經(jīng)發(fā)表的研究文獻相比也具有良好的準確性 酶解對于藥材有效成分破壞的影響1.酶解對藥材有效成分提取率的影響2.五、前期工作小結在前期實驗中，應用薄層層析法對各供試品 進行檢測分析，顯示結果與對照組相比較斑 點無明顯變化。這與相應文獻記載相符合。但是樣品用高效液相測定之后發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，對照組與實驗組的譜圖上顯示峰數(shù)目、保留時間等參數(shù)均有很大變化。因此我對文獻中纖維素酶解沒有破壞葛根的有效成分這一說法存在質疑。 六、后續(xù)實驗設計 1.用分光光度法對提取物進行含量測定，以確 定酶