Box-Behnken設(shè)計優(yōu)化小兒消積止咳制劑提取純化工藝

1、Box-Behnken設(shè)計優(yōu)化小兒消積止咳制劑提取純化工藝小兒消積止咳制劑（口服液/顆粒）組方來源于山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院兒科名老中醫(yī)畢 可恩的臨床經(jīng)驗方，由山楂、檳榔、枳實、枇杷葉、瓜簍、連翹、萊瓶子、摹芮子、蟬蛻 和桔梗10味中藥制成，具有清熱肅肺、消積止咳的功效1材料儀器1260型高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；XS204型電子分析天平（MettlerToledo ）。試藥對照品辛弗林（批號：110727-201809,純度：99.5%）、柚皮背（批號：110722-201815,純度：93.4%）均購自中國食品藥品檢定研究院。小兒消積止咳制劑提取液、醇沉液（中藥制藥共性技術(shù)國家重

2、點實驗室）；甲醇、乙睛為 色譜純；其余試劑均為分析純。2方法與結(jié)果辛弗林的測定方法辛弗林對照品溶液的制備精密稱取辛弗林對照品適量，加入50%勺甲醇制成20 wg。mL辛弗林供試品的制備精密量取藥材提取液/醇沉液適量（折合成品 0.5支/袋），水浴加熱濃縮至約 10 mL （醇沉液濃縮至無醇后加水 10 mL溶解），通過聚酰胺柱（3060目，2.5 g ,內(nèi)徑為12.5 mm,干法裝柱），用水 30 mL洗脫，收集洗脫液，至 50 mL量瓶中，加水至刻度， 搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。色譜條件色譜柱：TURNER Kromasil 100A C含量測定分別精密吸取對照品與供試品溶液各10 L,注

3、入液相色譜儀，測定，即得。柚皮背的測定方法柚皮背對照品的制備取柚皮背對照品適量，精密稱定，加入50%勺甲醇制成60 wg。mL柚皮普供試品的制備精密量取提取液/醇沉液適量（折合成品 0.5支/袋），至50 mL量瓶中，加50%P醇， 定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。色譜條件色譜柱：Agilent ZORBAX SB C含量測定分別精密吸取對照品與供試品溶液各10 L,注入液相色譜儀，測定，即得。干物質(zhì)得率測定方法干物質(zhì)得率測定方法參考中華人民共和國藥典（以下簡稱中國藥典）2020年版四部通則0831 “干燥失重測定法”，精密量取提取液/醇沉液10 mL,稱量，記錄質(zhì)量，水浴蒸干，置于1

4、05 C烘箱，干燥至質(zhì)量恒定，干燥器中冷卻至室溫，稱質(zhì)量，計算干物 質(zhì)得率。評價指標(biāo)中國藥典2020年版一部小兒消積止咳口服液項下的含量測定項為辛弗林，小兒消積 止咳顆粒的含量測定項為柚皮背。止匕外，干物質(zhì)得率也是衡量工藝的重要指標(biāo)。根據(jù)多年 生產(chǎn)數(shù)據(jù)，經(jīng)SPSSAUS值法計算確定，=(R =（R水提單因素試驗料液比對水提工藝的影響固定提取時間為60 min,提取次數(shù)為2次，考察料液比（1:4、1:6、1:8、1:10）對水 提效果的影響，結(jié)果見圖1。由圖1可知，料液比在1:41:8時，料液比增加，提取次數(shù)對水提工藝的影響固定提取時間為60 min ,料液比為1:8 ,考察提取次數(shù)（1、2、3

5、、4次）對水提效果的 影響，結(jié)果見圖2。由圖2可知，提取次數(shù)在14時，隨著提取次數(shù)的增加，提取時間對水提工藝的影響固定料液比為1:8,提取次數(shù)為2次，考察提取時間（30、60、90、120、150 min）對水提效果的影響，結(jié)果見圖3。由圖3可知，隨著提取時間的增加，Box-Behnken 響應(yīng)面法優(yōu)化水提工藝水提方案設(shè)計及試驗結(jié)果依據(jù)Box-Behnken響應(yīng)面試驗設(shè)計原理，結(jié)合上述水提單因素試驗結(jié)果，進行因素水平設(shè)計與試驗。因素水平見表1,設(shè)計及結(jié)果見表23。水提模型擬合及方差分析采用Design-expert 8.0.6軟件對試驗結(jié)果進行分析，得到回歸方程：A和A水提工藝驗證通過模型分析

6、可以確定水提最佳工藝：料液比為1:8 ,提取次數(shù)為2.84次，提取時間為99 min ,此時綜合評分醇沉單因素試驗浸膏相對密度對醇沉工藝的影響固定醇沉?xí)r間為24 h ,醇沉醇度為60%考察醇沉前浸膏相對密度（1.15、1.20、1.25、1.30）對醇沉效果的影響，結(jié)果見圖7。由圖7可知，隨著相對密度的提高，醇沉醇度對醇沉工藝的影響固定醇沉前浸膏相對密度為1.23 ,醇沉?xí)r間為24 h ,考察醇沉醇度（50% 60% 70%80%對醇沉效果的影響，結(jié)果見圖8。由圖8可知，隨著醇沉醇度的提高，醇沉?xí)r間對醇沉工藝的影響固定醇沉前浸膏相對密度為1.23 ,醇沉醇度為60%考察醇沉?xí)r間（12、24、3

7、6、48 h）對醇沉效果的影響，結(jié)果見圖9。由圖9可知，隨著醇沉?xí)r間的增加，2.8 Box-Behnken 響應(yīng)面法優(yōu)化醇沉工藝醇沉方案設(shè)計及試驗結(jié)果依據(jù)Box-Behnken響應(yīng)面試驗設(shè)計原理，結(jié)合上述醇沉單因素試驗結(jié)果，進行因素水平設(shè)計與試驗。因素水平見表 4,實驗設(shè)計及結(jié)果見表 56。醇沉模型擬合及方差分析采用Design-expert 8.0.6軟件對試驗結(jié)果進行分析，得到回歸方程：醇沉工藝驗證通過模型分析可以確定醇沉最佳工藝：浸膏相對密度1.218,醇沉醇度58.2%,醇沉?xí)r間19.68 h ,在此條件下，評價指標(biāo)3結(jié)論小兒積食是指因食物積滯于內(nèi)而出現(xiàn)不思飲食、腹脹、腹痛、嘔吐等的一

8、種病癥，嚴(yán)重影 響小兒消化吸收及生長發(fā)育。目前，臨床西醫(yī)治療小兒急性支氣管炎伴積食主要以抗生素 控制感染及對癥干預(yù)為主，可有效促進患兒癥狀改善及病情恢復(fù)，但尚無法完全滿足臨床 需求Box-Behnken是一種優(yōu)化多變量系統(tǒng)的統(tǒng)計方法，可通過多元二次回歸方程擬合多個因素 與多個響應(yīng)值之間的函數(shù)關(guān)系，通過回歸方程數(shù)學(xué)模型尋求最佳條件和參數(shù)，從而獲得較 為精確的最佳工藝參數(shù)和響應(yīng)目標(biāo)的最優(yōu)值本研究采用Box-Behnken對小兒消積止咳制劑的提取純化工藝進行優(yōu)化，使處方中各藥的 有效成分最大程度地溶出，并盡可能降低雜質(zhì)的含量，以增加制劑的穩(wěn)定性，提高臨床療 效。最終優(yōu)選出的提取純化條件為料液比1:8,