提高常規(guī)切片質(zhì)量的幾個(gè)關(guān)鍵

1、提高常規(guī)切片質(zhì)量的幾個(gè) 1 常規(guī)切片技術(shù)在病理技術(shù)中是一項(xiàng)既普通又非常重要的技術(shù)，制片質(zhì)量的好壞，直接關(guān)系到臨床病理的正確診斷，高質(zhì)量的切片可以給病理診斷帶來極大的方便，否則，病理診斷困難，甚至給病人造成極大的痛苦，因此，常規(guī)制片的質(zhì)量在病理診斷中顯得尤為重要。 高質(zhì)量的制片技術(shù)關(guān)鍵在于組織的固定、脫水、浸蠟與包埋等步驟，但是對(duì)于切片刀的研磨也不能忽視。 2一、 組織固定： 組織固定是常規(guī)制片致關(guān)重要的一環(huán)，作好組織固定將是高質(zhì)量切片的開端，往往由于組織固定不當(dāng)，而影響制片的整個(gè)過程。首先，我們必須了解固定的目的、固定劑的種類及其性質(zhì)、優(yōu)缺點(diǎn)。3 1. 固定的目的：（1） 防止組織溶解及腐敗。

2、（2）使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等各 種成分沉淀下來，保持原有的組織結(jié)構(gòu) 與生活時(shí)相仿。（3） 沉淀及凝固使細(xì)胞內(nèi)成份產(chǎn)生不同的折 射率，造成光學(xué)上差異，使得在生活情 況下原來看不清楚的結(jié)構(gòu)變得清晰起來， 并使得細(xì)胞各部分容易染色。（4）固定劑兼有硬化作用，使組織硬化，增 加組織硬度使組織不易變形，有利于固 定以后的處理。 因此固定是制片過程中 重要一環(huán)節(jié)，也是高質(zhì)量切片的基礎(chǔ)。4 2. 固定劑具備的性質(zhì)：（1） 迅速滲入組織殺死原生質(zhì)，在殺死的短期內(nèi)， 細(xì)胞形態(tài)不至所變化，使組織可以久存。（2） 必須具有相當(dāng)?shù)臐B透力，對(duì)組織各部分的滲 透力相等，可使組織內(nèi)外完全固定，使細(xì)胞 不至于因固定

3、引起人為的改變。（3）固定后增加細(xì)胞對(duì)各種穿透力的抵抗力，不 至于因以后的處理使固定的組織變形。（4）盡可能避免組織膨脹或收縮。（5）使組織內(nèi)的成份（蛋白質(zhì)）凝固或沉淀，組 織變硬適于切片。（6）增加細(xì)胞內(nèi)含物的折光程度，易于鑒別，增 加媒染作用和染色能力5 3. 常用固定劑及其優(yōu)缺點(diǎn)： 福爾馬林（1） 固定組織滲透力強(qiáng)，組織收縮少，固 定厚度適當(dāng)?shù)慕M織較為均勻。（2） 非沉淀性固定劑，不能使白蛋白及核 蛋白沉淀，可與蛋白質(zhì)化合，脂肪、 神經(jīng)及髓鞘的固定效果很好，也可固 定高爾基體、線粒體。（3） 經(jīng)固定的組織、核的染色較好，胞漿 染色稍差，一般染料都可以染，以堿 性染料更好。6 乙醇： （1

4、） 可沉淀白蛋白、核蛋白、球蛋白、肝糖。 （2） 穿透組織速度很好，使組織硬化顯著， 在高濃度酒精中留置過久，組織發(fā)脆， 組織收縮厲害，約可縮小20%體積，僅 可在70%酒精內(nèi)久存。50%以上濃度可 溶解脂肪及類脂體，能溶解血色素及損 害多數(shù)其它色素。 7 醋酸：（1）穿透組織速度很快，不能沉淀細(xì)胞質(zhì) 的蛋白質(zhì)，所以組織不會(huì)硬化。（2）對(duì)染色體的保存非常好。（3）醋酸能使組織膨脹，特別對(duì)于膠原纖維 及原漿中的纖維蛋白，故單獨(dú)使用只能 短時(shí)固定，一般與其它固定劑混合使用。 Zenker、Bouin、Carnoy等混合 固定液中均含冰醋酸，Carnoy可達(dá) 10%。84、 固定液的用量及固定時(shí)間：

5、 固定液的用量 固定劑的量要充足，至少為組織體積 的4倍以上，一般為10-15倍。容器勿 過小，避免組織內(nèi)水分在固定時(shí)滲出， 影響固定劑的濃度，勿使組織貼于瓶 底或瓶壁，以免影響固定劑的滲入。 9 固定時(shí)間 視標(biāo)本的種類、性質(zhì)、大小、固定劑 的種類、性質(zhì)、滲透力的強(qiáng)弱而定， 可以1-2小時(shí)至十幾小時(shí)或更長，一 些小組織僅須幾十分鐘。如Carnoy 對(duì)組織硬化作用較強(qiáng)，不宜時(shí)間過長， 而Bouin固定時(shí)間可較長，一般為24 小時(shí)左右。10二、組織脫水： 水在組織內(nèi)能使組織分解，水份與石蠟等包埋劑不能相溶，因此，在制片過程中，脫水是否徹底直接影響著組織的透明與浸蠟。組織內(nèi)的水份必須通過脫水劑將其完

6、全脫出，才有利于組織的透明與浸蠟，也有利于組織的永久保存。否則，即便是延長透明與浸蠟時(shí)間，包埋后也難以切出高質(zhì)量的切片。 11 1、 常用脫水劑及使用方法： 乙醇：（1） 與水可任何比例混合，能硬化組織、價(jià)廉。（2） 非石蠟溶劑，必須二甲苯透明后才能浸蠟。（3） 95%以上酒精對(duì)組織有強(qiáng)烈的收縮及脆化。 一般組織從70%酒精開始脫水，經(jīng)80%、 95%、無水逐步進(jìn)行，柔軟組織如胚胎、 眼球等組織須從50%或30%開始，否則組 織收縮較大。12 正丁醇：（1）脫水能力弱，但組織收縮小，可與 水及酒精混合。（2） 能溶解石蠟，可不經(jīng)透明直接浸蠟。 脫水程序：經(jīng)過各級(jí)酒精換入純正 丁醇中，更換一次新

7、液，最后投入 石蠟中。13三、透明與浸蠟： 透明：當(dāng)組織完成脫水后，即可進(jìn)入透明，透明劑是蠟浸入組織的媒劑或橋梁。常用透明劑為二甲苯，其透明力強(qiáng)，作用快，但易使組織收縮變硬變脆，因此，組織不能在其內(nèi)久留。 浸蠟：將石蠟作為支持劑透入組織內(nèi)部，使之變硬，經(jīng)包埋后以利于切片。石蠟通過有機(jī)溶劑而滲透于組織細(xì)胞及其間質(zhì)，應(yīng)用石蠟與組織相應(yīng)的硬度，石蠟度數(shù)越低則越軟，越硬則度數(shù)越高。夏季氣溫較高，選擇硬度好的石蠟，使用其與組織的硬度相匹配，一般常用60-62的石蠟進(jìn)行包埋。 14四、切片過程中常見問題及其解 決的辦法： 切片是常規(guī)制片技術(shù)中技術(shù)最強(qiáng)的環(huán)節(jié)，這項(xiàng)技術(shù)的經(jīng)驗(yàn)，也是靠平時(shí)工作中日積月累，不斷摸

8、索的提高的。高質(zhì)量的切片既與組織固定、脫水、浸蠟包埋密切相關(guān)，又與切片的鋒利與否分不開，作好以上各步操作過程，解決好切片中遇到的問題，即可作出高質(zhì)量的切片。151、 切片與組織塊切面的夾角應(yīng)在3度8 度之間，平時(shí)常用5角，不可過大或 過小。2、 切片時(shí)蠟塊有一定的硬度才能使切片 順利 進(jìn)行，因此視氣溫高低適當(dāng)處 理蠟塊，冷凍或給予適當(dāng)溫度。3、 常見問題及其解決辦法：16常見問題及其解決辦法： 常見問題 原因 解決辦法（1）組織切面呈灰白色 、 切片呈碎屑狀或空洞固定不足脫水不徹底透明不好浸蠟不夠凡送檢標(biāo)本必須充分固定注意脫水時(shí)間徹底脫水后再入二甲苯透明適當(dāng)延長透明時(shí)間適當(dāng)延長浸蠟時(shí)間（2）切

9、片呈碎屑或粉沫狀二甲苯或浸蠟時(shí)間過長浸蠟或包埋溫度過高適當(dāng)給予冷處理、盡量薄切注意浸蠟及包埋溫度17（3）切片呈蜂窩狀粗切時(shí)推進(jìn)器用力過猛切的過厚粗切時(shí)盡量薄削切去組織塊表面過切部分（4）切片呈皸裂狀組織透明或浸蠟時(shí)間過長，組織變脆浸蠟、包埋時(shí)蠟溫過高注意透明及浸蠟時(shí)間控制好浸蠟包埋溫度18（5）蠟帶易向一側(cè)彎曲組織最大面末切全組織組織塊兩側(cè)寬窄不一調(diào)整持蠟器，切全組織窄的一邊多留一些蠟（6）蠟片難以連成帶或卷曲刀不鋒利刀與蠟塊角度不當(dāng)切片蠟過硬、粘度不夠 鐾刀或磨刀調(diào)整刀的角度適當(dāng)加些蜂蠟或用稍低溫蠟包埋19（7）切片易粘附于蠟塊上切片刀不鋒利切片刀背側(cè)有蠟移動(dòng)刀至鋒利處，鐾刀或磨刀去除粘附

10、于刀上的蠟（8）蠟片易起皺，不易展平組織塊兩側(cè)有蠟水溫過高或過低碎小組織之間有蠟盡量削凈左右兩側(cè)多余蠟調(diào)整水溫注意包埋方位，盡量組織間貼緊借助酒精張力使組織攤平20（9）切片薄厚不均或呈搓板狀刀或組織塊沒有夾緊切片機(jī)零部件松動(dòng)切片機(jī)微調(diào)不靈敏旋緊持蠟器或持刀器請(qǐng)專業(yè)技術(shù)人員調(diào)整切片機(jī)平時(shí)注意切片機(jī)的保養(yǎng)（10）攤片時(shí)切片炸裂水溫過高組織含脂量高透明二甲苯使用過久浸用組織蠟使用過久組織處理不當(dāng)，固定不好降低水溫適當(dāng)延長透明時(shí)間更換二甲苯更換新蠟重新取材，注意固定21（11）切片總在一處出現(xiàn)縱向裂痕(12)切片壓縮厲害刀刃有缺口刀刃有纖維組織內(nèi)有異物鈣化組織組織富含纖維結(jié)締組織切片刀不鋒利切片與組織塊夾角不當(dāng)切片蠟硬度不夠切片過薄避開缺口處，鐾刀或磨刀擦凈切片刀刃上的纖維取材、包埋時(shí)注意適當(dāng)脫鈣適