現(xiàn)代分子檢測技術(shù)在食品品質(zhì)控制中的應用及優(yōu)勢

1、現(xiàn)代分子檢測技術(shù)在食品品質(zhì)控制中的應用及優(yōu)勢一、轉(zhuǎn)基因食品檢測轉(zhuǎn)基因食品也稱基因改造食品或基因修飾食品 ( GeneticallyModifiedFood，GMF)。近幾年，隨著轉(zhuǎn)基因食品的快速發(fā)展，轉(zhuǎn)基因食品的安全性受到廣泛關(guān)注，因而對轉(zhuǎn)基因食品的檢測是非常必要的。利用PCR 方法檢測轉(zhuǎn)BT 基因水稻原理：由于 Bt 水稻基因中含有CaMV35S（花椰菜花葉病毒）啟動子、根瘤農(nóng)桿菌的NOS終止子和Cry1Ac基因，因此，在檢測水稻中是否含有轉(zhuǎn)基因水稻成分時，可選擇檢測CaMV35S啟動子、NOS終止子和Cry1Ac基因的存在與否，如果存在，即可說明其中存在轉(zhuǎn)基因水稻成分。方法：經(jīng)DNA的提取

2、，PCR擴增，通過凝膠電泳來判斷樣品是否為BT轉(zhuǎn)基因水稻實驗步驟1將新鮮嫩葉放于瓷質(zhì)的研缽中，將人適量的液氮進行研磨，待葉片磨至粉末狀后加入適量的CTAB。2500l 65預熱的CTAB 70保溫30min，不時顛倒混勻。3450l酚/氯仿/異戊醇，顛倒混勻至溶液呈乳濁狀但不要震蕩，離心10000rpm， 3min，取上清。4加入450 l 氯仿，混勻后離心10000rpm，3min，取上清。5加入600l異丙醇，顛倒混勻，-20放置30min。612000rpm，4/5min，棄上清。7用800l預冷的70乙醇洗滌沉淀（注意不要吹散沉淀）。8離心后吸去殘余乙醇。9待乙醇揮發(fā)后加入20-50l

3、 TE緩沖液（含1RNase A），溫和混勻。10取5l樣品進行瓊脂糖凝膠電泳，其余的樣品-20保存。CaMV35S 啟動子是一段長 195bp 的堿基序列，如圖1所示，經(jīng)過PCR擴增后，在凝膠電泳檢測中，其條帶位置在200bp左右。電泳結(jié)果NOS終止子是一段長165bp的堿基序列，如圖2所示，經(jīng)過PCR擴增后，在凝膠電泳檢測中，其條帶位置在100bp至200bp中間位置。Cry1Ac基因是一段長301bp的堿基序列， 如圖3所示，經(jīng)過PCR擴增后，在凝膠電泳檢測中，其條帶位置在300bp左右。tRNALeu： 植物葉綠體內(nèi)源參照基因，長180bp，如圖4，經(jīng)PCR擴增后，在凝膠電泳檢測中，

4、其條帶位置在200bp左右。在這種方法中，DNA 的提取是關(guān)鍵，PCR 的成功與否關(guān)系到整個實驗的準確性。核酸檢測能為轉(zhuǎn)基因水稻的篩選鑒定及為安全性評價提供直接的數(shù)據(jù)，成為轉(zhuǎn)基因水稻安全性檢驗中一項重要的技術(shù)手段。二、天然毒素的檢測技術(shù)ELISA（酶聯(lián)免疫吸附劑測定）試劑盒檢測黃曲霉毒素黃曲霉毒素： 1993年黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織(WHO)的癌癥研究機構(gòu)劃定為1類致癌物，是一種毒性極強的劇毒物質(zhì)。在天然污染的食品中以黃曲霉毒素B1最為多見，其毒性和致癌性也最強。 B1是最危險的致癌物，經(jīng)常在玉米，花生，棉花種子，一些干果中常能檢測到。 Analyte = antigen Analyte =

5、antibodyIncubate, wash酶聯(lián)免疫(ELISA)原理：1. Coat solid phase withantigen when analysing antibody antibody when analysing antigen2. Block free binding sites. Incubate. Wash. Analyte =antigen Analyte =antibody3. Add sample. Incubate. Wash Analyte =antigen Analyte =antibody4. Add conjugate. Incubate. Wash.

6、Analyte =antigen Analyte =antibodyE E E E5. Add substrate 6. Incubate, stop, measure colour change Colourless ENZYMEODCONCENTRATION江濤等成功地制備出針對黃曲霉毒素具有高親合力、高特異性的單克隆抗體，建立了檢測食品中總黃曲霉毒素的間接競爭 ELISA 檢測方法，為開展全國性總黃曲霉毒素污染調(diào)查提供了技術(shù)支持。龔燕等通過改進產(chǎn)處理，使ELISA檢測黃曲霉素靈敏度達到0.1g/kg。二、現(xiàn)代分子檢測技術(shù)在食品檢測中的優(yōu)勢分子檢測技術(shù)作為一種基因水平的檢測技術(shù)，具有靈敏度高、選擇性好、響應快等優(yōu)點，是新時期食品安全的戰(zhàn)略制高點之一，也是食品安全領(lǐng)域關(guān)注的熱點之一。例如，黃曲霉毒素傳統(tǒng)的檢測方法較繁瑣、成本高、準確度差。薄膜層析法和液相色譜法是目前國內(nèi)絕大多數(shù)檢測機構(gòu)都在使用的方法，由于其檢測周期長，程序復雜，所需試劑繁多等缺點已遠遠不能滿足現(xiàn)代檢測要求。近幾年出現(xiàn)的新檢測方法是在傳統(tǒng)檢測方法的基礎(chǔ)上，將酶聯(lián)免疫技術(shù)應用于毒素的檢測。相關(guān)科研單位研制的酶聯(lián)免疫(ELISA)試劑盒，檢測食品中的黃曲霉毒素 B