醫(yī)學(xué)科研方法

1、醫(yī)學(xué)科研方法學(xué) 魔天記科研過程： 選題、設(shè)計(jì)、實(shí)踐、統(tǒng)計(jì)分析 與總結(jié)成文科研方法學(xué): 解決科研過程中問題的程序與 手段（如何提出問題、設(shè)計(jì)、 實(shí)踐)第一節(jié) 醫(yī)學(xué)科研的分類與任務(wù) 分 類學(xué)科屬性：基礎(chǔ)、臨床、預(yù)防、社會醫(yī)學(xué)研究科研體系：現(xiàn)代、傳統(tǒng)、中西醫(yī)結(jié)合、藥學(xué)科研意義：基礎(chǔ)（理論）研究（探索未知、解決理論 新觀點(diǎn)、新信息） 如氣體受體和嗅覺系統(tǒng)的基因發(fā)現(xiàn)(2004) 幽門螺桿菌的發(fā)現(xiàn)(2005) 應(yīng)用基礎(chǔ)研究（臨床科學(xué)研究課題 ） 如疾病發(fā)病機(jī)制、診斷新技術(shù)、方法 應(yīng)用研究（推廣新技術(shù)、新產(chǎn)品） 分 類按設(shè)計(jì)與事實(shí)的關(guān)系（研究的時(shí)間） 前瞻性研究：先設(shè)計(jì)、后實(shí)踐（結(jié)果可靠性 高，結(jié)論可信性好

2、） 回顧性研究：事物發(fā)生在前，設(shè)計(jì)在后按科研過程采用的方法 實(shí)驗(yàn)性研究：實(shí)驗(yàn)方法，嚴(yán)格控制條件，研究對象進(jìn) 行干預(yù) 調(diào)查性研究：現(xiàn)場調(diào)查，搜索資料，研究對象未干預(yù)科研任務(wù)1、發(fā)現(xiàn)醫(yī)學(xué)中未知事物與未知過程 人類基因組DNA序列草圖繪制完成(1990-2000)，估計(jì)人類基因組大約2.7萬個(gè)（決定人類生命的全部組織結(jié)構(gòu)和活動） 蛋白質(zhì)組學(xué)（表達(dá)、分布、加工修飾、生物學(xué)功能與相互作用） 系統(tǒng)生物學(xué)（生命是由多種成分包括基因和蛋白質(zhì)構(gòu)成，組分之間存在廣泛的相互作用,信息網(wǎng)絡(luò)） 2.揭示醫(yī)學(xué)中已知事物的未知規(guī)律癌癥(發(fā)病機(jī)制)(子宮頸癌-人類乳頭瘤病毒；艾滋 病-HIV，2008年，諾貝爾生理學(xué)獎(jiǎng)）毒品

3、(成癮機(jī)制)(受體、酶活性、活性物質(zhì)變化)新發(fā)現(xiàn)的疾病發(fā)病機(jī)制（SARS）新的活性物質(zhì)(化學(xué)本質(zhì)、生物學(xué)特性、生理作用、 病理生理意義、藥理學(xué)特性、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、 靶點(diǎn)）(1)阿片受體發(fā)現(xiàn)，推論存在內(nèi)源性阿片樣物質(zhì) 機(jī)體不可能為外源性物質(zhì)（嗎啡）設(shè)置受體 電刺激某些神經(jīng)核團(tuán)產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用，預(yù)先應(yīng)用 納洛酮（阿片受體阻斷劑）取消電刺激鎮(zhèn)痛作用 （電刺激釋放某些活性物質(zhì)作用阿片受體） 發(fā)現(xiàn)腦啡肽 (2)孤兒受體，利用“孤兒受體策略”，以反向藥 理學(xué)方法尋找內(nèi)源性配體3.探索醫(yī)學(xué)中已知規(guī)律的應(yīng)用 基因工程 組織工程 新靶點(diǎn)開發(fā)新藥4. 驗(yàn)證與發(fā)展醫(yī)學(xué)中已有的理論和學(xué)說動脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展19

4、76年, 損傷反應(yīng)學(xué)說: 內(nèi)皮細(xì)胞受損，細(xì) 胞相互作用，多種活性物質(zhì)1999年, 炎癥性疾病學(xué)說: 內(nèi)皮細(xì)胞受損，多 種細(xì)胞因子 血管內(nèi)皮損傷是動脈粥樣硬化形成的始動環(huán)節(jié)(Ross, New Engl Med J, 1999)硝酸甘油舒血管機(jī)制的研究進(jìn)展 硝酸甘油為治療心絞痛的經(jīng)典藥物，舒張血管，降低前后負(fù)荷，降低心肌耗氧量，緩解心絞痛。 1867年- 應(yīng)用于臨床(直接舒張血管) 1977年- 硝酸甘油 NO cGMP 舒張血管 2001年 降鈣素基因相關(guān)肽介導(dǎo)硝酸甘油舒血管 降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)感覺神經(jīng)的主要遞質(zhì)，37個(gè)氨基酸組成，強(qiáng)效舒血管作用 CGRP介導(dǎo)硝酸甘油的舒血管作用(工

5、作假說) 硝酸甘油 NO cGMP CGRP ? 舒張血管CGRP介導(dǎo)硝酸甘油舒血管作用的依據(jù)： 1、CGRP廣泛分布血管組織 2、CGRP強(qiáng)效舒血管作用 3、硝酸甘油不良反應(yīng)搏動頭痛伴隨頸靜脈血中CGRP濃度升高 4、NO促進(jìn)CGRP釋放(硝酸甘油釋放NO) 5、硝酸甘油與CGRP半衰期均非常短硝酸甘油的舒血管作用（離體大鼠胸主動脈環(huán)）CGRP介導(dǎo)硝酸甘油舒血管作用NitroglycerinNTG+CGRP8-37NTG+CapsaicinCGRP8-37: CGRP受體阻斷劑Capsaicin(辣椒素): 感覺神經(jīng)遞質(zhì)耗竭劑硝酸甘油對血壓、CGRP的影響Methylene blue(MB)

6、:鳥苷環(huán)化酶抑制劑Capsaicin(辣椒素): 感覺神經(jīng)遞質(zhì)耗竭劑人體CGRP是否介導(dǎo)硝酸甘油舒血管？ 硝酸甘油 NO cGMP CGRP( )? 舒張血管線粒體醛脫氫酶(SNP)正常野生型純合子（n=9)，504(谷氨酸）攜帶突變等位體（n=9)，504(賴氨酸）硝酸甘油舌下含服（0.5 mg）指標(biāo)：血壓 心率 血漿CGRP濃度 淋巴細(xì)胞CGRPmRNA 表達(dá)硝酸甘油對血壓、心率的影響. ：ALDH2*1/*1 ; : ALDH2*2 ( n=9). *P0.05, #P0.05, *P12) Wu RR, Zhao JP, Jin H et JAMA. Lifestyle interve

7、ntion and metformin for treatment of antipsychotic-induced weight gain: a randomized controlled trial. JAMA 2008; 299(2):185-93. (IF28) (2008年中國百篇最具影響國際學(xué)術(shù)論文)Li H, Xie H, Liu W, Hu R, Huang B, Tan YF, Xu K, Sheng ZF, Zhou HD, Wu XP, Luo XH. A novel microRNA targeting HDAC5 regulates osteoblast differ

8、entiation in mice and contributes to primary osteoporosis in humans. J Clin Invest. 2009;119(12): 3666-77. (IF15)Wu F, Yang LY, Li YF, Ou DP, Chen DP, Fan C. Novel role for epidermal growth factor-ike domie 7 in metastasis of human hepatocellular carcinoma. Hepatology. 2009; 50(6): 1839-50. (IF10)研究

9、生獲獎(jiǎng)情況全國優(yōu)秀博士學(xué)位論文獎(jiǎng)1名(彭軍)全國優(yōu)秀博士論文提名獎(jiǎng)4人(魯蓉，周智紅，鄧盤月，姜德建)湖南省優(yōu)秀博士學(xué)位論文獎(jiǎng)7人湖南省優(yōu)秀碩士學(xué)位論文獎(jiǎng)11人注意理論成果：感性認(rèn)識上升為理性電刺激對腸系膜血管張力的影響血管受交感縮血管神經(jīng)(NE)和感覺舒血管神經(jīng)(CGRP) 兩種神經(jīng)支配,電刺激釋放NE和CGRP.2. 耗竭感覺神經(jīng)遞質(zhì)CGRP后,電刺激興奮交感神經(jīng)(NE)表現(xiàn)縮血管效應(yīng)增強(qiáng).3. 阻斷交感神經(jīng)后,電刺激興奮感覺神經(jīng)(CGRP)表現(xiàn)為舒血管效應(yīng).腸系膜血管,辣椒素耗竭感覺遞質(zhì)(CGRP)后,電刺激興奮交感神經(jīng)(NE)縮血管效應(yīng)增強(qiáng)（Li YJ , at al., Eur J

10、Pharmacol, 1992)阻斷交感神經(jīng)后,電刺激興奮感覺神經(jīng)(CGRP) 表現(xiàn)為舒血管效應(yīng)理論成果：外周血管張力是交感縮血管（NE)和感覺舒血管（ CGRP）兩種神經(jīng)活動的凈效應(yīng).理論成果：內(nèi)源性NOS抑制物是AS形成的重要促進(jìn)物第三節(jié) 科研過程需要注意的幾個(gè)問題1.解放思想,標(biāo)新立異 科研是探索未知,應(yīng)具有敢為人先的意識。敢于標(biāo)新立異，向權(quán)威挑戰(zhàn)，敢于提出假設(shè) 1964年，HM，Temin提出RNA可以作為模版，逆向產(chǎn)生DNA 心臟是泵血器官也是分泌器官2.抓住苗頭，逐步深入 新生物活性多肽: 生物學(xué)特性 生物學(xué)效應(yīng) 受體 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑 病理生理意義降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）與高血壓

11、： CGRP是否與高血壓發(fā)生有關(guān)？自發(fā)性高血壓大鼠與原發(fā)性高血壓患者CGRP濃度降低，在高血壓動物，耗竭CGRP可加劇血壓升高 高血壓時(shí)血中CGRP降低原因？辣椒素受體配體（調(diào)節(jié)CGRP的合成與釋放）的轉(zhuǎn)運(yùn)體活性降低 轉(zhuǎn)運(yùn)體活性降低的原因？內(nèi)源性一氧化氮合酶抑制物濃度升高 促進(jìn)內(nèi)源性CGRP合成與釋放的化合物是否能降壓作？吳茱萸次堿原發(fā)性高血壓患者血壓與CGRP變化SHR與2K1C大鼠血壓與CGRP的變化(Li D, et al., J Hypertens, 2009)SHR與2K1C大鼠DRG中，-CGRPmRNA表達(dá)的改變 （Real-Time PCR）CGRPmRNA的表達(dá)SHR與2K1

12、C大鼠血漿CGRP與AEA濃度的變化SHR，2K1C AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體活性變化(淋巴細(xì)胞)花生四烯酸乙醇胺(AEA)為辣椒素受體（VR1）的內(nèi)源性配體，調(diào)節(jié)CGRP釋放。SHR CGRP濃度降低是否與AEA水平有關(guān)？AEA需在AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體作用下進(jìn)入膜內(nèi)（VR1結(jié)合位點(diǎn)在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)），才能發(fā)揮作用。CGRP濃度降低是否與AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體活性降低有關(guān)？SHR，2K1C血漿中ADMA與NO水平變化ADMA降低AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體活性AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體活性降低的原因（NO/ADMA）一氧化氮合酶抑制劑(ADMA)降低AEA轉(zhuǎn)運(yùn)體活性CGRP與高血壓ADMAAEA轉(zhuǎn)運(yùn)體活性AEA激動VR1CGRP合成與釋放高血壓發(fā)生發(fā)展CG

13、RP介導(dǎo)吳茱萸次堿抗高血壓連續(xù)口服吳茱萸次堿對苯酚誘導(dǎo)的高血壓大鼠血壓的影響 J Hypertens. 2004; 23: 1819-1829吳茱萸次堿的降壓作用連續(xù)口服吳茱萸次堿對CGRP水平的影響背根神經(jīng)節(jié)血漿連續(xù)口服吳茱萸次堿對背根神經(jīng)節(jié)CGRPmRNA表達(dá)的影響-CGRP (318 bp) -actin (422 bp) -CGRP (264 bp) -actin (422 bp)-CGRPmRNA-CGRPmRNA連續(xù)口服吳茱萸次堿對脊髓后角CGRP水平的影響胸段腰段吳茱萸次堿增加腸系膜上動脈CGRP陽性感覺神經(jīng)纖維密度3 勤奮學(xué)習(xí)，刻苦鉆研 不斷擴(kuò)大知識面，了解新進(jìn)展，善于借鑒相鄰

14、學(xué)科的先進(jìn)成果。 生理學(xué)的成果（腎素-血管緊張素），毒理學(xué)的成果(巴西蛇毒成分的研究)，開闊了藥物化學(xué)家思路研究，研發(fā)抗高血壓藥卡托普利（ACEI） 慢性腎功能不全病人血漿一氧化氮合酶抑制物升高（解釋高血壓），引入研究動脈粥樣硬化內(nèi)皮功能不全一氧化氮 1980年，F(xiàn)urchgot發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞舒張因子（EDRF），即一氧化氮（nitric oxide，NO）， 1998年，獲諾貝爾獎(jiǎng)。 調(diào)節(jié)血管張力 抑制血小板聚集 抑制平滑肌細(xì)胞增殖 抗氧化 NO抗動脈粥樣硬化因子 NO生物利用降低的原因: L-精氨酸水平 L-精氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體活性 NO氧化滅活 NOS活性（輔因子） 內(nèi)源性NOS抑制物L(fēng)-精氨酸N

15、O瓜氨酸ADMANOS()內(nèi)源性一氧化氮合酶抑制物： 非對稱二甲基精氨酸（ADMA）HNNH2CCH2CH2CH2CHH2NCOOHL-arginineHNCH3H3CNADMANNHCH3CH3SDMANHCCH2CH2CH2CHH2NCOOHNHCCH2CH2CH2CHH2NCOOHNH內(nèi)源性一氧化氮合酶抑制物促動脈粥樣硬化形成依據(jù)：1、血管內(nèi)皮受損是AS形成的始動環(huán)節(jié) (Ross,1976) 2、NO舒張血管，抑制血小板聚集，抑制 平滑肌細(xì)胞增殖，NO內(nèi)源性抗AS因子 3、外源性NOS抑制劑（NO合成 ）促動脈 粥樣硬化形成工作假說：某些致AS因素ADMA血管內(nèi)皮受損促AS形成ApoE缺

16、陷小鼠血漿中ADMA的變化(Xiao H, et al., Life Sci, 2007)A: C57BL/6J (16 W)B: C57BL/6J + ADMA (16 W)C: ApoE/ (16 W)D: ApoE/ + ADMA (16 W)E: ApoE/ (20 W).高甘油三酯病人血漿ADMA水平的變化(Yang TL, Eur J Clin Pharmacol 2006)*#ADMA與疾病動脈粥樣硬化 (Yu XJ 1994)高血壓 (Perticone F 2005)外周動脈閉塞性疾病 (Boger RH 1997)糖尿病 (Fard A 2000)胰島素抵抗 (Chan NN 2002)衰老 (Bode-Boger SM 2005)老年癡呆（ 阿爾茨海默?。?Abe T 2001)阻塞性呼吸暫停綜合征 (Ohike Y 2005)勃起功能障礙 (Wierzbicki AS 2006)甲狀腺功能低下 （ Hermenegildo C J 2002）4 一絲不茍,艱苦奮斗 不畏艱險(xiǎn),百折不撓,拼搏犧牲的精神 (日本學(xué)者,單個(gè)神經(jīng)細(xì)胞記錄LTP，2年間記錄6個(gè)細(xì)胞) “只有在那崎嶇的道路上不畏艱險(xiǎn)攀登的人們,才有希望達(dá)到光輝的頂點(diǎn).”5.認(rèn)真觀察,實(shí)事求是嚴(yán)肅認(rèn)真的態(tài)