3,5二硝基水楊酸(DNS)法測(cè)定還原糖

1、3,5-二硝基水楊酸比色法標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作1.實(shí)驗(yàn)原理還原糖的測(cè)定是糖定量測(cè)定的基本方法。還原糖是指含有自由醛基或酮基的糖類(lèi)，單糖都是還原糖，雙糖和多糖不一定是還原糖，其中乳糖10257RP麥芽糖是還原糖，蔗糖和淀粉是非還原糖。COOE還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，3,5-二硝基水楊酸則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系，利用分光光度計(jì)，在540nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度值，查對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。由于多糖水解為單糖時(shí)，每斷裂一個(gè)糖苷鍵需加入一分子水，所以在計(jì)算多糖含量時(shí)應(yīng)乘以0.9。加熱還驚

2、糖堿tt2實(shí)驗(yàn)材料、主要儀器和試劑2.1實(shí)驗(yàn)材料主要用到這些實(shí)驗(yàn)材料：紅曲黃色素發(fā)酵液、鈉慮膜濃縮后紅曲黃色素液、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后紅曲黃色素液。2.2主要儀器本實(shí)驗(yàn)用到的實(shí)驗(yàn)儀器有:具塞玻璃刻度比色管：25mLxl9；燒杯：100mLx4；二角瓶：lOOmLxl；容量瓶：100mLx3,50mLx3；刻度吸管：1mLx4；2mLx3；lOmLxl；沸水?。?)冰??；8)扭力天平；9)UV2802SH型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)尤尼柯(上海)儀器有限公司；2.3實(shí)驗(yàn)試劑lmg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液準(zhǔn)確稱(chēng)取8OC烘至恒重的分析純葡萄糖lOOmg,置于小燒杯中，加少量蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)移到lOOmL容量瓶中，用蒸餾水定

3、容至lOOmL,混勻，4C冰箱中保存?zhèn)溆谩?,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑將6.3gDNS和262mL2MNaOH溶液，加到500mL含有l(wèi)85g酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加5g結(jié)晶酚和5g亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻后加蒸餾水定容至lOOOmL，貯于棕色瓶中備用。3實(shí)驗(yàn)步驟制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線取7支25mL具塞刻度試管編號(hào)，按表l分別加入濃度為lmg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液、蒸餾水和3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑，配成不同葡萄糖含量的反應(yīng)液。表1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制作管號(hào)1mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液蒸餾水(mL)DNS(mL)葡萄糖含量(mg)光密度值(OD540nm)(mL)0021.5010.21.81.50.220.41.61.50.430.61.41.50.640.81.21.50.851.01.01.51.061.20.81.51.2將各管搖勻，在沸水浴中準(zhǔn)確加熱5min，取出，冰浴冷卻至室溫，用蒸餾水定容至25mL，加塞后顛倒混勻，在分光光度計(jì)上進(jìn)行比色。調(diào)波長(zhǎng)540