食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中四聚乙醛殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

1、食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 植物源性食品中四聚乙醛殘留量的測(cè)定 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了植物源性食品中四聚乙醛殘留量的液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于植物源性食品中四聚乙醛農(nóng)藥殘留量的測(cè)定。規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB 2763 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法原理試樣中的四聚乙醛用乙腈提取，提取液經(jīng)分散介質(zhì)吸附凈化，用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定，外標(biāo)法定量。材料與試劑除另有說(shuō)明外，在分

2、析中僅使用分析純?cè)噭┖虶B/T 6682中規(guī)定的一級(jí)水。試劑乙腈（CH3CN， CAS號(hào)：75-05-8）：色譜純。甲醇（CH3OH，CAS號(hào)：67-56-1）：色譜純。甲酸（HCOOH，CAS號(hào)：64-18-6）：色譜純。乙酸銨（CH3COONH4，CAS號(hào)：631-61-8）：色譜純。氯化鈉（NaCl，CAS號(hào)：12125-02-9）。無(wú)水硫酸鎂（MgSO4，CAS號(hào)：7487-88-9）。溶液配制乙酸銨溶液（5 mol/L）：準(zhǔn)確稱取385.4 g乙酸銨溶解于適量水中，用水定容至1000 mL，搖勻。甲酸/乙酸銨溶液（1+0.05+998.95）：量取1 mL甲酸和0.05 mL乙酸銨溶

3、液（4.2.1）加入998.95mL水中，搖勻。標(biāo)準(zhǔn)品四聚乙醛（C8H16O4，CAS號(hào)：108-62-3）標(biāo)準(zhǔn)品，純度95%。標(biāo)準(zhǔn)溶液配制四聚乙醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000 mg/L）：準(zhǔn)確稱取四聚乙醛標(biāo)準(zhǔn)品10.0mg于50 mL燒杯中，用乙腈溶解后轉(zhuǎn)移到10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻，放置于-18避光保存，有效期6個(gè)月。四聚乙醛標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（10 mg/L）：準(zhǔn)確吸取1 mL四聚乙醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液于100 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，搖勻，放置于04冰箱，有效期1個(gè)月。材料N-丙基乙二胺（PSA）：40m 60 m。石墨化炭黑（GCB）：120m 400m。十八烷基鍵合硅膠（C

4、18）：50m。濾膜：0.22 m，有機(jī)系。儀器和設(shè)備液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。電子天平：感量 0.000 1 g、感量 0.0 1 g。組織搗碎機(jī)。小型粉碎機(jī)。高速均質(zhì)器：轉(zhuǎn)速不低于15000 r/min。離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于15000 r/min。渦旋振蕩器。離心管（聚四氟乙烯）：10 mL、50 mL和100 mL。試樣制備蔬菜、水果和食用菌樣品按相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)取一定量，取樣部位按GB 2763規(guī)定執(zhí)行。對(duì)于個(gè)體較小的樣品，取樣后全部處理；對(duì)于個(gè)體較大的基本均勻樣品，可在對(duì)稱軸或?qū)ΨQ面上分割或切成小塊后處理；對(duì)于細(xì)長(zhǎng)、扁平或組分含量在各部分有差異的樣品，可在不同部位切取小

5、片或截成小段或處理；取后的樣品將其切碎，充分混勻，用四分法取樣或直接放入組織搗碎機(jī)中搗碎成勻漿。勻漿放入聚乙烯容器中。取谷類樣品500g，粉碎后使其全部可通過(guò)425m的標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)篩，放入聚乙烯瓶或袋中。取油料作物、茶葉、堅(jiān)果和香辛料樣品各500g，粉碎后充分混勻，放入聚乙烯瓶或袋中。 植物油類樣品攪拌均勻。試樣于-16-20條件下保存。分析步驟提取蔬菜、水果、食用菌類稱取10 g（精確至0.01 g）試樣于100 mL離心管中，參見(jiàn)附錄A補(bǔ)水，靜置10 min，然后加入10 mL乙腈（4.1.1），用高速均質(zhì)器以15 000 r/min勻漿提取2min后，加入2 g氯化鈉（4.1.4），渦旋振蕩1

6、 min，以5000 r/min離心5 min，待凈化。谷物、油料、堅(jiān)果、植物油類稱取5 g（精確至0.01 g）試樣于100 mL離心管中，參見(jiàn)附錄A補(bǔ)水，靜置10min，然后加入10 mL乙腈（4.1.1），渦旋振蕩2 min后，加入2 g氯化鈉（4.1.4），渦旋振蕩1 min，以5000 r/min離心5 min，待凈化。茶葉、香辛料類稱取2 g（精確至0.01g）試樣于100 mL離心管中，參見(jiàn)附錄A補(bǔ)水，靜置10 min，然后加入10 mL乙腈（4.1.1），冰浴超聲15 min后，以5000 r/min離心5 min，上清液全部轉(zhuǎn)入另一只預(yù)先裝有2 g氯化鈉（4.1.4）的50

7、mL離心管中，殘?jiān)?0 mL乙腈（4.1.1）再提取一次，合并兩次提取的上清液，渦旋振蕩1 min，以5000 r/min離心5 min，待凈化。凈化淺色蔬菜、水果、食用菌、谷物、油料、堅(jiān)果、植物油、香辛料準(zhǔn)確吸取2 mL提取液于稱有100 mg PSA（4.5.1）、100 mg C18（4.5.3）和300 mg無(wú)水硫酸鎂（4.1.5）的10 mL離心管中，蓋上蓋子，渦旋1 min，以5000 r/min離心5 min，取上清液過(guò)0.22 m有機(jī)系濾膜（4.5.4），待測(cè)。深色蔬菜、茶葉準(zhǔn)確吸取2mL提取液于稱有100 mg PSA（4.5.1）、100 mg GCB（4.5.2）、10

8、0 mg C18（4.5.3）和300 mg無(wú)水硫酸鎂（4.1.5）的10 mL離心管中，蓋上蓋子，渦旋1 min，以5000 r/min離心5 min，取上清液過(guò)0.22 m有機(jī)系濾膜（4.5.4），待測(cè)。儀器參考條件液相色譜參考條件a) 色譜柱：C18，50 mm3.0 mm，粒徑1.8 m，或相當(dāng)者；b) 流動(dòng)相：A為0.1%甲酸-0.25mM乙酸銨溶液，B為乙腈，梯度洗脫程序見(jiàn)表1； c) 流速：0.4 mL/min；d) 柱溫：40C；e) 進(jìn)樣體積：2 L。表1 流動(dòng)相及梯度洗脫條件（VA+VB）時(shí)間minVAVB090102802034060510907010099010質(zhì)譜參考

9、條件a) 離子源類型：ESI；b) 毛細(xì)管電壓：2.5 kv；c) 干燥氣：氮?dú)?，流速?60 L/h，溫度350 ；d) 碰撞氣類型：氮?dú)?；e) 掃描方式：正離子掃描；f) 檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），監(jiān)測(cè)條件見(jiàn)表2。表2 四聚乙醛的保留時(shí)間和多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）的條件化合物保留時(shí)間min定性離子對(duì)定量離子對(duì)錐孔電壓V碰撞能量V四聚乙醛3.1194/62；194/45194/62702；30標(biāo)準(zhǔn)工作曲線將四聚乙醛標(biāo)準(zhǔn)中間溶液用空白提取液稀釋成質(zhì)量濃度為0.001mg/L、0.005 mg/L、0.01 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L和0.5 mg/L的系列基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液

10、，供液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定。以四聚乙醛質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，其相應(yīng)的峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求回歸方程和相關(guān)系數(shù)?；|(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。定性及定量保留時(shí)間被測(cè)試樣品中四聚乙醛色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間相比較，相對(duì)誤差應(yīng)在2.5%之內(nèi)。定量離子、定性離子及子離子豐度比在相同實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí)，如果檢出的色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)樣品相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，目標(biāo)化合物的質(zhì)譜定性離子必須出現(xiàn)，至少應(yīng)包括一個(gè)母離子和一個(gè)子離子，而且同一檢測(cè)批次，對(duì)同一化合物，樣品中目標(biāo)化合物的子離子的相對(duì)豐度比與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液相比，其相對(duì)偏差不超過(guò)表3規(guī)定的范圍，

11、則可判斷樣品中存在四聚乙醛。表3 定性時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度50%20%至50%10%至20%10%允許相對(duì)偏差20%25%30%50%測(cè)定將基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和待測(cè)溶液分別注入液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中，以保留時(shí)間和定性離子定性，試樣中四聚乙醛質(zhì)量濃度應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)工作曲線質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，采用外標(biāo)法定量?？瞻自囼?yàn)除不加試樣外，采用完全相同的步驟進(jìn)行平行操作。結(jié)果計(jì)算試樣中四聚乙醛殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，單位以毫克每千克(mg/kg)表示，按公式（1）計(jì)算：（1）式中：試樣中四聚乙醛的殘留量，單位為毫克每千克（mg/ kg）；A樣溶液中四聚乙醛的峰面積；As農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液中四聚乙醛的峰面積

12、；標(biāo)準(zhǔn)溶液中四聚乙醛的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升（mg/ L）；V提取液的總體積，單位為毫升（mL）；m試樣的質(zhì)量，單位為克（g）；計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留兩位有效數(shù)字，當(dāng)結(jié)果大于1 mg/kg時(shí)保留三位有效數(shù)字。精密度在重復(fù)性條件下，兩次獨(dú)立測(cè)定的結(jié)果差不大于重復(fù)性限（r），重復(fù)性限（r）的數(shù)據(jù)為：含量為0.01 mg/kg時(shí)，重復(fù)性限（r）為0.00236；含量為0.1 mg/kg時(shí)，重復(fù)性限（r）為0.0231；含量為1.0 mg/kg時(shí)，重復(fù)性限（r）為0.185。在再現(xiàn)性條件下，兩次獨(dú)立測(cè)定的結(jié)果差不大于再現(xiàn)性限（R），再現(xiàn)性限（R）的數(shù)據(jù)為：

13、含量為0.01 mg/kg時(shí)，再現(xiàn)性限（R）為0.00306；含量為0.1 mg/kg時(shí)，再現(xiàn)性限（R）為0.0473；含量為1.0 mg/kg時(shí)，再現(xiàn)性限（R）為0.375。其他本方法定量限為0.01 mg/kg。圖譜圖1 0.01mg/L四聚乙醛標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖附錄A（資料性附錄）所選基質(zhì)含水量、稱樣量及提取前補(bǔ)水量信息表表A.1 所選基質(zhì)含水量、稱樣量及提取前補(bǔ)水量信息表基質(zhì)名稱含水量%稱樣量g提取前補(bǔ)水量g桃90101.0梨85101.5蘋果85101.5草莓90101.5葡萄80102.0柑橘85101.5菜豆75102.5黃瓜95100.5花椰菜75102.5西蘭花75102.5大白菜95100.5茄子9010