細胞融合與單克隆抗體制備

1、關(guān)于細胞融合和單克隆抗體制備第一張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月考綱要求2.2.2細胞融合與單克隆抗體 細胞融合與單克隆抗體 ： 對所列知識點要知道其含義，能夠在試題所給予的相對簡單的情境中識別和使用它們。： 理解所列知識和其他相關(guān)知識之間的聯(lián)系和區(qū)別，并能在較復(fù)雜的情境中綜合運用其進行分析、判斷、推理和評價。第二張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月回顧： 1、抗體的化學(xué)本質(zhì)？ 2、抗體由什么細胞產(chǎn)生？ 抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。 B淋巴細胞（漿細胞）產(chǎn)生抗體。第三張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月小資料：2010年

2、全球治療用單克隆抗體藥物的銷售總額達到440億美元，如果加上100億美元的單抗診斷和研究試劑，單抗藥物的市場總量達到550億美元。2011年單抗藥物的市場總量已經(jīng)達到628億美元。到2015年，全球單克隆抗體藥銷售額達980億美元。我國的單克隆抗體藥物從無到有，并且在我國醫(yī)藥市場發(fā)揮越來越重要的作用。目前我國單抗市場規(guī)模每年以50%以上的速度遞增。 準(zhǔn)確識別各種抗原物質(zhì)，并與特異性結(jié)合，可以起到診斷、治療疾病的效果。第四張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 把某種抗原反復(fù)注射到動物體內(nèi)，然后從動物血清中分離出所需抗體。漿細胞 產(chǎn)量低，純度低，且抗體的特異性差?；仡欝w液免疫過程思考1：傳統(tǒng)

3、的生產(chǎn)抗體方法是？思考2：用該方法生產(chǎn)抗體有什么缺點？第五張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月1個B細胞 B細胞群 大量專一抗體 1.克隆單一的B淋巴細胞，形成B細胞群，需要用到什么技術(shù)？2.對B細胞進行克隆化培養(yǎng)可行嗎？為什么？3.哪種細胞可以大量增殖呢？4.如何獲得既能產(chǎn)生專一抗體，又能無限增殖的細胞呢？如何制備純度高、特異性強的抗體呢？只能分泌一種特異性抗體設(shè)計方案1：單克隆抗體：由單一B細胞克隆產(chǎn)生的高度專一、僅針對某一特定抗原的抗體。 第六張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月雜交瘤細胞動物細胞培養(yǎng)技術(shù)誘導(dǎo)細胞融合需要什么技術(shù)？骨髓瘤細胞 +一種特定B細胞大量的化學(xué)性質(zhì)單一

4、的抗體設(shè)計方案2：既能分泌抗體又能無限增殖第七張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月細胞膜的流動性滅活病毒、PEG、電激等誘導(dǎo)的手段？原理？動物細胞融合融合成功的標(biāo)志：細胞核融合第八張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合融合原理融合的方法誘導(dǎo)方法用途細胞膜的流動性、細胞的全能性細胞膜的流動性去壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細胞分散后誘導(dǎo)細胞融合物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒獲得雜種植株制備單克隆抗體第九張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月單克隆抗體的制備第十張，PPT共二十六頁

5、，創(chuàng)作于2022年6月注射抗原B細胞骨髓瘤細胞融合注射抗原的目的是什么？單克隆抗體的制備誘導(dǎo)產(chǎn)生相應(yīng)的效應(yīng)B細胞第十一張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月誘導(dǎo)細胞融合后，培養(yǎng)基中有幾類細胞？B淋巴細胞B淋巴細胞B淋巴細胞B淋巴細胞骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞（雜交瘤細胞）單克隆抗體的制備注射抗原B細胞骨髓瘤細胞融合第十二張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月雜交瘤細胞 資料分析1：細胞內(nèi)DNA復(fù)制有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。B淋巴細胞中有這兩條DNA合成途徑，但體外培養(yǎng)時一般不會分裂增殖。鼠骨髓瘤細胞中沒有S途徑，但能不斷分裂增殖。多種雜交瘤細胞思考：請

6、根據(jù)資料設(shè)計方案選出雜交瘤細胞。選出雜交瘤細胞都能產(chǎn)生同一種抗體嗎？為什么？ 方案：選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)（即加入氨基嘌呤） 結(jié)果：雜交瘤細胞第十三張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月24孔板 資料分析2：（1）多孔細胞培養(yǎng)板：將細胞培養(yǎng)液稀釋后，轉(zhuǎn)移到多孔細胞培養(yǎng)板上，使每孔細胞不超過一個，通過培養(yǎng)讓其增殖。（2）抗體能夠特異性識別抗原并與之結(jié)合。思考：請根據(jù)資料設(shè)計方案選出能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細胞。方法：克隆化培養(yǎng)+抗體檢測結(jié)果：能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細胞第十四張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月多種雜交瘤細胞選擇性培養(yǎng)基 篩選1專一抗體檢驗陽性克隆化培養(yǎng) 篩選2單克隆抗體的制備產(chǎn)生

7、專一抗體的雜交瘤細胞歸納提升：制備單克隆抗體過程中兩次篩選的方法、目的？第十五張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月多種雜交瘤細胞選擇性培養(yǎng)基 篩選1專一抗體檢驗陽性克隆化培養(yǎng)單克隆抗體 篩選2培養(yǎng)雜交瘤細胞的方法有哪兩種？單克隆抗體的制備特異性強，靈敏度高，并可大量制備。產(chǎn)生專一性抗體的雜交瘤細胞第十六張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月1、作為診斷試劑2、用于治療疾病和運載藥物準(zhǔn)確、高效、簡易、快速 把抗癌細胞的單克隆抗體與藥物相結(jié)合，制成“生物導(dǎo)彈”。應(yīng)用主要有：單克隆抗體的制備“生物導(dǎo)彈” 單克隆抗體藥物（如同位素標(biāo)記單克隆抗體，可診斷腫瘤、心血管畸形等）第十七張，PPT共二

8、十六頁，創(chuàng)作于2022年6月構(gòu)建概念模型1.完成學(xué)案中單克隆抗體的制備過程流程圖 分組展示第十八張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月1.背誦記憶以下問題，同位間相互檢測（1）為何要給小鼠注射抗原？獲取的B淋巴細胞只有一種嗎？（2）制備單克隆抗體時，為什么要選用B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞？（3）如何誘導(dǎo)誘導(dǎo)細胞融合？細胞融合后，培養(yǎng)基中有幾類細胞？（4）單克隆抗體的制備過程中兩次篩選方法、目的分別是什么 ？ （5）雜交瘤細胞的特點？單克隆抗體的優(yōu)點？（6）雜交瘤細胞的培養(yǎng)方法有哪兩種？（7）制備過程采用了哪些動物細胞工程技術(shù)手段？（8）單克隆抗體的應(yīng)用？記憶整合第十九張，PP

9、T共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月思考：1.本過程利用了哪些原理？免疫原理，細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理2.為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B細胞融合？ 雜交瘤細胞，繼承了雙親細胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體3.兩次篩選的方法和目的？（1）用選擇性培養(yǎng)基，選出多種雜交瘤細胞；（2）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，選出能產(chǎn)生特定（單一或相應(yīng)）抗體的雜交瘤細胞。4.單克隆抗體的優(yōu)點特異性強，靈敏度高、可以大量制備第二十張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月鞏固訓(xùn)練1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗

10、體，與骨髓瘤細胞融合的是 A.經(jīng)過免疫的B淋巴細胞 B.沒經(jīng)過免疫的T淋巴細胞C.經(jīng)過免疫的T淋巴細胞 D.沒經(jīng)過免疫的淋巴細胞A2.動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較中，正確的是A.誘導(dǎo)融合的方法完全相同 B.所用的技術(shù)手段基本相同 C. 操作步驟基本相同 D. 都能形成雜種細胞 D3. 單克隆抗體制備過程中培育的雜交細胞是A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞與肝細胞融合 B.由小鼠一個B淋巴細胞誘導(dǎo)融合而成 C.由小鼠一個B淋巴細胞與肌瘤細胞誘導(dǎo)融合而成 D.由小鼠一個B淋巴細胞與骨髓瘤細胞誘導(dǎo)融合而成 D第二十一張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月變式訓(xùn)練1、完成步步高243頁第2題2

11、.單克隆抗體的特點是特異性強、靈敏度高、可以大量制備，已被廣泛應(yīng)用于疾病的診斷和治療。用H7N9病毒制備單克隆抗體的流程如下圖所示：第二十二張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月2014新課標(biāo)，40某研究者用抗原(A)分別免疫3只同種小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后測定各小鼠血清抗體的效價(能檢測出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù))，結(jié)果如下圖所示。若要制備雜交瘤細胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細胞(染色體數(shù)目為40條)，并將該細胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細胞(染色體數(shù)目為60條)按一定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導(dǎo)細胞融合，經(jīng)篩選培養(yǎng)及抗體檢測，得到不斷分泌抗A抗體的雜交

12、瘤細胞。體驗高考1、完成步步高244頁第3題第二十三張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6月回答下列問題：(1)制備融合所需的B淋巴細胞時，所用免疫小鼠的血清抗體效價需達到16 000以上，則小鼠最少需要經(jīng)過_次免疫后才能有符合要求的。達到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細胞的是_小鼠，理由是_。(2)細胞融合實驗完成后，融合體系中除含有未融合的細胞和雜交廇細胞外，還含有_，體系中出現(xiàn)多種類型細胞的原因是_。(3)雜交瘤細胞中有_個細胞核，染色體數(shù)目最多是_條。(4)未融合的B淋巴細胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是_。第二十四張，PPT共二十六頁，創(chuàng)作于2022年6