藥物分析實(shí)驗(yàn)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專心-專注-專業(yè)專心-專注-專業(yè)精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專心-專注-專業(yè)藥物分析實(shí)驗(yàn)?zāi)夸浺?、基本知識與基本技能（一）藥物分析的性質(zhì)與任務(wù)（二）藥品檢驗(yàn)工作的基本程序（三）計(jì)量器具的檢定（四）藥物分析數(shù)據(jù)的處理（五）藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法的驗(yàn)證（六）藥典基本知識二、驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一 葡萄糖的一般雜質(zhì)檢查實(shí)驗(yàn)二 醋酸可的松中其它甾體的檢查實(shí)驗(yàn)三 藥物的特殊雜質(zhì)檢查實(shí)驗(yàn)四 藥物的鑒別與區(qū)別實(shí)驗(yàn)五 雙相滴定法測定苯扎溴銨溶液的含量實(shí)驗(yàn)六 凱氏定氮法測定干酵母片的含量實(shí)驗(yàn)七 非水堿量法測定硫酸奎尼丁的含量實(shí)驗(yàn)八 溴酸鉀法測定異煙肼片的含量實(shí)驗(yàn)九 磺胺嘧

2、啶的重氮化滴定實(shí)驗(yàn)十 酸性染料比色法測定硫酸阿托品注射液的含量實(shí)驗(yàn)十一 硅鎢酸重量法測定維生素B1片的含量實(shí)驗(yàn)十二 差示分光光度法測定苯巴比妥片的含量實(shí)驗(yàn)十三 三點(diǎn)校正-紫外分光光度法測定維生素AD膠丸中維生素A的含量實(shí)驗(yàn)十四 氣相色譜法測定維生素E片劑的含量實(shí)驗(yàn)十五 高效液相色譜法測定丙酸睪酮注射液的含量實(shí)驗(yàn)十六 復(fù)方乙酰水楊酸片中三種成分的含量測定實(shí)驗(yàn)十七 雙波長分光光度法測定復(fù)方制劑的含量實(shí)驗(yàn)十八 胃蛋白酶片的含量測定實(shí)驗(yàn)十九 尿中咖啡酸的比色分析實(shí)驗(yàn)二十 尿中異煙肼及其代謝物乙酰異煙肼的比色測定實(shí)驗(yàn)二十一 血清中氨茶堿的雙波長分光光度法測定實(shí)驗(yàn)二十二 血清中茶堿的高效液相色譜分析實(shí)驗(yàn)二

3、十三 血漿中阿司匹林的高效液相色譜測定實(shí)驗(yàn)二十四 唾液中對乙酰氨基酚濃度的比色測定三、綜合性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一 阿司匹林及其制劑的質(zhì)量分析(一) 阿司匹林原料藥(二) 阿司匹林腸溶片 (三) 阿司匹林栓 實(shí)驗(yàn)二 對乙酰氨基酚和對乙酰氨基酚片的質(zhì)量分析 (一) 對乙酰氨基酚原料藥（二）對乙酰氨基酚片實(shí)驗(yàn)三 鹽酸普魯卡因和鹽酸普魯卡因注射液的質(zhì)量分析（一）鹽酸普魯卡因原料藥 （二）鹽酸普魯卡因注射液 四、設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一 藥物的鑒別實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)二 藥物的特殊雜質(zhì)檢查實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)三 藥物滴定分析實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)四 藥物紫外定量分析實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)五 藥物的色譜定量分析實(shí)驗(yàn)五、附錄附錄一 中國藥典2005版 （二部）凡例附錄二 藥品

4、雜質(zhì)分析指導(dǎo)原則附錄三 藥品檢驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)匯編中有關(guān)樣品和取樣的規(guī)定附錄三 填寫檢驗(yàn)結(jié)果和檢驗(yàn)報(bào)告書的要求一、藥物分析的基本知識與基本技能（一）藥物分析的性質(zhì)與任務(wù)藥物分析是藥學(xué)專業(yè)的一門主要專業(yè)課程。本課程旨在培養(yǎng)學(xué)生具有強(qiáng)烈的藥品質(zhì)量觀念和具備從事藥品質(zhì)量研究及質(zhì)量控制的基本理論知識和基本操作技能。藥物分析學(xué)是一門研究藥品的組成、理化性質(zhì)、真?zhèn)舞b別、純度檢查及含量測定的一門方法學(xué)科。藥物分析學(xué)是整個藥學(xué)科學(xué)領(lǐng)域中一個重要的組成部分，其目的是為了控制藥物的質(zhì)量，保證用藥的安全、有效、合理。藥物分析是運(yùn)用物理學(xué)的、化學(xué)的、物理化學(xué)的、生物化學(xué)的方法和技術(shù)來研究化學(xué)結(jié)構(gòu)已經(jīng)明確的合成藥物、天然藥物

5、、生化藥物及其制劑的質(zhì)量控制問題。為了全面控制藥品質(zhì)量，還要與生產(chǎn)單位緊密配合，積極從事藥物生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制，從而發(fā)現(xiàn)問題、提高藥品質(zhì)量。同時也要與藥品供應(yīng)部門密切協(xié)作，考察藥物貯存、使用過程中的質(zhì)量穩(wěn)定性問題，以改進(jìn)藥物的貯存條件和方法?？梢?，藥品的質(zhì)量控制問題不是某一個單位、某一個部門的，也不是某一學(xué)科可以單獨(dú)完成的，它涉及到藥品的研究、生產(chǎn)、供應(yīng)、使用等多個環(huán)節(jié)，而藥物分析則是其中最重要的一個方面。藥物分析的主要任務(wù)包括兩個方面:一是藥品的常規(guī)檢驗(yàn)工作，如藥物成品的化學(xué)檢驗(yàn)、藥物生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制、藥物貯存過程的質(zhì)量考察等。二是體內(nèi)藥物分析工作，如測定藥物在生物材料中的藥物濃度，以了解

6、藥物進(jìn)在體內(nèi)吸收、分布、代謝、消除等動力學(xué)過程，為安全合理用藥提供信息。（二）藥品檢驗(yàn)工作的基本程序1取樣取樣是從一批產(chǎn)品中按取樣規(guī)則，抽取出少量樣品進(jìn)行分析。取樣應(yīng)具有科學(xué)性、真實(shí)性和代表性，不然就失去了檢驗(yàn)的意義。生產(chǎn)規(guī)模的固體原料藥的取樣，須采用取樣探子取樣。取樣量要依據(jù)產(chǎn)品數(shù)量的多少而有所不同，樣品取出后應(yīng)混合均勻。有關(guān)樣取樣的規(guī)定見本書藥物分析部分附錄三。鑒別 鑒別就是依據(jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)來進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)、測定理化常數(shù)、光譜特征及色譜特征以判斷藥物的真?zhèn)?。藥物的鑒別不能由某一項(xiàng)試驗(yàn)就能完成，而是要采用一組（二個或幾個）試驗(yàn)項(xiàng)目全面評價一個藥物，力求使結(jié)論正確無誤。選擇鑒別方法應(yīng)

7、以專屬性強(qiáng)、靈敏度高、方法簡便、結(jié)果準(zhǔn)確為原則。3.檢查藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢查項(xiàng)主要是檢查藥物的純度，即檢查藥物在生產(chǎn)和貯存過程中引入的雜質(zhì)是否超過了限量。藥物在不影響療效及人體健康的原則下，是可以允許微量的雜質(zhì)存在的；但其量必須在藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定之內(nèi)。通常按照藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的項(xiàng)目進(jìn)行“限度檢查”，就是判斷藥物的純度是否符合標(biāo)準(zhǔn)的限量規(guī)定要求，所以也可稱為純度檢查4.含量測定 含量測定是測定藥物中有效成分的量是否符合藥品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定要求。一般采用化學(xué)分析、物理化學(xué)分析方法或生物化學(xué)的方法來測定。 判斷一個藥物的質(zhì)量是否符合要求，必須綜合考慮藥物的性狀、理化常數(shù)、鑒別、檢查與含量測定的檢驗(yàn)結(jié)果。5.記錄

8、和報(bào)告檢驗(yàn)報(bào)告是對藥品質(zhì)量檢驗(yàn)結(jié)果的證明書，結(jié)論必須明確、肯定，有依據(jù)。藥品檢驗(yàn)記錄應(yīng)真實(shí)、簡明、完整、具體。字跡應(yīng)清晰、色調(diào)一致，不得任意涂改，若有寫錯，可在錯處劃上單線或雙線，而后在其旁邊改正重寫，并簽名蓋章。檢驗(yàn)記錄的內(nèi)容應(yīng)包括：藥名、批號、規(guī)格、數(shù)量、來源(取樣或送樣部門或單位)、取樣方法、外觀性狀、包裝情況、檢驗(yàn)?zāi)康?、取樣日期或收到日期、?bào)告日期；檢驗(yàn)項(xiàng)目、檢驗(yàn)依據(jù)、檢驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)、計(jì)算、結(jié)果、結(jié)論及處理意見；檢驗(yàn)人、復(fù)核人簽名或蓋章。復(fù)核后的記錄，屬內(nèi)容和計(jì)算錯誤的，由復(fù)核人負(fù)責(zé)；屬檢驗(yàn)錯誤的，由檢驗(yàn)人負(fù)責(zé)。（三）計(jì)量器具的檢定計(jì)量器具是指單獨(dú)或連同輔助設(shè)備一起用以進(jìn)行測量的器具。

9、計(jì)量器具的檢定是查明和確認(rèn)計(jì)量器具是否法定要求的程序。計(jì)量檢定人員利用測量標(biāo)準(zhǔn)，按照法定計(jì)量檢定的規(guī)程要求對計(jì)量器具的測試能力和可靠性進(jìn)行檢定，以考核和證明計(jì)量器具是否可供使用。國家對社會公用計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)器具，部門和企業(yè)、事業(yè)單位使用的最高計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)器具，以及用于貿(mào)易結(jié)算、安全保護(hù)、醫(yī)療衛(wèi)生、環(huán)境監(jiān)測方面的計(jì)量器具實(shí)行強(qiáng)制檢定。未按照規(guī)定申請檢定或者檢定不合格的，不得使用。實(shí)行強(qiáng)制檢定的計(jì)量器具的目錄和管理辦法，由國務(wù)院制定。規(guī)定以外的其他計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)器具和工作計(jì)量器具，使用單位應(yīng)當(dāng)自行定期檢定或者送其他計(jì)量檢定機(jī)構(gòu)檢定，縣級以上人民政府計(jì)量行政部門負(fù)責(zé)進(jìn)行監(jiān)督檢查。按照中華人民共和國依法管理的計(jì)量器具

10、目錄，進(jìn)行藥物分析實(shí)驗(yàn)時需要檢定的計(jì)量器具主要有：溫度計(jì)、酸度計(jì)、天平及砝碼、紫外可見分光光度計(jì)、紅外分光光度計(jì)、原子吸收分光光度計(jì)、旋光計(jì)、氣相色譜儀、高效液相色譜儀等。（四）藥物分析數(shù)據(jù)的處理藥品檢驗(yàn)過程中所測得的數(shù)據(jù)由于受分析方法、儀器、試劑,操作者及偶然因素的影響都不可能絕對準(zhǔn)確，總是存在一定的誤差。這就需要對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性作出合理的判斷并予以正確表達(dá)。1絕對誤差和相對誤差測量值和真實(shí)值之差稱為測量誤差。測量誤差可用兩種方法表示,即絕對誤差和相對誤差。絕對誤差是測量值與真實(shí)值之差，以測量值的單位為單位,可以是正值,也可以是負(fù)值。測量值越接近真實(shí)值,絕對誤差越??；反之,則越大。相對誤差

11、是以真實(shí)值的大小為為基礎(chǔ)來表示誤差值,他可反映誤差在測量值中所占的比例, 不受測量值單位的影響，實(shí)際工作中，常使用相對誤差。， 2系統(tǒng)誤差和偶然誤差根據(jù)誤差的性質(zhì), 誤差可分為系統(tǒng)誤差和偶然誤差兩大類。（1）系統(tǒng)誤差也叫可定誤差,它是由于某種確定的原因引起的,一般有固定的方向（正或負(fù)）和大小,重復(fù)測定時重復(fù)出現(xiàn)。根據(jù)系統(tǒng)誤差的來源,又可分為方法誤差、儀器誤差、試劑誤差及操作誤差等。方法誤差是由分析方法本身不完善或選用不當(dāng)所造成的。對分析方法誤差較大的分析方法必須尋找新的方法加以改正。試劑誤差是由于試劑不純而造成的誤差。試劑誤差可以通過更換試劑來克服,也可用“空白試驗(yàn)”的方法測知誤差的大小加以校

12、正。儀器誤差是由于儀器不夠準(zhǔn)確造成的誤差。儀器誤差可通過預(yù)先校正儀器,選用符合要求的儀器或求出其校正值加以克服。操作誤差是由于分析者操作不符合要求造成的誤差。操作誤差可通過作對照試驗(yàn)或經(jīng)請有經(jīng)驗(yàn)的分析人員校正而減免。（2）偶然誤差也稱不可定誤差或隨機(jī)誤差,它是由偶然的原因所引起的，其大小和正負(fù)都不固定，但多次測定就會發(fā)現(xiàn)絕對值大的誤差出現(xiàn)的概率小, 絕對值小的誤差出現(xiàn)的概率大,正、負(fù)偶然誤差出現(xiàn)的概率大致相同。所以，可通過增加平行測定的次數(shù),來減少測定的偶然誤差。3有效數(shù)字（1）有效數(shù)字在科學(xué)試驗(yàn)中,對于任一物理量的測定,其準(zhǔn)確度都是有一定限度的。測量值的記錄，必須與測量的準(zhǔn)確度相符合。在分析

13、工作中實(shí)際能測量到的數(shù)字稱為有效數(shù)字。在記錄有效數(shù)字時，規(guī)定只允許數(shù)的最末一位欠準(zhǔn)，而且只能上下差1。確定有效數(shù)字的位數(shù)，要根據(jù)測量所能達(dá)到的準(zhǔn)確度來考慮。所以，在記錄測量值時，一般只保留一位可疑數(shù)值，不可夸大。超過有效數(shù)字的數(shù)位再多，也不能提高結(jié)果可靠性，反而會給運(yùn)算帶來麻煩。從0到9的10個數(shù)字中，只有0既可以是有效數(shù)字，也可以是只作定位用的無效數(shù)字，其余的數(shù)都只能作有效數(shù)字。（2）有效數(shù)字的修約在數(shù)據(jù)處理時，各個測量值的有效數(shù)字位數(shù)可能不同，為便于運(yùn)算，應(yīng)按一定規(guī)則舍棄多余的尾數(shù)。舍棄多余的尾數(shù)，稱為有效數(shù)字的修約，其主要原則有:四舍六入五成雙測量值中被修約的那個數(shù)等于或小于4時舍棄,等

14、于或大于6時，進(jìn)位。等于5且5后無數(shù)時，若進(jìn)位后測量值的末位數(shù)成偶數(shù)，則進(jìn)位；若進(jìn)位后，測量值的末位數(shù)成奇數(shù)，則舍棄。若5后還有數(shù)，說明修約數(shù)比5大，宜進(jìn)位。只允許對原測量值一次修約至所需位數(shù)，不能分次修約。例如將2.15491修約為三位數(shù)，不能先修約成2.155后再修約成2.16,只能一次修約為2.15。運(yùn)算過程中，為了減少舍入誤差，可多保留一位有效數(shù)字（不修約），待算出結(jié)果后，再按修約規(guī)則，將結(jié)果修約至應(yīng)有的有效數(shù)字位數(shù)。在修約標(biāo)準(zhǔn)偏差值或其它表示不確定度時、修約的結(jié)果應(yīng)使準(zhǔn)確度的估計(jì)值變得更差一些，例如S0.2l3，若取兩位有效數(shù)字，宜修約為0.22,取一位則為0.3。（3）有效數(shù)字的運(yùn)

15、算法則在計(jì)算分析結(jié)果時，每個測量值的誤差都要傳遞到結(jié)果中去。必須根據(jù)誤差傳遞規(guī)律，按照有效數(shù)字運(yùn)算法則，合理取舍，才不致影響結(jié)果準(zhǔn)確度的表達(dá)。在做數(shù)學(xué)運(yùn)算時，有效數(shù)字的處理，加減法與乘除法不同。做加減法是各數(shù)值絕對誤差的傳遞，所以結(jié)果的絕對誤差必須與各數(shù)中絕對誤差最大的那個相當(dāng)。通常為了便于計(jì)算，可按照小數(shù)點(diǎn)后位數(shù)最少的那個數(shù)保留其它各數(shù)的位數(shù)，然后再相加減。在乘除法中,因是各數(shù)值相對誤差的傳遞，所以結(jié)果的相對誤差必須與各數(shù)中相對誤差最大的那個相當(dāng)。通常為了便于計(jì)算，可按照有效數(shù)字位數(shù)最少的那個數(shù)保留其它各數(shù)的位數(shù)，然后再相乘除。（五）藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法的驗(yàn)證藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證的目的是

16、證明采用的方法適合于相應(yīng)檢測要求。在建立藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證；在藥品生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時，則質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法也需進(jìn)行驗(yàn)證。需驗(yàn)證的內(nèi)容如下。1準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度系指用該方法測定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般用回收率（%）表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測試。（1）含量測定方法的準(zhǔn)確度 原料藥可用已知純度的對照品或供試器進(jìn)行測定，或用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一個方法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。制劑可用含已知量被測物的各組分混合物進(jìn)行測定。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進(jìn)行測定，或用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一個方法測定結(jié)果進(jìn)行比較。（

17、2）雜質(zhì)定量測定的準(zhǔn)確度 可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測定。如不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可用本法測定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較，如藥典標(biāo)準(zhǔn)方法或經(jīng)過驗(yàn)證的方法。在不能測得雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的響應(yīng)因子或不能測得對原料藥的相對響應(yīng)因子的情況下，可用原料藥的響應(yīng)因子。應(yīng)明確表明單個雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比（%）或面積比（%）。（3）數(shù)據(jù)要求 在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個測定結(jié)果進(jìn)行評價。例如，設(shè)計(jì)3個不同濃度，每個濃度各分別制備3份供試品溶液，進(jìn)行測定。應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率（%），或測定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差或可信限。2.精密度精密度系指在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻供

18、試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。含量測定和雜質(zhì)的定量測定應(yīng)考慮方法的精密度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）表示。(1)重復(fù)性 在相同條件下，由同一個分析人員測定所得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性。在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個測定結(jié)果進(jìn)行評價。例如，設(shè)計(jì)3個不同濃度，每個濃度各分別制備3份供試品溶液，進(jìn)行測定，或?qū)⑾喈?dāng)于100%濃度水平的供試品溶液，用至少測定6次的結(jié)果進(jìn)行評價。(2)中間精密度 在同一個實(shí)驗(yàn)，不同時間由不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果之間的精密度，稱為中間精密度。為考察隨機(jī)變動因素對精密度的影響，應(yīng)設(shè)計(jì)方案進(jìn)行中間精密度試驗(yàn)。變動因素為不同日期、不同分析人員、

19、不同設(shè)備。（3）重現(xiàn)性 在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測定結(jié)果之間的精密度，稱為重現(xiàn)性。法定標(biāo)準(zhǔn)采用的分析方法，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。例如，建立藥典分析方法時，通過協(xié)同檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果。協(xié)同檢驗(yàn)的目的、過程和重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗(yàn)用的樣品本身的質(zhì)量均勻性和貯存運(yùn)輸中的環(huán)境影響因素，以免影響重現(xiàn)性結(jié)果。（4）數(shù)據(jù)要求 均應(yīng)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差和可信限。3.專屬性專屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，采用的方法能正確測定出被測物的特性。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查和含量測定方法，均應(yīng)考察其專屬性。如方法不夠?qū)?，?yīng)采用多個方法予以補(bǔ)充。（1）鑒別反應(yīng) 反應(yīng)要求

20、能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分。不含被測成分的供試品，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，應(yīng)均呈負(fù)反應(yīng)。（2）含量測定和雜質(zhì)測定 色譜法和其他分離方法，應(yīng)附代表性圖譜，以說明方法的專屬性，并應(yīng)標(biāo)明諸成分在圖中的位置，色譜法中的分離度應(yīng)符合要求。在雜質(zhì)可獲得的情況下，對于含量測定，試樣中可加入雜質(zhì)或輔料，考察測定結(jié)果是否受干擾，并可與未加雜質(zhì)或輔料的試樣比較測定結(jié)果。對于雜質(zhì)測定，也可向試樣中加入一定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)之間能否得到分離。在雜質(zhì)降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可將含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣進(jìn)行測定；與另一個經(jīng)驗(yàn)證了的方法或藥典方法比較結(jié)果。用強(qiáng)光照射、高溫、高濕、酸（堿）水解或氧化的

21、方法進(jìn)行加速破壞，以研究可能的降解產(chǎn)物和降解途徑。含量測定方法應(yīng)比對二法的結(jié)果，雜質(zhì)檢查比對檢查的雜質(zhì)個數(shù)，必要時可采用光二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測，進(jìn)行峰純度檢查。4. 檢測限檢測限系指拭樣中被測物能被檢出的最低量。藥品的鑒別試驗(yàn)和雜質(zhì)檢查方法，均應(yīng)通過測試確定方法的檢測限。常用的方法如下：（1）非儀器分析目視法 用已知濃度的被測物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測出最低濃度或量。（2）信噪比法 用于能顯示基線噪聲的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比為31或21時相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。（3）數(shù)據(jù)要求 應(yīng)附測試圖譜

22、，說明測試過程和檢測限結(jié)果。5. 定量限定量限系指試樣中被測物能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)具一定準(zhǔn)確度和精密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物有定量測定方法研究時，應(yīng)確定方法的定量限。常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比為101時相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定定量限。6. 線性線性指是設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)被測定線性關(guān)系?？捎靡毁A備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列供試樣品的方法進(jìn)行測定，至少制備5份供試樣品。以測得的響應(yīng)信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。必要時，響應(yīng)信號可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計(jì)算。數(shù)

23、據(jù)要求 應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。7. 范圍范圍系指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定。原料藥和制劑含量測定，范圍應(yīng)為測試濃度的80%120%；制劑含量均勻度檢查，范圍應(yīng)為測試濃度的70%130%，根據(jù)劑型特點(diǎn)，如氣霧劑和噴霧劑，范圍可適當(dāng)放寬；溶出度或釋放度中的出量測定，范圍應(yīng)為限度的20%；如規(guī)定了限度范圍，則應(yīng)為下限的-20%至上限的+20%；雜質(zhì)測定，范圍應(yīng)根據(jù)初步實(shí)測，擬定為規(guī)定限度的20%。如果含量測定與雜質(zhì)檢查同時進(jìn)行，用百分歸一化法，則線性范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定限度的-20%至含

24、量限度（或上限）的+20%。8. 耐用性耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為使方法可用于提供常規(guī)檢驗(yàn)依據(jù)。開始研究分析方法時，就應(yīng)考慮其耐用性。如果測試條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫明。典型的變動因素有：被測溶液的穩(wěn)定性、樣品的提取次數(shù)、時間等。液相色譜法中典型的變動因素有：流動相的組成和pH值、不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱、柱溫、流速等。氣相色譜變動因素有：不同廠牌或批號的色譜柱、固定相、不同類型的擔(dān)體、柱溫、進(jìn)樣口和檢測器溫度等。經(jīng)試驗(yàn)，應(yīng)說明小的變動能否通過設(shè)計(jì)的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，以確保方法有效。附表 檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容 項(xiàng)目鑒別雜質(zhì)測定含量測定及溶出題 測定

25、內(nèi)容定量限度準(zhǔn)確度+精密度 重復(fù)性+ 中間精密度+專屬性+檢測限+定量限+線性+范圍+耐用性+ 已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度。如一種方法不夠?qū)?，可有其他分析方法予以補(bǔ)充。視具體情況予以驗(yàn)證。（六）藥典基本知識1藥典（pharmacopoeia） 藥典是一個國家記載藥品標(biāo)準(zhǔn)的法典，是國家管理藥品生產(chǎn)和實(shí)施質(zhì)量檢驗(yàn)的依據(jù)。藥典的重要特點(diǎn)體現(xiàn)在他的法定性和體例的規(guī)范化。法定性是藥典同其它法一樣，具有法律約束力。規(guī)范化是指全書按一定的體例進(jìn)行編排。 2藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（簡稱藥品標(biāo)準(zhǔn)）藥品標(biāo)準(zhǔn)是國家對藥品質(zhì)量、規(guī)格及檢驗(yàn)方法所作的技術(shù)規(guī)定，是藥品生產(chǎn)、供應(yīng)、使用和監(jiān)督管理部門共同遵循的法定依據(jù)。藥品

26、標(biāo)準(zhǔn)收載在藥典的正文部分，是藥典的主體內(nèi)容。我國現(xiàn)行的藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是國家藥品標(biāo)準(zhǔn)。國家藥品標(biāo)準(zhǔn)包括中華人民共和國藥典（簡稱中國藥典）、藥品注冊標(biāo)準(zhǔn)和其他藥品標(biāo)準(zhǔn)。國家藥品標(biāo)準(zhǔn)由國家藥典委員會負(fù)責(zé)制定和修訂，由國家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）頒布實(shí)施。 藥品檢驗(yàn)應(yīng)嚴(yán)格按照藥典規(guī)定的項(xiàng)目和方法進(jìn)行，只有符合藥品標(biāo)準(zhǔn)的藥品才是合格的藥品。生產(chǎn)、銷售和使用不符合國家藥品標(biāo)準(zhǔn)的藥品，均屬于違法行為。3中國藥典中華人民共和國藥典簡稱中國藥典，如用英文表示則為Chinese Pharmacopoeia （縮寫為Ch.P）。中國藥典由國家藥典委員會負(fù)責(zé)制定和修訂，由國家食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）頒布實(shí)施

27、。自1949年新中國建立后，國家藥典委員會先后共出版了8個版次（1963、1977、1985、1990、1995、2000、2005年版）的中國藥典。中國藥典除1953年版為一部和2005年版為三部外，其他版次均為二部。中國藥典2005年版為現(xiàn)行版本，于2005年1月出版發(fā)行，2005年7月1日起正式執(zhí)行。該版藥典首次將中國藥典分為三部，其中一部收載中藥材、中藥飲片及成方制劑；二部收載化學(xué)藥品、抗生素、生化藥品、放射性藥品及其制劑；第三部是將原中國生物制品規(guī)程并入藥典，單獨(dú)收載生物制品。中國藥典內(nèi)容包括凡例、正文、附錄和索引四個部分?！胺怖笔侵贫ê蛨?zhí)行藥典必須了解和遵循的規(guī)則。中國藥典的凡例

28、，除了說明書名與內(nèi)容編排外，并把一些與標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)的、共性的、需要明確的問題，以及采用的計(jì)量單位、符號與專門術(shù)語等，用條文加以規(guī)定，以避免在全書中重復(fù)說明。凡例的具體內(nèi)容見本書藥物分析部分附錄一。正文部分專門收載藥品或制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。藥品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容一般應(yīng)包括：法定名稱、結(jié)構(gòu)式、分子式和分子量、來源、性狀、鑒別、純度檢查、含量測定、類別、劑量、規(guī)格、貯藏、制劑等。正文品種收載的中文藥品名稱系按照中國藥品通用名稱收載的名稱及命名原則命名,中國藥典收載的中文藥品名稱均為法定名稱。英文名除另有規(guī)定外，均采用國際非專利藥品名(INN)。附錄是藥典的重要組成部分。中國藥典（2005年版）二部附錄包括：制

29、劑通則、一般鑒別試驗(yàn)、分光光度法、色譜法、有關(guān)理化常數(shù)測定法、有關(guān)滴定法及測定法、一般雜質(zhì)檢查法、有關(guān)檢查法及測定法、制劑檢查法及測定法、抗生素效價測定法及安全檢查法、升壓素生物測定法等測定法、放射性藥品檢定法、生物檢定統(tǒng)計(jì)法、試藥與滴定液、制藥用水、滅菌法、原子量表及指導(dǎo)原則等內(nèi)容。 中國藥典（2005年版）二部的索引分為兩種：一是中文索引（按漢語拼音順序排序）、二是英文名和中文名對照索引。 中國藥典除有中文的品名目次外，在書末還有漢語拼音索引和英文索引。4外國藥典介紹 目前世界上有38個國家編制了藥典，代表性的藥典是美國藥典、英國藥典、日本藥典和歐洲藥典。美國藥典的英文全稱是The Uni

30、ted States Pharmacopoeia（縮寫為USP）。美國國家處方集的英文全稱是The National Formulary(縮寫為NF)。為減少重復(fù)，方便使用，從1980年起，USP與NF合并為一冊出版，用USP-NF表示。美國藥典的現(xiàn)行版本是USP（29）-NF（24）版，2006年出版。 英國藥典的英文全稱是British Pharmacopoeia（縮寫為BP）。英國藥典有悠久的歷史，最早的藥典是1618年編寫的倫敦藥典，后又有愛丁堡藥典和愛爾蘭藥典。1864年合為英國藥典。英國藥典的現(xiàn)行版本為2005年版，簡寫為BP(2005)。 日本國藥典名稱是日本藥局方，英文縮寫為J

31、P。日本藥局方歷史也較悠久，1886年就出版了日本藥局方第一版。日本藥局方分為二部，一部包括凡例、制劑總則、一般試驗(yàn)方法（系指各類測定方法）和醫(yī)藥品各論（主要為化學(xué)藥品、抗生素、放射性藥品及各種制劑）。二部包括通則、生藥總則、制劑總則、一般試驗(yàn)方法和醫(yī)藥品各論（主要為生藥、生物制品、調(diào)劑用附加劑等）。日本藥局方現(xiàn)行版本是第15版，以JP（15）表示。 歐洲藥典的英文全稱是European Pharmacopoeia(縮寫為Ph. Eur.)。歐洲藥典由歐洲藥典質(zhì)量委員會編輯出版，有英文和法文兩種法定文本，對其成員國皆有法律約束力。實(shí)驗(yàn)一 葡萄糖的一般雜質(zhì)檢查一、實(shí)驗(yàn)要求1掌握一般雜質(zhì)檢查的項(xiàng)目

32、及雜質(zhì)限量計(jì)算方法。2掌握一般雜質(zhì)檢查的原理和方法。二、實(shí)驗(yàn)原理1酸堿度檢查是指用藥典規(guī)定的方法對藥物中的酸度、堿度及酸堿度等酸堿性雜質(zhì)進(jìn)行檢查。檢查時應(yīng)以新沸并放冷至室溫的水為溶劑。不溶于水的藥物，可用中性乙醇等有機(jī)溶劑溶解。常用的方法有酸堿滴定法，指示劑法以及pH值測定法。2氯化物檢查是指藥物中微量氯化物在硝酸溶液中與硝酸銀試液作用，生成氯化銀白色渾濁液，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液在相同條件下生成的氯化銀渾濁相比較，以判斷供試品中氯化物的限量Cl-+AgNO3AgCl3硫酸鹽檢查是指藥物中微量硫酸鹽與氯化鋇試液在酸性溶液中作用生成的白色渾濁液，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液與氯化鋇試液在相同的條件

33、下生成的渾濁比較，以判斷供試品中硫酸鹽的限量。SO+BaCI2BaSO44鐵鹽檢查是指藥物中三價鐵鹽在酸性溶液中與硫氰酸鹽試液生成紅色可溶性的硫氰酸鐵配離子，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液，用同法處理后進(jìn)行比色，以判斷供試品中三價鐵鹽的限量。Fe3+6SCN-Fe (SCN) 63-5重金屬檢查 是指重金屬（以鉛為代表）在弱酸性（pH33.5）溶液中與硫代乙酰胺或硫化鈉作用，生成黃色到棕黑色的硫化物混懸液，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同法處理后的顏色比較，以控制藥品中重金屬含量。CH3CSNH2CH3CONH2+H2SPb2+H2SPbS6砷鹽檢查（古蔡氏法）是利用金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥物中微量砷

34、鹽作用生成具揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙，產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所生成的砷斑比較，以判斷藥物中砷鹽的限量。AsO33-+3Zn+9H+AsH3+3Zn2+3H2OAsH3+2HgBr22HBr+AsH (HgBr)2 （黃色）AsH3+3HgBr23HBr+As (HgBr)3 （棕色）五價砷在酸性溶液中也能被金屬鋅還原為砷化氫，但生成砷化氫的速度較三價砷慢，故在反應(yīng)液中加入碘化鉀及酸性氯化亞錫將五價砷還原為三價砷，碘化鉀被氧化生成碘，碘又可被氯化亞錫還原為碘離子。AsO43+2I-+2H+AsO33-+I2+H2OAsO43-+Sn2+AsO33-+Sn4+H2OI2+Sn2

35、+2I-+Sn4+溶液中的碘離子，又可與反應(yīng)中產(chǎn)生的鋅離子生成穩(wěn)定的配離子，有利于生成砷化氫的反應(yīng)不斷進(jìn)行。4I-+Zn2+ZnI42-7熾灼殘?jiān)鼨z查在機(jī)藥物經(jīng)熾灼炭化，再加硫酸濕潤，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡后，于高溫（700800）熾灼至完全灰化，使有機(jī)物破壞分解變?yōu)閾]發(fā)性物質(zhì)逸出，殘留的非揮發(fā)性無機(jī)雜質(zhì)（多為金屬的氧化物或無機(jī)鹽類）稱為熾灼殘?jiān)?，或稱為硫酸鹽灰分。三、實(shí)驗(yàn)步驟1酸度取本品2g，加新沸過的冷水20ml溶解后，加酚酞指示液3滴與氫氧化鈉滴定液（0.02mol/L）0.2ml，應(yīng)顯粉紅色。2氯化物取本品0.60g，加水溶解使成25ml（溶解加顯堿性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸

36、10ml；溶液如不澄清，應(yīng)濾過；置50ml納氏比色管中，加水使成約40ml，搖勻，即得供試溶液。另取標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液（10gCl-/ml）6.0ml，置50ml納氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40ml，搖勻，即得對照溶液。于供試溶液與對照溶液中，分別加入硝酸銀試液1.0ml，用水稀釋使成50ml，搖勻，在暗處放置5分鐘，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察，比較，供試溶液不得比對照液更濃（0.01%）。3硫酸鹽取本品2.0g，加水溶解使成約40ml（溶液如顯堿性，可滴加鹽酸使成中性）；溶液如不澄清，應(yīng)濾過；置50ml納氏比色管中，加稀鹽酸2ml、搖勻，即得供試溶液。另取標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液（1

37、00gSO42-/ml）2.0ml，置50ml納氏比色管中，加水使成約40ml，加稀鹽酸2ml，搖勻，即得對照溶液，于供試溶液與對照溶液中，分別加入25%的氯化鋇溶液5ml，用水稀釋成50ml，充分搖勻，放置10分鐘，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察，比較，供試溶液不得比對照溶液更濃（0.01%）。4鐵鹽取本品2.0g，加水20ml溶解后，加硝酸3滴，緩緩煮沸5分鐘，放冷，加水稀釋使成45ml，加硫氰酸銨溶液（30100）3ml，搖勻，如顯色、與標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液2.0ml用同一方法制成的對照液比較，不得更深（0.001%）。5重金屬取25ml納氏比色管兩支，甲管中加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（10ug pb/m

38、l）2ml，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，加水稀釋成25ml。取本品4.0g置于乙管中，加水23ml溶解，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，若供試液帶顏色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其它無干擾的有色溶液，使之與乙管一致；再在甲乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液各2ml，搖勻，放置2分鐘，同置白紙上，自上向下透視，乙管中顯示的顏色與甲管比較，不得更深（含重金屬不得過百萬分之五）。6砷鹽取本品2.0g，置檢砷瓶中，加水5ml溶解后，加稀硫酸5ml與溴化鉀溴試液0.5ml，置水浴上加熱約20分鐘，使保持稍過量的溴存在，必要時，再補(bǔ)加溴化鉀溴試液適量，并隨時補(bǔ)充蒸散的水分，放冷，加鹽酸5ml與

39、水適量使成28ml，加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g，迅速將瓶塞塞緊（瓶塞上已置有醋酸鉛棉花及溴化汞試紙的檢砷管），并在2540的水浴中反應(yīng)45分鐘，取出溴化汞試紙，將生成的砷斑與標(biāo)準(zhǔn)砷溶液一定量制成的標(biāo)準(zhǔn)砷斑比較，顏色不得更深，含砷量不得過百萬分之一。標(biāo)準(zhǔn)砷斑制備：精密量取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（1g/ml）2ml，置另一檢砷瓶中，加鹽酸5ml與水21ml，照上述方法自“加碘化鉀試液5ml”起依法操作，即得標(biāo)準(zhǔn)砷斑。7熾灼殘?jiān)”酒?.0g，置已熾灼至恒重的坩堝中，精密稱定，緩緩熾灼至完全灰化，放冷至室溫，加硫酸0.51ml使?jié)駶?，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡后，在7

40、00800熾灼使完全灰化，移置干燥器內(nèi)，放冷至室溫，精密稱定后，再在700800熾灼至恒重，即得。所得熾灼殘?jiān)坏贸^0.1%。四、注意事項(xiàng)1比色或比濁操作，均應(yīng)在納氏比色管中進(jìn)行。選擇比色管時，應(yīng)注意樣品管與標(biāo)準(zhǔn)管的體積相等，玻璃色質(zhì)一致，管上刻度均勻，高低一致，如有差別，不得超過2mm。2樣品液與對照品液的操作應(yīng)遵循平行操作的原則，并應(yīng)注意按操作順序加入各種試劑。3比色、比濁前應(yīng)使比色管內(nèi)試劑充分混勻，然后將兩管同置于黑色或白色背景上，自上而下觀察。4砷鹽檢查時，取用的樣品管與標(biāo)準(zhǔn)管應(yīng)力求一致，管的長短，內(nèi)經(jīng)一定要相同，以免生成的色斑大小不同，影響比色。鋅粒加入后，應(yīng)立即將檢砷管蓋上，塞緊

41、，以免AsH3氣體逸出。5熾灼殘?jiān)鼤r，恒重的操作條件，如所用的干燥器、坩堝鉗、坩堝置于干燥器內(nèi)放置時間等，必須一致。五、問題與討論1一般雜質(zhì)檢查的主要項(xiàng)目有哪些？2比色、比濁操作應(yīng)遵循的原則是什么？3簡述古蔡氏法檢砷所加各個試劑的作用與操作注意點(diǎn)。4熾灼殘?jiān)某蓴￡P(guān)鍵是什么？恒重的概念和意義是什么？實(shí)驗(yàn)二 醋酸可的松中其它甾體的檢查一、實(shí)驗(yàn)要求1了解醋酸可的松中的特殊雜質(zhì)來源及其檢查意義。2掌握薄層色譜法檢查特殊雜質(zhì)的操作方法。二、實(shí)驗(yàn)原理甾體激素類藥物多是由甾體化合物經(jīng)結(jié)構(gòu)改造而來，因而可能帶來未反應(yīng)完的原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物、試劑和溶劑等雜質(zhì)。甾體化合物通常要作“其它甾體”的檢查，

42、“其它甾體”是藥物中存在的具有甾體結(jié)構(gòu)的其它物質(zhì)。如合成用的原料、中間體、副產(chǎn)物及降解產(chǎn)物等。由于其它甾體和藥物的結(jié)構(gòu)相似，一般采用色譜方法檢查，如薄層色譜法、高效液相色譜法等。如醋酸可的松中其它甾體的檢查可采用薄層色譜方法。在醋酸可的松的化學(xué)結(jié)構(gòu)中，由于C17位的-醇酮基（-CO-CH3OH）具有還原性，在強(qiáng)堿性溶液中能將四氮唑定量地還原為有色甲臢，生成的顏色隨所用的試劑和條件而不同，多為紅色或蘭色。三、實(shí)驗(yàn)步聚1薄層板的制備取薄層用硅膠G4g，按13（WV）比例加0.5%的羧甲基纖維素鈉的上清液，研磨均勻，鋪于兩塊520cm規(guī)格的玻璃板上，于室溫下，置水平臺上晾干，在110烘半小時，取出，置干燥器中備用。2供試溶液和對照溶液的制備取醋酸可的松適量，加氯仿-甲醇（91）制成每1ml中含10mg的溶液，作為供試品溶液。精密量取以上溶液適量，加氯仿-甲醇（91）稀釋成每1ml中含0.10mg的溶液，作為對照溶液。3薄層層析照薄層色譜法（中國藥典1990年版附錄30頁）試驗(yàn)，吸取上述供試溶液和對照溶液各5l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷10ml-乙醚-甲醇-水（38560152）為展開劑，展開后，晾干，在105干燥10分鐘，放冷，噴以堿性四氮唑藍(lán)試液，立即檢視。供