山大醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)課件13細(xì)胞衰老和死亡

1、第十三章細(xì)胞衰老和死亡 cellular aging and cell death山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所11. 什么是細(xì)胞衰老？ （Cellular aging） 細(xì)胞衰老（cell senescence or aging）指細(xì)胞在正常條件下發(fā)生的細(xì)胞的生理功能和增殖能力減弱，以及細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，并趨向死亡的現(xiàn)象。 細(xì)胞衰老是一個(gè)不可逆的過程。山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所2第一節(jié) 細(xì)胞衰老 2. 什么是機(jī)體衰老？ 機(jī)體衰老是指絕大多數(shù)生物性成熟以后，機(jī)體形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理功能逐漸退化或老化的過程，是一個(gè)受發(fā)育程序、環(huán)境因子等多因素控制的不可逆的生物學(xué)現(xiàn)象，機(jī)體的衰老與動(dòng)物的壽命密切相關(guān)

2、。山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所3 3. 細(xì)胞衰老與機(jī)體衰老的關(guān)系個(gè)別細(xì)胞或局部許多細(xì)胞的衰老并不影響機(jī)體的壽命機(jī)體衰老并不代表所有細(xì)胞的衰老個(gè)體的衰老是建立在總體細(xì)胞衰老的基礎(chǔ)上細(xì)胞總體的衰老反應(yīng)了機(jī)體的衰老山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所4 （1）長壽命細(xì)胞 （細(xì)胞壽命接近整體壽命） 神經(jīng)元，脂肪細(xì)胞，肌細(xì)胞 （2）緩慢更新的細(xì)胞 肝細(xì)胞，胃壁細(xì)胞（3）快速更新且壽命較短的細(xì)胞 皮膚的表皮細(xì)胞，紅細(xì)胞和白細(xì)胞山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所5 4. 機(jī)體內(nèi)各類細(xì)胞的壽命不同 實(shí)驗(yàn)證明，體外培養(yǎng)的細(xì)胞壽命取決于 1）體外可傳代的次數(shù) 2）來源個(gè)體的年齡 3）物種的壽命 這些規(guī)律是由Hayflic

3、k研究和發(fā)現(xiàn)的， 故稱為 Hayflick界限。山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所6 5. 體外培養(yǎng)的細(xì)胞壽命取決于多種因素細(xì)胞來源人胚肺成纖維細(xì)胞中年人成纖維細(xì)胞老年人成纖維細(xì)胞可增殖代數(shù) 40-60 20 2-4不同年齡來源的人成纖維細(xì)胞的增殖代數(shù)實(shí)驗(yàn)證明:細(xì)胞增殖能力與供體年齡有關(guān); 體外培養(yǎng)細(xì)胞倍增次數(shù)與原個(gè)體年齡成反比關(guān)系.物種的壽命與體外培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞傳代次數(shù)的關(guān)系不同物種的細(xì)胞最大分裂次數(shù)與動(dòng)物平均壽命成正比老年胞質(zhì)體+是細(xì)胞核而不是細(xì)胞質(zhì)決定了細(xì)胞衰老年青胞質(zhì)體老年細(xì)胞不能分裂年青細(xì)胞 + +分裂能力與年青細(xì)胞一樣Cytochalasin處理細(xì)胞 得到胞質(zhì)體離心決定細(xì)胞衰老的因素在細(xì)胞

4、內(nèi)部，而不是外部的環(huán)境; 老年男性體細(xì)胞 培養(yǎng) 混合培養(yǎng) 年輕女性體細(xì)胞 培養(yǎng)結(jié)果: 混合培養(yǎng)中各自的倍增次數(shù)與單獨(dú)培養(yǎng)一樣 二倍體細(xì)胞的衰老是由細(xì)胞本身決定的山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所10 6. 細(xì)胞衰老有什么表現(xiàn)？（1）細(xì)胞衰老的形態(tài)結(jié)構(gòu)改變山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所11 6. 細(xì)胞衰老有什么表現(xiàn)？（2）細(xì)胞衰老過程中有生物大分子的改變DNA：復(fù)制與轉(zhuǎn)錄受阻，端粒DNA、mtDNA丟失。 DNA氧化、斷裂、缺失和交聯(lián)，甲基化程度降低。RNA：mRNA含量和與核糖體結(jié)合力降低。蛋白質(zhì)：含成速度下降，發(fā)生修飾、交聯(lián)、穩(wěn)定性 下降、功能降低。酶分子：活性中心被氧化，金屬離子丟失，酶分子

5、的二級(jí)結(jié)構(gòu)，溶解度，等電點(diǎn)發(fā)生改變，酶失活。脂類：不飽和脂肪酸被氧化。山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所12 衰老癥狀與原因分析皮膚干燥、發(fā)皺頭發(fā)變白老人斑飲食減少細(xì)胞水分減少，體積減小細(xì)胞內(nèi)的酶活性降低細(xì)胞內(nèi)色素的累積細(xì)胞膜通透性功能改變山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所13 7. 細(xì)胞為什么發(fā)生衰老？（1）遺傳決定學(xué)說認(rèn)為衰老是遺傳的程序化過程患有早衰癥的六歲女童山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所14 7. 細(xì)胞為什么發(fā)生衰老？（1）遺傳決定學(xué)說認(rèn)為衰老是遺傳的程序化過程子女的壽命與雙親的壽命有關(guān)；各種動(dòng)物都有相當(dāng)恒定的平均壽命和最高壽命；早衰癥患者體內(nèi)解旋酶發(fā)生突變。 SGS1基因和WRN基因同源,

6、 編碼解旋酶，與衰老有關(guān)；如：酵母sgs1突變體壽命明顯短于野生型。WRN基因突變：引發(fā)早老癥。 Caenrhabditis elegans的平均壽命僅3.5天，該蟲age-1 單基因突變，可提高平均壽命65%，提高最大壽命110%。 山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所15 7. 細(xì)胞為什么發(fā)生衰老？（2）自由基學(xué)說認(rèn)為活性氧基團(tuán)導(dǎo)致細(xì)胞損傷和衰老自由基是原子核外層軌道上具有不成對(duì)電子的分子或原子基團(tuán)。是一類高度活化的分子，對(duì)細(xì)胞或組織產(chǎn)生十分有害的生物效應(yīng)。 內(nèi)源性自由基： 體內(nèi)各種代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的，是自由基的主要來源 外源性自由基 受高溫，輻射，光解，化學(xué)物質(zhì)等引起的外源性自由基山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)

7、胞生物學(xué)研究所16 自由基對(duì)細(xì)胞的損傷胞內(nèi)蛋白（酶類）氧化受損，交聯(lián)、變性失活，細(xì)胞功能退化而導(dǎo)致衰老；不飽和脂肪酸氧化為過氧化脂質(zhì)，影響膜內(nèi)酶活性和蛋白質(zhì)變性，膜結(jié)構(gòu)改變；DNA鏈斷裂、交聯(lián)、堿基羥基化而損傷；自由基數(shù)量隨年齡增多，導(dǎo)致各器官細(xì)胞脂褐質(zhì)與蠟樣物質(zhì)增多。山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所17 7. 細(xì)胞為什么發(fā)生衰老？（3）端粒鐘學(xué)說認(rèn)為端?？s短會(huì)導(dǎo)致為細(xì)胞衰老端粒是染色體末端的一種特殊結(jié)構(gòu)，其DNA由簡單的串聯(lián)重復(fù)系列組成。端粒隨細(xì)胞的分裂不斷縮短，當(dāng)端粒長度縮短到一定閾值時(shí)，細(xì)胞就進(jìn)入衰老過程。當(dāng)細(xì)胞功能下降，細(xì)胞既不能將代謝廢物及時(shí)排出胞外，又不能將其降解與消化，積累的代謝廢

8、物會(huì)影響細(xì)胞的正常生理功能，從而引起細(xì)胞的衰老。山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所18 7. 細(xì)胞為什么發(fā)生衰老？（4）細(xì)胞代謝廢物累積可引起細(xì)胞衰老山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所19 7. 細(xì)胞為什么發(fā)生衰老？（5）基因轉(zhuǎn)錄或翻譯差錯(cuò)導(dǎo)致細(xì)胞衰老隨著年齡的增長，細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制效率下降，核酸，蛋白質(zhì)，酶等大分子的合成差錯(cuò)，最終引起細(xì)胞功能降低，導(dǎo)致細(xì)胞衰老。1. 什么是細(xì)胞死亡？ (Cell Death） 細(xì)胞死亡（cell death）指細(xì)胞生命現(xiàn)象的終結(jié)。主要包括細(xì)胞壞死和細(xì)胞凋亡兩種形式。細(xì)胞壞死是指在外來致病因子的作用下，細(xì)胞生命活動(dòng)被強(qiáng)行終止所致的病理性、被動(dòng)性的死亡過程。細(xì)胞凋亡是

9、指在特定信號(hào)誘導(dǎo)下，細(xì)胞內(nèi)的死亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)被觸發(fā)所致的生理或病理性、主動(dòng)性的死亡過程。山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所20第二節(jié) 細(xì)胞死亡 2. 細(xì)胞死亡的原因 山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所21外界原因內(nèi)在因素劇烈，引起細(xì)胞壞死（necrosis)相對(duì)不劇烈細(xì)胞凋亡 3. 細(xì)胞死亡的特征與形式 山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所22細(xì)胞壞死：細(xì)胞膜與胞漿中的細(xì)胞器的質(zhì)膜發(fā)生破裂，細(xì)胞漿外溢，細(xì)胞解體并引起周圍組織發(fā)生炎癥反應(yīng)。細(xì)胞凋亡：胞膜始終保持完整，胞膜內(nèi)陷將細(xì)胞內(nèi)容物包被成一些囊狀小體，即凋亡小體（apoptotic body),后者被周圍吞噬細(xì)胞吞噬，不引起炎癥。細(xì)胞壞死和細(xì)胞凋亡壞死細(xì)胞凋

10、亡細(xì)胞山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所25細(xì)胞自噬（autophagy): 真核生物細(xì)胞通過降解細(xì)胞內(nèi)長壽命蛋白和細(xì)胞器，產(chǎn)生氨基酸以維持細(xì)胞在缺乏營養(yǎng)時(shí)的生存。特征：形成雙層膜的自噬泡，自噬泡可包裹細(xì)胞質(zhì)、大型細(xì)胞器，然后與溶酶體結(jié)合，并分解內(nèi)容物，供細(xì)胞使用。意義：是細(xì)胞在不良的情況下的一種應(yīng)急的反應(yīng)。自噬被認(rèn)為是真核細(xì)胞中廣泛存在的降解/再循環(huán)系統(tǒng) 4. 細(xì)胞死亡的另一種形式自噬 酵母自噬相關(guān)基因Atg ( Autophagy related gene) ，它們的編碼蛋白在自噬的誘導(dǎo)、產(chǎn)生、成熟、再循環(huán)中起重要作用。1. 什么是細(xì)胞凋亡？ (Apoptosis) 細(xì)胞凋亡是細(xì)胞在一定的生理

11、或病理?xiàng)l件下，遵循自身的程序，自己結(jié)束其生命的過程。 又稱程序性細(xì)胞死亡（programmed cell death, PCD), 即在一定時(shí)間內(nèi)，細(xì)胞按一定的程序發(fā)生死亡，這種細(xì)胞死亡具有嚴(yán)格的基因時(shí)控性和選擇性。山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所27第三節(jié) 細(xì)胞凋亡 細(xì)胞凋亡的典型例子發(fā)育中神經(jīng)細(xì)胞的凋亡哺乳動(dòng)物的手指和腳趾由連在一塊到逐個(gè)分開的伴隨細(xì)胞凋亡幼體蝌蚪向成體發(fā)育過程中尾部細(xì)胞發(fā)生凋亡后脫落山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所29 2. 細(xì)胞凋亡的特征 細(xì)胞凋亡時(shí)的形態(tài)學(xué)改變細(xì)胞核：核DNA聚集，濃縮成染色質(zhì)塊， 細(xì)胞核呈帽狀或新月形，染色質(zhì)進(jìn)一步聚集使核膜斷裂， 并形成核碎片或核殘片。

12、2.細(xì)胞質(zhì)：細(xì)胞質(zhì)密度增加，胞漿濃縮。線粒體先增 大，而后空泡化；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)囊腔膨脹，并逐漸與質(zhì)膜 融合；細(xì)胞骨架致密并紊亂。3.細(xì)胞膜：微絨毛，細(xì)胞突起，細(xì)胞間連接復(fù)合體普 遍消失。此時(shí)，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)仍保持完整。4.凋亡小體的形成： 細(xì)胞核的碎片形成后會(huì)不斷轉(zhuǎn)化為大小不等，內(nèi)含胞質(zhì)，細(xì)胞器以及核碎片的膜包小體，即凋亡小體。 不同細(xì)胞凋亡時(shí)的形態(tài)學(xué)改變 細(xì)胞凋亡時(shí)的生化改變DNA 片段化（fragmentation)DNA電泳呈現(xiàn)出梯狀條帶（DNA ladders），內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶活化（依賴 Ca2+/Mg2+ ，Zn2+是其抑制劑） 細(xì)胞凋亡時(shí)的生化改變2. 細(xì)胞凋亡中的蛋白酶 控制凋亡的蛋白酶

13、有多種，如胱天蛋白酶（cystein aspartic acid specific protease, Caspase) ，鈣蛋白酶。這些酶在凋亡過程中發(fā)揮關(guān)鍵的調(diào)控作用。3.胞漿Ca2+ 、pH的變化Ca2+庫開放，胞內(nèi)Ca2+濃度升高，可作為凋亡啟動(dòng)的信號(hào)。Ca2+的釋放會(huì)破壞細(xì)胞的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，從而也會(huì)觸發(fā)細(xì)胞凋亡。細(xì)胞凋亡時(shí)，胞漿內(nèi)的pH先急性升高，后又緩慢降低。Ca2+ 細(xì)胞凋亡時(shí)的生化改變4. 線粒體在細(xì)胞凋亡中的生化變化1）線粒體呼吸鏈?zhǔn)軗p，能量代謝受到破壞，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。2）線粒體釋放細(xì)胞色素C（cytochrome C, cytC) 而cytC是凋亡所必需的胱天蛋白酶(caspa

14、se)家族激活物。3）線粒體是細(xì)胞產(chǎn)生活性氧類物質(zhì)（reactive oxygen species, ROS)的主要來源，ROS是細(xì)胞凋亡的信使分子和效應(yīng)分子，凋亡時(shí)，線粒體生成ROS增多。4）線粒體滲透轉(zhuǎn)變孔（permeability transition pore, PT pore）通透性增高，這是凋亡早期的決定性變化。PT孔是線粒體內(nèi)膜和外膜在接觸部位協(xié)同組成的一條通道，PT孔的開放可導(dǎo)致線粒體呼吸鏈解偶聯(lián)，并且線粒體內(nèi)的cyt C可通過開放PT孔釋放到胞質(zhì)，進(jìn)而觸發(fā)caspase 級(jí)聯(lián)反應(yīng)。 細(xì)胞凋亡時(shí)的線粒體釋放細(xì)胞色素C失巢凋亡（anoikis)是因細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)和其它 細(xì)胞脫離

15、接觸而誘發(fā)的。 2. 細(xì)胞凋亡的另一種形式失巢凋亡山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所37 3. 細(xì)胞凋亡是受哪些因素調(diào)控的？ （1）細(xì)胞凋亡的誘發(fā)因素 生理性誘導(dǎo)因子: TNF , FasL, TGF-，神經(jīng)遞質(zhì)、 Ca2+, 糖皮質(zhì)激素等。 損傷相關(guān)因子: 熱休克，病毒感染，原癌基因、 抑癌基因、 細(xì)胞毒性T細(xì)胞，氧化劑、自由基。 缺血、缺氧等。 疾病治療相關(guān)因子: 化療， 放療，等 其它某些細(xì)胞毒性物質(zhì): 如乙醇、等。山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所38 3. 細(xì)胞凋亡是受哪些因素調(diào)控的？ （2）細(xì)胞凋亡的抑制因素生理性抑制因子: 如bcl-2 原癌基因，突變型p53,各種生長因子，細(xì)胞外基質(zhì)。

16、 病毒基因: 如腺病毒E1B 等 其它: 線蟲的ced-9 基因，caspase 抑制劑，促癌劑（如PMA）。山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所39 4. 細(xì)胞為什么會(huì)發(fā)生凋亡？ 細(xì)胞凋亡的調(diào)控主要受多種基因調(diào)控（1）調(diào)控細(xì)胞凋亡的Ced基因家族 Ced 基因是線蟲的細(xì)胞凋亡關(guān)鍵調(diào)控基因。 Ced3 、ced4的可促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。 Ced9基因可抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生與Ced基因家族同源的哺乳動(dòng)物基因 Caspase 3與Ced3同源 Apa-f1與Ced4同源 Bcl-2基因與Ced9同源Regulation of Ced Proteins for Cell Apoptosis（左圖）：當(dāng)細(xì)胞膜表面

17、的死亡受體未被激活時(shí)，Ced9蛋白處于活性狀態(tài)， 并抑制Ced-4分子的活性，細(xì)胞不發(fā)生凋亡。（右圖）：當(dāng)細(xì)胞膜表面的死亡受體被死亡信號(hào)激活時(shí)，Ced9蛋白呈現(xiàn)非活性狀態(tài)， Ced-3 和 Ced-4分子發(fā)揮活性，誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。 Caspase-2,caspase-8,caspase-9, caspase-10 參與凋亡起始 Caspase-3,caspase-6, caspase-7 參與凋亡執(zhí)行， 它們能降解多種底物， 導(dǎo)致核纖層和細(xì)胞骨架的斷裂崩解。 哺乳動(dòng)物 參與細(xì)胞凋亡的Caspase基因 (2) 既能抑制又能促進(jìn)細(xì)胞凋亡的bcl-2基因家族 bcl-2基因是B細(xì)胞淋巴瘤/白血病

18、-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,bcl2）的 縮寫，又稱“存活基因（survival gene)” 。 同家族的Bad，Bax 是凋亡的促進(jìn)者。Molecular Structure of Bcl-2 Protein Family（3） 可促進(jìn)細(xì)胞凋亡的ice基因（4） 參與調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的p53基因 p53為抑癌基因，其蛋白在人類存在兩種形式。 野生型：促進(jìn)細(xì)胞凋亡 突變型: 抑制細(xì)胞凋亡ICE基因（interleukin-1 converting enzyme, ICE) 與線蟲的ced-3基因在DNA序列上高度同源。其作用是將IL-1前體分解為有生理活性的白細(xì)胞

19、介素-1。ICE過度表達(dá)可誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物纖維母細(xì)胞發(fā)生凋亡。 (5) 可觸發(fā)細(xì)胞凋亡的Fas 和FasLFas 屬于腫瘤壞死因子受體（tumor necrosis factor receptor, TNFR)和神經(jīng)生長因子受體(nerve growth factor receptor, NGFR） 超家族的細(xì)胞表面分子；Fas配體（Fas ligand, FasL)是TNF家族的細(xì)胞表面分子。多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)Fas；FasL只在活化的T細(xì)胞表達(dá)Fas需要通過和FasL結(jié)合后發(fā)揮調(diào)控作用 。Molecular Structure of Fas配體FasL與死亡受體Fas結(jié)合后，誘導(dǎo)Fas胞質(zhì)區(qū)

20、內(nèi)的死亡結(jié)構(gòu)域（DD）結(jié)合Fas結(jié)合蛋白（FADD），F(xiàn)ADD再結(jié)合Caspase-8前體，形成FasFADDCaspase-8前體組成的死亡誘導(dǎo)復(fù)合物，進(jìn)一步誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。（6） c-myc 基因既是凋亡的激活因子又是抑制因素 表達(dá)蛋白：c-Myc-1, c-Myc-2 C-Myc原癌基因刺激和抑制細(xì)胞凋亡。 Myc與Max形成二聚體作為轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，激活 介導(dǎo)細(xì)胞增殖的基因和誘導(dǎo)凋亡的基因。 細(xì)胞在C-Myc基因作用下出現(xiàn)哪種結(jié)果，取決于 細(xì)胞接受的外來信號(hào)。山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所49 5. 細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是由什么調(diào)控的？ 細(xì)胞凋亡的信號(hào)調(diào)控主要由 死亡受體和線粒體兩種通路

21、參與調(diào)控。（1）死亡受體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路 死亡受體主要屬于腫瘤壞死因子受體和神經(jīng)生長因子受體超家族,主要有成員有Fas/Apo-1/CD95, DR-4/TRAIL-R1, DR3/WSL-1/Apo-3/TRAMP。 細(xì)胞外很多信號(hào)分子可以與細(xì)胞表面相應(yīng)的死亡受體結(jié)合，激活細(xì)胞凋亡信號(hào)通路，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。（2）線粒體介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路 許多凋亡信號(hào)都可引起線粒體的損傷和膜通透性改變。有線粒體釋放的Cyt.C進(jìn)入胞漿可以與Apaf-1一起與Caspase-9的前體結(jié)合，并進(jìn)一步激活Caspase-3,引起細(xì)胞凋亡。山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所50哺乳動(dòng)物細(xì)胞凋亡的主要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所51 6. 如何檢測(cè)細(xì)胞凋亡？ (1）形態(tài)學(xué)檢測(cè) 染色法、透射和掃描電鏡觀察 核固縮，核成新月狀、花瓣樣，凋亡小體 山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所52（2）生化特征檢測(cè) DNA電泳：DNA片段就呈現(xiàn)出梯狀條帶（DNA ladders）；TUNEL測(cè)定法，即DNA斷裂的原位末端標(biāo)記法；彗星電泳法（comet assay）；磷脂酰絲氨酸外翻分析（Annexin V法）線粒體膜勢(shì)能的檢測(cè)細(xì)胞色素c誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞DNA電泳圖1細(xì)胞色素c誘導(dǎo)0 h2細(xì)胞色素c誘導(dǎo)1 h3細(xì)胞色素c誘導(dǎo)2 h4細(xì)胞色素c誘導(dǎo)3 h5細(xì)胞色素c誘導(dǎo)4