液相色譜知識(shí)總結(jié)

1、液相色譜知識(shí)總結(jié)1液相色譜的工作原理高效液相色譜（high performance liquid chromatography）是色譜法的一個(gè)分支，分離原理是：溶于流動(dòng)相(mobile phase)中的各組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí)，由于與固定相(stationary phase)發(fā)生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從固定相中流出。 2儀器安裝要求實(shí)驗(yàn)室應(yīng)清潔無(wú)塵，無(wú)易燃，易爆和腐蝕性氣體，排風(fēng)良好并避免檢測(cè)器受 對(duì)流空氣干擾，室溫在 15-30(示差折光檢測(cè)器時(shí)，室溫變化不超過(guò)2)， 室內(nèi)溫度應(yīng)控制20%-85%范圍內(nèi) 3工作臺(tái)應(yīng)平穩(wěn)周圍無(wú)強(qiáng)烈機(jī)

2、械震動(dòng)和電磁干擾。工作臺(tái)盡量避免靠近窗戶， 以免受陽(yáng)光和對(duì)流風(fēng)。工作臺(tái)后方離墻最好留有半米的距離方便人員檢查儀器后面板。 4:電源電壓為22010V，頻率為500.5Hz最好配備穩(wěn)壓器(2kw以上) 最好 實(shí)驗(yàn)室有專線，同一線路上不可有大的用電機(jī)械干擾 電源為三相電源，接地必須良好(此條非常重要)，泵，檢測(cè)器，工作站，電 腦接在同一個(gè)合格的接線板上 (溫分每臺(tái)儀器帶一專用接線板) 5高效液相色譜儀Lc98型儀器系統(tǒng)泵 進(jìn)樣閥 (定量環(huán) )色譜柱柱溫箱檢測(cè)器 工作站6液路系統(tǒng)10u過(guò)濾器 四氟管 螺母 四氟壓環(huán)泵頭 比例閥 壓力傳感器 緩沖器進(jìn)樣閥 色譜柱 流通池 反壓器7色譜分析必備的六個(gè)條件

3、流動(dòng)相比例流速進(jìn)樣量柱型柱溫波長(zhǎng)8液相分析實(shí)驗(yàn)的步驟及要求配制流動(dòng)相，過(guò)濾超聲備用。配制標(biāo)樣，制備樣品。開(kāi)機(jī)預(yù)熱，觀察基線。注射標(biāo)品，保存譜圖。注射樣品，保存譜圖。標(biāo)樣校正。計(jì)算含量。9色譜柱的種類 正反相色譜柱 配位體交換色譜柱 尺寸排阻色譜柱 離子交換離子色譜柱 親和色譜柱 手性色譜柱10檢測(cè)器種類高效液相色譜的檢測(cè)器很多，最常用的有紫外檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器等。11紫外檢測(cè)器 紫外檢測(cè)器是液相色譜中應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)器，適用有紫外吸收物質(zhì)的檢測(cè)。在進(jìn) 行高效液相色譜分析的樣品中，約有80的樣品可以使用這種檢測(cè)器。根據(jù)朗伯比爾定律，樣品濃度越大，產(chǎn)生的信號(hào)越大，這種檢測(cè)器靈敏度高

4、，檢測(cè)下限約為10-10 gml，而且線性范圍廣，對(duì)溫度和流速不敏感，適于進(jìn)行梯度洗脫。 12示差折光檢測(cè)器 示差折光檢測(cè)器是根據(jù)不同物質(zhì)具有不同折射率來(lái)進(jìn)行組分檢測(cè)的。凡是具有與流動(dòng)相折射率不同的組分，均可以使用這種 檢測(cè)器。如果流動(dòng)相選擇適當(dāng)，可以檢測(cè)所有的樣品組分。示差折光檢測(cè)器的優(yōu)點(diǎn)是通用性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便；缺點(diǎn)是靈敏度低，最小檢出限約為10-7g/ml，不能做痕量分析。此外，由于洗脫液組成的變化會(huì)使折射率變化很大，因此，這種檢測(cè)器也不適用于梯度洗脫。13熒光檢測(cè)器在其他條件一定的情況下，熒光強(qiáng)度與物質(zhì)的濃度成正比。許多有機(jī)化合物具有天然熒光活性，另外，有些化合物可以利用柱后反應(yīng)法或柱前反應(yīng)法加入熒光化試劑，使其轉(zhuǎn)化為具有熒光活性的衍生物。在紫外光激發(fā)下，熒光活性物質(zhì)產(chǎn)生熒光，由光電倍增管轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)。熒光檢測(cè)器是一種選擇性檢測(cè)器，它適合于稠環(huán)芳烴、氨基酸、胺類、維生素、蛋白質(zhì)等熒光物質(zhì)的測(cè)定。這種檢測(cè)器靈敏度非常高，檢出限達(dá)10-1210-13g/ml，比紫外檢測(cè)器高23個(gè)數(shù)量級(jí)，適合于