淺談欽州地區(qū)豬鏈球菌的分離鑒定與藥敏試驗

1、淺談欽州地區(qū)豬鏈球菌的別離鑒定與藥敏試驗摘要采集疑似鏈球菌病的豬病料進展細菌別離,根據(jù)培養(yǎng)特性、染色特點、形態(tài)觀察、生化試驗鑒定為1株豬鏈球菌;藥敏試驗說明,該別離菌株對氨芐西林、包孢他啶、萬古霉素、頭孢氨芐、克林霉素、恩諾沙星高度敏感,對多黏菌素、環(huán)丙沙星、卡那霉素中度敏感,對紅霉素、青霉素低度敏感,而對土霉素、四環(huán)素、強力霉素、復(fù)方新諾明有明顯耐藥性。關(guān)鍵詞豬鏈球菌;別離鑒定;藥敏試驗;廣西欽州豬鏈球菌病是現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)中的一種重要傳染病,主要引發(fā)豬腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎和敗血癥1。2型豬鏈球菌在全球范圍內(nèi)都是優(yōu)勢流行株。2022年67月發(fā)生在四川省資陽、內(nèi)江等地區(qū)的2型豬鏈球菌感染事件造成

2、了極大的經(jīng)濟損失,引起社會廣泛關(guān)注2。另外,1型和9型是除2型外的流行株3-4,也可使豬發(fā)玻雖然理論上有很多藥物能治療豬鏈球菌病,但隨著抗菌藥物的廣泛使用以及臨床中不合理用藥,使得病原菌的耐藥現(xiàn)象日趨嚴重5-6。本研究對地區(qū)豬場送檢的疑似鏈球菌病病死豬的淋巴結(jié)、肺、脾、扁桃體等病變組織進展了細菌的別離鑒定,對別離菌進展了藥敏試驗,以期為該病的臨床防治提供科學(xué)根據(jù)。1材料與方法1.1試驗材料試驗病料為采自廣西欽州地區(qū)某豬場疑似豬鏈球菌發(fā)病的仔豬淋巴結(jié)、肺、脾、扁桃體等病變組織。試驗試劑為:綿羊血瓊脂平板、綿羊血瓊脂斜面、普通瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯、巧克力培養(yǎng)基等,均按常規(guī)方法制備,4冰箱保存?zhèn)溆?

3、藥敏紙片購自北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司;細菌微量發(fā)酵管購自杭州天和微生物試劑。1.2細菌別離采用無菌法將采集的疑似鏈球菌病發(fā)病的仔豬淋巴結(jié)、肺、脾、扁桃體等病變組織,劃線接種于含有8%綿羊血的瓊脂平板、巧克力培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂平板中,37培養(yǎng)24h,觀察細菌生長特性。挑取綿羊血平板上針尖大孝外表光滑、灰白色、圓形、半透明、邊緣整齊的單個菌落進展革蘭氏染色。革蘭氏染色陽性、有鏈狀排列或成對的球形細菌為可疑菌落,接種于葡萄糖肉浸液肉湯液體培養(yǎng)基內(nèi)進展增菌培養(yǎng),37純培養(yǎng)24h后再次進展革蘭氏染色,對鏡檢為革蘭氏染色陽性、成對、短鏈球菌,再做接觸酶試驗,結(jié)果為陰性者,即確定為豬鏈球菌,接種于綿羊血瓊

4、脂斜面上,置于4冰箱中保存?zhèn)溆谩?.3生化試驗將別離菌株分別接種于木糖、麥芽糖、蔗糖、菊糖、肌醇、阿拉伯糖、葡萄糖、乳糖、棉子糖等微量生化反響管中,同時做r試驗和vp試驗,37培養(yǎng)24h后,觀察其生化反響特性。1.4藥敏試驗采用紙片擴散法。將所保存的純化菌株分別在37營養(yǎng)肉湯中培養(yǎng)24h,用無菌生理鹽水將菌液稀釋至濃度約為200萬個/l,用無菌棉拭子蘸取菌液,均勻涂布于營養(yǎng)瓊脂平板,待稍干后,將各種抗生素藥敏紙片平貼于培養(yǎng)基外表,并輕按紙片中心,使其附著嚴密,37培養(yǎng)24h后,觀察、測定抑菌圈的直徑。斷定豬鏈球菌對藥敏紙片的敏感性標準:抑菌環(huán)直徑在15以上為高度敏感;1015為中度敏感;10以

5、下為低度敏感;無抑菌環(huán)為不敏感。2結(jié)果與分析2.1培養(yǎng)結(jié)果別離菌在綿羊血瓊脂平板上菌落直徑為0.51.0、灰白色、半透明、外表光滑、圓形、邊緣整齊,呈溶血;巧克力培養(yǎng)基上菌落特征與綿羊血平板菌落特征相似;革蘭氏染色陽性、有鏈狀排列或成對的球形細菌;在普通培養(yǎng)基中不能生長。2.2生化試驗結(jié)果別離菌株接種于各個微量生化反響管,同時做r試驗和vp試驗,結(jié)果見表1。2.3藥敏試驗結(jié)果對別離培養(yǎng)獲得的純培養(yǎng)物進展藥敏試驗,結(jié)果見表2。由表2可知,該別離菌株對氨芐西林、頭孢他啶、萬古霉素、頭孢氨芐、克林霉素、恩諾沙星高度敏感,對多黏菌素、環(huán)丙沙星、卡那霉素中度敏感,對紅霉素、青霉素低度敏感,(上接第338

6、頁)而對土霉素、四環(huán)素、強力霉素、復(fù)方新諾明有明顯耐藥性。3結(jié)論與討論從采集的疑似鏈球菌病的豬病料中別離到1株細菌,根據(jù)培養(yǎng)特性、染色特點、形態(tài)觀察、生化試驗鑒定為豬鏈球菌。藥敏試驗結(jié)果說明,該別離菌株對氨芐西林、頭孢他啶、萬古霉素、頭孢氨芐、克林霉素、恩諾沙星高度敏感,對多黏菌素、環(huán)丙沙星、卡那霉素中度敏感,對紅霉素、青霉素低度敏感,而對土霉素、四環(huán)素、強力霉素、復(fù)方新諾明有明顯耐藥性。該菌株存在多重耐藥性。由于各地用藥習(xí)慣以及近年來抗生素的濫用,產(chǎn)生了大量的耐藥菌株,為疾病的后續(xù)治療產(chǎn)生了很大的影響,也使得疾病更加難以控制。因此,建議臨床用藥前,有條件的先進展菌株的藥敏試驗,根據(jù)試驗結(jié)果進

7、展指導(dǎo)用藥,并注意穿梭用藥,防止耐藥菌株的出現(xiàn)。4參考文獻1luquei,tarradas,arenasa,etal.streptussuissertypesassiatedithdifferentdiseasenditinsinpigsj.vetre,1998(142):726-727.2趙華梅,潘秀珍,唐家琪.豬鏈球菌毒力因子和鑒定方法的研究進展j.微生物學(xué)雜志,2022,26(1):77-80.3熊毅,劉棋,覃芳蕓,等.豬鏈球菌亞種及1、2、9型四重pr檢測方法的建立j.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué),2022,38(6):681-684.4付薇,陳進喜,覃芳蕓,等.豬鏈球菌9型ps9g基因的克隆與序列分析j.動物醫(yī)學(xué)進展,2022,30(1):1-4.5王麗平,陸承平,唐家琪.