同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科ISO15189體系文件16培養(yǎng)基、試劑管理與配制

1、同濟(jì)大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物組項(xiàng)目操作指導(dǎo)書TJYYJYKWSW/XMZ116第2版標(biāo)題：培養(yǎng)基、試劑管理與配制第1章 第16號(hào)第 PAGE 3 頁 共 NUMPAGES 3 頁1. 目的：保證培養(yǎng)基、試劑符合微生物檢驗(yàn)要求，確保檢驗(yàn)質(zhì)量。2. 適用范圍：同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科微生物室。3. 成品培養(yǎng)基3.1 綿羊血瓊脂平板、T-M瓊脂平板：上海江南生物技術(shù)工程有限公司產(chǎn)品，每批平板有產(chǎn)品質(zhì)檢報(bào)告，在有效期內(nèi)使用。3.2 巧克力瓊脂平板、結(jié)核桿菌改良羅氏斜面：上海伊華科技有限公司產(chǎn)品,每批平板有產(chǎn)品質(zhì)檢報(bào)告，在有效期內(nèi)使用。4. 商品干粉培養(yǎng)基4.1 來源：國(guó)內(nèi)產(chǎn)品主要購(gòu)自上海市臨床檢驗(yàn)中心,上海

2、市疾病控制中心和衛(wèi)生部上海生物制品研究所。進(jìn)口培養(yǎng)基主要購(gòu)自O(shè)XOID公司。4.2 常用品種及用途說明4.2.1 營(yíng)養(yǎng)瓊脂：用于配制營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板,用于普通細(xì)菌分離培養(yǎng)、空氣培養(yǎng)作等。4.2.2 麥康凱瓊脂（MAC）：中等程度選擇性，培養(yǎng)分離革蘭陰性桿菌。4.2.3 志賀瓊脂（SS）：用于分離志賀菌和沙門菌。4.2.4 TCBS瓊脂：從糞便中分離霍亂弧菌及其他弧菌。4.2.5 堿性蛋白胨水：霍亂弧菌增菌。4.2.6 水解酪蛋白瓊脂：專用于藥物敏感性試驗(yàn)。4.2.7 克氏雙糖鐵瓊脂：用于觀察細(xì)菌能否發(fā)酵葡萄糖，乳糖以及分解蛋白質(zhì)產(chǎn)生H2S，便于細(xì)菌的初步鑒定。4.2.8 營(yíng)養(yǎng)肉湯：用于標(biāo)本及各類細(xì)

3、菌的增菌。4.2.9 山梨醇麥康凱瓊脂（SMAC）：用于分離腸出血性腸炎大腸埃希菌（O157H7）。4. 配制方法 按產(chǎn)品使用說明書進(jìn)行。4.1 營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板4.1.1 按商品標(biāo)示，稱取營(yíng)養(yǎng)瓊脂干粉于適量蒸餾水中.4.1.2 121滅菌15分鐘.4.1.3 冷至50，傾注平板或分裝試管。4.1.4 質(zhì)控：金葡生長(zhǎng)良好，24 mm .黃色素。4.2 MuellerHinton瓊脂平板4.2.1 按商品說明，稱取Mueller-Hinton瓊脂干粉于適量蒸餾水中；4.2.2 121滅菌15分鐘后冷卻至約50，傾注平板(約25 ml)，瓊脂平板厚度4 mm。4.3 麥康凱平板(Mac)4.3.1 按

4、商品說明，稱取麥康凱瓊脂于適量蒸餾水中；4.3.2 121滅菌15分鐘后冷卻至約50，傾注平板。4.3.4 質(zhì)控：E.coli：紅色菌落,4mm；福氏：無色透明菌落, 2mm。4.4 SS平板4.4.1 按商品說明，稱取SS瓊脂于適量蒸餾水中；4.4.2 煮沸溶解（無需高壓滅菌）.4.4.3 傾注平板，不可過熱。4.4.4 質(zhì)控：大腸埃希氏菌：生長(zhǎng)受抑制，菌落紅色；鼠傷寒沙門菌：菌落中心黑，2mm左右，無色;福氏志賀氏菌：無色透明菌落。4.5 TCBS瓊脂平板4.5.1 按商品說明，稱取TCBS瓊脂于適量蒸餾水中；4.5.2 煮沸溶解（無需高壓滅菌）；4.5.3 傾注平板，不可過熱。4.5.4

5、 質(zhì)控：非01-群霍亂弧菌：菌落黃色，中等大小，稍扁平；副溶血性弧菌 ：生長(zhǎng)良好，綠色菌落，24mm。4.6 三糖鐵瓊脂斜面4.6.1 按商品說明，稱取三糖鐵瓊脂于適量蒸餾水中4.6.2 加熱溶解后，分裝14mm100mm試管,每管約4ml4.6.3 12115分鐘滅菌后，放置成斜面.4.6.4 質(zhì)控：遲緩愛德華菌：-/（+）H2S（+）,大腸桿菌：+/（+）4.6.5 冰箱貯存?zhèn)溆谩?.7 營(yíng)養(yǎng)肉湯4.7.1 按商品說明，稱取“營(yíng)養(yǎng)肉湯”干粉于適量蒸餾水中4.7.2 加熱溶解后，分裝15mm100mm試管,每管約2ml。4.7.3 12115分鐘滅菌后，冷卻，冰箱保存.4.8 山梨醇麥康凱瓊

6、脂(SMac)4.8.1 按商品說明，稱取山梨醇麥康凱瓊脂于適量蒸餾水中；4.8.2 121滅菌15分鐘后冷卻至約50，傾注平板。4.8.3 質(zhì)控：福氏志賀氏菌：無色透明菌落, 2mm。5. 染色液配制 參見：常見細(xì)菌染色法操作規(guī)程。6. 化學(xué)試劑6.1 2NaOH溶液 稱取10克NaOH片劑（化學(xué)純），充分溶解于200ml左右的蒸濾水中，定容至500ml，密封保存于塑料瓶中。6.2 3%H2O2溶液 取市售30% H2O2溶液稀釋10倍即可。7. 診斷血清 購(gòu)自疾控中心或生物制品所，2-8冰箱儲(chǔ)存，在有效期內(nèi)使用。每次使用時(shí)注意外觀變化，變混或有顏色改變停止使用。8. API系統(tǒng)添加試劑 主