10第十章發(fā)酵設(shè)備的異常與染菌

1、發(fā)酵設(shè)備的異常和染菌第十章.一、生物制藥過程滅菌的重要性 大多數(shù)工業(yè)發(fā)酵都要堅持純種培育，這就需求有一套可以適用于工業(yè)消費的滅菌技術(shù)和防止染菌的技術(shù)。.生物制藥過程染菌的危害： 許多工業(yè)發(fā)酵過程染菌后均能影響其消費經(jīng)濟效益，尤其是抗生素發(fā)酵中的染菌，可以嚴(yán)重地要挾抗生素的消費，是抗生素工業(yè)的致命傷。 工業(yè)發(fā)酵中的染菌不僅可呵斥宏大的經(jīng)濟損失，而且還會擾亂消費次序、破壞消費方案，遇到延續(xù)染菌，特別是在找不到污染緣由而缺乏防止措施時，往往會影響人們的心情和消費積極性。一、生物制藥過程滅菌的重要性.發(fā)酵染菌還會影響后道工序的正常消費、影響產(chǎn)品外觀及內(nèi)在質(zhì)量、添加三廢處置難度，進而影響環(huán)境維護等呵斥無

2、法估量的危害。.二、染菌控制的開展歷史近半個世紀(jì)以來，隨著抗生素工業(yè)發(fā)酵技術(shù)的不斷開展，逐漸構(gòu)成了一整套堅持純種培育的滅菌和染菌防治技術(shù)。國內(nèi)很多發(fā)酵工廠，特別是抗生素消費工廠，由于掌握了滅菌和制服發(fā)酵染菌的技術(shù)，使發(fā)酵染菌率到達(dá)了比較先進的程度。根據(jù)這些工廠的勝利閱歷，其關(guān)鍵是在染菌的表象中，尋覓呵斥染菌的錯綜復(fù)雜的緣由，進而不斷地提出處理和防治的措施，使發(fā)酵染菌率不斷降低。.二、染菌控制的開展歷史雖然呵斥工業(yè)微生物發(fā)酵染菌的緣由錯綜復(fù)雜，但大多數(shù)緣由經(jīng)過仔細(xì)察看和仔細(xì)分析，是可以找到的，而且也有相應(yīng)的有力措施。. 第一節(jié)滅菌的實際和技術(shù). 滅菌：是指用化學(xué)的或是物理的方法殺滅或去除物料及設(shè)

3、備中一切生命物質(zhì)的技術(shù)或工藝過程。 消毒：僅是指用化學(xué)的或是物理的方法殺滅或去除病原微生物的過程，它普通只能殺死營養(yǎng)細(xì)胞而不能殺死細(xì)菌芽孢。.用于工業(yè)規(guī)模和普通實驗室規(guī)模的滅菌方法主要有: 熱滅菌包括濕熱滅菌和干熱滅菌) 化學(xué)藥劑滅菌 射線滅菌 介質(zhì)過濾除菌等.一、熱滅菌的原理和方法 1干熱滅菌的原理和方法干熱滅菌的主要作用： 干熱對微生物有氧化、使細(xì)胞蛋白量變性和電解質(zhì)濃縮等從而使微生物細(xì)胞中毒死亡。 其中導(dǎo)致微生物死亡的主要作用是氧化。在干熱處置中，只需有足夠高的溫度和足夠長的時間，一切微生物都可被殺滅。 . 普通采用的干熱滅菌的條件: 160 、120 min。一、熱滅菌的原理和方法 .

4、干熱滅菌的效果不如濕熱滅菌： 微生物對干熱的耐受力要比對濕熱的耐受力強得多。這可用溫度系數(shù)Q10來表征。Q10是指：溫度升高10時微生物的死亡速度常數(shù)與原來溫度時的死亡速度常數(shù)的比值。一、熱滅菌的原理和方法 .一、熱滅菌的原理和方法 表中列出了一些微生物菌種的Q10。從表中的內(nèi)容可知，干熱滅菌時嗜熱脂肪芽孢桿菌的Q10僅為2.86，而在濕熱滅菌時的Q10卻高達(dá)14.28。某些微生物的Q10微生物名稱干熱滅菌濕熱滅菌嗜熱脂肪芽孢桿菌2.8614.28枯草桿菌黑色亞種2.728.71凝結(jié)芽孢桿菌2.60大腸桿菌營養(yǎng)體50.44.干熱滅菌的適用范圍： 適用于工業(yè)上要求的滅菌后仍能堅持枯燥形狀的物料的

5、滅菌。實驗室規(guī)模的玻璃器皿等器具常采用干熱滅菌。干熱滅菌的溫度和時間的關(guān)系可參考下表。一、熱滅菌的原理和方法 .滅菌溫度（0C)滅菌時間17060160120150150140180121過夜干熱滅菌的溫度和時間.2濕熱滅菌的原理和方法濕熱滅菌的原理： 借助于蒸汽釋放的熱能使微生物細(xì)胞中的蛋白質(zhì)、酶和核酸分子內(nèi)部的化學(xué)鍵，特別是氫鍵遭到破壞而引起不可逆的變性導(dǎo)致微生物死亡。 下表列出了卵蛋白中水分的含量與其凝固溫度的關(guān)系。一、熱滅菌的原理和方法 .蛋白質(zhì)水分含量和凝固溫度卵蛋白水分含量（%）凝固溫度（0C)50562576159651490165.濕熱滅菌中水分的作用：1.由于水分子的存在，使

6、蛋白質(zhì)更易因受熱而凝固變性。2.在高溫下水還能直接與復(fù)雜的生化成分反響，破壞必需的細(xì)胞成分或者產(chǎn)生有毒的副產(chǎn)物。一、熱滅菌的原理和方法 .一、熱滅菌的原理和方法 濕熱滅菌中水分的作用：3.在滅菌過程中水有助于殺死微生物的第二條途徑是經(jīng)過添加熱導(dǎo)系數(shù)。猶如人能將其手快速地穿過800的蠟燭火焰而不會感到灼熱或疼痛，而穿過100的茶壺噴出的蒸汽流時，手指會受傷。.方法： 利用蒸汽進展?jié)駸釡缇鷷r，可經(jīng)過調(diào)理蒸汽的壓強來調(diào)理滅菌溫度。但應(yīng)留意的是，有時壓力計指示的壓力并不總是表示相應(yīng)的溫度。因此，在采用濕熱滅菌時，應(yīng)留意以下兩個要素：一、熱滅菌的原理和方法 . (1)壓力計的選用 壓力計選用包括選定壓力

7、計的型式及決議壓力計的量程兩個方面。彈簧管壓力計是丈量蒸汽壓力而被廣泛運用的壓力計。在被測壓力比較平穩(wěn)的情況下，規(guī)定被測壓力的最大值是選用壓力計滿刻度的34。如被測壓力是脈動的，那么規(guī)定被測壓力的最大值是選用的壓力計滿刻度的2/3。 一、熱滅菌的原理和方法 . 被測壓力的低限，在以上兩種情況下都不應(yīng)該低于所選壓力滿刻度的13，以保證讀數(shù)誤差不致太大。選用滿刻度或太小的壓力計，都不能得到準(zhǔn)確的讀數(shù)。 一、熱滅菌的原理和方法 . (2)壓力容器中殘留空氣的排放 壓力容器中有空氣存在時，空氣與蒸汽混合，蒸汽分壓與空氣分壓之和為容器的總壓力。蒸汽分壓低于無空氣殘留時的蒸汽壓力時，那么蒸汽冷凝溫度降低，

8、不能起到完全滅菌的作用。殘留空氣愈多，溫度那么愈低。 一、熱滅菌的原理和方法 .判別壓力容器中的空氣能否排除干凈的判別方法： 可根據(jù)排氣口排出氣體的溫度來判別。假設(shè)排氣溫度已到達(dá)100，那么闡明空氣已排除干凈。容器上的壓力計和溫度計的安裝位置須能正確指示容器內(nèi)的壓力和溫度。壓力計應(yīng)安裝在遠(yuǎn)離蒸汽進口的上方，溫度計那么安裝在近空氣出口處。一、熱滅菌的原理和方法 . 3培育基及有關(guān)設(shè)備的滅菌方法 培育基滅菌過程中，除了微生物被殺死外，還伴隨著培育基成分的破壞。在蒸汽加壓加熱情況下，氨基酸和維生素等都易被破壞。在工業(yè)消費中必需選擇既能到達(dá)滅菌目的，又能使培育基的破壞量減少到最小的條件。一、熱滅菌的原

9、理和方法 . 根據(jù)微生物對數(shù)殘留定律(滅菌過程中，在一定溫度下殘留微生物的數(shù)量隨時間添加而以對數(shù)速率減少)，滅菌過程中培育基受熱破壞呈化學(xué)反響的一級動力學(xué)反響。消費實際證明，滅菌溫度較高而時間較短的滅菌效果要比滅菌溫度較低而時間較長的好。一、熱滅菌的原理和方法 . (1)實罐滅菌(分批滅菌) 先將輸料管路內(nèi)的污水放盡并沖洗干凈，再特配制好的培育基用泵打到發(fā)酵耀、種子耀或補料罐內(nèi)(較小體積的配料可直接在罐內(nèi)配制)，然后開動攪拌器進展滅菌。其操作過程大致可分為：一、熱滅菌的原理和方法 .培育基預(yù)熱 滅菌時培育基需先加熱到80-90，然后再導(dǎo)入蒸氣升溫到120-180。 預(yù)熱的目的： 一是假設(shè)直接導(dǎo)

10、入蒸汽，由于培育基與蒸汽的溫差過大會產(chǎn)生大量的冷凝水使培育基稀釋。 二是假設(shè)直接導(dǎo)入蒸汽容易呵斥泡抹急劇上升而引起物料外溢。一、熱滅菌的原理和方法 .一、熱滅菌的原理和方法 培育基預(yù)熱 預(yù)熱的方法：先將各排氣閥翻開，將蒸汽引入夾套或蛇管進展預(yù)熱，待罐溫升到8090，將排氣閥逐漸關(guān)小。.培育基滅菌 將蒸汽從進氣口、排料口、取樣口直接導(dǎo)入罐內(nèi)(如有沖視鏡管那么也同時導(dǎo)入蒸氣)，使罐溫上升到120130，罐壓維持在105Pa(表壓)左右，并保溫30min。 一、熱滅菌的原理和方法 .滅菌時應(yīng)留意：各路蒸氣進口的進氣要暢通，防止短路逆流，罐內(nèi)液體翻動要猛烈，以使罐內(nèi)物料到達(dá)均一的滅菌溫度； 排氣量不宜

11、過大，以節(jié)約蒸氣用量；滅菌將要終了時，應(yīng)立刻引入無菌空氣以堅持罐壓，然后開夾套或蛇管冷卻水冷卻，以防止罐壓迅速下降產(chǎn)生負(fù)壓而抽吸外界空氣；在引入無菌空氣前，罐內(nèi)壓力必需低于過濾器壓力，否那么培育基(或物料)將倒流入過濾器內(nèi)，滅菌時總蒸氣壓力不低于33.5 105 Pa(表壓)，運用壓力不低于2 105Pa(表壓)。 一、熱滅菌的原理和方法 . (9)延續(xù)滅菌 培育基經(jīng)過延續(xù)滅菌以比分批滅菌高的溫度和較短的時間，進展快速延續(xù)加熱滅菌，并快速冷卻，再立刻輸入預(yù)先經(jīng)過空罐滅菌后的發(fā)酸罐中。一、熱滅菌的原理和方法 .一、熱滅菌的原理和方法 .培育基預(yù)熱 將料液預(yù)熱到60-75，防止延續(xù)滅菌 時由于料液

12、與蒸汽溫度相差過大而產(chǎn)生水氣撞擊聲。 一、熱滅菌的原理和方法 . 延續(xù)滅菌 延續(xù)滅菌是在連消塔中完成的。連消塔的主要作用是使高溫蒸氣與料液迅速接觸混合，并使料液溫度很快升高到滅菌溫度。 延續(xù)滅菌的溫度普通以126132為宜。由于保送培育基的連消泵的出口壓力普通為6105Pa，所以總蒸汽壓力要求到達(dá)4.55.0105Pa以上。只需當(dāng)兩者壓力接近，培育基流速才干均勻穩(wěn)定，否那么流速非快即慢，影響滅菌質(zhì)量。一、熱滅菌的原理和方法 . 維持滅菌溫度 由于連消塔加熱時間較短，光靠這短時間的滅菌是不夠的。因此，利用維持罐使料液在滅菌溫度下堅持67min，以到達(dá)滅菌的目的。維持罐的罐壓普通維持在 4105P

13、a左右。一、熱滅菌的原理和方法 .冷卻 消費上普通采用冷水噴淋冷卻，即用冷水在排管外從上向下噴淋，使管內(nèi)料液逐漸冷卻。普通料液冷卻到40-50后，保送到預(yù)先空消過的罐內(nèi)。在冷水噴淋前，冷卻管內(nèi)應(yīng)充溢填料。 一、熱滅菌的原理和方法 . 延續(xù)滅菌的特點： 延續(xù)滅菌的溫度較高，時間較短，培育基遭到的破壞較少，故質(zhì)量較好。延續(xù)滅菌時由于培育基滅菌不在發(fā)酵罐內(nèi)進展，所以發(fā)酵罐的利用率較高，此外，延續(xù)滅菌時蒸汽負(fù)荷平衡一致。但延續(xù)滅菌的缺乏之處是所需設(shè)備較多，操作較費事，染菌的時機也相應(yīng)增多。一、熱滅菌的原理和方法 . (8)空罐滅菌空罐滅菌即發(fā)酵罐罐體的滅菌?？展逌缇胀ňS持罐壓1.52.0105Pa，

14、罐溫125130，時間3045min。滅菌時要求總蒸氣壓力不低于3.03.5105Pa，運用壓力不低于2.53.0105Pa。滅菌后為防止罐壓急速下降呵斥負(fù)壓，要等到經(jīng)過延續(xù)滅菌的無菌培育基輸入罐內(nèi)后，才可以開冷卻水冷卻。 一、熱滅菌的原理和方法 . (4)發(fā)酵附屬設(shè)備及管路的滅菌 發(fā)酵附屬設(shè)備：總空氣過濾器、管道、計量罐、補料罐等。普通糖水罐滅菌時罐壓為1105Pa、時間為30min。滅菌時要使糖水翻騰良好，溫度不宜過高，否那么糖料易炭化。油罐(消沫劑)的罐壓為1518105Pa、時間為60 min。一、熱滅菌的原理和方法 .一、熱滅菌的原理和方法 (4)發(fā)酵附屬設(shè)備及管路的滅菌總空氣過濾器

15、滅菌時，先封鎖總進氣和出氣閥門，開啟放氣閥門，使總空氣過濾器內(nèi)的壓力降到零(表壓)?？偪諝膺^濾器滅菌的蒸汽壓力為36105Pa左右，蒸汽自上端輸入，上下放氣口放氣，總過濾器內(nèi)壓控制為152.0105Pa(表壓)，滅菌時間2h。滅菌終了，自上端輸入空氣，自上而下吹干過濾介質(zhì)。. (5)影響加熱滅菌的要素影響加熱滅菌的要素很多，其中包括：水分、脂肪、鹽類、糖、pH值、蛋白質(zhì)、菌含量、培育溫度、不同的微生物生長階段、滅菌的溫度與時間等。因此，在詳細(xì)加熱滅菌時應(yīng)思索上述這些影響要素，適當(dāng)?shù)卣{(diào)整滅菌條件。在上述這些影響要素中，滅菌的溫度與時間是最為重要的要素。表11-7一1110列出了這些關(guān)系。一、熱滅

16、菌的原理和方法 .化學(xué)藥劑滅菌的原理：與微生物細(xì)胞接觸而發(fā)生諸如蛋白量變性等作用而到達(dá)殺滅微生物的目的。作為滅菌用的化學(xué)藥劑必需具備以下四個條件： (1)殺菌譜廣且有效濃度低和殺滅微生物的速度快； (2)性質(zhì)穩(wěn)定，易溶于水且可在常溫下運用； (3)根本上不受有機物、酸、堿和其他物理化學(xué)要素的影響； (4)無腐蝕性、無毒或低毒、運用平安。二、化學(xué)藥劑滅菌的原理和方法.常用的化學(xué)藥劑包括： 甲醛、戊二醛、環(huán)氧乙烷、漂白粉、過氧乙酸、乙醇和新潔爾滅等。其用途和運用方法見表11-11。 二、化學(xué)藥劑滅菌的原理和方法.二、化學(xué)藥劑滅菌的原理和方法. 三、射線滅菌的原理和方法 射線滅菌即利用紫外線、高能量

17、的電磁波或粒子幅射滅菌。. 三、射線滅菌的原理和方法紫外線的滅菌功能：低壓水銀電弧發(fā)射的紫外線，對微生物有殺滅作用。其波長在2100-3132范圍內(nèi)有效，而最常用的有效波長為2537。紫外線對芽飽和營養(yǎng)細(xì)胞都能起作用，但其穿透力極低，只能用于外表滅菌，它對真菌孢子的殺滅才干不大。 .紫外線滅菌的適用范圍： 在發(fā)酵消費和實驗室規(guī)模，紫外線主要用來進展一定空間內(nèi)空氣的滅菌(如無菌室等，而用于大量空氣的滅菌，技術(shù)上有許多困難，因此在工業(yè)消費中用紫外線對殺滅大量流動空氣中的細(xì)菌意義不大。紫外燈的運用壽命：商品紫外燈輸出波長2637的紫外線達(dá)95，長期運用后能量逐漸衰減，殺菌效果亦即降低，因此需定期改換

18、。 三、射線滅菌的原理和方法.介質(zhì)過濾除菌主要是用于空氣除菌以得到發(fā)酵工業(yè)所需的無菌空氣?？諝?即大氣)是一種氣態(tài)混合物，除氧氣、氮氣、二氧化碳、惰性氣體和水蒸氣外，尚有懸浮在空氣中的灰塵?；覊m主要是由構(gòu)成地殼的無機物質(zhì)微粒、煙灰、植物的花粉、以及種類繁多的細(xì)菌和其他微生物組成。灰塵的含量和粒子的大小很大程度上因地域、氣候的不同而異。一船城市多于鄉(xiāng)村或山區(qū)，夏天多于冬天，特別是氣候溫暖溫潤的地域，空氣中的細(xì)菌往往較多。 四、介質(zhì)過濾除菌的原理和方法.1介質(zhì)除菌的機理 雜菌在空氣中很少單獨游離存在，常以一定方式與其他物質(zhì)結(jié)合在一同，大部分雜菌附著在煙灰、微滴等粒子上。介質(zhì)過濾或靜電除塵法除菌就是

19、把這些粒子與附著在粒子上的雜菌，以及空氣中單獨游離存在的雜菌除去。介質(zhì)除菌過程涉及到下述五種除菌機理。四、介質(zhì)過濾除菌的原理和方法. (1)沉降作用 微粒具有一定的重力，當(dāng)微粒的重力超越空氣作用于它的浮力時(不計氣流速度的影響)，即產(chǎn)生一種沉降速度。低速度的氣流經(jīng)過介質(zhì)時，微粒沉降在介質(zhì)外表。實踐上，由于氣流速度大于微粒沉降速度，因此沉降效果不明顯。所以在介質(zhì)除菌過程中，沉降是去除微生物和塵埃的次要因子。四、介質(zhì)過濾除菌的原理和方法. (2)截留作用 截留是空氣中的微生物或塵埃外表與過濾介質(zhì)外表簡單接觸，微生物和塵埃吸著在介質(zhì)外表。除菌介質(zhì)，如纖維等的直徑愈細(xì)，填充密度愈大，截留效果愈好。截留

20、作用在介質(zhì)過濾中也不是除菌的主要機理。四、介質(zhì)過濾除菌的原理和方法. (3)慣性碰撞 氣流中的微塵具有一定的慣性力，當(dāng)氣流遇到過濾介質(zhì)而改動方向時，微塵仍作直線運動以致與過濾介質(zhì)碰撞而被阻攔在過濾介質(zhì)外表。當(dāng)氣體流速到達(dá)一定值時，慣性碰按是介質(zhì)過濾除塵的主要因子。四、介質(zhì)過濾除菌的原理和方法.(4)凝聚景象 直徑小于1um的粒子在氣流中呈不規(guī)那么的直線運動，稱為分子運動，或稱布朗運動。使較小微粒凝聚為較大微粒，隨即能夠產(chǎn)生重力沉降或被過濾介質(zhì)截留。微粒愈小，分子運動的速度愈大。空氣流速低時，分子運動比較顯著，微小粒子被除去的時機添加?？諝饬魉俅髸r，凝聚景象為慣性碰撞所取代。四、介質(zhì)過濾除菌的原

21、理和方法.(5)靜電吸附 許多微生物及其孢子都帶有電荷，約有75的孢子帶有160負(fù)電子單位，15的孢子帶有514正電子單位，其他10的孢子為中性。介質(zhì)過濾中帶電荷的粒子可被帶相反電荷的介質(zhì)吸引除去。四、介質(zhì)過濾除菌的原理和方法.2空氣過濾除菌的工藝過程 工業(yè)發(fā)酵過程中為得到無菌空氣。 主要目的： 一是，提高緊縮前空氣的質(zhì)量(干凈度)。 二是，去除緊縮空氣中所帶的油和水。 三是，再加熱到3035，最后經(jīng)過總過濾器和分過濾器(有的不用分過濾器)除菌，從而獲得干凈度、壓力、溫度和流量都符合工藝要求的無菌空氣。四、介質(zhì)過濾除菌的原理和方法.四、介質(zhì)過濾除菌的原理和方法.(1)提高緊縮前空氣的質(zhì)量 主要

22、措施是提高空氣吸氣口的位置和加強吸入空氣的緊縮前過濾。提高空氣吸氣口的高度可以減少吸入空氣的微生物含量。普通空氣吸入口以離地面510m為較好。裝上前過濾器可減少往復(fù)式空氣緊縮機活塞和氣缸的磨損，減輕介質(zhì)過濾除菌的負(fù)荷。四、介質(zhì)過濾除菌的原理和方法. (2)去除緊縮空氣中所帶的油和水 緊縮空氣由于溫度高(120160)而不能直接進入空氣過濾器，因此需經(jīng)過空氣冷卻器將溫度冷卻到2025。普通一級空氣冷卻器是采用30左右水將緊縮空氣冷卻到4060，二級空氣冷卻器用9冷凍水或1518地下水，進一步將緊縮空氣冷卻到2025。 四、介質(zhì)過濾除菌的原理和方法. 冷卻后的空氣其相對濕度提高到100，由于溫度處

23、于露點以下，其中的油、水即凝結(jié)為油滴和水滴。進而用空氣貯藏罐來沉降大的油滴、水滴和穩(wěn)定壓力，用旋風(fēng)分別器分別5um以上的液滴，用絲網(wǎng)除沫器分別5um以下的液滴。四、介質(zhì)過濾除菌的原理和方法. (3)無菌空氣的獲得 分別油、水以后的空氣的相對濕度仍為100，當(dāng)濕度略微下降時(例如冬天或過濾器阻力下降很大時)就會析出水來，使過濾介質(zhì)受潮。因此，還必需運用加熱器來提高空氣溫度，降低空氣的相對濕度(要求在60以下)，以免析出水來。這樣的空氣(3035)再經(jīng)過總過濾器和分過濾器除菌后即能得到符合工藝要求的無菌空氣。四、介質(zhì)過濾除菌的原理和方法. 發(fā)酵染菌的緣由 分析以及防治措施第二節(jié) .一、前 言分析發(fā)

24、酵染菌緣由，總結(jié)防止發(fā)酵染菌的閱歷教訓(xùn)，把發(fā)酵染菌消滅在發(fā)生以前，防患于未然，是積極制服工業(yè)發(fā)酵消費過程中染菌的最重要措施。反之，如對染菌不作詳細(xì)分析，不了解緣由，盲目地采取所謂“措施，就會勞民傷財，毫無效果。.染菌緣由常因工廠不同而有所不同，但設(shè)備滲漏、空氣有菌、種子帶菌、滅菌不徹底和技術(shù)管理不善等那么是呵斥各廠染菌的普遍緣由。值得留意的是，緣由不明的染菌率愈高，從某種程度上闡明該廠的分析程度較低，有待于進一步提高。下面引見一些常見的染菌緣由和防治措施。一、前 言.一、常見的種子帶菌緣由及其防治措施種子染菌的判別： 根據(jù)長期的消費閱歷，在種子培育過程中，06h內(nèi)種子染菌是較少見的，絕大多數(shù)染

25、菌在10h以后。種子污染芽孢菌，推測能夠是由于滅菌不徹底所致，故不應(yīng)作為種子帶菌統(tǒng)計。 但種子污染酵母菌、霉菌那么能夠是種子帶菌的緣故。. 種子染菌的判別方法： 為了弄清染菌能否為種子帶菌所致，在接種后要將接種瓶中剩余的少量種子液繼續(xù)進展培育，以察看斷定能否為種子帶菌。一、常見的種子帶菌緣由及其防治措施.防治種子染菌的措施： 為了防止種子帶菌，最重要的是在制備種子時對沙土管、冷凍管，斜面及搖瓶嚴(yán)厲控制。特別是由液體菌絲體接種時的母瓶是易于招致染菌的環(huán)節(jié)，因此，堅持搖瓶的清潔可以減少被雜菌污染的時機。 如某抗生素廠在將幾只母瓶合并操作時，先把紗布去除，換上新穎滅菌的牛皮紙包好后再操作，使種子罐染

26、菌率明顯下降。由于包扎在母瓶上的紗布在搖床間培育過程中 (普通為2448小時)帶有較多的雜菌，故在操作時很容易污染母瓶種子。一、常見的種子帶菌緣由及其防治措施. 發(fā)酵設(shè)備及其附件一旦滲漏，就會呵斥染菌。例如冷卻盤管、夾套穿孔滲漏，有菌的冷卻水便會經(jīng)過漏孔進入發(fā)酵罐而招致染菌。閥門滲漏也會使帶菌的空氣或水進入發(fā)酵罐而呵斥染菌。二、設(shè)備及附件滲漏呵斥的染菌及其防治措施.設(shè)備漏隙，如肉眼所能見者，容易被發(fā)現(xiàn)也容易被治理。但對于肉眼看不見的微小漏隙，那么必需經(jīng)過加壓等各種試漏方法才干被發(fā)現(xiàn)。由于各種設(shè)備和附件都能夠發(fā)生這種微小的滲漏，加之目前還短少快速準(zhǔn)確的檢測手段，故很難發(fā)現(xiàn)。因此，經(jīng)常發(fā)生這種情況

27、，即雖已斷定是設(shè)備或其附件滲漏而引起的染菌，但控往部找不到滲漏源，以致因同一處滲漏而呵斥延續(xù)多批染菌。二、設(shè)備及附件滲漏呵斥的染菌及其防治措施.了解滲漏的緣由，及時采取措施，不但可以防止發(fā)酵染菌，還可以延伸設(shè)備及其附件的運用壽命。普通來說，呵斥發(fā)酵設(shè)備及附件滲漏的有下述四項緣由。二、設(shè)備及附件滲漏呵斥的染菌及其防治措施.1化學(xué)腐蝕及其防止 所謂化學(xué)腐蝕是指金屬或合金與介質(zhì)間直接的化學(xué)作用而引起的破壞。發(fā)酵設(shè)備及附件所接觸的介質(zhì)主要為蒸汽、空氣、油、糖及含氮的水溶液。這些介質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、與金屬或合金間的化學(xué)作用非常緩慢。調(diào)理發(fā)酵液的pH值需用酸和堿，前體如苯乙酸(青霉素發(fā)酵)、丙酸(紅霉素發(fā)

28、酵)等，這些物質(zhì)均能產(chǎn)生化學(xué)作用，即發(fā)生化學(xué)腐蝕。 二、設(shè)備及附件滲漏呵斥的染菌及其防治措施. 但由于接觸時間較短，且這些物質(zhì)的數(shù)量不多，因此，可以以為在抗生素發(fā)酵中，化學(xué)腐蝕并不是設(shè)備損壞的主要緣由。但在有機酸發(fā)酵過程中，化學(xué)腐蝕是設(shè)備損壞的主要緣由。二、設(shè)備及附件滲漏呵斥的染菌及其防治措施. 通常經(jīng)過選用耐腐蝕資料、添加緩蝕劑、控制及改善腐蝕環(huán)境(如降低冷卻水中的氯離子)等措施，可以降低或防止化學(xué)腐蝕。運用防腐涂料也是防止化學(xué)腐蝕的有效措施之一，并在工業(yè)發(fā)酵中得到運用。 二、設(shè)備及附件滲漏呵斥的染菌及其防治措施.2電化學(xué)腐蝕及其防止 金屬腐蝕經(jīng)常伴有電流發(fā)生。當(dāng)電子從金屬的某一區(qū)域的電介質(zhì)

29、溶液挪動而引起的破壞稱為電化學(xué)腐蝕，即由于電介質(zhì)的存在，在金屬外表產(chǎn)生微電池作用，從而使較活潑的金屬放出電子而發(fā)生氧化反響的一種腐蝕。電化學(xué)腐蝕能不斷深化金屬內(nèi)部，使設(shè)備腐蝕穿孔，電化學(xué)腐蝕的破壞性比化學(xué)腐蝕嚴(yán)重。在抗生素發(fā)酵過程中，需求延續(xù)輸入空氣，又延續(xù)產(chǎn)生二氧化碳，從而使發(fā)酵設(shè)備加速腐蝕。二、設(shè)備及附件滲漏呵斥的染菌及其防治措施.防止方法： 電化學(xué)腐蝕常采用陰極維護法來防止，其根本原理是使要維護的金屬成為陰極，由于由于陰極是復(fù)原反響，從而使金屬得到維護。但對抗生素發(fā)酵設(shè)備的電化學(xué)腐蝕來說，幾乎還沒有維護的方法。二、設(shè)備及附件滲漏呵斥的染菌及其防治措施. 3腐蝕及其防止 金屬、合金或非金屬

30、資料與介質(zhì)長期延續(xù)不斷地摩擦而引起的破壞稱為腐蝕。腐蝕沒有化學(xué)和電化學(xué)反響發(fā)生，純粹是機械磨損。二、設(shè)備及附件滲漏呵斥的染菌及其防治措施. 產(chǎn)生腐蝕的緣由： 工業(yè)發(fā)酵培育基中常含有黃豆餅粉、花生粉或其他種籽餅粉等固體成分，在發(fā)酵過程中因攪拌而與罐壁、盤管、攪拌軸、擋板等長期延續(xù)摩擦，使罐體、盤管磨蝕而穿孔走漏。各種籽真實榨油和籽餅加工過程中，能夠摻雜泥沙、金屬等異物，從而使磨蝕加快。 二、設(shè)備及附件滲漏呵斥的染菌及其防治措施.腐蝕的緣由： 培育基中的其他成分如玉米漿等，也?；煊泄腆w異物，這些都是呵斥磨損的緣由。呵斥磨蝕的另一個不可忽視的緣由是蒸汽和緊縮空氣對設(shè)備的沖擊。 二、設(shè)備及附件滲漏呵斥

31、的染菌及其防治措施. 3腐蝕及其防止 腐蝕的防止方法： 一是，對發(fā)酵用的培育基中的固體成分研磨到相當(dāng)?shù)募?xì)度。如美國施貴寶公司將培育基中的黃豆餅粉研磨到200目以下。 二是，設(shè)備定期檢修時，應(yīng)檢查一下設(shè)備中受蒸汽、空氣和其他流體沖擊的部位能否被磨蝕，如被磨蝕應(yīng)及時采取措施。二、設(shè)備及附件滲漏呵斥的染菌及其防治措施.4設(shè)備加工不良遭成滲漏及其防止 由于設(shè)備制造加工者對工業(yè)發(fā)酵工藝要求不了解，所以設(shè)備加工不良或有缺陷而引起穿孔滲漏，也是常見的染菌緣由之一。 屬于制造加工不良的滲漏多發(fā)生在彎頭和焊縫處。因此工廠在正式投入運用前，應(yīng)進展適當(dāng)?shù)恼{(diào)研和實驗，以保證所用設(shè)備或附件能順應(yīng)工藝要求。二、設(shè)備及附件

32、滲漏呵斥的染菌及其防治措施.4設(shè)備加工不良遭成滲漏及其防止 設(shè)備及附件滲漏而導(dǎo)致染菌的機率很高，因此，有必要對發(fā)酵用的設(shè)備及附件進展規(guī)范化的維修。各種設(shè)備及附件的檢查內(nèi)容、時間間隔、維修質(zhì)量規(guī)范等列于表11-1711-25(抗生素發(fā)酵)。二、設(shè)備及附件滲漏呵斥的染菌及其防治措施. 三、培育基滅菌不徹底導(dǎo)致染菌及其防治措施 培育基滅菌不徹底是常見的染菌緣由。呵斥這一緣由的主要要素有三個方面： 一是，蒸氣壓力缺乏或蒸氣量缺乏以及滅菌時間不夠。 二是，滅菌時培育基產(chǎn)生大量泡沫或發(fā)酵罐內(nèi)有污垢堆積以及培育基中有不溶解的固體顆粒。 . 三是，設(shè)備制造或安裝不合理而使滅菌時蒸汽短路。由培育基滅菌不徹底而產(chǎn)

33、生的染菌大多表如今發(fā)酵前期，且污染的雜菌大多為耐高溫的芽孢菌。.根據(jù)上述幾種呵斥培育基滅菌不徹底而導(dǎo)致染菌的緣由，采取相應(yīng)的措施，可以防止。如滅菌時的蒸氣壓力、蒸氣量和滅菌時間一定要保證；滅菌時從常溫升到滅菌溫度的升溫時間不宜太快(普通為45min左右)，以防止大量泡沫的產(chǎn)生，由于染菌大多是由于通蒸氣滅菌時泡沫上升到發(fā)酵罐罐頂不易消逝呵斥的。 三、培育基滅菌不徹底導(dǎo)致染菌及其防治措施.為防止滅菌時泡沫的產(chǎn)生，最好將含有大量糖及氮的培育基分開滅菌，尤其是在當(dāng)原材科易受潮、結(jié)塊、甚至發(fā)霉蛻變的季節(jié)，將糖氮分開滅菌會減少泡沫的產(chǎn)生。投料方式有時也會影響泡沫的構(gòu)成。進氣和排氣控制不當(dāng)，容易產(chǎn)生泡沫，故

34、要緩慢開啟進氣和排氣閥門以防止泡沫上升。再那么，合理地創(chuàng)作加工和安裝設(shè)備及有關(guān)的附件，使滅菌時蒸汽可以通到各個部位而不留有“死角。 三、培育基滅菌不徹底導(dǎo)致染菌及其防治措施.空氣系統(tǒng)導(dǎo)致染菌是抗生素發(fā)酵染菌的主要緣由之一。因空氣不潔呵斥的染菌，可涉及許多發(fā)酵罐批，對消費危害甚大?？諝獬到y(tǒng)環(huán)節(jié)較多，彼此相互制約，倘假設(shè)一個環(huán)節(jié)失調(diào)，就會使滅菌失敗，這是空氣系統(tǒng)容易染菌的主要緣由。 四、空氣系統(tǒng)導(dǎo)致染菌及其防治措施 . 空氣帶菌主要包括： (1)油摻入空氣和列管式冷卻器穿孔；可采用無光滑油活塞式空氣緊縮機和定期檢查列管式冷卻器來處理。 (2)空氣過濾器過濾介質(zhì)松動、過濾介質(zhì)老化、操作不當(dāng)使過濾介質(zhì)受潮、滅菌時被冷凝水潤濕等?？山?jīng)過嚴(yán)厲按操作規(guī)程操作，定期改換過濾介質(zhì)和檢修過濾器來處理。 四、空氣系統(tǒng)導(dǎo)致染菌及其防治措施 . 良好的發(fā)酵設(shè)備和嚴(yán)厲的滅菌操作是防止染菌的先決條件。但是，單純注重技術(shù)操作而忽視技術(shù)管理，就