細(xì)胞工程全套課件

1、緒 論緒 論知識(shí)目標(biāo)：了解細(xì)胞工程的發(fā)展簡(jiǎn)史掌握細(xì)胞工程及其相關(guān)概念掌握細(xì)胞工程主要技術(shù)了解細(xì)胞工程的應(yīng)用 緒 論細(xì)胞工程應(yīng)用的原理和方法細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)細(xì)胞整體水平或細(xì)胞器水平按照人們的意愿來(lái)改變細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細(xì)胞產(chǎn)品概念分類植物細(xì)胞工程研究的目的研究的水平動(dòng)物細(xì)胞工程緒 論第一節(jié) 細(xì)胞工程的基本概念是指細(xì)胞融合和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。包括所有的生物組織、器官及細(xì)胞離體操作與培養(yǎng)緒 論第一節(jié) 細(xì)胞工程的基本概念一、細(xì)胞工程（cell engineering）定義是指在細(xì)胞水平上的遺傳工程，即應(yīng)用細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)的方法，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行遺傳操作，如細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合、細(xì)胞誘變、細(xì)胞重組、

2、細(xì)胞遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移和生殖工程等，以獲得所期望遺傳組成的細(xì)胞或生物體，從而達(dá)到改良生物品種或創(chuàng)造新品種，加速繁育動(dòng)植物個(gè)體，或利用細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生某種有用物質(zhì)的過程。細(xì)胞工程的核心技術(shù)：細(xì)胞培養(yǎng)與繁殖目的：獲得新性狀、新個(gè)體、新物質(zhì)緒 論第一節(jié) 細(xì)胞工程的基本概念二、細(xì)胞工程的分類、植物細(xì)胞工程（plant cell engineering）是細(xì)胞工程的一個(gè)重要的分支，是一門以植物組織和細(xì)胞的離體操作為基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)性學(xué)科。它是以植物組織細(xì)胞為基本單位，在離體條件下進(jìn)行培養(yǎng)、繁殖或人為的精細(xì)操作，使細(xì)胞的某些生物學(xué)特性按人們的意愿發(fā)生改變，從而改良品種或創(chuàng)造新物種，或加速繁殖植物個(gè)體，或獲得有用物質(zhì)的過程

3、統(tǒng)稱為植物細(xì)胞工程緒 論第一節(jié) 細(xì)胞工程的基本概念二、細(xì)胞工程的分類植物細(xì)胞工程的任務(wù)（1）研究植物器官、組織和細(xì)胞在離體培養(yǎng)條件下，所需要的有機(jī)營(yíng)養(yǎng)、無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)、植物激素等培養(yǎng)條件和刺激因素。（2）研究植物器官、組織和細(xì)胞，在離體培養(yǎng)條件下，所需的溫度、濕度和光照等環(huán)境條件。（3）研究植物的不同生理年齡、遺傳組成（基因型）在離體培養(yǎng)條件下，形態(tài)發(fā)生的規(guī)律。（4）研究離體培養(yǎng)條件下再生植株群體的遺傳穩(wěn)定性和變異性。、 緒 論第一節(jié) 細(xì)胞工程的基本概念二、細(xì)胞工程的分類2、動(dòng)物細(xì)胞工程（ animal cell engineering ）是細(xì)胞工程的另一個(gè)重要的分支，是對(duì)動(dòng)物的細(xì)胞、組織和器官培養(yǎng)

4、、細(xì)胞融合、細(xì)胞重組、遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移和生殖工程等從細(xì)胞水平改變動(dòng)物細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，用于生產(chǎn)特定生物制品、培育動(dòng)物新品種和應(yīng)用于人類的優(yōu)生。就技術(shù)范圍而言，動(dòng)物細(xì)胞工程包括:細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)（組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)）；細(xì)胞融合技術(shù)；胚胎工程技術(shù) （核移植、胚胎分割等）；克隆技術(shù)（單細(xì)胞系克隆、器官克隆、個(gè)體克隆），這些便是動(dòng)物細(xì)胞工程的主要內(nèi)容。緒 論第一節(jié) 細(xì)胞工程的基本概念二、細(xì)胞工程的分類2、動(dòng)物細(xì)胞工程（ animal cell engineering ）是細(xì)胞工程的另一個(gè)重要的分支，是對(duì)動(dòng)物的細(xì)胞、組織和器官培養(yǎng)、細(xì)胞融合、細(xì)胞重組、遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移和生殖工程等從細(xì)胞水平改變動(dòng)物細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，用于

5、生產(chǎn)特定生物制品、培育動(dòng)物新品種和應(yīng)用于人類的優(yōu)生。就技術(shù)范圍而言，動(dòng)物細(xì)胞工程包括:細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)（組織培養(yǎng)、器官培養(yǎng)）；細(xì)胞融合技術(shù)；胚胎工程技術(shù) （核移植、胚胎分割等）；克隆技術(shù)（單細(xì)胞系克隆、器官克隆、個(gè)體克?。@些便是動(dòng)物細(xì)胞工程的主要內(nèi)容。緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要技術(shù)一、細(xì)胞與組織培養(yǎng)技術(shù)（cell and tissue culture）屬體外培養(yǎng)（in vitro culture），可分為三個(gè)層次的培養(yǎng)：細(xì)胞培養(yǎng) 組織培養(yǎng) 器官培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)是進(jìn)行細(xì)胞工程操作的基本技術(shù)和 內(nèi)容。 緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要技術(shù) 植物細(xì)胞與組織培養(yǎng)的基本技術(shù)要點(diǎn):取材和消毒準(zhǔn)備培養(yǎng)基接種移栽緒

6、 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程示意圖:緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要技術(shù) 細(xì)胞與組織培養(yǎng)技術(shù)價(jià)值該技術(shù)最顯著的價(jià)值在于能快速、大量繁殖一些有價(jià)值的苗林、花卉、藥材和瀕危植物等，并可以在培養(yǎng)無(wú)毒苗、長(zhǎng)期貯存種子、細(xì)胞和原生質(zhì)融合以及生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物方面發(fā)揮作用。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可生產(chǎn)許多有應(yīng)用價(jià)值的細(xì)胞產(chǎn)品，如多種單克隆抗體、疫苗、酶、激素以及免疫調(diào)節(jié)因子等。其中單克隆抗體的生物反應(yīng)器大規(guī)模生產(chǎn)，已經(jīng)在醫(yī)藥領(lǐng)域產(chǎn)生了極大的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要技術(shù)二、細(xì)胞融合技術(shù)（cell fusion）又稱細(xì)胞雜交（cell hybridization），是指在外力（誘導(dǎo)劑

7、或促融劑）作用下，兩個(gè)或兩個(gè)以上的異源（種屬間）細(xì)胞或原生質(zhì)體融合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。是轉(zhuǎn)移異源遺傳物質(zhì)創(chuàng)造新種質(zhì)或新材料的一種重要細(xì)胞工程技術(shù)。緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要技術(shù)二、細(xì)胞融合技術(shù)（cell fusion）技術(shù)要點(diǎn): 原生質(zhì)體的制備 細(xì)胞融合 融合細(xì)胞的培養(yǎng) 雜種細(xì)胞的篩選 雜種細(xì)胞的分化與再生 再生植株的鑒定 緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要技術(shù)二、細(xì)胞融合技術(shù)（cell fusion）技術(shù)價(jià)值:最大的貢獻(xiàn)是動(dòng)植物、微生物新品種的培育方面。應(yīng)用該技術(shù)能把親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，甚至毫無(wú)親緣關(guān)系的生物體細(xì)胞融合在一起，為遠(yuǎn)源雜交架起了橋梁，是改造細(xì)胞遺傳物質(zhì)的有力手段； 動(dòng)物細(xì)胞的融合后形成的

8、雜交瘤主要用來(lái)獲得單克隆抗體，被成為“生物導(dǎo)彈”，將為治療癌癥開辟一條新的途徑；此外細(xì)胞融合技術(shù)為攜帶外源基因的載體（如攜帶抗病基因的載體Ti和Ri）進(jìn)入細(xì)胞創(chuàng)造了條件。緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要技術(shù)三、細(xì)胞拆合技術(shù)(nuclear transplantation)也稱為細(xì)胞核(包括細(xì)胞器)移植技術(shù)，是用某種方法如利用顯微操作技術(shù)將細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)拆開或者把細(xì)胞核從細(xì)胞質(zhì)中吸取出來(lái)，或用紫外線等把細(xì)胞中的核殺死，然后再把分離的同中或異種細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)重新組合起來(lái)，形成一個(gè)新細(xì)胞或新生物個(gè)體，賦予重建的細(xì)胞以某種新的功能。緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要技術(shù)三、細(xì)胞拆合技術(shù)(nuclear tran

9、splantation)細(xì)胞拆合技術(shù)和細(xì)胞融合技術(shù)匯合，建立了細(xì)胞重組技術(shù)。細(xì)胞重組技術(shù)已成為一種十分重要的現(xiàn)代生物技術(shù)。 緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要技術(shù)四、染色體工程 (chromosome engineering )按照人們一定的設(shè)計(jì)，把單個(gè)的染色體或染色體組轉(zhuǎn)入或移出受體細(xì)胞，從而形成新的染色體組合和遺傳構(gòu)成，達(dá)到定向改變遺傳性和選育新品種的一種技術(shù)。該技術(shù)最大的價(jià)值是新品種的培育。緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要技術(shù)四、染色體工程 (chromosome engineering )主要分為: 植物染色體工程 動(dòng)物染色體工程 植物染色體工程目前主要是利用傳統(tǒng)的雜交回交等方法達(dá)到改變?nèi)旧w的

10、目的。 動(dòng)物染色體工程主要是通過對(duì)染色體顯微操作技術(shù)達(dá)到轉(zhuǎn)移基因的目的。緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要技術(shù)五、胚胎工程(embryonic engineering)以生殖細(xì)胞和胚胎細(xì)胞為對(duì)象進(jìn)行的操作， 主要技術(shù)包括體外受精、胚胎切割、胚胎移植等。 胚胎移植技術(shù)是將一個(gè)生物體內(nèi)的胚胎移植到另一個(gè)生物體內(nèi)繁殖的技術(shù)，這樣可能大量繁殖優(yōu)良的品種。緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要技術(shù)五、胚胎工程(embryonic engineering)具體操作是： 先注射雌性激素在一雌性動(dòng)物的體內(nèi)，促使其大量排卵 然后在體外人工受精后發(fā)育成為胚胎 后再植入其它同類動(dòng)物的子宮內(nèi)使其發(fā)育成為個(gè)體緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主

11、要技術(shù)五、胚胎工程(embryonic engineering)價(jià)值:一頭優(yōu)良的牛馬等動(dòng)物一年可以產(chǎn)四五十頭，大大提高了繁殖率，從而可以降低胚胎成本，擴(kuò)大移植胚的來(lái)源，使農(nóng)畜動(dòng)物胚胎移植的推廣應(yīng)用成為可能。 優(yōu)勢(shì):體外受精可以準(zhǔn)確地確定受精的時(shí)間和胚胎發(fā)育階段，因此，利用體外受精技術(shù)進(jìn)行核移植性別控制和基因?qū)耄赏S化生產(chǎn)遺傳性穩(wěn)定生產(chǎn)性能優(yōu)良的家畜，以加快農(nóng)畜良種化。 緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要技術(shù)五、胚胎工程(embryonic engineering)具體操作是： 先注射雌性激素在一雌性動(dòng)物的體內(nèi)，促使其大量排卵 然后在體外人工受精后發(fā)育成為胚胎 后再植入其它同類動(dòng)物的子宮內(nèi)使其發(fā)

12、育成為個(gè)體緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要技術(shù)六、細(xì)胞遺傳工程 主要包括細(xì)胞克隆和轉(zhuǎn)基因技術(shù)。 克隆是指離體條件下的無(wú)性繁殖。 動(dòng)物克隆技術(shù)主要是指核移植技術(shù)。 簡(jiǎn)單地講，將發(fā)育各個(gè)階段（胚胎、胎兒、幼子、成年）的一個(gè)細(xì)胞，利用顯微操作技術(shù)，移植到一個(gè)去掉了細(xì)胞核的成熟的卵母細(xì)胞中，在適當(dāng)?shù)臈l件下，重新形成一個(gè)胚胎，把這個(gè)胚胎移植到生殖周期相近的代理母體內(nèi)，最終發(fā)育成一個(gè)正常的動(dòng)物個(gè)體。緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要技術(shù)六、細(xì)胞遺傳工程轉(zhuǎn)基因技術(shù)即將目標(biāo)性狀基因分離出來(lái)，構(gòu)建重組DNA分子導(dǎo)入生物體，得到穩(wěn)定表達(dá)，并能夠遺傳給后代的技術(shù)。目前已成為物種遺傳改良的最有效途徑。緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主

13、要技術(shù)七、干細(xì)胞與組織工程 干細(xì)胞（stem cell）是動(dòng)物體內(nèi)具有分化潛能，并能自我更新的細(xì)胞. 分為胚胎干細(xì)胞和組織干細(xì)胞。 胚胎干細(xì)胞來(lái)自囊胚期的細(xì)胞團(tuán)，屬于全能干細(xì)胞，每個(gè)細(xì)胞可以發(fā)育成為完整的個(gè)體。 組織干細(xì)胞存在于成體組織中，屬單能或多能干細(xì)胞，可以定向分化為一種或幾種不同的組織。緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要技術(shù)七、干細(xì)胞與組織工程 組織工程是在干細(xì)胞的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，將干細(xì)胞與材料科學(xué)相結(jié)合，將自體或異體的干細(xì)胞經(jīng)體外擴(kuò)增后種植在預(yù)先構(gòu)建好的聚合物骨架上，在適宜的生長(zhǎng)條件下干細(xì)胞沿聚合物骨架遷移鋪展生長(zhǎng)和分化，最終發(fā)育具有特定形態(tài)及功能的工程組織。緒 論第二節(jié) 細(xì)胞工程的主要

14、技術(shù)七、干細(xì)胞與組織工程“治療性克隆”:如果能夠消除體細(xì)胞的“記憶”，它們就有可能恢復(fù)到胚胎細(xì)胞的狀態(tài)科學(xué)家稱之為把細(xì)胞“重編程”。把通過“重編程”得到的干細(xì)胞在不同的環(huán)境條件下進(jìn)行培養(yǎng)，就能得到各種分化細(xì)胞。人們通常把這種利用體細(xì)胞制造胚胎干細(xì)胞，分化后再移植回人體的技術(shù)。緒 論第三節(jié) 細(xì)胞工程的發(fā)展歷史 一、植物細(xì)胞工程的發(fā)展簡(jiǎn)史大致經(jīng)歷了三個(gè)階段： （一）探索階段（1902-1929） （二）培養(yǎng)技術(shù)建立階段（1930-1959） （三）應(yīng)用研究階段（1960- ） （1）原生質(zhì)體培養(yǎng)和細(xì)胞融合。 （2）微繁技術(shù) （3）花藥培養(yǎng)技術(shù) （4）次生產(chǎn)物生產(chǎn)緒 論第三節(jié) 細(xì)胞工程的發(fā)展歷史 二

15、、動(dòng)物細(xì)胞工程發(fā)展史 1、細(xì)胞融合現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn) 2、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的建立 3、細(xì)胞融合技術(shù)的建立和雜交瘤技術(shù)的誕生 4、動(dòng)物克隆技術(shù)的建立緒 論第三節(jié) 細(xì)胞工程的發(fā)展歷史 （一）植物細(xì)胞工程的應(yīng)用1、脫毒和快速繁殖2、細(xì)胞工程育種 （1）利用培養(yǎng)變異，篩選優(yōu)良 突變體。 （2）利用遠(yuǎn)緣雜交幼胚培養(yǎng)，獲得雜種植株，克服其雜交不親和性。 （3）利用細(xì)胞融合技術(shù)，克服遠(yuǎn)緣雜交不親和性。 （4）倍性育種3、離體種質(zhì)保存4、細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)有用物質(zhì)緒 論第三節(jié) 細(xì)胞工程的發(fā)展歷史 （二）動(dòng)物細(xì)胞工程的應(yīng)用1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)醫(yī)藥產(chǎn)品（單克隆 抗體）2、新品種培育3、試管動(dòng)物與嬰兒4、組織工程5、珍稀動(dòng)植物資

16、源的保存與保護(hù)第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ) 本章重點(diǎn)回顧與細(xì)胞工程相關(guān)的理論背景知識(shí)，尤其是細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等方面的知識(shí)，為后續(xù)章節(jié)的學(xué)習(xí)奠定基礎(chǔ)。第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)第二節(jié)分子生物學(xué)基礎(chǔ)第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)知識(shí)目標(biāo)：掌握原核生物和真核生物的細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能重點(diǎn)掌握與細(xì)胞工程相關(guān)的細(xì)胞生物學(xué)及分子生物學(xué)的有關(guān)理論知識(shí)。能力目標(biāo)：能夠運(yùn)用細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)的相關(guān)知識(shí)為學(xué)習(xí)細(xì)胞工程打下基礎(chǔ)。第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 一、細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)二、細(xì)胞的分類 三、細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)與功能四、染色質(zhì)和染色體五、細(xì)胞分裂與繁殖 六、細(xì)胞周期七、細(xì)胞分化與細(xì)胞全能性八、細(xì)胞衰老、死亡與癌變 第二章

17、細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 一、細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)1、構(gòu)成生物體的結(jié)構(gòu)和功能單位細(xì)胞2、1665年，英國(guó)人羅伯特胡克觀察到死亡細(xì)胞的細(xì)胞壁，他稱之為細(xì)胞（cell）1831年羅伯特布朗發(fā)現(xiàn)蘭科植物葉片表皮細(xì)胞中的細(xì)胞核。1835年發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)-細(xì)胞內(nèi)含物，于是細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)和形態(tài)逐漸為人所知。地球上，具有獨(dú)立生命活動(dòng)的所有生物均由一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞組成。第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 一、細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)3、德國(guó)植物學(xué)家施來(lái)登(Mathias Schleiden)和動(dòng)物學(xué)家施旺(Theodor Schwann)創(chuàng)立了細(xì)胞學(xué)說 對(duì)細(xì)胞的研究在細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞（超微）結(jié)構(gòu)、細(xì)胞周期、

18、核型、基因調(diào)控、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分化和凋亡、腫瘤生物學(xué)等方面取得了重大進(jìn)展， 二、細(xì)胞的分類真核細(xì)胞:原核細(xì)胞:有成形的細(xì)胞核(有核膜包被)無(wú)成形的細(xì)胞核(無(wú)核膜包被),只有核區(qū)原核細(xì)胞真核細(xì)胞原核生物真核生物 1、根據(jù)細(xì)胞核結(jié)構(gòu)的分化程度不同，將細(xì)胞分為原核細(xì)胞和真核細(xì)胞 第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 二、細(xì)胞的分類 第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)2、原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的主要特征 見書16頁(yè)表2.1 原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的主要特征比較 （一）原核細(xì)胞 種類：細(xì)菌、藍(lán)藻、放線菌等第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ) 第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)1.細(xì)菌 （1）細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)是在自然界分布最廣、個(gè)體

19、數(shù)量最多的有機(jī)體?？煞譃椋呵蚓?、桿菌和螺旋菌（弧形菌）。絕大多數(shù)細(xì)菌的直徑在0.5-5m之間。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)大腸桿菌第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)淋病球菌第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)肉毒梭菌第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)弧形霍亂菌第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)細(xì)胞壁：主要成分是肽聚糖，由N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸構(gòu)成雙糖單元，以（1-4）糖苷鍵連接成大分子。N-乙酰胞壁酸分子上有四肽側(cè)鏈，相鄰聚糖纖維之間的短肽通過肽橋（革蘭氏陽(yáng)性菌）或肽鍵（革蘭氏陰性菌）橋接起來(lái)，形成了肽聚糖片層。革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁厚約20-80nm，有

20、15-50層肽聚糖片層，每層厚1nm，含20-40的磷壁酸（teichoic acid。革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁厚約10nm，僅2-3層肽聚糖，另外還有脂多糖、細(xì)菌外膜和脂蛋白。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁 革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu) 細(xì)胞膜 厚約8-10nm，外側(cè)緊貼細(xì)胞壁。一些行光合作用的原核生物，質(zhì)膜具有與捕光反應(yīng)有關(guān)的內(nèi)褶。一些革蘭氏陽(yáng)性菌質(zhì)膜內(nèi)褶形成小管狀結(jié)構(gòu)，稱為間體 。mesosome第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)擬核：DNA分子裸露，沒有內(nèi)含子，具有重疊基因。大

21、腸桿菌低電子密度區(qū)為擬核第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)核糖體： 約含5000-50000個(gè)。 部分附著在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，大部分游離于細(xì)胞質(zhì)中。沉降系數(shù)為70S。由大亞單位(50S)與小亞單位(30S)組成。 小亞單位對(duì)四環(huán)素與鏈霉素敏感，大亞單位對(duì)紅霉素與氯霉素敏感。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)質(zhì)粒(plasmid) ：除核區(qū)DNA外，可進(jìn)行自主復(fù)制的遺傳因子，是裸露的環(huán)狀DNA分子，所含遺傳信息量為2-200個(gè)基因，能進(jìn)行自我復(fù)制，有時(shí)能整合到核DNA中去。質(zhì)粒常用作基因重組與基因轉(zhuǎn)移的載體。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)莢膜（capsule）：細(xì)菌最外表的一層多

22、糖類物質(zhì)。功能：抵御不良環(huán)境；保護(hù)自身不受吞噬；選擇性的粘附到特定細(xì)胞的表面上。Negative stained bacteria第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)鞭毛： 細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)器官，由鞭毛蛋白構(gòu)成第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)菌毛：是菌體表面極其的蛋白纖細(xì)，與細(xì)菌運(yùn)動(dòng)無(wú)關(guān)。分為細(xì)胞菌毛和性菌毛兩類。前者與細(xì)菌吸附和侵染宿主有關(guān)，后者為中空管子，與傳遞遺傳物質(zhì)有關(guān)。 第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)（2）繁殖方式：以二分裂的方式繁殖，某些細(xì)菌處于不利的環(huán)境，或耗盡營(yíng)養(yǎng)時(shí)，形成內(nèi)生孢子，又稱芽孢，是對(duì)不良環(huán)境有強(qiáng)抵抗力的休眠體。 分裂中的鏈球菌分裂中的大腸桿菌第二章細(xì)

23、胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)（3）細(xì)菌毒素 細(xì)菌產(chǎn)生對(duì)機(jī)體有毒害作用的化學(xué)物質(zhì)，稱為毒素。包括內(nèi)毒素和外毒素。特性外毒素內(nèi)毒素產(chǎn)生細(xì)菌主要是革蘭氏陽(yáng)性菌 主要為革蘭氏陰性菌來(lái)源由活的細(xì)菌釋放至菌體外 是細(xì)菌細(xì)胞壁成分，細(xì)菌崩解后釋放出來(lái)化學(xué)成分蛋白質(zhì)多糖-磷脂-蛋白質(zhì)復(fù)合物毒性毒性強(qiáng)，各種細(xì)菌的外毒素對(duì)某些組織細(xì)胞有特殊的親和力，引起特異性病變。毒性弱，各種細(xì)菌內(nèi)毒素的毒性作用相似。全身性、致發(fā)熱、腹瀉、嘔吐。 抗原性強(qiáng)，能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗毒素。經(jīng)甲醛處理，可脫毒成為類毒素。弱，不能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗毒素。不能經(jīng)甲醛處理成為類毒素。致熱性對(duì)宿主不致熱致熱性。常致宿主發(fā)熱耐熱性一般不耐熱，60以上

24、迅速破壞。耐熱，60耐熱數(shù)小時(shí)。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)2.古細(xì)菌 無(wú)核膜及內(nèi)膜系統(tǒng)；以甲硫氨酸起始蛋白質(zhì)的合成、核糖體對(duì)氯霉素不敏感、RNA聚合酶和真核細(xì)胞的相似、具有內(nèi)含子和組蛋白。細(xì)胞膜中的脂類不可皂化，細(xì)胞壁不含肽聚糖。生活在極端環(huán)境中，如：極端嗜熱菌、產(chǎn)甲烷菌、極端嗜鹽菌、極端嗜熱菌。 第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)海底煙筒附近也具有古細(xì)菌第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)地球上在大約12億億年前才出現(xiàn)真核細(xì)胞。真核細(xì)胞由原核細(xì)胞進(jìn)化而來(lái)，細(xì)胞內(nèi)有核膜包被的真正的細(xì)胞核，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有功能不同的多種細(xì)胞器，如線粒體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等。大多數(shù)動(dòng)、植物細(xì)胞均為真核細(xì)胞。 （二） 真核細(xì)胞：第二章細(xì)胞工

25、程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)1.植物細(xì)胞 除簡(jiǎn)單的藻類植物外，植物細(xì)胞都屬于真核細(xì)胞。高等植物細(xì)胞具有最完善的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。 第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)1.細(xì)胞膜2.細(xì)胞壁3.細(xì)胞質(zhì)4.葉綠體5.高爾基體 6.核仁7.核液8.核膜9.染色質(zhì)10.核孔 11.線粒體12.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)13.游離的核糖體14.液泡15.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的核糖體第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)2.動(dòng)物細(xì)胞 與植物細(xì)胞不同，動(dòng)物細(xì)胞沒有細(xì)胞壁，但具有植物細(xì)胞不具有的中心體。1.細(xì)胞膜2.細(xì)胞質(zhì)3.高爾基體4.核液5.染色質(zhì) 6.核仁7.核膜8.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)9.線粒體10.核孔11.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的核糖體12.游離的核糖體13.中心體第二章細(xì)胞工程基

26、礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)動(dòng)物細(xì)胞與植物細(xì)胞的比較 細(xì)胞組分動(dòng)物細(xì)胞植物細(xì)胞細(xì)胞壁無(wú)有葉綠體無(wú)有液泡無(wú)有圓球體無(wú)有乙醛酸循環(huán)體無(wú)有溶酶體有有中心體有無(wú)通訊連接方式間隙連接胞間連絲胞質(zhì)分裂方式收縮環(huán)細(xì)胞板第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)3真菌 第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 真菌不是植物真菌不含葉綠素，無(wú)根、莖、葉的分化。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)真菌細(xì)菌細(xì)胞真核細(xì)胞原核細(xì)胞細(xì)胞核有，還有核仁、核膜擬核，無(wú)核仁、核膜細(xì)胞器有只有核糖體細(xì)胞壁無(wú)肽聚糖，由多糖（75%）與蛋白質(zhì)（25%）有肽聚糖對(duì)青霉素或頭孢菌素敏感不敏感敏感細(xì)胞膜含固醇不含固醇大小，復(fù)雜程度比細(xì)菌大幾倍至幾十倍，結(jié)構(gòu)復(fù)雜小，簡(jiǎn)單第二章細(xì)胞工程基

27、礎(chǔ)(1)真菌形態(tài)結(jié)構(gòu)及類型 單細(xì)胞真菌 圓形或卵圓形 酵母菌(yeast)多細(xì)胞真菌 菌絲和孢子， 絲狀菌(filamentous fungus) 交織成團(tuán) 或霉菌(mold) 二相性(dimorphic)1.菌絲 hypha2.孢子 spore第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)單細(xì)胞真菌形態(tài)新生隱球菌第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)酵母菌出芽繁殖第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)多細(xì)胞真菌形態(tài)sporehypha第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)菌絲 （ hypha）有隔菌絲 多數(shù)致病性真菌無(wú)隔菌絲營(yíng)養(yǎng)菌絲氣生菌絲生殖菌絲在環(huán)境適宜情況下由孢子長(zhǎng)出芽管，逐漸延長(zhǎng)呈絲狀，稱菌絲 菌絲形態(tài)有助于鑒別 第二章細(xì)胞工程基

28、礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)孢子 spore孢子芽胞作用真菌繁殖結(jié)構(gòu)細(xì)菌休眠結(jié)構(gòu)，抵御不良環(huán)境抵抗力不強(qiáng)，加熱6070短時(shí)間即可死亡強(qiáng)，有的可耐100數(shù)小時(shí)第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)有性孢子:同一菌體或不同菌體上的2個(gè)細(xì)胞融合經(jīng)減數(shù)分裂形成 無(wú)性孢子:菌絲上的細(xì)胞分化或出芽生成 病原性真菌大多形成無(wú)性孢子 分生孢子葉狀孢子孢子囊孢子大分生孢子 大小、細(xì)胞數(shù)和顏色是鑒定的重要依據(jù) 小分生孢子 真菌都能產(chǎn)生芽生孢子 假菌絲 厚膜孢子 關(guān)節(jié)孢子 第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)大分生孢子第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)芽生孢子第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)假菌絲第二章

29、細(xì)胞工程基礎(chǔ)厚膜孢子第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)關(guān)節(jié)孢子第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)孢子囊孢子(2)發(fā)酵生產(chǎn)常用的真菌種類 霉菌 酵母菌 啤酒酵母 紅曲霉素 假絲酵母 黃曲霉 抗生菌第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)三、細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)與功能 （一）主要細(xì)胞器 1.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（endoplasmic reticulum，ER）： 由膜圍成一個(gè)連續(xù)的管道系統(tǒng)。 第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和核糖體內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是膜連接成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成和加工,以及脂質(zhì)合成的“車間”核糖體有的附著在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上,有的游離在細(xì)胞質(zhì)中,是“生產(chǎn)蛋白質(zhì)的機(jī)器”第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)2.高爾基體：是蛋白質(zhì)進(jìn)行加工、分類和包裝

30、的“車間”及“發(fā)送站”，與細(xì)胞壁的合成有關(guān)（單層膜）第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 3.溶酶體：是“消化車間”，內(nèi)含多種水解酶，能分解衰老損傷的細(xì)胞器，吞噬并殺死侵入細(xì)胞的病毒和病菌第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 4.線粒體:細(xì)胞進(jìn)行有氧呼吸的主要場(chǎng)所，是細(xì)胞的“動(dòng)力車間”（雙層膜）第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 5.葉綠體：植物細(xì)胞的“養(yǎng)料制造車間”和“能量轉(zhuǎn)換器”（雙層膜）第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 6.中心粒： 是動(dòng)物細(xì)胞特有的細(xì)胞器，位于動(dòng)物細(xì)胞的中心部位，故名中心粒。它的主要化學(xué)成分是微管蛋白。7.微體：由單層單位膜圍成的小泡狀結(jié)構(gòu)，含有多

31、種氧化酶，與分解過氧化氫和乙醛酸循環(huán)有關(guān)。 第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) (二)、細(xì)胞骨架蛋白質(zhì)纖維構(gòu)成的網(wǎng)架結(jié)構(gòu),與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、分裂、分化以及物質(zhì)運(yùn)輸、能量交換、信息傳遞等生命活動(dòng)密切相關(guān)。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 四、染色質(zhì)和染色體第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 染色質(zhì)是細(xì)胞核內(nèi)容易被堿性染料染成深色的物質(zhì)被稱為染色質(zhì)或染色體。染色質(zhì)和染色體的主要成分都是DNA和蛋白質(zhì)。它們是同一物質(zhì)在間期和分裂期的不同形態(tài)表現(xiàn)。染色質(zhì)出現(xiàn)于分裂間期，呈細(xì)長(zhǎng)的絲狀，并且交織成網(wǎng)狀；染色體出現(xiàn)于分裂期，每條染色質(zhì)細(xì)絲就高度螺旋化，縮短變粗，成為柱狀或桿狀，且有基本恒定的數(shù)

32、目，不同種類的生物有不同數(shù)目的染色體，例如人體細(xì)胞有染色體23對(duì)，共計(jì)46條。四、染色質(zhì)和染色體第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 染色體的四級(jí)結(jié)構(gòu)模型(a) DNA 繞組蛋白形成核小體；（b）核小體按一定間隔沿DNA構(gòu)成纖維絲；（c）纖維絲螺旋化構(gòu)成一個(gè)螺線管；（d）螺線管進(jìn)一步螺旋化；（e）濃縮構(gòu)成染色體五、細(xì)胞分裂與繁殖 細(xì)胞分裂是生物生長(zhǎng)、發(fā)育和實(shí)現(xiàn)個(gè)體繁殖的基礎(chǔ)。單細(xì)胞生物：通過細(xì)胞分裂進(jìn)行繁殖。多細(xì)胞生物：由細(xì)胞分裂產(chǎn)生新細(xì)胞，以補(bǔ)充衰老、死亡的細(xì)胞。其生長(zhǎng)和發(fā)育，實(shí)際就是細(xì)胞分裂和分化的過程。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 細(xì)胞分裂細(xì)胞分裂的方式：有絲分裂無(wú)絲分裂

33、體細(xì)胞，動(dòng)植物細(xì)胞分裂的主要形式如：蛙的紅血細(xì)胞生殖細(xì)胞產(chǎn)生的過程。減數(shù)分裂第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) （一） 有絲分裂有絲分裂的過程有絲分裂包括兩個(gè)緊密相連的過程：核分裂、細(xì)胞質(zhì)分裂。通常有絲分裂主要是指核分裂，特別是在遺傳學(xué)中更主要討論細(xì)胞核分裂有絲分裂過程可分為五個(gè)時(shí)期，即：間期、前期、中期、后期、末期應(yīng)當(dāng)注意的是：有絲分裂過程本身是一個(gè)連續(xù)的自然過程。細(xì)胞分裂時(shí)期是人為劃分的，是根據(jù)所觀察到整個(gè)有絲分裂過程中的各種形態(tài)、結(jié)構(gòu)和狀態(tài)的差異而進(jìn)行的劃分；其目的是便于對(duì)整個(gè)過程進(jìn)行研究的描述。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)有絲分裂過程示意圖第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)（二）無(wú)絲分裂過程：非常簡(jiǎn)單，在

34、分裂過程中不出現(xiàn)染色體和紡錘絲的形成。 細(xì)胞的無(wú)絲分裂在動(dòng)、植物體內(nèi)雖時(shí)有發(fā)現(xiàn)，但和有絲分裂相比，是少見的。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)（三）減數(shù)分裂 減數(shù)分裂是性母細(xì)胞成熟時(shí)，配子形成過程中所發(fā)生的一種特殊的有絲分裂，又稱成熟分裂。其結(jié)果是產(chǎn)生染色體數(shù)目減半的性細(xì)胞，所以稱為減數(shù)分裂。減數(shù)分裂的特殊性表現(xiàn)在：具有一定的時(shí)間性和空間性：生物個(gè)體性成熟后，動(dòng)物性腺和植物造孢組織細(xì)胞中進(jìn)行。連續(xù)進(jìn)行兩次分裂：遺傳物質(zhì)經(jīng)過一次復(fù)制，連續(xù)兩次分裂，導(dǎo)致染色體數(shù)目的減半。同源染色體在第一次分裂前期(前期I，PI)相互配對(duì)(paring)，也稱為聯(lián)會(huì)(synapsis)；并且在同源染色體間發(fā)生片段的交換。第二章細(xì)胞

35、工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 減數(shù)分裂的過程間期(前間期, preinterphase)減數(shù)第一分裂 (meiosis I)減數(shù)間期 (interkinesis)減數(shù)第二分裂 (meiosis)前期I (prophase I, PI), 中期I(metaphase I, MI)后期I(anaphase I, AI)末期I(telophase I, TI)前期II (prophase II, PII), 中期II(metaphase II, MII)后期II(anaphase II, AII)末期II(telophase II, TII)前期I (prophase I, PI), 中期I(me

36、taphase I, MI)后期I(anaphase I, AI)末期I(telophase I, TI)第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)1.間期(interphase) 性母細(xì)胞進(jìn)入減數(shù)分裂前的間期稱為前減數(shù)分裂間期，也稱為前間期。這一時(shí)期是為性細(xì)胞進(jìn)入減數(shù)分裂作準(zhǔn)備。其準(zhǔn)備的內(nèi)容包括：染色體復(fù)制；有絲分裂向減數(shù)分裂轉(zhuǎn)化.特征：持續(xù)時(shí)間比有絲分裂間期長(zhǎng)，特別是合成期較長(zhǎng)；合成期間往往僅有約99.7%的DNA完成合成，而其余的0.3%在偶線期合成。 第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)2.減數(shù)第一次分裂(meiosis I)減數(shù)第一次分裂是減數(shù)分裂中比較重要的一次分裂，行為復(fù)雜，主要是前期的染色體變化多。(1). 前期I(p

37、rophase I, P I)；(2). 中期I(metaphase I, M I)；(3). 后期I(anaphase I, A I)；(4). 末期I(telephase I, P I)。細(xì)線期(leptotene，PI1).偶線期(zygotene，PI2).粗線期(pachytene，PI3).雙線期(diplotene，PI4).終變期(diakinesis，PI5).第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)（1）前期 I (prophase I, PI), 這一時(shí)期細(xì)胞內(nèi)變化復(fù)雜，所經(jīng)歷的時(shí)間較長(zhǎng)，細(xì)胞核比有絲分裂前期核要大些。根據(jù)核內(nèi)變化特征，可進(jìn)一步分為五個(gè)時(shí)期：細(xì)線期(leptotene，PI1)

38、.偶線期(zygotene，PI2).粗線期(pachytene，PI3).雙線期(diplotene，PI4).終變期(diakinesis，PI5).第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)細(xì)線期(leptonene，PI1)染色體開始螺旋收縮，在光學(xué)顯微鏡下呈細(xì)長(zhǎng)線狀；有時(shí)可以較為清楚地計(jì)數(shù)染色體數(shù)目。這時(shí)每個(gè)染色體含有兩染色單體，由著絲點(diǎn)連接，但在光學(xué)顯微鏡下還不能分辨染色單體。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)偶線期(zygotene，PI2)同源染色體的對(duì)應(yīng)部位相互開始緊密并列，逐漸沿縱向配對(duì)在一起，稱為聯(lián)會(huì)現(xiàn)象(synapsis)。細(xì)胞內(nèi)2n條染色體可配對(duì)形成n對(duì)染色體。配對(duì)的兩條同源染色體稱為二價(jià)體(bivalen

39、t)。細(xì)胞內(nèi)二價(jià)體(n)的數(shù)目就是同源染色體的對(duì)數(shù)。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)粗線期(pachytene，PI3)隨著染色體的進(jìn)一步螺旋，二價(jià)體逐漸縮短加粗，二價(jià)體具有四條染色單體，所以又稱為四合體或四聯(lián)體(tetrad)；聯(lián)會(huì)復(fù)合體的結(jié)構(gòu)完全形成；姊妹染色單體與非姊妹染色單體；非姊妹染色單體間會(huì)形成交叉(chiasmata)或交換(crossing over)現(xiàn)象，導(dǎo)致同源染色體發(fā)生片段交換(exchange)，最終導(dǎo)致同源染色體間發(fā)生遺傳物質(zhì)重組(recombination)。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)粗線期細(xì)胞形態(tài)圖第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)雙線期(diplotene，PI4)染色體繼續(xù)縮短變粗，在光學(xué)顯微鏡下

40、四個(gè)染色單體均可見；非姊妹染色單體之間由于螺旋卷縮而相互排斥，同源染色體局部開始分開；非姊妹染色單體間的交換部位仍由橫絲連接，因而同源染色體間仍由一至二個(gè)交叉聯(lián)結(jié)。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)終變期(diakinesis，PI5)染色體進(jìn)一步濃縮，縮短變粗；同源染色體間排斥力更大，的交叉向二價(jià)體兩端移動(dòng)，逐漸接近于末端，該過程稱為交叉端化(terminalization)。二價(jià)體在核內(nèi)分散分布，因而常用以鑒定染色體數(shù)目，二價(jià)體數(shù)目就是同源染色體的對(duì)數(shù)。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)（2）中期 I(metaphase I, MI)核仁和核膜消失，紡錘體形成，紡錘絲附著在著絲點(diǎn)上并將二價(jià)體拉向赤道板位置。每個(gè)二價(jià)體的兩

41、同源染色體分布在赤道板的兩側(cè)，同源染色體的著絲點(diǎn)分別朝向兩極，赤道板位置上是將同源染色體相連交叉部分(已經(jīng)端化)。在二價(jià)體趨向赤道板的過程中，兩條同源染色體的排列方向(著絲粒取向)是隨機(jī)的。從紡錘體的極面觀察，n個(gè)二價(jià)體分散排在赤道板的附近，因而這也是可用于鑒定染色體數(shù)目的重要時(shí)期之一。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)（3）后期 I(anaphase I, AI)紡錘絲牽引染色體向兩極運(yùn)動(dòng)，使得同源染色體末端脫開，一對(duì)同源染色體分別移向兩極。每極具有一對(duì)同源染色體中的一條(共有n條染色體)，使得子細(xì)胞中染色體數(shù)目從2n減半到n。此過程并不進(jìn)行著絲粒分裂，沒有發(fā)生染色單體分離；每條染色體都仍然具有兩個(gè)染色單體

42、，并且由著絲粒相連。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)（4）末期 I(telophase I, TI)染色體到達(dá)兩極之后，松散、伸長(zhǎng)、變細(xì)(但通常并不完全解螺旋)；核仁、核膜逐漸形成(核分裂完成)，產(chǎn)生兩個(gè)子核。細(xì)胞質(zhì)也隨之分裂，兩個(gè)子細(xì)胞形成，稱為二分體(dyad)。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)3.減數(shù)間期(interkinesis)減數(shù)間期是減數(shù)分裂的兩次分裂之間的一個(gè)間歇。此時(shí)期與有絲分裂的間期相比有顯著不同：時(shí)間很短暫。在許多動(dòng)物之中，甚至沒有明顯的停頓和間歇存在。不進(jìn)行DNA復(fù)制，中間期前后細(xì)胞中DNA的含量也沒有變化。染色體的螺旋化程度較高。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)4.減數(shù)第二次分裂(meiosis)減數(shù)第二分裂

43、是第一分裂所產(chǎn)生的兩個(gè)子細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行同步分裂，與有絲分裂沒有實(shí)質(zhì)區(qū)別, 仍可分為前、中、后、末四個(gè)時(shí)期：(1). 前期(prophase, P)；(2). 中期(metaphase, M)；(3). 后期(anaphase, A)；(4). 末期(telephase , P)。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)減數(shù)分裂的遺傳學(xué)意義1、精子(n) +卵細(xì)胞(n)= 2n 染色體數(shù)目恒定性、物種相對(duì) 穩(wěn)定性2、非姊妹染色單體間交換、后 期 I 同源染色體隨機(jī)分離 變異、生物進(jìn)化 第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)六、細(xì)胞周期 從一次細(xì)胞分裂到下一次分裂前的過程。細(xì)胞周期包括一個(gè)間期和一個(gè)有絲分裂期。植物細(xì)胞的周

44、期從十幾個(gè)小時(shí)至幾十個(gè)小時(shí)不等。 細(xì)胞分裂間期：因有絲分裂是周期性進(jìn)行的，處于兩個(gè)分裂期之間稱分裂間期，是有絲分裂的準(zhǔn)備階段，細(xì)胞表面無(wú)明顯變化，只是細(xì)胞核較一般細(xì)胞大，核質(zhì)中有分散的染色質(zhì)。包括復(fù)制前期（G1期）、復(fù)制期（S期）和復(fù)制后期（G2期）。 第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 細(xì)胞周期的各時(shí)期特征 時(shí) 期 特 征分裂間期G1期轉(zhuǎn)錄大量的RNA和合成大量的蛋白質(zhì)，為DNA復(fù)制作準(zhǔn)備S期DNA復(fù)制，一個(gè)DNA分子復(fù)制出的兩個(gè)DNA分子通過著絲點(diǎn)連在一起，與蛋白質(zhì)結(jié)合形成2個(gè)姐妹染色單體 G2期為進(jìn)入分裂期作準(zhǔn)備分裂期前期染色質(zhì)轉(zhuǎn)變成染色體

45、；核膜解體，核仁消失；紡綞體形成中期著絲點(diǎn)排列在赤道板中央；染色體數(shù)目最清晰，形態(tài)最固定后期著絲點(diǎn)分裂，染色單體分裂，在紡綞絲牽引下移向細(xì)胞兩極末期染色質(zhì)轉(zhuǎn)變成染色體；核膜重建，核仁出現(xiàn)；紡綞體解體；赤道板形成細(xì)胞壁（植物細(xì)胞）第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)細(xì)胞的增殖過程第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)細(xì)胞的生長(zhǎng)公式： dNt/dt=Nt 代表群體細(xì)胞的比生長(zhǎng)速率（s1） 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線 細(xì)胞的增殖過程第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)潛伏期：當(dāng)細(xì)胞接種至合適的培養(yǎng)液中，細(xì)胞數(shù)不增長(zhǎng)或增長(zhǎng)很少對(duì)數(shù)（生長(zhǎng)）期 ：細(xì)胞隨時(shí)間呈指數(shù)函數(shù)形式增長(zhǎng) 倍增時(shí)間Td（s）：細(xì)胞數(shù)量增加1倍所需的時(shí)間 Td(ln2)/ 細(xì)胞的增殖過程第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)

46、穩(wěn)定期 細(xì)胞數(shù)量在一定的時(shí)間內(nèi)保持恒定原因：營(yíng)養(yǎng)成分的耗盡；細(xì)胞代謝廢產(chǎn)物的積累可抑制細(xì)胞生長(zhǎng)衰亡期：細(xì)胞不斷死亡，數(shù)量隨著培養(yǎng)的進(jìn)程而減少 (一)細(xì)胞分化1、定義 是指細(xì)胞后代在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能上發(fā)生差異的過程.細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)是基因的差別表達(dá) 細(xì)胞分化的具體表現(xiàn)為特異性蛋白質(zhì)的形成 通過分化產(chǎn)生不同類型的細(xì)胞，由此形成不同的組織，而器官則是不同類型細(xì)胞穩(wěn)定而有機(jī)組合的結(jié)果。 七、細(xì)胞分化與細(xì)胞全能性第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) (一)細(xì)胞分化2、細(xì)胞分化的分子基礎(chǔ)細(xì)胞決定：一個(gè)細(xì)胞的分化可被識(shí)別之前，細(xì)胞沿著特定方向變化的能力已經(jīng)被提前賦予了分子基礎(chǔ)：特定的基因在特定時(shí)間和空間處于

47、激活狀態(tài)，導(dǎo)致特異性蛋白質(zhì)的優(yōu)先合成基于細(xì)胞分化的基因分類： 奢侈基因決定分化細(xì)胞的特殊性狀 持家基因維持細(xì)胞最低限度功能所不可缺的基因 七、細(xì)胞分化與細(xì)胞全能性第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) (一)細(xì)胞分化3、影響細(xì)胞分化的因素胞外信號(hào)分子（近距離）：如成纖維細(xì)胞生 長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子激素 （遠(yuǎn)距離）細(xì)胞質(zhì)的不均一性：如卵細(xì)胞和受精卵細(xì)胞 七、細(xì)胞分化與細(xì)胞全能性第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) （二）細(xì)胞的全能性（ totipotency） 指生物的每個(gè)細(xì)胞經(jīng)過分裂和分化后，仍然保持發(fā)育成完整個(gè)體的潛在能力 對(duì)于整體細(xì)胞：全能性隨著細(xì)胞分化程度的提高而逐漸受到限制，分化

48、潛能變窄 對(duì)于細(xì)胞核：沒有因細(xì)胞分化而丟失基因，因此高度分化細(xì)胞的細(xì)胞核仍具有全能性 七、細(xì)胞分化與細(xì)胞全能性第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) （二）細(xì)胞的全能性（ totipotency）細(xì)胞分化的分子基礎(chǔ) 細(xì)胞決定：一個(gè)細(xì)胞的分化可被識(shí)別之前，細(xì)胞沿著特定方向變化的能力已經(jīng)被提前賦予了分子基礎(chǔ)：特定的基因在特定時(shí)間和空間處于激活狀態(tài)，導(dǎo)致特異性蛋白質(zhì)的優(yōu)先合成基于細(xì)胞分化的基因分類： 奢侈基因決定分化細(xì)胞的特殊性狀 持家基因維持細(xì)胞最低限度功能所不可缺的基因 七、細(xì)胞分化與細(xì)胞全能性第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) (一) 細(xì)胞的衰老 細(xì)胞衰老（cell senescenc

49、e)是指細(xì)胞在正 常環(huán)境條件下發(fā)生的細(xì)胞的生理功能和增 殖能力減弱以及細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，趨向 死亡的現(xiàn)象。1、細(xì)胞衰老的概念八、細(xì)胞衰老、死亡與癌變第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第一節(jié) 細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ) 衰老癥狀與原因分析細(xì)胞膜通透性功能改變 飲食減少細(xì)胞內(nèi)色素的累積 老人斑細(xì)胞內(nèi)的酶活性降低頭發(fā)變白細(xì)胞水分減少，體積減小皮膚干燥、發(fā)皺 原因分析 衰老癥狀第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)2、細(xì)胞衰老的特征（1）形態(tài)變化第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)DNA：復(fù)制與轉(zhuǎn)錄受阻，端粒DNA、mtDNA缺失。DNA氧化、斷裂、缺失和交聯(lián)，甲基化程度降低。RNA：含量降低。蛋白質(zhì)：含成下降，發(fā)生修飾、交聯(lián)。酶分子：活性中心被氧化，金屬離子丟失，

50、酶分子的二級(jí)結(jié)構(gòu)、溶解度、等電點(diǎn)發(fā)生改變，酶失活。脂類：不飽和脂肪酸被氧化。（2）分子水平的變化第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)（1）代謝廢物積累：如：脂褐質(zhì)3、細(xì)胞的衰老學(xué)說 正常細(xì)胞內(nèi)存在清除自由基的防御系統(tǒng)：酶系統(tǒng)：超氧化物歧化酶(SOD)，過氧化氫(CAT)， 谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)；非酶系統(tǒng)：維生素E，醌類等電子受體。（2）自由基理論：過量的自由基導(dǎo)致DNA、蛋 白質(zhì)變異。第二章細(xì)胞工程基礎(chǔ)第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)細(xì)胞工程是以離體細(xì)胞和組織的無(wú)菌操作為基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)性學(xué)科，它需要在模擬動(dòng)植物細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育而設(shè)置的實(shí)驗(yàn)條件和環(huán)境下進(jìn)行一系列操作的

51、。為此需要各種實(shí)驗(yàn)設(shè)施設(shè)備適宜的培養(yǎng)條件與技術(shù)。本章重點(diǎn)介紹細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置主要儀器設(shè)備以及細(xì)胞工程的基本實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)，這些是從事細(xì)胞工程工作的基礎(chǔ)。第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室設(shè)置第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)室主要儀器設(shè)備第三節(jié) 細(xì)胞工程的基本操作技術(shù)第四節(jié) 培養(yǎng)基的成分、配制與選擇第五節(jié) 培養(yǎng)條件的選擇知識(shí)目標(biāo)：了解細(xì)胞工程的通用技術(shù)熟悉實(shí)驗(yàn)室設(shè)置、儀器設(shè)備、器具以其處理方法掌握培養(yǎng)基配制、培養(yǎng)條件的控制掌握滅菌以及無(wú)菌操作的原理與操作方法能力目標(biāo)：掌握洗滌、滅菌和無(wú)菌操作技術(shù)（詳見實(shí)訓(xùn)部分）會(huì)配制培養(yǎng)基（詳見實(shí)訓(xùn)部分第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室設(shè)置一、洗滌

52、室二、滅菌室三、配制室四、無(wú)菌操作室(接種室)五、培養(yǎng)室 六、鑒定室七、馴化移植室第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室設(shè)置一、洗滌室 用途：洗滌室主要用于玻璃器皿用具和培養(yǎng)材料清洗 配置:洗滌水槽、落水架、干燥箱、柜子、超聲波清洗器二、滅菌室用途：用于培養(yǎng)基及培養(yǎng)器械的滅菌。配置:配備實(shí)驗(yàn)臺(tái)高壓滅菌鍋排風(fēng)滅火設(shè)備細(xì)菌過濾設(shè)備干熱消毒柜電爐等。 要求：設(shè)備的安裝和排列要合理房間要寬敞明亮通風(fēng)條件好，地面要便于清潔防滑。 第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室設(shè)置三、配制室用途：配制室主要用于配置培養(yǎng)基。配置:：冰箱天平微波爐pH計(jì)培養(yǎng)基分裝器藥品柜器械柜抽氣泵電爐各種規(guī)

53、格的培養(yǎng)瓶和用具培養(yǎng)皿移液管燒杯量筒容量瓶?jī)?chǔ)藏瓶等。冰箱用于儲(chǔ)存培養(yǎng)基母液激素維生素等貴重藥品彩色膠卷及保存植物材料。天平應(yīng)有不同感量。第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室設(shè)置四、無(wú)菌操作室(接種室)用途：主要用于實(shí)驗(yàn)材料的接種操作配置:超凈工作臺(tái)或接種箱、固定式載物臺(tái)、移動(dòng)式載物臺(tái)、廣口瓶、酒精燈、紗布、器械支架、手術(shù)剪、解剖刀、解剖針、鑷子等。要求：無(wú)菌操作室在工作方便的前提下，宜小不宜大，宜精細(xì)密閉，忌粗陋放散，是植物組織培養(yǎng)研究或生產(chǎn)工作中最關(guān)鍵的部分，關(guān)系到培養(yǎng)物的污染率，接種工作效率等重要指標(biāo)。 第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)五、培養(yǎng)室用途：能控制光照和溫度，防

54、止微生物感染，對(duì)離體材料進(jìn)行控制培養(yǎng)要求：應(yīng)保持干燥和清潔。配置:培養(yǎng)架、轉(zhuǎn)床、搖床、光照培養(yǎng)箱、生化培養(yǎng)箱、自動(dòng)控時(shí)器、搖床等。六、鑒定室用途：對(duì)培養(yǎng)材料進(jìn)行細(xì)胞學(xué)鑒定和研究。要求：清潔明亮干燥，配置:各種光學(xué)儀器七、馴化移植室用途：用于試管小植株的鍛煉和移植。為試管苗提供滿足生長(zhǎng)的適宜環(huán)境條件配置: 溫室彌霧裝置蔭棚移植床缽盆塑料布草炭蛭石粗沙等，第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)室設(shè)置第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)室主要儀器設(shè)備實(shí)驗(yàn)室主要儀器設(shè)備包括常規(guī)設(shè)備、滅菌設(shè)備、培養(yǎng)設(shè)備等。熟練掌握它們的結(jié)構(gòu)、用途、使用方法及注意事項(xiàng)是順利完成實(shí)驗(yàn)的重要保證。一、常規(guī)設(shè)備主要是用于試劑保存與稱量、培養(yǎng)

55、基配制與分裝和水處理等。如天平、冰箱和冰柜 、酸度計(jì) 、離心機(jī) 、水純化裝置 天平離心機(jī)第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)室主要儀器設(shè)備二、滅菌設(shè)備（一）高壓蒸汽消毒裝置培養(yǎng)基、蒸餾水、不含糖的緩沖液、培養(yǎng)器皿及其他用具等均需經(jīng)過高壓蒸汽消毒滅菌后方可使用。高壓滅菌器時(shí)，一般在121，控溫1540分鐘，既可切斷電源，緩慢降壓至讀數(shù)為0時(shí)，方可取出滅菌物。（二）干燥滅菌器 用于各種用具的滅菌。通常采用160180持續(xù)90分鐘來(lái)滅菌。 （三）過濾除菌裝置高壓滅菌器濾 器第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)室主要儀器設(shè)備 二氧化碳培養(yǎng)箱養(yǎng)箱養(yǎng)箱倒置顯微鏡三、培養(yǎng)設(shè)備（一）培

56、養(yǎng)設(shè)備包括培養(yǎng)架培養(yǎng)箱搖床和生物反應(yīng)器等。（二）倒置顯微鏡多用于隔瓶觀察記錄外植體及懸浮培養(yǎng)物（細(xì)胞團(tuán)原生質(zhì)體等）的生長(zhǎng)情況。（三）雙筒實(shí)體顯微鏡多用于剝離植物莖尖。第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)室主要儀器設(shè)備（四）細(xì)胞計(jì)數(shù)工具用作培養(yǎng)細(xì)胞的計(jì)數(shù)和活性的觀察。（五）細(xì)胞冷凍保存裝置普通的液氮容器常稱為液氮罐。液氮溫度約為-196，使用時(shí)要注意勿使液氮濺到皮膚上，以防凍傷。由于液氮不斷揮發(fā)，應(yīng)注意觀察存留液氮情況，及時(shí)補(bǔ)充液氮，避免揮發(fā)過多而導(dǎo)致細(xì)胞受損。（六）其他儀器如磁力攪拌器恒溫水浴箱振蕩器超聲波清洗儀等。冷凍裝置第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)室主要儀器

57、設(shè)備主要金屬器材四、培養(yǎng)容器與用具（一）接種用具用途：主要用于接種外植體解剖動(dòng)物取材和原代培養(yǎng)中切割組織。消毒方法采用高壓蒸汽消毒或采用70酒精浸泡消毒。 第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)培養(yǎng)器皿多孔培養(yǎng)板（二）培養(yǎng)器皿體外培養(yǎng)必須使用大量的各式器皿 第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)室主要儀器設(shè)備離心管Eppendorf管第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)室主要儀器設(shè)備（三）移液器移液器 1電動(dòng)移液器：2微量移液器：3多通道可調(diào)式微量移液器 （四）特殊用具第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)室主要儀器設(shè)備五、無(wú)菌操作設(shè)備超凈（凈化）工作臺(tái)是目前已普遍應(yīng)用的無(wú)菌操作裝置。 超凈工作臺(tái)的

58、工作原理是利用鼓風(fēng)機(jī)驅(qū)動(dòng)空氣遁過高效濾器除去空氣中的塵埃顆粒，使空氣得到凈化。凈化空氣徐徐通過工作臺(tái)面，使工作臺(tái)內(nèi)構(gòu)成無(wú)菌環(huán)境。 超凈工作臺(tái)第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)第三節(jié) 細(xì)胞工程的基本操作技術(shù)一、洗滌技術(shù)體外培養(yǎng)細(xì)胞使用的器材品種較多，器皿表面常殘留微量有毒物質(zhì)。由于離體細(xì)胞對(duì)各種毒物都很敏感，除去器皿表面殘留的微量有毒物質(zhì)，改善玻璃表面性質(zhì)，有利于細(xì)胞的粘著和生長(zhǎng)，所以細(xì)胞培養(yǎng)所用器材的清洗消毒處理是培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵之一。（一）洗滌劑的配制 常用洗滌劑的配制與適用范圍見書的43頁(yè)表3.1 第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)第三節(jié) 細(xì)胞工程的基本操作技術(shù)(二)洗滌方法A、新購(gòu)

59、買的玻璃儀器的清洗 表面常附著有游離的堿性物質(zhì)可先用0.5的去污劑洗刷，再用自來(lái)水洗凈，然后浸泡在12鹽酸溶液中過夜（不可少于四小時(shí)），再用自來(lái)水沖洗，最后用無(wú)離子水沖洗兩次，在100120烘箱內(nèi)烘干備用。B、使用過的玻璃儀器的清洗 先用自來(lái)水洗刷至無(wú)污物，再用合適的毛刷沾去污劑（粉）洗刷，或浸泡在0.5的清洗劑中超聲清洗（比色皿決不可超聲），然后用自來(lái)水徹底洗凈去污劑，用無(wú)離子水洗兩次，烘干備用（計(jì)量?jī)x器不可烘干）。清洗后器皿內(nèi)外不可掛有水珠，否則重洗，若重洗后仍掛有水珠，則需用洗液浸泡數(shù)小時(shí)后（或用去污粉擦洗），重新清洗。第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)第三節(jié) 細(xì)胞工程的基本操作技術(shù)C

60、、 塑料器皿的清洗 聚乙烯、聚丙烯等制成的塑料器皿，第一次使用塑料器皿時(shí)，可先用8mol/L尿素（用濃鹽酸調(diào)pH = 1）清洗，接著依次用無(wú)離子水、1 mol/L KOH和無(wú)離子水清洗，然后用103 mol/L EDTA 除去金屬離子的污染，最后用無(wú)離子水徹底清洗，以后每次使用時(shí)，可只用0.5的去污劑清洗，然后用自來(lái)水和無(wú)離子水洗凈即可。D、金屬用品洗滌 金屬用品一般不宜用各種洗滌液洗滌（新的可以用熱洗衣粉水洗凈），需要清洗時(shí)，一般用酒精擦洗，然后火焰干燥。 E、除菌過濾器洗滌 用清水沖洗后，用洗液沖洗，再用清水沖洗，最后用蒸餾水沖洗，晾干備用。第三章、細(xì)胞工程實(shí)驗(yàn)室設(shè)置與基本技術(shù)第三節(jié) 細(xì)胞