乳與乳制品常規(guī)理化指標檢驗乳糖蔗糖和總糖的檢測

1、乳與乳制品常規(guī)理化指標檢驗乳糖蔗糖和總糖的檢測 YLNB 2.7一、高壓液相色譜法(仲裁法) 1. 原理 食品中的多種糖，可利用高壓液相色譜法的碳水化合物柱或氨基柱將它們分離，用示差折光檢測器，檢出各糖液的折光指數，此折光指數與其濃度成正比。2. 試劑所有試劑，如未注明規(guī)格，均指分析純；所有實驗用水，如未注明其他要求，均指三級水。2.1澄清劑：硫酸銅，質量分數7%。氫氧化鈉，質量分數4%。2.2乙腈。2.3標準溶液2.3.1標準糖貯備液，10mg/ml。精確稱取被測糖的標樣1g，溶于水中，用水稀釋至100ml容量瓶內，定容。2.3.2標準糖工作液，4 mg/ml。吸取4ml貯備液，置10ml容

2、量瓶中，用乙腈稀釋至刻度。3. 儀器高壓液相色譜儀，帶碳水化合物分析柱或氨基柱。4. 方法4.1 樣液制備精確稱取2g左右奶粉或15g左右液態(tài)奶樣品，加30ml水溶解，移至100ml容量瓶中，加澄清劑硫酸銅（4.1）10ml，氫氧化鈉（4.1）4ml，振搖，加水至刻度，靜置半小時，過濾。取4ml樣品母液置10ml容量瓶用乙腈定容，通過0.45um過濾器過濾，濾液備用。4.2 高壓液相色譜儀工作條件：示差折光檢測器：氨基柱流動相：乙腈/水=6/4流動相流速：1.0ml/min4.3 進樣在儀器穩(wěn)定后，用注射器或進樣閥注射50uL標準樣液共4次，記下保留時間，測定峰高，放棄第一次數據，取后三者平均

3、峰高值，同樣注射樣品50ul四次得出平均峰高。結果計算 樣品中糖含量（g/100g）= （1）式中： C1 標準糖溶液濃度，mg/ml；H 樣品中糖的平均峰高；H1 標準糖溶液的峰高；m 樣品的質量，g 。注：如果需同時測定樣品中所含其他糖類，可在標準糖溶液中加入各種糖1g，進樣如前，記下各種糖保留時間，按上列公式計算各值。6. 允許差同一樣品兩次測定值之差不得超過兩次測定平均值的5%。方法二 乳糖、蔗糖和總糖的測定（萊因埃農氏法）1方法提要乳糖：樣品經除去蛋白以后，在加熱條件下，直接滴定已標定過的費林氏液，樣液中的乳糖將費林氏液中的二價銅還原為氧化亞銅。以次甲基藍為指示劑，在終點稍過量時，乳

4、糖將藍色的氧化型次甲基藍還原為無色的還原型次甲基藍。根據樣液消耗的體積，計算乳糖含量。蔗糖：樣品除去蛋白質后，其中蔗糖經鹽酸水解轉化為具有還原能力的葡萄糖和果糖，再按還原糖測定。將水解前后轉化糖的差值乘以相應的系數即為蔗糖含量?？偺牵喝樘呛驼崽侵?。2. 試劑所有試劑，如未注明規(guī)格，均指分析純；實驗室用水，如未注明其他要求，均指三級水。2.1費林氏液（甲液和乙液）2.1.1甲液：取34.639g硫酸銅，溶于水中，加入0.5ml濃硫酸，加水至500ml。2.1.2乙液：取173g酒石酸鉀鈉及50g氫氧化鈉溶解于水中，稀釋至500ml，靜置兩天過濾。2.2次甲基藍溶液：10g/L。2.3鹽酸溶液：

5、體積比1：1。2.4酚酞溶液：0.5g酚酞溶于75ml體積分數95%的乙醇中，并加入20ml水，然后再加入約0.1mol/L的氫氧化鈉溶液，直到加入一滴立即變成粉紅色，再加入水定容至100ml。2.5氫氧化鈉：c（NaOH）為300g/L。取300g氫氧化鈉，溶于1000 ml水中。2.6乙酸鉛溶液：c（PbAc2）為200g/L。取20g乙酸鉛，溶解與100 ml水中。2.7草酸鉀磷酸氫二鈉溶液：取草酸鉀3g，磷酸氫二鈉7g，溶解于100mL水中。3. 儀器常用理化實驗室儀器。4. 方法及結果計算4.1費林氏液的標定4.1.1用乳糖標定4.1.1.1稱取預先在9294烘箱中干燥2h的乳糖標樣

6、約0.75g（準確到0.2mg），用水溶解并稀釋至250ml。將此乳糖溶液注入一個50ml滴定管中，待滴定。4.1.1.2預滴定：取10ml費林氏液（甲、乙液各5ml）于250ml三角燒瓶中。再加入20ml蒸餾水，從滴定管中放出15ml乳糖溶液于三角瓶中，置于電爐上加熱，使其在2min內沸騰，沸騰后關小火焰，保持沸騰狀態(tài)15s，加入3滴次甲基藍溶液（2.2），繼續(xù)滴入乳糖溶液至藍色完全褪盡為止，讀取所用乳糖的毫升數。4.1.1.3精確滴定：另取10ml費林氏液（甲、乙液各5ml）于250ml三角燒瓶中，再加入20ml蒸餾水，一次加入比預備滴定量少0.51.0ml的乳糖溶液置于電爐上，使其在2m

7、in內沸騰，沸騰后關小火焰，保持沸騰狀態(tài)2min, 加入3滴次甲基藍溶液（2.2），繼續(xù)滴入乳糖溶液(一滴一滴徐徐滴入)，待藍色完全褪盡即為終點。以此滴定量作為計算的依據（在同時測定蔗糖時，此即為轉化前滴定量）。4.1.1.4按（2）、（3）計算乳糖測定時，費林氏液的乳糖校正值（f1）： -（2） -（3） 式中：A1實測乳糖數，mg； V1滴定時消耗乳糖液量，ml；m1稱取乳糖的質量，g；AL1由乳糖液滴定毫升數查表1所得的乳糖數，mg。4.1.2用蔗糖標定4.1.2.1稱取在105烘箱中干燥2h的蔗糖約0.2g（準確至0.2mg），用50ml水溶解并洗入100ml容量瓶中，加入10ml水，

8、再加入10ml鹽酸（2.3），置75水浴鍋中，時時搖動，在2min30s到2min45s之間，使瓶內溫度升到67。自達到67后繼續(xù)在水浴中保持5min,于此時間內使其溫度升至69.5，取出，用冷水冷卻，當瓶內溫度冷卻至35時，加2滴酚酞指示劑（2.4）,用300g/l的氫氧化鈉（2.5）中和至呈中性。冷卻至20，用水稀釋至刻度，搖勻。并在此溫度下保溫30min后在按4.1.1.2和4.1.1.3操作。得出滴定10ml費林氏液所消耗的轉化糖量。4.1.2.2按式（4）(5)計算蔗糖測定時，費林氏液的蔗糖校正值（f2）: -（4） -（5）式中：A 2實測轉化糖數，mg； V2滴定時消耗蔗糖液量，

9、ml；m 2稱取蔗糖的質量，g；AL1由蔗糖液滴定毫升數查表1所得的轉化糖數，mg。4.2 乳糖的測定4.2.1樣品處理4.2.1.1稱樣：乳粉稱取2-3g（牛乳、花色奶：17-18g；酸乳樣品：10-12g） (準確至0.01g)，用100ml水分數次溶解并洗入250ml容量瓶中。4.2.1.2加4ml乙酸鉛（2.6）、4ml草酸鉀磷酸氫二鈉溶液，每次加入試劑時都要徐徐加入，并搖動容量瓶，用水稀釋至刻度。靜止數分鐘，用干燥濾紙過濾，棄去最初25ml濾液后，所得濾液做滴定用。4.2.2滴定4.2.2.1預滴定：將此濾液注入一個50ml滴定管中，待測定。取10ml費林氏液（甲、乙液各5ml）于2

10、50ml三角瓶中，再加入20mL蒸餾水，在三角瓶中放入15mL濾液，置于電爐上，使其在2min內沸騰，沸騰后關小火焰，保持沸騰狀態(tài)15s，加入3滴次甲基藍（2.2），混勻，然后徐徐滴入乳糖溶液至藍色完全褪盡為止，讀取所用乳糖的毫升數。4.2.2.2精確滴定：另取10ml費林氏液（甲、乙液各5ml）于250ml三角瓶中，再加入20mL蒸餾水，一次加入比預備滴定量少0.5-1.0ml的乳糖溶液，置于電爐上，使其在2min內沸騰，沸騰后關小火焰，保持沸騰狀態(tài)2min，加入3滴次甲基藍（2.2），然后一滴一滴徐徐滴入乳糖溶液至藍色完全褪盡即為終點，以此滴定量作為計算的依據（在同時測定蔗糖時，此即為轉化

11、前滴定量）。4.2.3乳糖含量的計算 -（6） 式中：L樣品中乳糖的質量分數，g/100gF1由消耗樣液的毫升數查表1所得乳糖數，mg；f1費林氏液乳糖校正值；V1滴定消耗濾液量，mlm樣品的質量，g。4.3 蔗糖的測定4.3.1轉化前轉化糖量的計算利用測定乳糖時的滴定量，自表1中查出相應的轉化糖量，按式（7）計算： 轉化前轉化糖質量分數（%）=-（7）式中：F2由測定乳糖時消耗樣液的毫升數查表1所得轉化糖數，mg；f2費林氏液蔗糖校正值；V1滴定消耗濾液量，mlm樣品的質量，g。4.3.2樣液的轉化及滴定取50ml樣液于100ml容量瓶中，加水10ml，再加入10ml的鹽酸（2.3），置75

12、水浴鍋中，時時搖動，在2min30s至2min45s之間，使瓶內溫度升至67后。自達到67繼續(xù)在水浴中保持5min，于此時間內使其溫度升至69.5，取出，用冷水冷卻，當瓶內溫度冷卻至35時，加2滴酚酞溶液指示劑（2.4），用氫氧化鈉（2.5）中和至呈中性，冷卻至20，用水稀釋至刻度，搖勻。并在此溫度下保溫30min后再按4.2.2滴定，得出滴定10ml費林氏液的轉化液量。轉化后轉化糖質量分數（%）-（8）式中：F3由V2查表1所得轉化糖數，mg；f2費林氏液蔗糖校正值；V2滴定消耗轉化液量，mlm樣品的質量，g。4.3.3蔗糖含量的計算 樣品中蔗糖含量（g/100g）=-（9） 式中：L1轉化

13、后轉化糖質量分數，%； L2轉化前轉化糖質量分數，%。 0.95蔗糖轉化系數4.3.4如樣品中蔗糖與乳糖之比超過3：1時，則計算乳糖時應在滴定量中加入表2中的校正值后再查表1和計算。4.3.5總糖=蔗糖+乳糖5.允許差5.1重復性由同一分析人員在短時間間隔內測定的兩個結果之間的差值，不應超過結果平均值的1.5%。5.2重現性由不同實驗室的兩個分析人員對同一樣品測得的兩個結果之差，不應超過結果平均值的2.5%。表1 乳糖及轉化糖因數表（10ml費林氏液）滴定量，ml乳糖，mg轉化糖，mg滴定量，ml乳糖，mg轉化糖，mg1568.350.53367.851.71668.250.63467.951

14、.71768.250.73567.951.81868.150.83667.951.81968.150.83767.951.92068.050.93867.951.92168.051.03967.952.02268.051.04067.952.02367.951.14168.052.12467.951.24268.052.12567.951.24368.052.22667.951.34468.052.22767.851.44568.152.32867.851.44668.152.32967.851.54768.252.43067.851.54868.252.43167.851.64968.252

15、.53267.851.65068.352.5注：“因數”系指與滴定量相對應的數目，可自表1中查得。若蔗糖含量與乳糖含量得比超過3：1時，則在滴定量中加表2中的校正數后計算。表2乳糖滴定量校正值滴定終點時所用的糖液量ml用10ml費林氏液、蔗糖及乳糖量的比3：16：1150.150.30200.250.50250.300.060300.350.70350.400.80400.450.90450.500.95500.551.056. 注意事項6.1甲乙液必須臨用時混合。6.2甲液中加入濃硫酸的作用是防止硫酸銅水解，同離子效應。6.3整個滴定過程必須在沸騰狀態(tài)下進行,目的是為了加快反應速度和防止空氣進入，避免氧化亞銅和還原型的次甲基藍被空氣氧化從而使得耗糖量增加。6.4 測定中滴定速度、熱源強度和煮沸時間等都對測定精密度有很大的影響。熱源強度和煮沸時間一定要嚴格按照操作中的規(guī)定執(zhí)行，且每個滴定的加熱程度和煮沸時間必須一致，否則，加熱到煮沸時間不同，蒸發(fā)量不同，反應液