組織化學(xué)實驗

1、組織化學(xué)實驗實驗十五、小鼠肝糖原染色PAS反應(yīng)實驗十六、小鼠肝/腸核酸染色Feulgen反應(yīng)實驗?zāi)康?.了解PAS染色法（Periodic Acid-Schiff stain）的基本原理，掌握PAS染色法的技術(shù)方法及其應(yīng)用。2.了解孚爾根染色法的基本原理，掌握孚爾根染色法的技術(shù)方法及其應(yīng)用。小鼠肝糖原染色PAS反應(yīng) 糖原是由多個葡萄糖組成的帶分枝的大分子多糖，形狀為大小不等的顆粒，遇碘則變褐色，易溶于水。 動物細胞內(nèi)貯存的多糖，完全由葡萄糖組成。在動物體內(nèi)以肝臟和骨骼肌中儲量最豐富，與淀粉在植物中的作用相當(dāng)。肝糖原分解主要維持血糖濃度，肌糖原分解為肌肉自身收縮供給能量。 利用強氧化劑使多糖產(chǎn)生

2、游離的醛基，醛基和Schiff試劑結(jié)合，形成紫紅色的化合物。因此在有多糖的部位，就會呈現(xiàn)除紫紅色陽性反應(yīng)。PAS （Periodic Acid Schiff ）反應(yīng)的基本原理將0.5g堿性品紅置入三角燒瓶內(nèi)沸騰的蒸餾水中，時時搖動玻璃瓶，煮沸5min使之充分溶解，冷卻至50時過濾，加入10ml 1M HCl，冷至25時，加入0.5g偏重亞硫酸鈉(Na2S2O3)或無水亞硫酸(NaHSO3)，在室溫冷暗處至少放置24h(有時需23天)，使其顏色退至淡黃色，密封瓶口，藏于暗處，最好保存于4冰箱中(可保存數(shù)月或更長時間)。在使用前加入0.5g活性碳, 搖1min, 用粗濾紙過濾，濾液應(yīng)為無色；若液體

3、顏色變?yōu)榉奂t色，便不能再用。 Schiff氏試劑的制備PAS反應(yīng)的應(yīng)用 可用于證明與鑒別細胞內(nèi)空泡狀的性質(zhì) ，心肌病變及其他心血管疾病的診斷 ，糖原累積病診斷和研究 ，糖尿病的診斷和研究 ，用于某些腫瘤的診斷等。在臨床診斷、分類和治療具有重要的意義。 1) 組織切片(70%酒精中)，鴨血涂片 2) 過碘酸液 3) Schiff氏液 4) 0.5%偏重亞硫酸鹽溶液 5) 蘇木精染色液 實驗材料1. 將石蠟切片（已保存于70%酒精中）移入50%酒精復(fù)水5 min2.石蠟切片及鴨血涂片用蒸餾浸洗1次，1 min;3. 過碘酸液處10 min （對照實驗用蒸餾水浸泡）;4. 蒸餾水洗1次，2 min;

4、5. Schiff 試劑中放置 20 min;6. 亞硫酸鹽溶液浸洗，3次， 每次2 min;7. 流水沖洗5 min（避免流水直接沖洗有組織的部位）, 蒸餾水過一下;8. 用蘇木精復(fù)染細胞核10 min ;9. 流水沖洗5 min （避免流水直接沖洗有組織的部位），蒸餾水浸泡1 min，吸干;10. 甘油封片;11. 顯微鏡觀察。實驗步驟（ PAS反應(yīng)）結(jié)果分析PAS陽性呈不同程度的紫紅色，細胞核藍色。是顯示DNA的最典型的組織化學(xué)反應(yīng)，為學(xué)者Feulgen于1924年發(fā)明，簡稱為Feulgen法。因?qū)NA的顯示反應(yīng)具有高度專一性，故常被用來顯示細胞內(nèi)DNA的分布情況。 Feulgen反應(yīng)

5、(Feulgen reaction)稀HCl水解DNA，破壞嘌呤和脫氧核糖間的配糖鍵，并在脫氧核糖C1端形成游離的醛基，醛基和Schiff試劑結(jié)合，形成紫紅色的化合物。因此在有DNA的部位，就會呈現(xiàn)除紫紅色陽性反應(yīng)。Feulgen反應(yīng)的基本原理實驗步驟（ Feulgen反應(yīng)） 1. 將石蠟切片（已保存于70%酒精中）移入50%酒精復(fù)水5 min 2. 石蠟切片及鴨血涂片用蒸餾水洗1次，2 min; 3. 1 mol/L HCl溶液(室溫) 1min; 4. 換入預(yù)熱60的1 mol/L HCl 中水解10 min （對照實驗用蒸餾水浸泡） 5. 1 mol/L HCl溶液(室溫) 1 min; 6. 蒸餾水稍洗; 7. Schiff試劑避光染色30 min; 8. 亞硫酸鹽溶液浸泡3次，每次2 min; 9. 流水沖洗5 min，蒸餾水洗片刻; 10. 用1%亮綠水溶液復(fù)染5-10秒; 11. 流水沖洗5 min ，蒸餾水浸泡1 min，吸干; 12. 甘油封片，顯微鏡觀察。結(jié)果分析 Feulgen陽性細胞核呈紫紅色，細胞質(zhì)和核仁被亮綠復(fù)染成淺綠色。1. 描述顯微觀察到的實驗現(xiàn)象；2. 肝臟組織切片PAS染色無陽