生物化學肝功能

1、關于生物化學肝功能第一張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第十二章 肝功能檢驗第一節(jié) 概 述 第二節(jié) 某些肝疾病 的臨床生化第三節(jié) 肝功能試驗第四節(jié) 肝功能試驗 選擇原則第二張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月掌握 肝功能試驗的意義及評價，賴氏法、速率法測定ALT，改良J-G法和膽紅素氧化酶法測定膽紅素的原理、注意事項及主要臨床意義。熟悉 金氏法、速率法測定ALP，GGT測定方法、酶比色法測定血清膽汁酸的原理、注意事項及主要臨床意義。了解 肝臟的結構特點及生物化學功能，某些肝病的生物化學。本章教學要求：第三張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 肝臟是人體最重要的器官之一，肝臟

2、病變會引起多種功能的障礙，臨床上常通過一些試驗來了解肝功能，幫助對肝膽疾病的診斷，預后判斷及療效觀察，這些試驗統(tǒng)稱為肝功能試驗。第一節(jié) 概 述 肝臟是人體最大的實質性器官，成人肝臟占體重的2%，約1.21.5kg。它幾乎參與了體內各種化學反應，如分泌、排泄、解毒以及各種物質代謝過程，故肝臟有 “物質代謝中樞”之稱。第四張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月一、肝結構的特點 （一）肝具有雙重的血流輸入系統(tǒng) 即門靜脈和肝動脈。門靜脈是肝的功能性血管，它匯集了胃腸、脾及胰腺的靜脈血流入肝，給肝帶來腸道吸收的大量營養(yǎng)物質和腐敗物。門靜脈血占肝總血量的75%。肝動脈是肝的營養(yǎng)性血管，給肝帶來大量的氧

3、氣，同時也帶來肝外組織代謝產生的大量廢物，其血流量占肝總血流量的25%。第五張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 （二）肝具有雙重輸出系統(tǒng) 即血液輸出系統(tǒng)和膽道輸出系統(tǒng)。 血液輸出系統(tǒng)是指肝靜脈，出肝后經下腔靜脈與體循環(huán)相通，使經肝處理后的代謝物通過腎臟隨尿排出。 膽道輸出系統(tǒng)是指肝細胞分泌的膽汁通過膽道排入腸道，隨膽汁排出的有膽汁酸鹽和一些代謝產物。第六張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）肝臟具有雙重的血流輸入系統(tǒng)門靜脈 (功能性血管)肝動脈 (營養(yǎng)性血管)（二）肝臟具有雙重的輸出系統(tǒng)營養(yǎng)物質和腐敗物 氧氣和肝外組織代謝廢物肝靜脈膽道 肝 臟下腔靜脈 體循環(huán) 腸道 肝處理后

4、的代謝物 腎臟(尿)膽汁酸鹽和代謝產物第七張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 （三）肝細胞的亞細胞結構特點 肝細胞中亞細胞結構豐富。 含有豐富的線粒體、內質網(wǎng)和核糖體。使肝臟能量供應充分，并大量合成蛋白質和脂類。 含有大量的溶酶體和高爾基復合體。促進對吞噬產物的分解和一些蛋白質的加工與成熟。 還有過氧化物酶體，能分解代謝中產生的過氧化氫，減輕活性氧的損傷。第八張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 （四）肝細胞的再生 肝細胞是體內唯一具有再生能力的實質細胞，而且再生能力很強。新生肝細胞的來源有兩種： 1.由已分化的肝細胞增殖而來。 2.由未分化的小葉內膽管上皮細胞分裂而來。 由于肝

5、細胞有很強的再生能力，所以輕度的損傷，難以通過肝功能試驗檢測出來。第九張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月（三）肝細胞的亞細胞結構特點 （四）肝細胞的再生新生肝細胞的來源由已分化的肝細胞增殖而來由未分化的小葉內膽管上皮細胞分裂而來細胞表面有大量的微絨毛細胞膜具有較高的通透性肝細胞中亞細胞結構豐富肝細胞含有豐富的酶系第十張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月二、肝臟的生物化學功能 （一）排泄功能 肝臟能分泌膽汁，很多代謝物可隨膽汁通過膽道排入腸道而排泄。如膽汁酸、膽紅素、氨等物質。 1.膽汁酸代謝 （1）膽汁：由肝細胞分泌的液體，正常人每天分泌量5001000ml，稱為肝膽汁。進入膽囊

6、后水分被重吸收而濃縮，稱為膽囊膽汁。膽汁中含有膽汁酸鹽、膽色素、膽固醇、卵磷脂、粘蛋白、酶、尿素和無機鹽等物質。其中膽汁酸鹽占固體成分50%以上。 膽汁既是一種消化液，也是排泄液。第十一張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月膽固醇 7-羥膽固醇膽酸鵝脫氧膽酸甘氨膽酸?；悄懰岣拾冰Z脫氧膽酸?；蛆Z脫氧膽酸腸道復雜反應甘氨酸牛磺酸膽汁膽道初級游離膽汁酸初級結合膽汁酸初級膽汁酸的生成第十二張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 HO OH COOH HO OHCONHCH2COOH HOHO OHCONHCH2CH2SO2H膽 酸鵝脫氧膽酸?；蛆Z脫氧膽酸甘氨膽酸初級膽汁酸 HOHO OHCOO

7、H第十三張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月脫氧膽酸石膽酸次級膽汁酸大部分通過主動重吸收經門靜脈入肝腸肝循環(huán)次級膽汁酸的生成與膽汁酸的腸肝循環(huán)甘氨膽酸 腸?；悄懰?道甘氨鵝脫氧膽酸?；蛆Z脫氧膽酸膽酸 鵝脫氧膽酸腸菌水解腸菌還原一部分通過被動重吸收經門靜脈入肝隨糞便排出第十四張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 HOHO OHCOOH HO HO COOH脫氧膽酸 HO OH COOH HOCOOH石膽酸膽 酸鵝脫氧膽酸次級膽汁酸7脫氧7脫氧第十五張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第十六張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 2. 膽紅素代謝 膽色素是鐵卟啉化合物分解代謝

8、的產物，主要包括膽紅素、膽綠素、膽素原和膽素，主要隨膽汁排泄。 （1）膽紅素（bilirubin）的生成衰老RBC 單核吞噬細胞系統(tǒng)（肝、脾、骨髓）珠蛋白血紅素加氧酶膽綠素還原酶脂溶性，可進入細胞產生毒害血紅素血紅蛋白 膽紅素CO Fe膽綠素 第十七張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月（2）膽紅素在血中的運輸膽紅素血液水溶性，不能進入細胞內，也不透過腎小球未結合膽紅素間接膽紅素 膽紅素-清蛋白復合物清蛋白 限制了膽紅素自由通過細胞膜，免除了對細胞的毒害作用。 增加了水溶性，有利于在血液中的運輸。第十八張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月（3）肝臟在膽紅素代謝中的作用未結合膽紅素 Y

9、-蛋白-膽紅素Z-蛋白-膽紅素Y-蛋白Z-蛋白葡萄糖醛酸-膽紅素UDPGA水溶性，不通過 細胞膜，可通過腎小球肝細胞結合膽紅素直接膽紅素隨膽汁排入腸道攝取轉化排泄第十九張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月（4）膽紅素在腸道的變化及腸肝循環(huán)結合膽紅素膽素原腸道細菌 還原大部分隨糞便排出80%90%少部分被重吸收10%20%大部分又隨膽汁排入腸道形成腸肝循環(huán)少部分進入體循環(huán)通過腎隨尿排出經門靜脈入肝0.64mg膽素原 膽素O2膽素原 膽素O240280mg第二十張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 血紅蛋白 珠蛋白 血紅素 CO OFe NADPH 膽綠素 NADPH 膽紅素 膽紅素

10、胞液Y蛋白 膽紅素-Y蛋白 Z蛋白 膽紅素-Z蛋白 UDPGA內質網(wǎng) UDP葡萄糖醛酸膽紅素腎小部分 大部分 膽素原膽紅素清蛋白復合物膽素原 膽素 尿 少量 腸道膽素 膽素原 葡萄糖醛酸膽紅素 糞便 膽紅素 葡萄糖醛酸單核吞噬細胞肝細胞血 液清蛋白第二十一張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 3.血氨代謝 （1）血氨的來源：氨基酸的脫氨基作用及含氮化合物的分解，稱為內源性氨。腸道吸收，由未消化的蛋白質和未吸收的氨基酸腐敗產生。 （2）血氨的去路：合成尿素；合成谷氨酰胺；合成其他含氮化合物。 （3）尿素的合成與排泄：血氨進入肝臟經鳥氨酸循環(huán)合成尿素，經腎臟隨尿排去。第二十二張，PPT共九十

11、三頁，創(chuàng)作于2022年6月 （1）在蛋白質代謝中的作用：是機體合成蛋白質的重要器官。除合成肝臟本身所需蛋白質外，還合成近100種血漿蛋白。 （2）在氨基酸代謝中的作用：是體內氨基酸分解代謝的主要場所。如脫氨基作用，調節(jié)血液中氨基酸的比例，合成尿素和一些含氮化合物。 （二）物質代謝功能 1.營養(yǎng)物質代謝第二十三張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月維持血糖濃度恒定合成肝糖原肝糖異生血糖高 （3）在糖代謝中的作用：維持血糖濃度的恒定。血糖低肝糖原分解第二十四張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月分泌膽汁酸鹽，促進脂類的消化吸收 。合成各種脂類，如TG，Ch，PL等。 進行脂肪酸的-氧化，產

12、生酮體 。參與脂蛋白代謝，合成HDL、VLDL； （4）在脂類代謝中的作用：對脂類的消化、吸收、分解、合成及運輸?shù)冗^程均起有重要作用肝功能受損脂肪肝第二十五張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 2.激素及維生素代謝 （1）在激素代謝中的作用：對多種激素進行滅活和排泄，如類固醇激素、胰島素、腎上腺素、甲狀腺激素等。滅活后的產物大部分隨尿排出。肝功能嚴重損害激素調節(jié)功能紊亂 （2）在維生素代謝中的作用膽汁酸鹽有助于脂溶性Vit的吸收。儲存維生素(A,K,D,B12) 。參與維生素的轉化。第二十六張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月二、肝臟的生物轉化定義： 生物轉化: 機體對許多外源性或

13、內源性非營養(yǎng)物質進行化學轉變，增加其水溶性(或極性)，使其易隨膽汁、尿排出，這種體內變化過程稱生物轉化(biotransformation)。 轉化對象：轉化特點：生理意義：保護機體 通過滅活對活性物質的作用時間和強度進行調節(jié) 利于機體對代謝廢物和進入體內的異物的排泄內源性非營養(yǎng)物:氨、胺、膽色素、激素 外源性非營養(yǎng)物:藥物、毒物、食品防腐劑、色素 連續(xù)性，多樣性， 失活與活化雙重性第二十七張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 1. 溶血性黃疸（肝前性黃疸） 由于各種原因使紅細胞大量破壞，以致未結合膽紅素明顯增加，超過肝臟的轉化能力，但結合膽紅素正常。新生兒血腦屏障發(fā)育不全，游離膽紅素易

14、進入腦組織，與腦部基底核的脂類結合，將神經核染成黃色，稱為核黃疸（膽紅素腦?。?。第二十八張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 2. 阻塞性黃疸（肝后性黃疸） 由于膽道阻塞，膽汁不能排出而淤積在膽管內，使上端膽管內壓力不斷升高，最后使小膽管和毛細膽管擴張，通透性增加，甚至破裂，使膽汁返流入血，血中結合膽紅素增加。第二十九張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 3. 肝細胞性黃疸（肝源性黃疸） 由于肝細胞病變，肝功能減退，使肝臟對膽紅素的攝取、轉化和排泄作用發(fā)生障礙。一方面肝臟不能將未結合膽紅素轉化成結合膽紅素，使血中未結合膽紅素增加；另一方面，病變區(qū)壓迫毛細膽管，使結合膽紅素返流入血，

15、血中結合膽紅素也增加。第三十張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2. 黃疸的生化檢查（1）血清總膽紅素和結合膽紅素的測定（2）尿三膽的測定:尿膽紅素、尿膽素原、尿膽素 （3）膽紅素葡萄糖醛酸轉移酶的誘導試驗黃疸類型的鑒別肝細胞損害程度和預后判斷第三十一張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 （二）黃疸的生化診斷 1. 血清總膽紅素和結合膽紅素的測定 用于黃疸類型的鑒別，肝細胞損害程度和預后判斷。 2. 尿三膽的測定 尿膽紅素、尿膽素原、尿膽素合稱為尿三膽。由于尿膽素是由尿膽素原遇空氣氧化而來，故臨床上一般只測定尿膽紅素和尿膽素原。第三十二張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 3

16、. 膽紅素葡萄糖醛酸轉移酶的誘導試驗 （1）糖皮質激素的誘導試驗：糖皮質激素能誘導肝細胞內尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移酶的合成，促進未結合膽紅素的轉化與排泄，使血清膽紅素迅速下降。 （2）苯巴比妥試驗：苯巴比妥類藥物能誘導肝細胞內Y蛋白和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉移酶的合成，苯巴比妥類藥物可用于核黃疸的治療。第三十三張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月二、肝硬化的生化 是由于多種損傷因素長期或反復作用于肝，使肝細胞彌漫性變性、壞死，以及肝結締組織彌漫性增生，導致肝廣泛的纖維化和結節(jié)的形成稱為肝硬化。第三十四張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 （一）肝硬化病因的分類 1. 確定的病因：乙型

17、、丙型病毒性肝炎；乙醇中毒；代謝性疾病：血色病、Wilson病、半乳糖血癥等；肝內、外長期膽汁淤積；門靜脈回流受阻；免疫功能紊亂：狼瘡性肝炎；毒素及治療性藥物：氨甲蝶呤、異煙肼等。 第三十五張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 乙醇的飲用量與肝硬化的發(fā)病率有密切關系，飲酒量越高的國家其肝硬化死亡率也越高。如飲酒量年人均量在10升以下的瑞典、英國、丹麥等國家，肝硬化死亡率在10/10萬以下；而飲酒量年人均在27升左右的法國，肝硬化死亡率為30/10萬以上。由于長期飲酒易形成乙醇性脂肪肝、乙醇性肝炎、乙醇性肝硬化。第三十六張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 乙醇在胃和小腸上部迅速被吸

18、收（胃30%、小腸上部70%），被吸收的乙醇90%98%在肝內被代謝，其余的隨尿和呼出氣排出。 乙醇的代謝途徑有乙醇脫氫酶（alcohol dehydrogenase，ADH）乙醇氧化體系、微粒體乙醇氧化體系（microsomal ethanol oxidizing system，MEOS）、NADPH氧化酶-過氧化氫酶體系、黃嘌呤氧化酶-過氧化氫酶體系。前二者最重要。 第三十七張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 ADH乙醇氧化體系：CH3CH2OH NAD+ CH3CHO NADH H+CH3CHO CH3COOH 乙酰輔酶A 三羧酸循環(huán) 微粒體乙醇氧化體系（MEOS）：CH3CH2

19、OH NADPH H+ O2 CH3CHO NADP+ 2H2O NADPH氧化酶-過氧化氫酶體系：NADPH H+ O2 NADP+ H2O2H2O2CH3CH2OH 2H2O CH3CHOADH乙醛脫氫酶MEOSNADPH氧化酶過氧化氫酶第三十八張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 黃嘌呤氧化酶-過氧化氫酶體系： 次黃嘌呤 H2O O2 黃嘌呤 H2O2 H2O2 CH3CH2OH 2H2O CH3CHO 2.可能的原因：營養(yǎng)不良；感染：新生兒梅毒、血吸蟲病蟲卵所致門管區(qū)纖維組織增生；隱原性肝硬化；肉芽腫性肝硬化。黃嘌呤氧化酶過氧化氫酶第三十九張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6

20、月 （二）肝硬化的生物化學檢查 肝硬化的早期診斷非常困難。近年來發(fā)展起來的幾項生化檢查為肝硬化的早期診斷提供了重要信息。 1.單胺氧化酶（MAO）測定 血清MAO與肝纖維化程度成正比。 肝纖維化僅限于門脈區(qū)或中央靜脈周圍時，血清MAO幾乎全部正常。第四十張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 門靜脈纖維增生侵入肝小葉實質內時，半數(shù)患者血清MAO活性增高。 門靜脈區(qū)間或門靜脈區(qū)間與中央靜脈之間結締組織相連時，80%患者血清MAO活性增高。 當有假小葉形成時，則100%患者血清MAO活性增高。 第四十一張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 2.-脯氨酸羥化酶（-PH）測定 -PH在膠原合

21、成中起關鍵作用。當肝纖維化時其含量和活性明顯增高。正常人為29.25.9ng/ml，肝硬化患者為654.990.2ng/ml。 3.血清透明質酸（HA）測定 肝纖維化時，門-腔靜脈分流增大，進入肝內清除的HA減少，使血清HA明顯增高。第四十二張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 4.血清型前膠原肽（PP） 是由型前膠原經內切酶作用而產生的多肽。正常人為7.910.86g/L，肝硬化患者明顯增高，診斷肝硬化的敏感性為95%，特異性為93%。第四十三張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月三、肝性腦病的生化機制 肝性腦病又稱肝昏迷，是由嚴重的肝病所致的中樞神經系統(tǒng)功能紊亂，是嚴重肝病的重危

22、合并癥。目前認為氨基酸的代謝障礙可能是肝性腦病發(fā)生的生化基礎。第四十四張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 （一）氨中毒學說 由于肝功能不全，肝臟合成尿素的功能障礙，血氨升高，血氨易通過血腦屏障，進入腦組織，氨對腦組織有嚴重的毒害作用。如抑制丙氨酸脫氫酶的活性，影響乙酰輔酶A的生成；與三羧酸循環(huán)中-酮戊二酸結合生成谷氨酸，耗竭三羧酸循環(huán)中-酮戊二酸，減少ATP的生成；與谷氨酸結合生成谷氨酰胺，增加ATP的消耗。影響腦組織的能量代謝。第四十五張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 （二）假神經遞質學說 在腸道，芳香族氨基酸，如酪氨酸和苯丙氨酸經腸菌的氨基酸脫羧酶作用，生成苯乙胺和酪胺，

23、在正常情況下可被肝內單胺氧化酶分解而清除，肝功能不全時，單胺氧化酶活性低下，苯乙胺和酪胺進入腦組織，經腦組織的非特異性羥化酶作用，生成苯乙醇胺和-羥酪胺，它們與兒茶酚胺遞質結構相似，但不能傳遞神經沖動，故稱為假神經遞質。第四十六張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 假神經遞質釋放后引起神經系統(tǒng)某些部位（如腦干網(wǎng)狀結構上行激動系統(tǒng)）功能發(fā)生障礙，使大腦發(fā)生深度抑制而昏迷。 （三）氨基酸不平衡學說 嚴重肝功能損傷和門腔靜脈短路時，血漿支/芳比明顯降低（正常健康人為4.0，慢性肝功能不全為0.9，急性肝功能不全0.8）。第四十七張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 由于芳香族氨基酸主要在

24、肝內分解，肝功能不全，芳香族氨基酸在肝內代謝發(fā)生障礙，在血中濃度增高；支鏈氨基酸主要在肌肉組織中代謝，肝功能不全時對胰島素的滅活障礙，高水平的胰島素促進支鏈氨基酸大量進入肌肉組織被分解，血中濃度降低。 芳香族氨基酸進入腦組織，引起假神經遞質生成增多，5-羥色胺（抑制性神經遞質）增多，使中樞進入抑制狀態(tài)。第四十八張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié) 肝功能試驗一、血清（漿）蛋白測定清蛋白（Alb)是血漿中主要的蛋白質,合成清蛋白是肝的重要功能之一。同時測定血清中的總蛋白（TP）和清蛋白含量，計算球蛋白（G）量和A/G比值是判定肝功能的重要指標。第四十九張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于20

25、22年6月血清總蛋白測定方法有化學法、物理法、染料結合法、電泳法等臨床上常用的是雙縮脲法。清蛋白測定常用方法為染料結合法，常用的染料有溴甲酚綠和溴甲酚紫。血中蛋白質主要由清蛋白和球蛋白組成而其他組分的蛋白含量低所以對同份血清測定的總蛋白、清蛋白結果可以求出可以求出球蛋白的含量，通過計算求出A/G。第五十張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月血清氨基轉移酶測定一、氨基轉移酶測定方法簡介丙氨酸氨基轉移酶（alanine aminotransferase，ALT)天冬氨酸氨基轉移酶（aspartate aminotransferase，AST)酶聯(lián)-紫外連續(xù)監(jiān)測法二硝基苯肼比色法方法:酶：第五十

26、一張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）酶聯(lián)-紫外連續(xù)監(jiān)測法ALT和AST測定的參考方法 NADH在340nm處有特征吸收峰，連續(xù)監(jiān)測NADH消耗引起的340nm吸光度變化,根據(jù)340nm處吸光度下降速率（A/min）計算ALT活性 原理：計算：第五十二張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月注意事項：1 .該ALT測定法中存在兩個消耗NADH的副反應2 .輔酶P-5-P能使血清中的ALT顯示最大活性3 .試劑空白測定值的處理4 .樣本選擇和處理方法評價 1. 特異性高2. 準確性高3. 精密度高參考范圍：540U/L或參考試劑盒提供的參考范圍 第五十三張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于

27、2022年6月（二）二硝基苯肼比色法原理：第五十四張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月操作與計算 1. ALT校準曲線的繪制第五十五張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2. 樣本的測定 測定管吸光度減去對照管吸光度的差值為樣本的吸光度，用該值在校準曲線上查得的卡門單位 3 .計算 4 .參考范圍： 525卡門單位 第五十六張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月注意事項： 1. 賴氏法單位定義： 卡門單位定義：血清1ml，反應液總體積3ml， 25，波長340nm，比色杯光徑1.0cm，每分鐘吸光度下降0.001A為一個單位（相當于每升反應體系中0.1608mol NADH被氧化

28、）。 2.底物-酮戊二酸和2，4-二硝基苯肼濃度不足，以及產物丙酮酸的抑制作用： 賴氏法的校準曲線不能延長到200卡門單位。當酶活性超過150卡門單位時，應用生理鹽水作510倍稀釋樣本，測定結果乘以稀釋倍數(shù) 第五十七張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月3. 樣本存放時間 在室溫（25）可維持2d，在4冰箱可維持1周。在25可維持1個月 試劑空白自身血清的對照管樣本對照管 4. 血清對照 5. 丙酮酸鈉的純度對曲線的影響6. 加入2，4-二硝基苯肼溶液后，應充分混勻，使反應完全。加入氫氧化鈉溶液的速度要一致，減少吸光度管間的差異。7.稱量必須準確 第五十八張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于202

29、2年6月方法評價 重復性差底物-酮戊二酸用量不足2，4-二硝基苯肼在堿性條件下也能顯色產物旁路效應2. 準確性差3. 試劑穩(wěn)定性差4. 操作簡便第五十九張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月二、氨基轉移酶測定的意義 肝細胞中含量最多，其次是腎臟和心臟，通常只有極少量釋放入血液，所以血清中此酶的活力很低，當這些組織病變時，細胞壞死或通透性增加，細胞內酶大量釋放入血，使血清中該酶活力顯著增高 1. 血清ALT活性增高 肝膽疾病骨骼肌疾病一些藥物和毒物可引起ALT活性升高2血清AST活性增高 心血管疾病各種肝病均可引起血清AST的升高第六十張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第三節(jié) 血清堿

30、性磷酸酶測定一、測定方法簡介一組非特異性的在堿性條件下水解磷酸酯的酶類 底物: -甘油磷酸鈉磷酸苯二鈉對硝基酚磷酸鹽酸酚酞-萘酚磷酸鹽4-甲基傘形花內酯酰磷酸鹽堿性磷酸酶:第六十一張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月測定方法: （一）測定水解釋放的無機磷鮑氏（Bodansky）法 （二）測定底物水解后的羥基化合物1. 羥基化合物需與顯色劑作用后比色測定 金氏（King）法 2. 羥基化合物在堿性條件下直接顯色測定 對硝基酚磷酸鹽（p-nitrophenyl phosphate, 4-NPP）法 第六十二張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月金氏法測定血清堿性磷酸酶 ALP在堿性條件催

31、化磷酸苯二鈉水解，釋放出酚和磷酸，酚在堿性溶液中與4-氨基安替比林作用，經鐵氰化鉀氧化形成紅色的醌類化合物，根據(jù)紅色的深淺與校準酚比較，確定ALP的活性。原理:第六十三張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月參考范圍：單位定義： 靈敏度較高，顯色穩(wěn)定，不需去蛋白，操作簡單、快速準確度和精密度都較低,受膽紅素和溶血的干擾方法評價：100ml血清在37與底物作用15min，產生1mg酚為1個金氏單位成人 313金氏單位，兒童 528金氏單位第六十四張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月速率法測定血清堿性磷酸酶 原理: 以對-硝基苯酚磷酸鈉（4-NPP）為底物， AMP或二乙醇胺（DEA）為磷

32、酸酰基的受體。在堿性條件下，ALP催化4-NPP水解釋放出磷酸基團，生成游離對-硝基酚（p-nitrophenol, 4-NP），4-NP在堿性溶液中轉變成醌式結構，呈現(xiàn)較深的黃色。根據(jù)405nm處吸光度增加的速率（A/min）推算出清ALP活性單位。第六十五張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月計算： 參考范圍： 40160 U/L （37） 靈敏度高、線性范圍寬（500U/L以上）和精密度高 方法評價：第六十六張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月二、堿性磷酸酶測定的意義分布：廣泛存在于各器官組織中，尤以肝臟、骨骼、小腸和腎臟含量較高，血清中ALP主要來自肝臟和骨骼 病理性增高：

33、肝膽疾?。鹤枞渣S疸、急性或慢性黃疸型肝炎、肝癌 骨骼疾?。贺E病、骨軟化病、骨轉移癌和骨折修復愈合期 生理性增高：妊娠期與兒童生長發(fā)育期 第六十七張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月第四節(jié) 血清-谷氨酰轉肽酶測定一、測定方法簡介-谷氨?；D移酶（-glutamyl transferase，GGT) （一）重氮比色法（二）速率法測定方法: 第六十八張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月速率法測定血清-谷氨酰基轉移酶 GGT催化-谷氨?；茡Q反應。以L-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺為底物，雙甘肽為谷氨?；氖荏w，在GGT的催化下，谷氨?；D移到雙甘肽分子上，同時釋放出黃色的2-硝基-

34、5-氨基苯甲酸，根據(jù)405nm處吸光度增加的速率（A/min）推算出GGT活性單位 原理： 第六十九張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月計算： 參考范圍：男性 1150U/L （37），女性 732U/L（37） 方法評價: 本法準確度好；精密度好線性范圍寬（460U/L）；操作簡便；但對試劑純度要求高第七十張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月重氮比色法測定血清-谷氨酰基轉移酶 以-谷氨酰-萘胺作為-谷氨?；墓w，雙甘肽作為受體，在GGT作用下，產生-萘胺，后者與重氮試劑反應，產生紅色-萘胺-對-偶氮苯磺酸，其色澤的深淺與GGT活力成正比。原理： 第七十一張，PPT共九十三頁，創(chuàng)

35、作于2022年6月參考范圍：方法評價： 不需去除蛋白質，操作簡便， 顏色穩(wěn)定，線性關系好，但底物水溶性較差 成年男性 317U/L， 成年女性 213U/L第七十二張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月二、-谷氨酰轉肽酶測定的意義分布：腎最高，其次是前列腺、胰、肝等器官 尿中GGT活性： 可能有助于診斷腎疾病 血清GGT用于診斷肝膽疾病1. 原發(fā)性或轉移性肝癌 2. 阻塞性黃疸3. 病毒性肝炎和肝硬化4. 乙醇性肝炎第七十三張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月血清膽紅素測定 未結合膽紅素 間接膽紅素血清膽紅素 結合膽紅素 直接膽紅素 加速劑常用的有甲醇、乙醇、苯甲酸鈉、尿素。最近在血

36、清中還發(fā)現(xiàn)了第三種膽紅素，稱為-膽紅素，性質與結合膽紅素相似，含量很低。第七十四張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 （一）重氮法 對氨基苯磺酸 亞硝酸鈉 氯化重氮苯磺酸 NaCl 2H2O 膽紅素 氯化重氮苯磺酸 紫紅色的偶氮化合物 =560nm 加速劑為甲醇。靈敏度較低，溶血標本干擾大。重氮試劑在室溫中不穩(wěn)定，易分解，故一般在臨用前新鮮配制。HClpH 1-2第七十五張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 （二）改良J-G法 1938年由Jendrossik和Grof建立，幾經改進成為今天廣泛應用的J-G法。 加速劑為苯甲酸鈉-咖啡因。 紫紅色的偶氮膽紅素在強堿性酒石酸鈉和咖啡因

37、存在下，生成藍色的偶氮膽紅素。pH13，=660nm 靈敏度高，7.4104；線性范圍寬，02736 mol/L；顯色穩(wěn)定；精確度較好；干擾少。是我國醫(yī)學檢驗學會推薦的方法。第七十六張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 （三）膽紅素氧化酶法總膽紅素 1/2O2 膽綠素 H2O膽綠素 O2 淡紫色化合物 膽紅素在460nm波長處，吸光度的下降與濃度成正比。在pH8.2時，膽紅素氧化酶可催化結合膽紅素和未結合膽紅素氧化；在pH4.5時，膽紅素氧化酶僅催化結合膽紅素氧化。因此，調節(jié)溶液pH可分別測定總膽紅素和結合膽紅素。 靈敏度高，干擾少，精確度好，線性范圍寬。 膽紅素氧化酶第七十七張，PPT

38、共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 【參考范圍】 血清總膽紅素 5.117.1mol/L 血清結合膽紅素 06mol/L 結合膽紅素/總膽紅素 20%35% 第七十八張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 【臨床意義】 診斷黃疸和鑒別黃疸類型，血清總膽紅素17.134.2mol/L為隱性黃疸，34.2mol/L為臨床黃疸，根據(jù)結合膽紅素占總膽紅素的百分比可鑒別黃疸類型。 溶血性黃疸 結合膽紅素占總膽紅素的20%以下。 肝細胞性黃疸 結合膽紅素占總膽紅素的35%以上。 阻塞性黃疸 結合膽紅素占總膽紅素的50%以上。 第七十九張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月二、血氨測定 血氨主要來自腸

39、道的吸收及組織中氨基酸的脫氨基作用。主要的去路是在肝臟經鳥氨酸循環(huán)合成尿素。 血液中的游離氨以兩種形式存在，NH4+和NH3，在生理pH條件下，NH4+占98%以上。 血氨測定的方法主要有三類：化學法（堿性酚次氯酸鹽直接顯色法）；酶法（谷氨酸脫氫酶速率法）；離子選擇電極法。第八十張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 （一）堿性酚次氯酸鹽直接顯色法 血清經鎢酸沉淀蛋白質后，濾液中的與堿性酚次氯酸鹽試劑反應生成藍色化合物（靛藍），=625nm，此反應又稱Berthlot反應。 顯色穩(wěn)定，但血液離體后，血液中的含氮化合物可分解產生氨，時血氨緩慢升高，此時應迅速將血液標本制成無蛋白濾液。第八十一

40、張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 （二）谷氨酸脫氫酶速率法 血漿中的在NH4+足量的-酮戊二酸和NADPH存在下，經GLDH催化生成谷氨酸NADP+，對340nm紫外光吸光度下降。NH4+ -酮戊二酸 NADPH 谷氨酸 NADP+ H2O 【參考范圍】1357mol/L（酶法）GLDH第八十二張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 【方法評價】特異性強、分析時間短，在200mol/L范圍內線性良好，精密度好，批內CV3.9%；批間CV4.5%。回收率為97.9%102.7%。是較為理想的氨分析方法。 【臨床意義】肝性腦病，重癥肝炎，尿毒癥血氨增高。第八十三張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月三、血清膽汁酸測定 膽酸 肝臟 游離型 鵝脫氧膽酸 初級膽汁酸 結合型膽汁酸 腸道 脫氧膽酸 次級膽汁酸 石膽酸甘氨膽酸甘氨鵝脫氧膽酸?；悄懰崤；蛆Z脫氧膽酸第八十四張，PPT共九十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 肝臟在膽汁酸的生成、分泌、排泄和攝取等代謝過程中有極其重要的作用。血液流經肝臟一次約90%的膽汁酸被攝取，故正常人血清TBA含量很低，一般在10mol/L以下。任何引起肝細胞病理性損傷的過程都可使肝臟攝取膽汁酸能力降低，而導致血清TBA，故血清TBA測定是目前認為最敏感的肝功能試驗項目之一。 膽汁酸測定的方法