葡萄糖的耐量實驗

1、葡萄糖的耐量實驗小組人員王敏,張靜雅,李詩雨,魏斌1糖尿病的發(fā)病機(jī)制 治療方法病因: 胰島素分泌不足及胰島素受體缺陷所致的代謝性疾病. 由于胰島素調(diào)節(jié)血糖水平,故糖尿病患者的血糖水平升高. 是常見的內(nèi)分泌紊亂性疾病分類 : I型糖尿病 II型糖尿病 繼發(fā)性糖尿病2癥狀: (三多一少) 多飲 多食 多尿 消瘦治療方法:口服藥物治療常用的有：化學(xué)類有促胰島素分泌劑、雙胍類、AGI 等；胰島素治療適應(yīng)癥： 1型糖尿病患者，由于自身胰島細(xì)胞功能受損，胰島素分泌絕對不足，在發(fā)病時就需要胰島素治療，而且需終生胰島素替代治療以維持生命和生活。約占糖尿病總?cè)藬?shù)5%。 2 型糖尿病患者在生活方式和口服降糖藥聯(lián)合

2、治療的基礎(chǔ)上，如果血糖仍然未達(dá)到控制目標(biāo)，即可開始口服藥物和胰島素的聯(lián)合治療。一般經(jīng)過較大劑量多種口服藥物聯(lián)合治療后 HbA1c仍大于 7.0%時，就可以考慮啟動胰島素治療。 3口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)4臨床上OGTT主要適用于下列情況:（1）無糖尿病癥狀，空腹血糖異常，或偶爾出現(xiàn)糖尿，或有明顯糖尿病家族史者；（2）有糖尿病癥狀，血糖水平不夠糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)者；（3）妊娠期或甲狀腺功能亢進(jìn)出現(xiàn)糖尿者；（4）不明原因腎病與視網(wǎng)膜病者。5(5)肥胖、血脂紊亂、高血壓，高尿酸血癥者；(6)屢發(fā)皮膚癤腫、皮膚感染，泌尿系感染者。6實驗?zāi)康恼莆彰阜y定血清葡萄糖濃度的原理掌握血糖變化的臨床生理意義掌

3、握口服葡萄糖耐量試驗的原理，適用人群和臨床意義。7實驗原理葡萄糖耐量試驗（OGTT）是一種葡萄糖負(fù)荷試驗，用于檢查人體胰島素B細(xì)胞功能和機(jī)體對糖的調(diào)節(jié)能力。正常人進(jìn)食后血糖都會暫時性升高，3060分鐘后可升到最高峰，但一般不超過8.9mmol/L，2小時左右又會回到空腹水平。這種現(xiàn)象稱為耐糖現(xiàn)象。8若內(nèi)分泌失調(diào)或神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂，則調(diào)節(jié)功能失常，食入大量糖后血糖濃度可急劇上升，短時間不能恢復(fù)到原值，稱為耐糖失常現(xiàn)象。所以觀察耐糖現(xiàn)象可以了解調(diào)節(jié)血糖的各種機(jī)能是否健全。9血清葡萄糖濃度測定方法1、GOD-POD法(酶測法)2、鄰甲苯胺法3、其他方法舉例 (福林馬爾露斯（Folin-Malmors

4、）超微量法)101、GOD-POD法：以過氧化物酶作指示酶的偶聯(lián)酶反應(yīng)定量法。 葡萄糖氧化酶（GOD）利用氧將葡萄糖氧化為葡萄糖酸，同時釋放過氧化氫。 過氧化物酶（POD）催化過氧化氫氧化色素原（如4-氨基安替比林和苯酚），并使色素原氧化成色素，即Trinder反應(yīng)。 紅色醌類化合物的生成量與葡萄糖含量成正比。 偶聯(lián)反應(yīng) 也作偶連反應(yīng)、耦聯(lián)反應(yīng)、氧化偶聯(lián)， 是由兩個有機(jī)化學(xué)單位進(jìn)行某種化學(xué)反應(yīng)而得到 一個有機(jī)分子的過程. 11反應(yīng)方程式: GOD 葡萄糖+O2+H2O 葡萄糖酸+2H2O2 POD2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚紅色醌類化合物122、鄰甲苯胺法：葡萄糖為一含醛基的己糖，在酸性

5、條件下加熱，可脫水生成5-羥甲基-2-呋喃甲醛，后者與鄰甲苯胺縮合成青色的Suchiff堿。 Suchiff堿顏色的深淺與樣品中葡萄糖的含量成正比與進(jìn)行同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液相比較，即可求出樣品中葡萄糖的含量。由于鄰甲苯胺只與醛糖作用顯色，故此種測定方法不受血液中其他還原物質(zhì)的干擾，測定時也無需除去血漿或血清中的蛋白質(zhì)。13反應(yīng)方程式: H+葡萄糖 5-羥甲基-2-呋喃甲醛+3H2O 加熱5-羥甲基-2-呋喃甲醛+鄰甲苯胺Schiff堿+H2O143、其他方法舉例 福林馬爾露斯（Folin-Malmors）超微量法：在熱堿溶液中的葡萄糖可將高鐵氰化鉀還原為低鐵氰化鉀，后者再與硫酸高鐵鹽作用生成

6、亞鐵氰化鐵（普魯士藍(lán)），與同樣處理的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行比色，即可求出血糖含量。 其反應(yīng)如下：15血糖測定方法歸納:血糖的測定方法按測定原理可分為無機(jī)化學(xué)方法、有機(jī)化學(xué)方法和生物化學(xué)方法三類。此外，還有固相酶法、電化學(xué)法及質(zhì)譜法等。常用的是分光光度法和酶學(xué)方法。分光光度法中常見的是鄰甲苯胺法，是利用葡萄糖在加熱的有機(jī)酸溶液中與某些芳香族胺類，可生成有色衍生物這一原理建立的。酶學(xué)方法有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法和葡萄糖脫氫酶法等。(己糖激酶法)原理是用已糖激酶催化葡萄糖同ATP反應(yīng)，產(chǎn)生葡萄糖6磷酸及ADP，葡萄糖6磷酸在葡萄糖6磷酸脫氧酶存在時，同NADP作用產(chǎn)生NADPH及6磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯，N

7、ADPH在340nm有吸收峰。16葡萄糖氧化酶法是利用葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖產(chǎn)生葡萄糖酸內(nèi)酯和雙氧水的反應(yīng)而建立。血糖的酶法測定是利用酶的特異性催化而建立起來的，具有高度的特異性，同時，可以避免使用化學(xué)方法中的一些有害試劑等。操作過程簡便，便于自動化檢測17應(yīng)用GOD-POD法測定血糖濃度來檢測葡萄糖耐量18實驗器材與試劑:器材：5ml移液管50或100ul微量可調(diào)式移液器721E分光光度計1cm比色皿37恒溫水浴19試劑:1、0.1mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.0） 稱取無水磷酸氫二鈉8.67g及無水磷酸二氫鉀5.3g溶于蒸餾水800ml中，調(diào)pH7.0，定容至1L。2、酶試劑 取過氧化物

8、酶12000U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，置4保存，可穩(wěn)定存放3個月。3、酚溶液 稱取重蒸餾酚100mg溶于蒸餾水100ml中，用棕色瓶貯存。4、酶酚混合試劑 將酶試劑及酚溶液等量混合，4可以存放1個月。205、12mmol/L苯甲酸溶液 取苯甲酸1.4g，于800ml蒸餾水中加溫助溶，冷卻后加蒸餾水定容至1L。6、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液（100mmol/L） 稱取已干燥恒重的無水葡萄糖1.802g，溶于約70ml 12mmol/L苯甲酸溶液中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h后方可使用。（防止氧化的作用 ，葡萄糖為單糖，含醛基，易氧化成羧基，加入苯甲酸，平

9、衡向左移動 ）7、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)工作液（5mmol/L） 吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液5.00ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀釋至刻度，混勻。 21血清中葡萄糖溶度的測定 項目 空白管 標(biāo)準(zhǔn)管 測定管血清/ml0.020葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液/ml0.020蒸餾水/ml0.020酶-酚混合試劑/ml3.003.003.0022混勻，置37水浴中，保溫25min，在波長510nm處比色，以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測定管吸光度。 計算公式: 血清葡萄糖濃度=（A測定/A標(biāo)準(zhǔn)）*5 mmol/L參考值: 空腹血清葡萄糖的濃度:3.896.11mmol/L23注意事項：實驗前受試者應(yīng)充分休息，避免

10、體力活動，試驗中亦不能吸煙、喝咖啡，以免影響實驗結(jié)果。葡萄糖氧化酶對-D葡萄糖高度特異，溶液中葡萄糖約36%為型，64%為型。葡萄糖的完全氧化需要型到型的變旋反應(yīng)。新配制的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液主要是型，故需放置2h以上（最好過夜），待變旋平衡后方可應(yīng)用。24葡萄糖氧化酶法可以直接測定腦脊液葡萄糖含量，但不能直接測定尿液葡萄糖含量。因為尿液中尿酸等干擾性物質(zhì)濃度過高，可干擾過氧化物酶反應(yīng)，造成結(jié)果假性偏低。因紅細(xì)胞的酵解將導(dǎo)致測定結(jié)果偏低，建議測定樣品以草酸鉀-氟化鈉做抗凝劑以抑制糖酵解。嚴(yán)重黃疸、溶血及乳糜樣血清應(yīng)先制備無蛋白血濾液，然后再進(jìn)行測定。25臨床意義:生理性高血糖:可見攝入高糖食物后，或情

11、緒緊張腎上腺素分泌增加時。病理性高血糖 （1）糖尿?。翰±硇愿哐浅Ｒ娪谝葝u素絕對或相對不足的糖尿病患者。 （2）內(nèi)分泌腺功能障礙：甲狀腺功能亢進(jìn)、腎上腺皮質(zhì)功能及髓質(zhì)功能亢進(jìn)，引起的各種對抗胰島素的激素分泌過多，或升高血糖的激素增多引起的高血糖，現(xiàn)已歸入特異性糖尿病中。26（3）顱內(nèi)壓增高：顱內(nèi)壓增高刺激血糖中樞，如顱外傷、顱內(nèi)出血、腦膜炎等，引起血糖增高。（4）脫水引起的高血糖：如嘔吐、腹瀉和高熱等也可使血糖輕度增高。生理性低血糖：見于饑餓和劇烈運(yùn)動。病理性低血糖：特發(fā)性功能性低血糖最多見，依次是藥源性、肝源性和胰島素瘤等。27臨床診斷:正常耐糖量：空腹血糖6.1mmol/L，口服1小時內(nèi)血糖值升高至最高峰，但不超過11.1mmol/L，2小時后血糖水平（2hPG）基本恢復(fù)空腹水平，即2hPG7.8mmol/L。各次尿液中均未檢出糖?？崭寡菗p害（IFG）：6.1mmol/LFPG7.0mmol/L，2小時后血糖水平7.8mmol/L。糖耐量減退（IGT）:FPG7.0mmol/L以及7.8mmol/L2hPG11.1mmol/L28糖尿病：FPG7.0mmol/L,2hPG11.1mmol/L。耐量增加 見于腎上腺皮質(zhì)功能減退患者，垂體前葉功能減