2022年版中國藥典培訓回答(第3部分：無菌檢查)

1、1、 供試品傳入無菌，對外表進展消毒。用75%無菌酒精浸泡外表是否可行？可用如何方法。等紫外照耀1h 酒精噴射，是否可行？注：無緩沖間的狀況。從一般區(qū)直接進入傳遞窗答：用 75%無菌酒精浸泡外表應當可行，但酒精易燃?？捎靡话阆緞┤鐫崰枩绲认?。2、無菌試驗供試品在傳入無菌傳遞窗前能否泡消毒液？答：視包裝而定。如：玻璃安瓿，可以；西林瓶，不行以。3、檢驗針劑時，安瓿外表消毒可否用碘液浸泡作為消毒，假設可以，它會殺死樣品本身的微生物嗎？答：我們沒有碘液浸泡消毒的閱歷。 就浸泡方式而言，視包裝而定，如：玻璃安瓿，可以； 西林瓶，不行以。4、微生物檢查樣品傳遞消毒處理，需作驗證嗎?如何確定其消毒效果

2、？ 答：驗證固然最好，但也應結合常識、閱歷等，盡量減低工作量。5、藥典要求只要供試品的特性允許優(yōu)先考慮薄膜過濾法。對于小劑量無抑菌作用的注射劑， 是直接接種法好還是薄膜過濾法好？答：優(yōu)先考慮薄膜過濾法，可視樣品包裝狀況而定。6、無菌檢查驗證，2022 年版方法轉變，變換了大腸埃希桿菌，請問從前經過驗證的無菌檢查方法，實施 2022 年藥典時是否必需從的驗證方法進展驗證？驗證后從能進展無菌檢查？答：應重驗證。7、假設產品經無菌驗證后，是以大腸為比照菌時，可行嗎？答：假設驗證6 種菌均可行，建議按藥典陽性比照章節(jié)的要求，設定陽性比照菌。假設驗證結果樣品是抗革蘭陰性菌的，則陽性菌應用大腸埃希菌。8、

3、無菌制劑的處方與工藝都沒有轉變，10 版藥典出版是否還需重驗證？ 答：10 版用大腸埃希替代銅綠假單胞，應重驗證。9、05 版我們已經做了方法驗證，10 版還要再做方法驗證嗎？ 答：如前所述。10、做陽性比照，為什么同是做 5 批檢樣，到最終只是兩到三批長菌？緣由出在哪？濾膜嗎？我們是做抗菌素的產品答：緣由是多方面的。請考慮方法的耐用性；此外，操作前后是否全都比方：供試品溶液溶解是否徹底、供試品溶液的濃度是否全都、對濾膜濾筒的潮濕、每次過濾對濾筒的蕩洗、抽干、抽干是否過久等等等等都有可能是影響因素。11、清潔無菌室所用消毒液如何做到無菌拖把、拖桶如何做到無菌？答：消毒液可承受過濾的方法。無菌拖

4、把、拖桶可承受浸泡、高溫滅菌的方法。12、微生物的操作記錄，可否直接用電子版進展記錄。也就是將操作結果及過程記錄在電子系統(tǒng)內？如細菌培育時間為 72 小時，在操作規(guī)程上可否寫成為 722 小時。生產企業(yè)可否將有菌種的檢查工程，如方法學驗證、培育基適用性檢查托付有資格的單位檢驗？答：可直接用電子版進展記錄。 細菌培育時間為 72 小時，建議在操作規(guī)程上寫成為 72 小時。 生產企業(yè)應當可將有菌種的檢查工程，如方法學驗證、培育基適用性檢查托付有資質的單位檢驗。13、高壓消毒爐的培訓一般在哪里有進展？ 答：廣州：特種設備培訓機構鍋爐所14、化裝品微控的容器洗滌一般用什么洗滌較好？ 答：外表活性劑15

5、、貴所日常所用的消毒液是哪些？答：潔爾滅、消毒粉、75%酒精、來蘇兒。16、消毒液原來就是用來消毒殺菌的，又怎么會存在消毒液是否無菌這一說法？答：消毒液不是萬能的，對絕大對數(shù)菌有效，不排解對有些微生物無效。 有些消毒劑質量難保證，假設有效成分濃度過低甚至無，則達不到滅菌效果。17、能否直接用電磁爐煮培育基加熱？最正確加熱方法是？ 答：電磁爐不能加熱玻璃瓶。我們所：水浴100，微波爐。18、硫乙醇酸鹽流體培育基培育后會有點渾濁排解是菌生長，是否可以在滅菌之前過濾培育基?答：找出培育基混濁的緣由，假設是培育基與樣品發(fā)生作用導致的混濁，滅菌之前過濾培育基 也是沒用的。硫乙醇酸鹽流體培育基含瓊脂，假設

6、用濾膜，一般很難過濾；假設用紗布、棉花、濾紙等，則須考慮濾材對不同成分的吸附程度不同，可能造成培育基成分比例的轉變。19、方法驗證時：比照加的菌液是最終才加嗎？答：按藥典，在最終一次沖洗液中參加。20、培育基適用性檢查無菌性檢查中“每批培育基隨機取不少于 5 支瓶中”中“每批” 指脫水商品培育基的生產批次，還是指制備的批次？答：指制備批次的培育基。21、微生物檢驗用的各種試劑除了化學純，能否使用分析純？ 答：可以。22、生物安全柜，凈化操作臺每年是否需要檢定？答：是的，我所是每年檢定一次。并定期檢測干凈度，頻次自己制訂。23、無菌操作時，對顯微鏡硬件條件的需求是怎樣？ 答：顯微鏡：至少 100

7、0X，也就說要有油鏡。24、生產原料藥的公司，其微生物檢測方法承受限度檢查法，請問干凈室的劃分中還需要建立“無菌檢查室”嗎？答：只要滿足藥典規(guī)定的萬級背景下的局部百級即可。25、陽性接種室，有沒有硬性要求在萬級區(qū)域局部百級區(qū)域？答：無硬性要求。但應使用生物安全柜，并按生物安全柜的要求設置外圍空間。26、陽性操作間的空調系統(tǒng)是否應與微生物限度檢查的空調系統(tǒng)完全分開，假設未分開，是否可以實行直排的方式？不利用陽性間的空調回風答：應分開。直排不等于分開。27、微生物限度試驗室和陽性比照室的干凈系統(tǒng)要分別獨立，如用同一套的HVAC，但都是全排，是否能承受？答：應分開。直排不等于分開。28、微生物與無菌

8、干凈系統(tǒng)也肯定分別設置嗎？答：有條件最好將微生物限度檢查與無菌檢查干凈系統(tǒng)分開。29、干凈區(qū)監(jiān)控中，某些設備不宜承受沖淋法和接觸碟法取樣，而擦拭法中棉簽釋放率很低一般棉簽釋放率只有 20%左右。請問如何設計采樣方法才能真實反映設備外表微生物狀況？答：有些國外生產微生物檢驗儀器的大公司，有專用的小拭子，可能更有效。30、用干凈服材質做成袋子來代替牛皮紙的包扎滅菌是否可行？ 答：我們所目前承受此法。31、環(huán)境監(jiān)測用平皿預培育溫度和時間?答：30-35，時間不少于 48h 。32、靈敏度檢測如何確定接種菌數(shù)量？答：菌液在接種至靈敏度檢測用培育基的同時用微生物限度檢查法的平皿法測定每1ml 菌液的 c

9、fu。33、如何驗證消毒劑消毒效果？答：目前沒有統(tǒng)一的方法，自行設計。34、消毒劑消毒效果如何驗證？如何設定SAL 承受標準？ 答：目前沒有統(tǒng)一的方法，自行設計。35、驗證試驗中，假設供試品需參加-內酰胺酶，那么陽性比照管是否應當參加等量-內酰胺酶？答：驗證試驗時，不加，由于比照管是用于比較試驗菌生長狀況的。 檢驗時的陽性比照則加。36、全封閉式無菌驗證中，用 0.9%Nacl 溶液溶解后，抽入集菌器中，樣品溶液是否要停留幾秒鐘？讓樣品與濾膜充分接觸或者停留后溶液造成抗生素殘角？如何停留幾秒鐘？應在100ml 時停留還是 50ml 時停留適宜？答：不應停留，應讓樣品盡快通過，避開抑菌成分被吸附

10、。薄膜過濾法的目的是僅讓微生物截留在濾膜上。37、每張濾膜每次沖洗量一般 100ml，總沖洗量不得超過 1000ml，假設供試品容量較大，總供試品樣品量按標準規(guī)定超過 1000ml，那這種狀況應如何對待呢？答：中國藥典未規(guī)定供試品溶液的體積，設計檢驗方法時，兼顧供試品溶液的濃度和體積， 盡量承受較小的體積。38、裝消毒劑的容器是否要求滅菌？例如用可滅菌的不銹鋼材質，由于塑料的容器不能滅菌問題。答：應當滅菌。39、配制用水最長可以放置多久？答：視放置條件，閱歷證，自己設定。40、對滅菌效果進展驗證，多久進展一次？ 答：依據(jù)自己工作狀況，自己制訂。41、微生物限度檢查時所用吸管是否均需計量？ 答：

11、無規(guī)定。42、無菌，微生物限度試驗，樣品與陽性比照可以共用一個培育箱嗎？答：有 2 種意見：其一，條件許可，分開，以免污染；其二，共用一個培育箱，使其在一樣條件下培育。 我們：分開。43、在無菌檢查項下，供試品檢驗時，陽性比照是否必需每批都需做？是否供試品無菌試驗跟陽性比照必需同步操作？答：ChP 要，同步。44、生產企業(yè)一次生產 80mg/瓶的凍干粉 36000 瓶，企業(yè)取 20 瓶做無菌檢驗，是否應另增加 10 瓶做陽性試驗？方法：薄膜過濾法，濾膜三分法，一份陽性，另兩份置兩種不同培育基中。答：是，總共需 30 瓶。45、培育基靈敏度試驗所用的菌種有6 種，為什么沒有大腸？答：有專家解釋：

12、因銅綠與大腸均為革蘭氏陰性桿菌，而銅綠在醫(yī)院及自然界中更廣泛存在， 致病性更強。46、靈敏度試驗可要參加大腸？ 答：否。47、薄膜過濾法中，菌懸液的參加，在最終一次的沖洗液中參加小于100cfu 的試驗菌，過濾，這個說法用封閉式過濾器要如何做？假設做法是參加培育基后，再從管子里加1ml 的 100cfu 的菌，可行嗎？答：在最終一次沖洗液中，經封閉式過濾器頂部的透氣孔參加1ml 的少于 100cfu 的菌液， 抽干，再加培育基。48、“全封閉式無菌檢驗中，每張濾膜每次沖洗量一般為100ml，我們驗證的是 50ml*3100ml*3，總沖洗量不超 1000ml,可行嗎？“答：可行。49、中國藥典

13、無菌檢查方法驗證中“菌種加在最終一次沖洗液中，過濾”，假設某供試品無菌檢查方法無需進展沖洗，那么菌懸液應當加在哪適宜？答：藥典無規(guī)定，可在過濾完樣品后直接加菌液，然后參加培育基。50、“無菌驗證后，試驗菌數(shù)經測定，假設參加菌數(shù)大于100cfu,該狀況如何處理？是否需要推斷其試驗無效，重驗證“答：重驗證。51、南方天氣濕度大，易發(fā)霉，毛巾或者衣服上可能有黑色的霉點洗不干凈，請問有沒有好的方法去除霉點？答：漂白、消毒。52、粉針注射劑，同一個品種有不同規(guī)格的產品，在建立方法學驗證時是否每個規(guī)格都需要進展驗證？ 答：理論上，以最大規(guī)格建立的方法應適用于其他較小規(guī)格。 但這樣做可能會提高本錢，因小規(guī)格

14、的沖洗量、滅活劑等用量可能可以更少，難以一概而論。 53、無菌檢查方法中陰性比照，每瓶溶劑，稀釋液， 沖洗液都需要收集，是不是每做一批試驗，都需同時操作兩臺集菌儀？陰性比照能否每一批溶劑，稀釋液， 沖洗液抽一、兩瓶做陰性比照？答：不肯定每做一批試驗，都需同時操作兩臺集菌儀。陰性比照不應當僅僅每一批溶劑，稀釋液，沖洗液抽一、兩瓶做陰性比照，應盡可能將所用到的每瓶都留少量做陰性。54、“每一張膜總沖洗量不得超過 1000ml,這個總沖洗量包括樣品溶液嗎？“答：不包括。55、無菌性檢查，培育基是直接拿去培育，還是依據(jù)說明書滅菌處理后再拿去培育？答：成品培育基直接培育；脫水培育基或自己配制的培育基滅菌

15、后拿去培育。56、液體硫乙醇酸鹽培育基中檢所極易被氧化， 藥檢所做試驗時是將管裝量定在多高？答：我們所用的是全封閉一次性濾筒，裝量 100ml， 高度約 6.5cm。57、假設培育過程氧化層高度已超過藥典中要求的 1/2 高度，并覺察其中長菌，結果如何判定？假設未長菌， 結果判定認為無菌是否成立？此類問題應當如何衡 量？答：假設培育過程氧化層高度已超過藥典中要求的 1/2 高度，并覺察其中長菌，可推斷為不合格；假設未長菌， 按藥典，結果判定認為無菌應不成立； 此類問題應當照藥典執(zhí)行，培育后不超過 1/2 高度。58、“無菌性檢查中每批培育基隨機取不少于 5 支瓶”,這句話中的“5 支瓶”是 5

16、 支或 5 瓶，還是5 支和 5 瓶？” 答：或59、干凈區(qū)與陽性試驗室空調系統(tǒng)應如何分別設置？ 送風分別，回風分別，或兩者均分別？即 2 套空調系統(tǒng)？答：2 套系統(tǒng)互不相干。60、十四烷酸異丙酯假設閱歷證后，不影響陽性菌生長， 可否濕熱滅菌？答：濕熱滅菌的水蒸氣可能會影響十四烷酸異丙酯的性能，建議按藥典。61、沖洗液的濾清，參加不渾濁，是否可不用過濾？ 答：可62、無菌檢查時，陽性比照的接種與培育是否也必需和供試品培育同一天進展？答：應同步操作。63、使用的消毒劑應無菌，比方購置的潔而滅要用無菌的 4.5 微米濾膜過濾再用嗎？答：如用在關鍵地方，建議過濾。64、產品穩(wěn)定性考察，有無菌檢查工程

17、，請問留樣產品的無菌檢查的數(shù)量和常規(guī)檢查的數(shù)量要一樣嗎？如果是，留樣量就會相當大，有的藥品比較貴重，這樣會造成企業(yè)較大的損失.答：無菌檢查的數(shù)量和常規(guī)檢查的數(shù)量應一樣。 按藥典穩(wěn)定性試驗指導原則附表，該做就應做，但假設狀況特別，或許可減低檢驗頻次，但如此一來，可能一些藥品注冊審評專家或 GMP 檢查員會有不同意見。穩(wěn)定性試驗的無菌檢查很大程度是在考察包裝。65、 做培育基適用性與方法驗證時，假設加菌量為100120cfu100cfu，是否需要重做驗證？ 答：要。66、 藥典只是供給了化藥中干擾物的中和劑方法，能否供給一些中成藥的除菌方法？答：無67、干凈區(qū)污染霉菌怎么處理？ 答：可嘗試甲醛熏蒸

18、68、干凈區(qū)有霉菌生長，要怎么凈化環(huán)境？注：我們用 75%的乙醇抹洗全部空間，然后開臭氧半小時，但是檢測后還是覺察有霉菌，教師是不是還有更好的方法？答：可嘗試甲醛熏蒸69、教師說的酒精棉過一段時間會生長細菌，請問酒精棉保存期多久？答：未考察，我們使用期一般不超過一周。70、酒精棉怎樣取樣進展微生物檢查？ 答：請自行設計71、酒精棉有規(guī)定超過多少的菌數(shù)不能再用？ 答：無規(guī)定。72、廣州環(huán)凱有凍干菌粉賣，是否可以在其單位購置？ 答：建議向中檢所購置。73、請問藥典說“當產品的組分或原檢驗條件發(fā)生轉變時，應對檢驗方法重驗證”，如何理解“原檢驗條件發(fā)生轉變”答：比方，將沖洗量 500ml 改為 300ml，等等。74、靈敏度檢查：改進馬丁和硫乙醇酸性流體培育基都要做 6 種菌株嗎？答：硫乙醇：4 種，為金葡、銅綠、枯草、生孢； 馬?。? 種，為白念、黑曲。75、清潔后的潔具需用微生物純化水洗滌？ 答：清潔后的潔具需用純化水洗滌。76、無菌：陽性比照培育 4872 小時就可以滅活了嗎？ 不用跟供試品培育 14 天嗎？答：是的77、供試品處理時，需參加適量的聚山梨酯80，聚山 梨酯 80 需要滅菌嗎？方法如何？答：需滅菌，可承受濕熱滅菌。78、含 0.05%vv聚山梨酯 80 的 0.9%無菌氯化鈉溶液如何配制？答：可直接用聚山梨酯 80 配制，或先配制聚山梨酯80 的濃溶液，然后取濃溶液