第章 植物組織培養(yǎng)技術(shù)

1、PAGE 第 PAGE 44 頁 共 NUMPAGES 44 頁第2章 植物組織培養(yǎng)技術(shù)第二節(jié) 植物組織培養(yǎng)概述一、授課章節(jié)第二節(jié) 植物組織培養(yǎng)概述。二、學(xué)時(shí)時(shí)安排2學(xué)時(shí)時(shí)。三、教學(xué)學(xué)目標(biāo)1掌握握植物組組織培養(yǎng)養(yǎng)的含義義。2了解解植物組組織培養(yǎng)養(yǎng)的類型型劃分。3理解解植物組組織培養(yǎng)養(yǎng)的應(yīng)用用原理。4掌握握植物組組織培養(yǎng)養(yǎng)的特點(diǎn)點(diǎn)和應(yīng)用用。四、教學(xué)學(xué)重點(diǎn)、難點(diǎn)分分析重點(diǎn)：植物組織織培養(yǎng)的的含義、特點(diǎn)和和應(yīng)用。難點(diǎn)：植物組織織培養(yǎng)的的應(yīng)用原原理。五、教具具電化教學(xué)學(xué)設(shè)備，植物組組織培養(yǎng)養(yǎng)試管苗苗。六、教學(xué)學(xué)方法講授法，多媒體體課件。七、教學(xué)學(xué)過程.導(dǎo)入入前面我們們學(xué)習(xí)了了有關(guān)植植物育種種的一些些知

2、識(shí)，今天，請(qǐng)看我我給同學(xué)學(xué)們看一一樣?xùn)|西西(教師師拿出試試管苗)，問同同學(xué)們這這是什么么呢？這這就是我我們要學(xué)學(xué)的植物物組織培培養(yǎng)。II.新新課一、植物物組織培培養(yǎng)的含含義植物組織織培養(yǎng)是是指在無無菌條件件下，將將離體的的植物器器官、組組織、細(xì)細(xì)胞以及及原生質(zhì)質(zhì)體培養(yǎng)養(yǎng)在人工工培養(yǎng)基基上，給給予適宜宜的培養(yǎng)養(yǎng)條件，使其長(zhǎng)長(zhǎng)成完整整植株的的過程。由于培培養(yǎng)物脫脫離母株株在試管管內(nèi)培養(yǎng)養(yǎng)，故又又稱離體體培養(yǎng)、試管培培養(yǎng)。二、植物物組織培培養(yǎng)的類類型植物組織織培養(yǎng)由由于分類類依據(jù)不不同可劃劃分為不不同的類類型。植株培養(yǎng)：對(duì)幼小植株的培養(yǎng)。植物組織培養(yǎng)根據(jù)培養(yǎng)對(duì)象器官培養(yǎng)：對(duì)根、莖、葉、花、果實(shí)、種子

3、等離體器官的培養(yǎng)。組織培養(yǎng)：對(duì)植物體的各部分組織進(jìn)行的培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)：對(duì)單個(gè)細(xì)胞或較小細(xì)胞團(tuán)的培養(yǎng)。原生質(zhì)體培養(yǎng)：對(duì)除去細(xì)胞壁的原生質(zhì)體的培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)方式固體培養(yǎng)：加入瓊脂等凝固劑，使培養(yǎng)基固體化，在此培養(yǎng)基上的培養(yǎng)。液體培養(yǎng)：培養(yǎng)基中不加凝固劑，培養(yǎng)基為液體，在此培養(yǎng)基上的培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)過程初代培養(yǎng)：將外植體進(jìn)行的第一次培養(yǎng)。繼代培養(yǎng)：將培養(yǎng)一段時(shí)間的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)的過程。光培養(yǎng)：培養(yǎng)過程中需要光照的培養(yǎng)。暗培養(yǎng)：培養(yǎng)過程中不需要光照的培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)條件三、植物物組織培培養(yǎng)的應(yīng)應(yīng)用原理理（一）植植物細(xì)胞胞全能性性植物細(xì)胞胞全能性性，是指指植物體體上每個(gè)個(gè)具有完完整細(xì)胞胞核的

4、植植物細(xì)胞胞，都具具有該植植物體的的全部遺遺傳信息息和產(chǎn)生生完整植植株的能能力。植植物的體體細(xì)胞一一旦脫離離所在器器官或組組織的束束縛成為為離體狀狀態(tài)時(shí)，在一定定的營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)、激素素和外界界條件作作用下，就可能能表現(xiàn)出出全能性性，而生生長(zhǎng)發(fā)育育成為完完整的植植株。（二）細(xì)細(xì)胞的分分化和形形態(tài)建成成（三）植植物的再再生功能能四、植物物組織培培養(yǎng)的特特點(diǎn)（一）研研究材料料來源單單一，無無性系遺遺傳信息息相同（二）試試驗(yàn)經(jīng)濟(jì)濟(jì)，管理理方便，工作效效率高（三）培培養(yǎng)條件件人為控控制，可可周年連連續(xù)進(jìn)行行試驗(yàn)或或生產(chǎn)（四）生生長(zhǎng)快，周期短短，繁殖殖率高五、植物物組織培培養(yǎng)的應(yīng)應(yīng)用（一）優(yōu)優(yōu)良品種種的快速速繁

5、殖（二）脫脫毒及脫脫毒苗的的再繁育育（三）植植物新品品種的培培育（四）種種質(zhì)資源源的保存存和交換換（五）有有用次生生代謝產(chǎn)產(chǎn)物的生生產(chǎn)III.作業(yè)1.簡(jiǎn)述述植物組組織培養(yǎng)養(yǎng)的概念念和培養(yǎng)養(yǎng)類型。2.植物物組織培培養(yǎng)技術(shù)術(shù)有哪些些特點(diǎn)？3.植物物組織培培養(yǎng)在生生產(chǎn)上有有哪些方方面的應(yīng)用？ 4.通過過學(xué)習(xí)，你對(duì)植物物組織培培養(yǎng)技術(shù)術(shù)是怎樣樣理解的的？第二節(jié) 植物物組織培培養(yǎng)廠房房的設(shè)計(jì)計(jì)與構(gòu)建建一、授課課章節(jié)第二節(jié) 植物物組織培培養(yǎng)廠房房的設(shè)計(jì)計(jì)與構(gòu)建建。二、學(xué)時(shí)時(shí)安排2學(xué)時(shí)。三、教學(xué)學(xué)目標(biāo)1了解解組培工工廠的基基本結(jié)構(gòu)構(gòu)、各部部分結(jié)構(gòu)構(gòu)的具體體功能。2理解解組培工工廠的設(shè)設(shè)計(jì)原則則與總體體要求，

6、能夠根根據(jù)需要要和實(shí)際際情況科科學(xué)設(shè)計(jì)計(jì)組培工工廠。3掌握握廠房的的基本組組成，儀儀器設(shè)備備配備與與設(shè)計(jì)要要求。4了解解常用儀儀器與用用具的使使用方法法。四、教學(xué)學(xué)重點(diǎn)、難點(diǎn)分分析重點(diǎn)：組培工廠廠的設(shè)計(jì)計(jì)原則與與總體要要求。難點(diǎn)：根據(jù)需要要和實(shí)際際情況科科學(xué)設(shè)計(jì)計(jì)組培工工廠。五、教具具電化教學(xué)學(xué)設(shè)備、組培工工廠現(xiàn)場(chǎng)場(chǎng)或?qū)嶒?yàn)驗(yàn)室。六、教學(xué)學(xué)方法講授法，演示法法。七、教學(xué)學(xué)過程.導(dǎo)入入復(fù)習(xí)：植植物組織織培養(yǎng)的的概念，類型及及應(yīng)用。提問：細(xì)細(xì)胞全能能性的概概念。上次課我我們學(xué)習(xí)習(xí)了植物物組織培培養(yǎng)的基基本知識(shí)識(shí)，那么么從事植植物組織織培養(yǎng)的的生產(chǎn)需需要一些些基本的的儀器和和設(shè)備，今天我我們來學(xué)學(xué)習(xí)植

7、物物組織培培養(yǎng)的廠廠房的設(shè)設(shè)計(jì)與構(gòu)構(gòu)建。II.新新課一、植物物組織培培養(yǎng)廠房房的設(shè)計(jì)計(jì)（一）設(shè)設(shè)計(jì)原則則1.環(huán)境境清潔、安靜、遠(yuǎn)離污污染源。2.按照照工作的的目的和和規(guī)模決決定廠房房的設(shè)計(jì)計(jì)。3.按照照自然工工作程序序先后合合理布局局，避免免生產(chǎn)環(huán)環(huán)節(jié)倒排排。4.經(jīng)濟(jì)濟(jì)實(shí)用，節(jié)能安安全。（二）具具體要求求1.廠房房選址時(shí)時(shí)應(yīng)選擇擇周圍安安靜、陽陽光充足足、無高高大建筑筑物遮擋擋的環(huán)境境；最好好在常年年主風(fēng)向向的上風(fēng)風(fēng)方向，盡量減減少污染染；要求求交通便便利，便便于產(chǎn)品品的運(yùn)送送。2.廠房房各車間間的大小小和比例例相對(duì)合合理，車車間的設(shè)設(shè)計(jì)和設(shè)設(shè)備的配配置、擺擺放與其其功能相相適應(yīng)。3.廠房房必

8、須滿滿足3個(gè)個(gè)基本的的需要：生產(chǎn)準(zhǔn)準(zhǔn)備（器器皿洗滌滌與存放放、培養(yǎng)養(yǎng)基制備備、各種種器具的的滅菌）、無菌菌操作和和控制培培養(yǎng)。4.廠房房的建筑筑與裝修修材料要要耐腐蝕蝕，便于于消毒和和清潔。（三）廠廠房基本本組成廠房根據(jù)據(jù)結(jié)構(gòu)和和應(yīng)用范范圍一般般設(shè)計(jì)為為藥品配配制間、洗滌間間、培養(yǎng)基基制作間間、緩沖沖間、無無菌操作作間、試試管苗培培養(yǎng)間、試管苗苗馴化移移植間。1.藥品品配制間間（1）任任務(wù)：主主要用于于化學(xué)藥藥品的儲(chǔ)儲(chǔ)藏、稱稱量和溶溶液的配配制。（2）設(shè)設(shè)計(jì)要求求：干燥燥、通風(fēng)風(fēng)、無直直射光線線。房間間內(nèi)設(shè)立立工作臺(tái)臺(tái)，工作作臺(tái)最好好用抗鹽鹽堿，耐耐腐蝕的的臺(tái)面，要牢固固、平穩(wěn)穩(wěn)，具有有較好的

9、的抗震性性能。注注意磁力力攪拌器器與電子子天平要要分開臺(tái)臺(tái)面放置置。（3）儀儀器與用用具配置置：大型型工作臺(tái)臺(tái)、藥品品柜、普普通冰箱箱、電子子分析天天平、托托盤天平平、磁力力攪拌器器、容量量瓶、燒燒杯、量量筒等。2.洗滌滌間（1）任任務(wù)：洗洗滌室用用于完成成玻璃器器皿等儀儀器的清清洗、干干燥和貯貯存；外外植體的的預(yù)處理理與清洗洗；試管管苗的出瓶、清洗與與整理等等工作。（2）設(shè)設(shè)計(jì)要求求：房間內(nèi)內(nèi)應(yīng)寬敞敞明亮，方便多多人同時(shí)時(shí)操作；配備大大型水槽槽，上下下水道要要暢通；地面、天花板板及墻壁壁應(yīng)耐濕濕和便于于清潔；應(yīng)有晾干臺(tái)臺(tái)，用于于放置洗洗滌后的的培養(yǎng)器器皿。（3）儀儀器與用用具配置置：水槽槽、

10、晾干干臺(tái)、周周轉(zhuǎn)箱、烘箱等等。3.培養(yǎng)養(yǎng)基制作作間（1）任任務(wù)：主主要負(fù)責(zé)責(zé)培養(yǎng)基基的配制制、分裝裝、包扎扎和高壓壓滅菌等等工作。（2）設(shè)設(shè)計(jì)要求求：房間寬寬敞明亮亮、通風(fēng)風(fēng)良好，方便多多人同時(shí)時(shí)操作；目前滅滅菌大多多采用電電加溫，墻體建建筑時(shí)要要預(yù)先設(shè)設(shè)計(jì)電路路線，確確保用電線路路和滅菌菌鍋的用用電安全全。在滅滅菌鍋上上方的墻墻壁設(shè)置置換氣窗窗，利于于通風(fēng)排排氣。地地面、墻墻壁應(yīng)用用耐濕材材料鋪設(shè)設(shè)，防水水、防潮潮、防腐腐蝕。（3）儀儀器與用用具配置置：托盤盤天平、酸度計(jì)計(jì)、工作作臺(tái)、高高壓滅菌菌鍋、周周轉(zhuǎn)箱、儲(chǔ)物柜柜等。4.緩沖沖間（1）任任務(wù)：防防止工作作人員進(jìn)進(jìn)出時(shí)帶帶進(jìn)雜菌菌。（2）

11、設(shè)設(shè)計(jì)要求求：面積積一般223m2為宜；緩沖間間應(yīng)安裝裝紫外燈燈，用以以照射滅滅菌；配配備鞋柜柜、衣柜柜、拖鞋鞋，用于于工作人人員進(jìn)入入無菌操操作室前前在此更更衣?lián)Q鞋鞋，（3）儀儀器與用用具配置置：紫外外燈、鞋鞋柜、衣衣柜、工工作服等等。5.無菌菌操作間間(接種種間)（1）任任務(wù)：進(jìn)進(jìn)行植物物材料的的分離接接種及培培養(yǎng)物轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移。（2）設(shè)設(shè)計(jì)要求求：接種種室宜小小不宜大大，一般般78mm2。地面、天花板板及四壁壁要求盡盡可能密密閉光滑滑，易于于清潔和和消毒。配置推推拉門，以減少少開關(guān)門門時(shí)的空空氣擾動(dòng)動(dòng)。房間間密閉，干爽安安靜，清清潔明亮亮。在適當(dāng)當(dāng)位置吊吊裝12盞紫紫外燈，用以照照射滅菌菌。最

12、好安安裝一小小型空調(diào)調(diào)，使室室溫可控控，這樣樣可使門門窗緊閉閉，減少少與外界界空氣對(duì)對(duì)流。（3）儀儀器與用用具配置置：超凈凈工作臺(tái)臺(tái)、紫外外燈、空空調(diào)機(jī)、醫(yī)用小小推車、接種器器具消毒毒器、酒酒精燈、接種工工具、擱擱物架等等。6.試管管苗培養(yǎng)養(yǎng)間（1）任任務(wù)：接接種材料料的培養(yǎng)養(yǎng)生長(zhǎng)。（2）設(shè)設(shè)計(jì)要求求：培養(yǎng)養(yǎng)間的大大小可根根據(jù)生產(chǎn)產(chǎn)規(guī)模和和培養(yǎng)架架的大小小、數(shù)目目及其它它附屬設(shè)設(shè)備而定定。其設(shè)設(shè)計(jì)以充充分利用用空間和和節(jié)省能能源為原原則。高高度比培培養(yǎng)架略略高為宜宜，周圍圍墻壁和和天花板板要求光滑滑平坦、有絕熱熱防火的的性能。能夠控控制光照照和溫度度，并保保持相對(duì)對(duì)的無菌菌環(huán)境；適當(dāng)位位置安裝

13、裝紫外燈燈進(jìn)行照照射滅菌菌。（3）儀儀器與用用具配置置：培養(yǎng)養(yǎng)架、空空調(diào)機(jī)、光照時(shí)時(shí)控器、溫度計(jì)計(jì)、搖床床等。7.試管管苗馴化化移植間間（1）任任務(wù)：進(jìn)進(jìn)行試管管苗的馴馴化和移移植。（2）設(shè)設(shè)計(jì)要求求：通常常在日光光溫室內(nèi)內(nèi)進(jìn)行，其面積積大小根根據(jù)生產(chǎn)產(chǎn)規(guī)模而而定。要要求能夠夠控溫調(diào)調(diào)濕、控控光通風(fēng)風(fēng)、控菌菌防蟲。（3）儀儀器與用用具配置置：移栽栽容器、彌霧裝裝置、遮遮陽網(wǎng)、移栽基基質(zhì)等。二、基本本儀器設(shè)設(shè)備和用用具（一）滅滅菌設(shè)備備1.濕熱熱滅菌設(shè)設(shè)備（高高壓蒸汽汽滅菌鍋鍋）：用于培培養(yǎng)基、玻璃器器皿以及及其它可可高溫滅滅菌用品品的滅菌菌，根據(jù)據(jù)規(guī)模大大小有小小型手提提式、中中型立式式、大型

14、型臥式等等不同規(guī)規(guī)格；根根據(jù)控制制方式分分為手動(dòng)動(dòng)控制、半自動(dòng)動(dòng)控制和和全自動(dòng)動(dòng)控制等等不同類類型。2.過濾濾滅菌設(shè)設(shè)備（防防細(xì)菌濾濾膜）：防細(xì)菌菌濾膜的的網(wǎng)孔直直徑為00.455m以下下，當(dāng)溶溶液通過過濾膜后后，細(xì)菌菌的細(xì)胞胞和真菌菌的孢子子等因大大于濾膜膜直徑而而被阻，在需要要過濾滅滅菌的液液體量大大時(shí)，常常使用抽抽濾裝置置；液量量小時(shí)，可用注注射器。主要用用于赤霉霉素、玉玉米素、脫落酸酸等不耐耐熱物質(zhì)質(zhì)的滅菌菌。3.干熱熱滅菌設(shè)設(shè)備：利利用高溫溫烘烤或或灼燒的的方法進(jìn)進(jìn)行滅菌菌，包括括烘箱（器皿和和器械的的滅菌）、酒精精燈（用用于接種種工具的的滅菌）、接種種器械滅滅菌器等等。4.其它它滅

15、菌設(shè)設(shè)備：利利用紫外外光波、超聲波波、臭氧氧等殺菌菌，主要要用于對(duì)對(duì)空氣和和物體表表面進(jìn)行行消毒。常用設(shè)設(shè)備包括括紫外燈燈、超聲聲波清洗洗器、臭臭氧發(fā)生生器等。（二）接接種設(shè)備備與用具具1.超凈凈工作臺(tái)臺(tái)：超凈凈工作臺(tái)臺(tái)是植物物組織培培養(yǎng)最常常用、最最普及的的無菌操操作裝置置。根據(jù)據(jù)風(fēng)幕形形成的方方式可分分為水平平風(fēng)和垂垂直風(fēng)兩兩種；根根據(jù)使用用方式分分為單人人單面、雙人單單面、雙雙人雙面面等。2.接種種工具：外植體體接種或或培養(yǎng)物物繼代轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)接時(shí)使使用的各各種工具具。常用用的有：尖頭鑷：用于分分離植物物組織等等；槍型鑷：用于夾夾取植物物器官繼繼代轉(zhuǎn)接接和外植植體接種種；解剖剪：用于幼幼嫩組織織

16、、細(xì)胞胞團(tuán)等剪剪取；彎頭剪：用于轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)接、剪剪取試管管苗莖段段等；解剖刀：用于外外植體或或培養(yǎng)物物切割；接種針：用于莖莖尖剝離離和愈傷傷組織轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)移；切割盤：用于原原球莖、愈傷組組織、植植物器官官等切割割分離。3.顯微微鏡：包包括雙目目體視顯顯微鏡(解剖鏡鏡)、生生物顯微微鏡、倒倒置顯微微鏡和電電子顯微微鏡，用用于剝離離莖尖和和進(jìn)行培培養(yǎng)物的的觀察、分析、拍照等等。（三）培培養(yǎng)設(shè)備備與用具具1.培養(yǎng)養(yǎng)架：試試管苗在在培養(yǎng)間間里培養(yǎng)養(yǎng)時(shí)通常常擺放在在培養(yǎng)架架上。培培養(yǎng)架大大多由金金屬制成成，一般般設(shè)58層，最低一一層離地地高約220cmm，其他他每層間間隔300cm左左右。培培養(yǎng)架長(zhǎng)長(zhǎng)度根據(jù)據(jù)日光燈

17、燈的長(zhǎng)度度而設(shè)計(jì)計(jì)，如采采用400W日光光燈，則則長(zhǎng)1.3m，寬度一一般為660cmm。2.恒溫溫振蕩器器：用于于液體培培養(yǎng)時(shí)改改善培養(yǎng)養(yǎng)過程的的氧氣供供應(yīng)狀況況。3.光照照培養(yǎng)箱箱：對(duì)于于一些對(duì)對(duì)環(huán)境條條件要求求特別嚴(yán)嚴(yán)格的培培養(yǎng)物，可培養(yǎng)養(yǎng)在能自自動(dòng)調(diào)控控溫度、濕度、光照等等的智能能光照培培養(yǎng)箱里里。4.培養(yǎng)養(yǎng)器皿：根據(jù)培培養(yǎng)目的的和要求求不同，可選用用不同類類型和規(guī)規(guī)格的培培養(yǎng)容器器。（1）三三角瓶：主要用用于外植植體靜置置培養(yǎng)、振蕩培培養(yǎng)或試試管苗繼繼代培養(yǎng)養(yǎng)。規(guī)格格有500mL，ll00mmL，1150mmL，2250mmL，5500mmL等，一般使使用l550mLL三角瓶瓶。優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)

18、：其培培養(yǎng)面積積大，利利于組織織生長(zhǎng)；透光度度好；由由于瓶口口較小，不易污污染。（2）試試管：主主要用于于莖尖培培養(yǎng)、液液體培養(yǎng)養(yǎng)。試管管要求口口徑大，長(zhǎng)度稍稍短、以以2cmm15ccm、2.55cm15ccm、3cmm15ccm 為為宜。優(yōu)優(yōu)點(diǎn)：占占空間少少，單位位面積容容納的數(shù)數(shù)量多。（3）果果醬瓶：主要用用于繼代代和生根根培養(yǎng)。優(yōu)點(diǎn)：在工廠廠化大批批量生產(chǎn)產(chǎn)時(shí)使用用，價(jià)格格低廉，成本低低；口徑徑較大，便于操操作。缺缺點(diǎn)：污污染率較較高；透透光性稍稍差。（4）塑塑料瓶：主要用用于蘭科科植物的的培養(yǎng)。有1000mLL、1550mLL、2000mLL、2550mLL的規(guī)格格。優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)：密封封好、

19、透透氣性差差、瓶?jī)?nèi)內(nèi)濕度大大；質(zhì)輕輕，便于于操作，不易破破損，污污染率低低；長(zhǎng)方方盒形的的培養(yǎng)株株數(shù)多，且疊摞摞起來節(jié)節(jié)約空間間。缺點(diǎn)點(diǎn)：可重重復(fù)利用用性較差差。（四）稱稱量設(shè)備備與用具具1.天平平：用于于進(jìn)行瓊瓊脂、蔗蔗糖和各各種藥品品的稱量量，需要要有稱量量微量元元素和植植物激素素等的分分析天平平；稱量量大量元元素、蔗蔗糖和瓊瓊脂等的的托盤天天平等不不同精度度的天平平。2.燒杯杯：用于于配制培培養(yǎng)基母母液時(shí)溶溶解各種種化合物物，規(guī)格格有50010000mmL不等等。3.量筒筒：用于于量取不不同體積積的液體體，規(guī)格格有50010000mmL不等等。4.試劑劑瓶：用用于貯存存不同容容量的溶溶液

20、，規(guī)規(guī)格有550110000mL不等等。5.移液液管：用用于吸取取各種用用量較少少的母液液，規(guī)格格有0.1110mLL不等。6.容量量瓶：用用于配制制培養(yǎng)基基母液時(shí)時(shí)進(jìn)行定定容，規(guī)規(guī)格有550110000mL不等等。（五）環(huán)環(huán)境控制制設(shè)備與與用具1.空調(diào)調(diào)機(jī)：自自動(dòng)控制制植物組組織培養(yǎng)養(yǎng)廠房的的溫度，為培養(yǎng)養(yǎng)物提供供最適宜宜的溫度度條件。2.冰箱箱：用于于母液和和某些試試劑的貯貯存及培培養(yǎng)材料料的保鮮鮮或與處處理等。3.光照照時(shí)控器器：用于于自動(dòng)控控制培養(yǎng)養(yǎng)間的光光照時(shí)間間。（六）其其它設(shè)備備與用具具1.磁力力攪拌器器：磁力力攪拌器器用于加加速攪拌拌難溶的的物質(zhì)，如各種種化學(xué)物物質(zhì)等。磁力攪攪

21、拌器還還可加熱熱，加快快物質(zhì)的的溶解。2.蒸餾餾水發(fā)生生器或純純水機(jī)：用于制制備配制制母液和和培養(yǎng)基基的蒸餾餾水或去去離子水水。3.藥品品柜：用用于存放放各種化化學(xué)藥品品。4.加熱熱設(shè)備：制備固固體培養(yǎng)養(yǎng)基時(shí)需需加熱使使固化劑劑溶化，因此需需要加熱熱設(shè)備如如液化氣氣灶、電電爐、恒恒溫水浴浴鍋等。5.pHH計(jì)：用用于精確確測(cè)量和和調(diào)節(jié)培培養(yǎng)基的的pH，大規(guī)模模生產(chǎn)中中一般用用精密ppH試紙紙代替。III.作業(yè)1.植物物組織培培養(yǎng)廠房房的設(shè)計(jì)計(jì)原則和和要求有有哪些？2.植物物組織培培養(yǎng)的工工藝流程程是怎樣樣的？3.組建建一個(gè)植植物組織織培養(yǎng)生生產(chǎn)車間間應(yīng)包括括哪幾部部分，各各部分的的設(shè)計(jì)要要求以及

22、及主要功功能是什什么？4.植物物組織培培養(yǎng)需要要哪些基基本設(shè)備備，各有有何作用用？第三節(jié) 植物物組織培培養(yǎng)操作作技術(shù)（1）一、授課課章節(jié)第三節(jié) 植物物組織培培養(yǎng)操作作技術(shù)（1）。二、學(xué)時(shí)時(shí)安排2學(xué)時(shí)。三、教學(xué)學(xué)目標(biāo)1掌握握組培的的一般工工作程序序。2掌握握不同類類型培養(yǎng)養(yǎng)器皿和和用具的的洗滌技技術(shù)。3了解解常用消消毒滅菌菌方法的的原理，掌握其其操作技技術(shù)，能能根據(jù)物物品種類類正確選選用消毒毒滅菌方方法。四、教學(xué)學(xué)重點(diǎn)、難點(diǎn)分分析重點(diǎn)：常用的消消毒滅菌菌技術(shù)。難點(diǎn)：滅菌和消消毒的區(qū)區(qū)別及無無菌意識(shí)識(shí)的樹立立。五、教具具電化教學(xué)學(xué)設(shè)備。六、教學(xué)學(xué)方法講授法，演示法法。七、教學(xué)學(xué)過程.導(dǎo)入入提問：植

23、植物組織織培養(yǎng)實(shí)實(shí)驗(yàn)室的的基本構(gòu)構(gòu)成。本次課主主要介紹紹的是植植物組織織培養(yǎng)洗洗滌和消消毒滅菌菌技術(shù)。II.新新課一、洗滌滌技術(shù)植物組織織培養(yǎng)除除了要對(duì)對(duì)培養(yǎng)材材料和接接種用具具進(jìn)行嚴(yán)嚴(yán)格消毒毒外，各各種用具具更要求洗洗滌清潔潔，因?yàn)闉楦鞣N滅滅菌方法法的有效效作用時(shí)時(shí)間都是是以材料料或用具具清潔為為前提的的。（一）洗洗滌液1.洗衣衣粉、洗洗潔精洗洗滌液適適用于玻玻璃器皿皿和金屬屬類器具具的洗滌滌。2.鉻酸酸洗滌液液 由由重鉻酸酸鉀和濃濃硫酸混混合而成成，屬?gòu)?qiáng)氧化化劑，對(duì)對(duì)無機(jī)離離子、灰灰塵效果果好，對(duì)對(duì)油污無無效。鉻酸洗滌滌液的配配制：稱稱取重鉻鉻酸鉀550g，加入11L蒸餾水，加熱攪攪拌至完

24、完全溶解解；冷卻卻后注入入90mmL濃硫硫酸，混混合均勻勻即可。剛配好好的洗液液是棕紅紅色，反反復(fù)使用用至變成成青褐色色則失效效?！咀⒁馐率马?xiàng)】（1）配配制時(shí)重重鉻酸鉀鉀溶液一定定要冷卻卻后才能能加濃硫硫酸，且且只能把把濃硫酸酸緩慢加加入重鉻鉻酸鉀溶溶液中，決不能能將重鉻鉻酸鉀溶溶液或蒸蒸餾水倒倒入濃硫硫酸中。（2）由于鉻鉻酸洗滌滌液具有有極強(qiáng)的的氧化能能力和腐腐蝕作用用，故不不要用手手直接接接觸洗滌滌液。（二）各各類器皿皿和用具具的洗滌滌方法1.新的的玻璃器器皿：使使用前先先用1%稀鹽酸酸浸泡112224h用毛刷蘸蘸洗衣粉粉水刷洗干凈流水沖洗洗344次最后用用蒸餾水水沖淋11遍晾干（或烘烘干

25、）后后備用。2.已用用過的培培養(yǎng)器皿皿：除去去容器內(nèi)內(nèi)的殘?jiān)詠硭疀_洗浸泡在在洗衣粉粉水中115330miin用毛刷刷刷洗干干凈流水沖沖洗34次最后用用蒸餾水水沖淋11遍晾干（或烘干干）后備備用。3.已被被霉菌等等雜菌污污染的器器皿：1121高溫高高壓蒸汽汽滅菌330miin趁熱倒倒去殘?jiān)詠硭疀_洗浸泡在在洗衣粉粉水中115330miin用毛刷刷刷洗干干凈流水沖沖洗34次最后用用蒸餾水水沖淋11遍晾干（或烘干干）后備備用。4.移液液管、量量筒等量量器：鉻酸洗滌滌液中浸浸泡2hh以上取出后在在流水中中沖洗330miin蒸餾水水沖淋11次晾干（或烘烘干）后后備用。5.載玻玻片和蓋蓋玻片：洗

26、滌液液中浸泡泡數(shù)小時(shí)時(shí)水洗綢布擦擦干放在995%的的灑精中中備用。6.解剖剖刀、鑷鑷子、剪剪刀等：新購(gòu)置置金屬器器皿因其其上有潤(rùn)潤(rùn)滑油或或防銹油油，用蘸蘸有四氯氯化碳的的棉布擦擦去油脂脂，再用用濕布擦擦凈，干干燥備用用。每次次使用后后先用洗洗衣粉水水刷洗，再用酒酒精擦拭拭。二、滅菌菌與消毒毒技術(shù)（一）滅滅菌與消消毒的區(qū)區(qū)別1有菌菌和無菌菌的范疇疇有菌的范范疇是：凡是暴暴露在空空氣中的的物體，接觸自自然水源源的物體體，至少少它的表表面都是是有菌的的。無菌的范范疇是：經(jīng)高溫溫灼燒或或一定時(shí)時(shí)間蒸煮煮過后的的物體，經(jīng)其他他理化滅滅菌方法法處理后后的物體體一般可可認(rèn)為是是無菌的的。2.滅菌菌與消毒毒的

27、區(qū)別別滅菌是指指用物理理或化學(xué)學(xué)方法殺殺死物體體表面和和孔隙內(nèi)內(nèi)一切微微生物或或生物體體。消毒是指指殺死、消除或或充分抑抑制部分分微生物物，使之之不再發(fā)發(fā)生危害害作用。由滅菌和和消毒的的含義可可以看出出，二者者的主要要區(qū)別是是：滅菌菌是把所所有有生生命的物物質(zhì)全部部殺死；而消毒毒主要?dú)⑺阑蛞忠种莆矬w體表面的的微生物物，但芽芽孢、厚厚垣孢子子一般不不會(huì)死亡亡。（二）常常用的消消毒滅菌菌方法（三）消消毒滅菌菌技術(shù)1.環(huán)境境消毒：方法主主要有空空氣過濾濾滅菌、紫外線線照射消消毒、噴噴霧消毒毒和熏蒸蒸消毒等等?？諝膺^過濾滅菌菌：成規(guī)規(guī)模的植植物組織織培養(yǎng)車車間可采采用空氣氣過濾系系統(tǒng)對(duì)整整個(gè)環(huán)境境進(jìn)

28、行空空氣過濾濾滅菌，這種方方法投入入較高，操作要要求比較較嚴(yán)格，一般較較少采用用。組織織培養(yǎng)中中普遍采采用的是是對(duì)無菌菌操作的的微環(huán)境境進(jìn)行空空氣過濾濾滅菌，如超凈凈工作臺(tái)臺(tái)的局部部無菌環(huán)環(huán)境。紫外線線照射消消毒：利利用紫外外光波照照射滅菌菌，細(xì)菌菌吸收紫紫外線后后，蛋白白質(zhì)和核核酸發(fā)生生結(jié)構(gòu)變變化，引引起細(xì)菌菌的染色色體變異異，造成成死亡。緩沖間間、接種種間、培培養(yǎng)間等均可采采用紫外外線照射射消毒，一般照照射20030miin。噴霧消消毒：利利用700%75%的酒精精或0.2%的的新潔爾爾滅對(duì)環(huán)環(huán)境進(jìn)行行噴霧，既可以以起到直直接殺死死環(huán)境中中微生物物的作用用，又可可以使飄飄浮的塵塵埃降落落，

29、防止止塵埃上上附著的的雜菌污污染培養(yǎng)養(yǎng)基和培培養(yǎng)材料料。熏蒸消消毒：利利用加熱熱焚燒、氧化等等方法，使化學(xué)學(xué)藥劑變變?yōu)闅怏w體狀態(tài)擴(kuò)擴(kuò)散到空空氣中，以殺死死空氣和和物體表表面的微微生物。常用熏熏蒸劑是是甲醛，熏蒸時(shí)時(shí)，按22mLm3用量，將甲醛醛置于廣廣口容器器中，加加0.22g/mm3高錳酸酸鉀氧化化揮發(fā)。熏蒸時(shí)時(shí)，房間間可預(yù)先先噴濕，關(guān)閉緊緊密，224h后后打開門門窗通風(fēng)風(fēng)。2.用具具的消毒毒滅菌：根據(jù)用用具種類類不同分分別采用用干熱滅滅菌、濕濕熱滅菌菌、浸泡泡消毒、擦拭消消毒等方方法。干熱滅滅菌：利利用烘箱箱進(jìn)行烘烘烤滅菌菌的方法法，適用用于各種種玻璃器器皿和器器械的滅滅菌消毒毒。方法法是

30、將清清洗后的的玻璃器器皿和器器械妥為為包扎，放入箱箱內(nèi)，將將箱溫控控制在11501700，烘烤1120mmin，即可達(dá)達(dá)到滅菌菌效果。在干熱熱條件下下，細(xì)菌菌的營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)細(xì)胞抗抗熱性大大為提高高，故能能源消耗耗大，又又浪費(fèi)時(shí)時(shí)間，所所以目前前多采用用濕熱滅滅菌代替替，接種種工具也也可采用用消毒器器烘烤和和酒精燈燈外焰灼灼燒的方方法消毒毒。濕熱滅滅菌：適適用于培培養(yǎng)基、玻璃器器皿、棉棉塞、布布制品及及金屬用用具等的的滅菌，一般滅滅菌掌握握在0.10.115MPPa壓力力下20030miin。浸泡消消毒：在在無菌操操作時(shí)，把鑷子子、剪子子、解剖剖刀等浸浸入700%775%的的酒精中中浸泡，使用之之前取

31、出出在酒精精燈外焰焰上灼燒燒，待冷冷卻后使使用。擦拭消消毒：接接種用具具及超凈凈工作臺(tái)臺(tái)表面等等使用前前可用770%酒酒精或00.10.22%新潔潔爾滅溶溶液進(jìn)行行擦拭消消毒。3.培養(yǎng)養(yǎng)基滅菌菌：培養(yǎng)養(yǎng)基滅菌菌一般采采用濕熱熱滅菌，特殊情情況下采采用過濾濾無菌。濕熱滅滅菌：采采用高壓壓蒸汽滅滅菌鍋滅滅菌。過濾滅滅菌：主主要針對(duì)對(duì)一些不不能處于于高溫高高壓環(huán)境境的物質(zhì)質(zhì)，如GA3、IAAA、ABAA（脫落落酸）、ZT（玉米素素）、部部分維生生素、多多數(shù)抗生生素和酶酶。過濾濾滅菌的的原理是是細(xì)菌濾濾膜的網(wǎng)網(wǎng)孔直徑徑為0.45m以下下，當(dāng)溶液液通過濾濾膜后，細(xì)菌的的細(xì)胞和和真菌的的孢子（直徑11m以

32、上上）等因因大于濾濾膜網(wǎng)孔孔直徑而而被阻。4.外植植體消毒毒：從外界界或室內(nèi)內(nèi)選取的的植物材材料，都都不同程程度地帶帶有各種種微生物物，因此，植物材材料必須須經(jīng)嚴(yán)格格的表面面消毒處理理。接種的的植物材材料叫做做外植體體。外植植體的消消毒要求求比較嚴(yán)嚴(yán)格，既既要能有有效殺滅滅微生物物，又要要保證植植物組織織盡量少少受傷害害。外植植體一般般采用浸浸泡消毒毒的方法法，具體體方法在在以后課課程中講講授。III.作業(yè)1.不同同的培養(yǎng)養(yǎng)器皿怎怎樣選擇擇與洗滌滌？2.植物物組織培培養(yǎng)環(huán)境境如何進(jìn)進(jìn)行消毒毒滅菌？3過濾濾滅菌的的技術(shù)原原理？第三節(jié) 植物物組織培培養(yǎng)操作作技術(shù)（2）一、授課課章節(jié)第三節(jié) 植物物組

33、織培培養(yǎng)操作作技術(shù)（2）。二、學(xué)時(shí)時(shí)安排2學(xué)時(shí)。三、教學(xué)學(xué)目標(biāo)1掌握握培養(yǎng)基基的作用用。2掌握握培養(yǎng)基基中生長(zhǎng)長(zhǎng)調(diào)控物物質(zhì)的作作用。3了解解培養(yǎng)基基的類型型。四、教學(xué)學(xué)重點(diǎn)、難點(diǎn)分分析重點(diǎn)：培養(yǎng)基的的基本成成分。難點(diǎn)：培養(yǎng)基中中生長(zhǎng)調(diào)調(diào)節(jié)物質(zhì)質(zhì)的作用用。五、教具具電化教學(xué)學(xué)設(shè)備。六、教學(xué)學(xué)方法講授法，演示法法。七、教學(xué)學(xué)過程.導(dǎo)入入培養(yǎng)基是是進(jìn)行植植物組織織培養(yǎng)的的基質(zhì)，進(jìn)行植植物組織織培養(yǎng)必必須掌握握培養(yǎng)基基的基本本知識(shí)，今天我我們就學(xué)學(xué)習(xí)培養(yǎng)養(yǎng)基的種種類和基基本成分分。II.新新課三、培養(yǎng)養(yǎng)基制備備技術(shù)（一）配配制培養(yǎng)養(yǎng)基的目目的配制培養(yǎng)養(yǎng)基的目目的是人人為提供供離體培培養(yǎng)材料料的營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)源

34、。配配制的不不同培養(yǎng)養(yǎng)基，是是為滿足足不同類類型植物物材料對(duì)對(duì)營(yíng)養(yǎng)的的不同需需要。沒沒有一種種培養(yǎng)基基能夠適適合一切切類型的的植物組組織或器器官，在在建立一一項(xiàng)新的的培養(yǎng)系系統(tǒng)時(shí)，首先必必須找到到一種合合適的培培養(yǎng)基，培養(yǎng)才才有可能能成功。（二）培培養(yǎng)基的的種類1.培養(yǎng)養(yǎng)基的種種類劃分分培 養(yǎng) 基 種 類固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入一定量凝固劑，使其成為固體狀態(tài)。根據(jù)形態(tài)液體培養(yǎng)基：培養(yǎng)基中沒有凝固劑為液體狀態(tài)。根據(jù)培養(yǎng)階段根據(jù)培養(yǎng)進(jìn)程根據(jù)營(yíng)養(yǎng)水平初代培養(yǎng)基：初代培養(yǎng)階段所用的培養(yǎng)基。繼代培養(yǎng)基：繼代培養(yǎng)階段所用的培養(yǎng)基。完全培養(yǎng)基：在基本培養(yǎng)基中加入適宜的植物激素和有機(jī)附加物的培養(yǎng)基?；?/p>

35、培養(yǎng)基：只含有無機(jī)鹽、蔗糖、維生素和水等最基本成分的合成培養(yǎng)基。如Ms、White、Nitsch、N6等培養(yǎng)基。誘導(dǎo)培養(yǎng)基：初代培養(yǎng)時(shí)誘導(dǎo)外植體生長(zhǎng)與脫分化的培養(yǎng)基。增殖培養(yǎng)基：繼代培養(yǎng)中促進(jìn)培養(yǎng)物快速增殖的培養(yǎng)基，也稱擴(kuò)繁培養(yǎng)基。生根培養(yǎng)基：誘導(dǎo)試管苗生根的培養(yǎng)基。2.常用用培養(yǎng)基基的配方方和特點(diǎn)點(diǎn)目前已已公開報(bào)報(bào)道的基基本培養(yǎng)養(yǎng)基有許許多種類類，各有有不同的的特點(diǎn)和和適用范范圍，在在植物組組織培養(yǎng)養(yǎng)生產(chǎn)中中應(yīng)根據(jù)據(jù)不同的的植物種種類和培培養(yǎng)部位位及不同同的培養(yǎng)養(yǎng)目的選選用不同同的培養(yǎng)養(yǎng)基。常用的培培養(yǎng)基配配方：表1 常用培培養(yǎng)基配配方含量（mg/L）MS（119622）B5（119688）

36、Whitte（19443）SH（19772）Knuddsonn C（19446）VW（19449）N6（19774）(NH44)2S04NH4NN03KN033Ca(NN03)24H20CaCll22H20Ca3(PO44)216500l90004401342500015080200250002005001000050052520046328300166MgS0047H20KH2PPO4NaH22P04H20Na2SSO4Na2EDTTA37017037.3325015037.33720172004001525025025025018540037.33FeSOO47H20Fe2(SO44)3K

37、ClFe2(C4H4O6)327.8827.882.56520252827.88NH4HH2PO4MnSOO4H20MnS0044H20ZnSOO47H20H3B003KINa2MMo0442H20MoO33CuSOO45H20CoCll26H2022.338.66.20.8330.2550.02250.0225102.03.00.7550.2550.02250.0225531.50.7550.00010.011300101.05.01.00.10.20.17.57.54.43.81.60.8鹽酸硫胺胺素VBl煙酸鹽酸吡哆哆醇VB6肌醇甘氨酸0.10.50.51002.0101.01.0100

38、0.10.30.135.05.05.01000010.50.52蔗糖pH3000005.82000005.52000005.63000005.82000005.82000005.55000005.8表2 常用基基本培養(yǎng)養(yǎng)基的特特點(diǎn)基本培養(yǎng)養(yǎng)基種類類設(shè)計(jì)由來來特點(diǎn)適用范圍圍MS19622年由MMuraashiige和和Skooog為為培養(yǎng)煙煙草細(xì)胞胞而設(shè)計(jì)計(jì)無機(jī)鹽和和離子濃濃度較高高，為較較穩(wěn)定的的平衡溶溶液；它它的硝酸酸鹽和銨銨鹽含量量較其他他培養(yǎng)基基為高，比例也也比較合合適，不不需要添添加更多多的有機(jī)機(jī)附加物物。廣泛地用用于植物物的器官官、花藥藥、細(xì)胞胞和原生生質(zhì)體培培養(yǎng)B519688年由G

39、Gambborgg等為培培養(yǎng)大豆豆根細(xì)胞胞而設(shè)計(jì)計(jì)除含有較較高的鉀鉀鹽外，還含有有較低的的氨態(tài)氮氮和較高高的鹽酸酸硫胺素素適合雙子子葉植物物，尤其其木本植植物的培培養(yǎng)Whitte19433年由WWhitte為培培養(yǎng)番茄茄根尖而而設(shè)計(jì)無機(jī)鹽數(shù)數(shù)量較低低，提高高了MggSO44的濃度度適于生根根培養(yǎng)SH19722年由Scchennk和Hiddebrranddt設(shè)計(jì)計(jì)鹽分濃度度較高，銨態(tài)氮氮含量較較低，鹽鹽酸硫胺胺素和硝硝酸鉀含含量較高高在不少單單子葉和和雙子葉葉植物的的組培中中應(yīng)用效效果較好好Knuddsonn C19222年由KKnuddsonn為蘭科科種子培培養(yǎng)而設(shè)設(shè)計(jì)，后后經(jīng)多次次改良成分簡(jiǎn)

40、單單，不能能滿足大大多數(shù)植植物組織織細(xì)胞的的生長(zhǎng)發(fā)發(fā)育所需需的營(yíng)養(yǎng)養(yǎng)物質(zhì)適用于蘭蘭科植物物種子培培養(yǎng)和萌萌發(fā)VWVaciin 和和Wennt 在在19449年設(shè)設(shè)計(jì)培養(yǎng)基的的總離子子強(qiáng)度稍稍低些，磷以磷磷酸鈣的的形式供供給適用于氣氣生蘭的的組培N619744年朱至至清等為為水稻等等禾谷類類作物花花藥培養(yǎng)養(yǎng)而設(shè)計(jì)計(jì)成分較簡(jiǎn)簡(jiǎn)單，KKN033和(NHH4)2S04含量高高適用于單單子葉植植物花藥藥培養(yǎng)，廣泛應(yīng)應(yīng)用于小小麥、水水稻及其其他植物物的花藥藥培養(yǎng)（三）培培養(yǎng)基的的組成培養(yǎng)基主主要有水水、無機(jī)機(jī)鹽、有有機(jī)物、植物生生長(zhǎng)調(diào)節(jié)節(jié)物質(zhì)、培養(yǎng)基基的支持持材料五五大類組組成。1.水水水是植物物原生質(zhì)質(zhì)

41、體的組組成成分分，也是是一切代代謝過程程的介質(zhì)質(zhì)和溶媒媒。它是是生命活活動(dòng)過程程中不可可缺少的的物質(zhì)。配制培培養(yǎng)基母母液時(shí)要要用蒸餾餾水，以以確保母液液及培養(yǎng)養(yǎng)基成分分的精確確性，防防止貯藏藏過程發(fā)發(fā)霉變質(zhì)質(zhì)，大規(guī)規(guī)模生產(chǎn)產(chǎn)時(shí)可用用自來水水。但在在少量研研究上盡盡量用蒸蒸餾水，以防成成分的變變化引起起不良效效果。2.無機(jī)機(jī)元素(1)大大量元素素指濃度度大于00.5mmmollL的的元素，有N，P，KK，Caa，Mgg，S等等。常由由KN003、NH4NO3、KH2P04、NaHH2P04、KCll、MgSS047HH20、CaCCl22HH20等化合合物來提提供。(2)微微量元素素指濃度度小于

42、00.5mmmollL的的元素，F(xiàn)e，B，MMn，CCu，MMo，CCo等。鐵是一些些氧化酶酶、細(xì)胞胞色素氧氧化酶、過氧化化氫酶等等的組成成成分。同時(shí)，它又是是葉綠素素形成必必要的。培養(yǎng)養(yǎng)基中的的鐵對(duì)胚胚的形成成、芽的的分化和和幼苗轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)綠有促促進(jìn)作用用。在制制作培養(yǎng)養(yǎng)基時(shí)不不用Fee2(S004)3和FeCCl3(因其其pH在在5.22以上，易形成成Fe(OH)3的不溶溶性沉淀淀)，而而用FeeS0447HH20和Na2-EDDTA結(jié)結(jié)合成螯螯合物使使用。BB，Mnn，Znn，Cuu，Moo，Coo等，也也是植物物組織培培養(yǎng)中不不可缺少少的元素素，缺少少這些物物質(zhì)會(huì)導(dǎo)導(dǎo)致生長(zhǎng)長(zhǎng)發(fā)育異異常。3.

43、有機(jī)機(jī)化合物物(1)糖糖類：這這類有機(jī)機(jī)物的作作用一是是培養(yǎng)物物賴以生生長(zhǎng)的碳碳源；二二是使培培養(yǎng)基維維持一定定的滲透透壓。種類：常用的的有蔗糖、葡萄糖糖、果糖糖，麥芽芽糖、半半乳糖、甘露糖糖等在組織織培養(yǎng)中中也有應(yīng)應(yīng)用。使用濃濃度：一一般在2233。在大規(guī)規(guī)模生產(chǎn)產(chǎn)時(shí)，可可用食用用的綿白白糖代替替。（2）維維生素類類：這類化化合物在在植物細(xì)細(xì)胞中主要以以各種輔輔酶的形形式參與與多種代代謝活動(dòng)動(dòng)，對(duì)生生長(zhǎng)、分分化等有有很好的的促進(jìn)作作用。種類：硫胺素素(維生生素B11)、吡吡哆醇(維生素素B6)、煙煙酸(維維生素BB3，又稱稱維生素素PP)、泛酸酸(維生生素B55)、生生物素(維生素素H)、鈷

44、胺素素(維生生素B112)、葉酸(維生素素B111）等。使用濃濃度：00.11.00 mgg/L(3)肌肌醇(環(huán)環(huán)己六醇醇)：作用：在糖類類的相互互轉(zhuǎn)化中中起重要要作用；參與細(xì)細(xì)胞壁和和細(xì)胞膜膜的構(gòu)建建；能促促進(jìn)愈傷傷組織的的生長(zhǎng)以以及胚狀狀體和芽芽的形成成；對(duì)組組織和細(xì)細(xì)胞的繁繁殖、分分化有促促進(jìn)作用用。使用濃濃度：一一般為11OO mgL。(4)氨氨基酸：作用：是很好好的有機(jī)機(jī)氮源，可被細(xì)細(xì)胞直接接吸收利利用。常用種種類：甘甘氨酸、精氨酸酸、谷氨氨酸、谷谷酰胺、天冬氨氨酸、天天冬酰胺胺、丙氨氨酸等。有時(shí)應(yīng)應(yīng)用水解解乳蛋白白（LHH）或水水解酪蛋蛋白（CCH），但由于于它們營(yíng)營(yíng)養(yǎng)豐富富，極易

45、易引起污污染。如如在培養(yǎng)養(yǎng)中無特特別需要要，以不不用為宜宜。(5)天天然復(fù)合合物：其成分分比較復(fù)復(fù)雜，大大多含氨氨基酸、激素、酶等一一些復(fù)雜雜化合物物。它對(duì)對(duì)細(xì)胞和和組織的的增殖與與分化有有明顯的的促進(jìn)作作用，但但對(duì)器官官的分化化作用不不明顯。它的成成分大多多不清楚楚，所以以一般盡盡量不使使用。椰乳 是椰子子的液體體胚乳。它是使使用最多多、效果果最大的的一種天天然復(fù)合合物，一般使使用濃度度在10020。它在在愈傷組組織和細(xì)細(xì)胞培養(yǎng)養(yǎng)中有促促進(jìn)作用用。在馬馬鈴薯莖莖尖分生生組織和和草莓微微莖尖培培養(yǎng)中起起明顯的的促進(jìn)作作用，但但莖尖組組織的大大小若超超過1mm時(shí)，椰乳就就不發(fā)生生作用。香蕉 用量

46、為為15002000g/LL。主要要在蘭花花的組織織培養(yǎng)中中應(yīng)用，對(duì)原球球莖增殖殖有明顯顯促進(jìn)效效果，并有利利于壯苗苗與生根根。馬鈴薯薯 去掉掉皮和芽芽后，加加水煮330miin，經(jīng)經(jīng)過過濾濾，取其其濾液使使用。用用量為11502000gL。添加后后可得到到健壯的的植株。4.植物物生長(zhǎng)調(diào)調(diào)節(jié)物質(zhì)質(zhì) 植植物生長(zhǎng)長(zhǎng)調(diào)節(jié)物物質(zhì)是培培養(yǎng)基的的關(guān)鍵性性物質(zhì)，對(duì)植物物組織培培養(yǎng)起著著決定性性作用，控制著著培養(yǎng)物物的脫分分化、再再分化和和形態(tài)建建成。（1）生生長(zhǎng)素類類：作用：在組織織培養(yǎng)中中，生長(zhǎng)長(zhǎng)素主要要被用于于誘導(dǎo)愈愈傷組織織形成，誘導(dǎo)根根的分化化和促進(jìn)進(jìn)細(xì)胞分分裂、伸伸長(zhǎng)生長(zhǎng)長(zhǎng)。種類及及活性：常用種種

47、類有IIAA(吲哚乙乙酸)、NAAA(萘乙乙酸)、IBAA(吲哚哚丁酸)、2，4-DD(2，4-二二氯苯氧氧乙酸)等。作作用能力力的強(qiáng)弱弱順序?yàn)闉椋?，4-DDNAAAIBAAIAAA。穩(wěn)定性性：IAAA是天天然存在在的生長(zhǎng)長(zhǎng)素，高高溫高壓壓易被破破壞，也也易被細(xì)細(xì)胞中的的IAAA分解酶酶降解，受光也也易分解解，故要要避光貯貯存，過過濾滅菌菌。其他他3種生生長(zhǎng)素為為人工合合成，耐耐高溫高高壓，不不易被分分解破壞壞。特別別是NAAA穩(wěn)定定性好，活性較較高，價(jià)價(jià)格低廉廉，所以以應(yīng)用最最普遍。溶解性性：生長(zhǎng)長(zhǎng)素不溶溶于水，IAAA、NAAA、IIBA配配制時(shí)可可先用少少量955酒精精助溶。2，44-

48、D可可用0.1moolLL的NaaOH或或KOHH助溶。（2）細(xì)細(xì)胞分裂裂素類：作用：誘導(dǎo)芽芽的分化化促進(jìn)側(cè)側(cè)芽萌發(fā)發(fā)生長(zhǎng)，細(xì)胞分分裂素與與生長(zhǎng)素素相互作作用，當(dāng)當(dāng)組織內(nèi)內(nèi)細(xì)胞分分裂素生長(zhǎng)素素的比值值高時(shí)，誘導(dǎo)愈愈傷組織織或器官官分化出出不定芽芽。促進(jìn)細(xì)細(xì)胞分裂裂與擴(kuò)大大。抑制根根的分化化。因此此，細(xì)胞胞分裂素素多用于于誘導(dǎo)不不定芽的的分化、莖、苗苗的增殖殖，而避避免在生生根培養(yǎng)養(yǎng)時(shí)使用用。種類及及活性：這類激激素是腺腺嘌呤的的衍生物物，包括括6-BBA(66-芐氨氨基嘌呤呤)、KKt(激激動(dòng)素)、Ztt(玉米米素)等等。作用用能力的的強(qiáng)弱順順序是：ZT6-BBAKT，常常用的是是人工合合成的

49、、性能穩(wěn)穩(wěn)定的、價(jià)格適適中的66-BAA。溶解性性：細(xì)胞胞分裂素素不溶于于水，也也不溶于于酒精，一般可可溶于00.1mmol/L的鹽鹽酸或NNaOHH溶液中中。（3）赤赤霉素(GA)：有200多種，培養(yǎng)基基中添加加的是GGA3，主要要用于促促進(jìn)幼苗苗莖的伸伸長(zhǎng)生長(zhǎng)長(zhǎng)，促進(jìn)進(jìn)不定胚胚發(fā)育成成小植株株；此外外，赤霉霉素還用用于打破破休眠，促進(jìn)種種子、塊塊莖、鱗鱗莖等提提前萌發(fā)發(fā)。一般般在器官官形成后后，添加加赤霉素素可促進(jìn)進(jìn)器官或或胚狀體體的生長(zhǎng)長(zhǎng)。赤霉素溶溶于酒精精，配制制時(shí)可用用少量995酒酒精助溶溶。赤霉霉素不耐耐熱，高高壓滅菌菌后將有有70-1000失失效，應(yīng)應(yīng)當(dāng)過濾濾滅菌。生長(zhǎng)調(diào)節(jié)節(jié)物質(zhì)

50、的的使用量量甚微，一般用用mgL表示示濃度。在組織織培養(yǎng)中中生長(zhǎng)調(diào)調(diào)節(jié)物質(zhì)質(zhì)的使用用濃度，因植物物的種類類、部位位、時(shí)期期、內(nèi)源源激素等等的不同同而異，一般生生長(zhǎng)素濃濃度的使使用為00.0555 mggL，細(xì)胞分分裂素00.05510 mmgLL。5.培養(yǎng)養(yǎng)基的其其他成分分(1)瓊瓊脂：在固體體培養(yǎng)時(shí)時(shí)瓊脂是是最好的的固化劑劑。瓊脂脂是一種種由海藻藻中提取取的高分分子碳水水化合物物，本身身并不提提供任何何營(yíng)養(yǎng)。瓊脂能能溶解在在90以上熱熱水中，成為溶溶膠，冷冷卻至440即凝固固為固體體狀凝膠膠。瓊脂脂的用量量在610gL之之間。一一般瓊脂脂以顏色色淺、透透明度好好、潔凈凈的為上上品。瓊瓊脂的凝

51、凝固能力力除與原原料、廠廠家的加加工方式式有關(guān)外外，還與與高壓滅滅菌時(shí)的的溫度、時(shí)間、pH等等因素有有關(guān)，長(zhǎng)長(zhǎng)時(shí)間的的高溫會(huì)會(huì)使凝固固能力下下降，過過酸過堿堿加之高高溫會(huì)使使瓊脂發(fā)發(fā)生水解解，喪失失凝固能能力。時(shí)時(shí)間過久久，瓊脂脂變褐，也會(huì)逐逐漸喪失失凝固能能力。加入瓊脂脂的固體體培養(yǎng)基基與液體體培養(yǎng)基基相比，優(yōu)點(diǎn)在在于操作作簡(jiǎn)便，通氣問問題易于于解決，便于經(jīng)經(jīng)常觀察察研究等等，缺點(diǎn)點(diǎn)是培養(yǎng)物物的吸收收面積小??；各種養(yǎng)養(yǎng)分在瓊瓊脂中擴(kuò)擴(kuò)散較慢慢，影響響?zhàn)B分的的充分利利用；培養(yǎng)物物排出的的一些代代謝廢物物，聚集集在吸收收表面，對(duì)組織織產(chǎn)生毒毒害作用用。(2)抗抗生物質(zhì)質(zhì)：抗生物物質(zhì)有青青霉素、鏈

52、霉素素、慶大大霉素等等，用量量在520 mmgLL之間。添加抗抗生物質(zhì)質(zhì)可防止止菌類污污染，減減少培養(yǎng)養(yǎng)中材料料的損失失?？股馗饔杏衅湟志V，要要加以選選擇試用用，也可可兩種抗抗生素混混用。但但應(yīng)當(dāng)注注意抗生生素對(duì)植植物組織織的生長(zhǎng)長(zhǎng)也有抑抑制作用用。（3）抗抗氧化物物：培養(yǎng)養(yǎng)基中添添加抗氧氧化物是是為了抑抑制外植植體和培培養(yǎng)物褐褐變。常常用的抗抗氧化劑劑有半胱胱氨酸、維生素素C、檸檸檬酸、聚乙烯烯吡咯烷烷酮（PPVP）等。（4）活活性炭：活性炭炭有很強(qiáng)強(qiáng)的吸附附作用，它可以以吸附非非極性物物質(zhì)和色色素等大大分子物物質(zhì)，包包括瓊脂脂中所含含的雜質(zhì)質(zhì)，培養(yǎng)養(yǎng)物分泌泌的酚類類、醌類類物質(zhì)及及

53、激素等等。通常常使用濃濃度為00.110ggL。培養(yǎng)基中中添加活活性炭的的作用：防止褐褐化；促促進(jìn)生根根；降低低玻璃苗苗的產(chǎn)生生頻率；活性炭炭在胚胎胎培養(yǎng)中中也有一一定作用用。但是是，活性性炭具有有副作用用：吸附培培養(yǎng)基中中的生長(zhǎng)長(zhǎng)調(diào)節(jié)物物質(zhì)；削弱瓊瓊脂的凝凝固能力力，添加加時(shí)須注注意。III.作業(yè)1.培養(yǎng)養(yǎng)基的作作用是什什么？2.培養(yǎng)養(yǎng)基一般般包括哪哪些基本本成分？3.培養(yǎng)養(yǎng)基中添添加的植植物生長(zhǎng)長(zhǎng)調(diào)控物物質(zhì)有哪哪些？ 各有有什么作作用？第三節(jié) 植物物組織培培養(yǎng)操作作技術(shù)（3）一、授課課章節(jié)第三節(jié) 植物物組織培培養(yǎng)操作作技術(shù)（3）。二、學(xué)時(shí)時(shí)安排2學(xué)時(shí)。三、教學(xué)學(xué)目標(biāo)1掌握握培養(yǎng)基基母液的的

54、配制技技術(shù)。2掌握握培養(yǎng)基的的配制、分裝包包扎技術(shù)術(shù)。3掌握握培養(yǎng)基基高壓滅滅菌技術(shù)術(shù)。4掌握握無菌操操作技術(shù)術(shù)。四、教學(xué)學(xué)重點(diǎn)、難點(diǎn)分分析重點(diǎn)：1培養(yǎng)養(yǎng)基母液液配制。2培養(yǎng)養(yǎng)基的制制備技術(shù)術(shù)。3培養(yǎng)養(yǎng)基的高高壓蒸汽汽滅菌。4無菌菌操作技技術(shù)。難點(diǎn)：1培養(yǎng)養(yǎng)基母液液、培養(yǎng)養(yǎng)基配制制的計(jì)算算。2無菌菌操作技技術(shù)步驟驟的剖析析。五、教具具電化教學(xué)學(xué)設(shè)備、試管苗苗、接種種工具、培養(yǎng)基基。六、教學(xué)學(xué)方法講授法，模擬實(shí)實(shí)驗(yàn)法。七、教學(xué)學(xué)過程.導(dǎo)入入提問：培培養(yǎng)基的的作用。復(fù)習(xí)：培培養(yǎng)基的的基本成成分。II.新新課（四）培培養(yǎng)基的的配制1.培養(yǎng)養(yǎng)基母液液的配制制：所謂謂母液是是欲配制制培養(yǎng)液的的濃縮液液，

55、也稱稱貯備液液。母液液配制的的目的一一是方便便快速配配制培養(yǎng)養(yǎng)基，二二是保證證各物質(zhì)質(zhì)成分的的準(zhǔn)確性性及配制制時(shí)的快快速移取取。（1）母母液配制制方法單配法法：將培培養(yǎng)基配配方中的的各種成成分分別別配成一一定濃度度的母液液。一般般mg/mL表表示?；炫浞ǚǎ簩讕最悹I(yíng)養(yǎng)養(yǎng)成分按按配方中中的用量量擴(kuò)大一一定倍數(shù)數(shù)稱量，分別溶溶解后各各類混合合在一起起定容到到一定體體積配成成混合母母液。（2）母母液配制制流程確定培養(yǎng)基配方確定母液種類計(jì)算稱量溶解混合定容分裝貼標(biāo)簽冰箱保存記錄（3）母母液配制制要求母液濃濃縮倍數(shù)數(shù)：大量量元素110220倍；微量元元素10002200倍倍；鐵鹽鹽1000倍；有有機(jī)物

56、11002000倍。選用蒸蒸餾水，分析純純或化學(xué)學(xué)純?cè)噭﹦乐钩脸恋?。激素母母液濃度度?.511mg/mL，11次配成成50mmL或1100mmL（4）藥藥品用量量的計(jì)算算：配制制母液時(shí)時(shí)藥品用用量(mmg)=配方用用量(mmg)濃縮倍倍數(shù)制備容容量（LL）（5）母母液配制制技術(shù) 以MMS培養(yǎng)養(yǎng)基為例例，配制制過程如如下：表1 MS培培養(yǎng)基母母液配制制（單位位：mgg/L）母液種類類成分規(guī)定量擴(kuò)大倍數(shù)數(shù)稱取量母液體積積(mL)配1L培培養(yǎng)基吸吸取量(mL)大量元素KNO33NH4NN03MgSOO47H20KH2PP04CaCll22H2O1900016500370170440101900

57、0016500037000170004400010000100微量元素MnS0044H20ZnS0047H20H3B003KINa2MMo0442H20CuS0045H20CoCll26H2022.338.66.20.8330.2550.02250.02251002230086062083252.52.5l000010鐵鹽Na2EEDTAAFeS0044H2037.3327.8810037300278001000010有機(jī)物甘氨酸鹽酸硫胺胺素鹽酸吡哆哆醇煙酸肌醇2.00.10.50.51001002001050501000001000010大量元元素母液液 配配成濃縮縮10倍倍的母液液。用感感

58、量0.01gg托盤天天平按表表2-4稱稱取藥品品，分別別加入1100mmL左右右蒸餾水水中，再再用磁力力攪拌器器攪拌促促進(jìn)溶解解，然后后倒入110000mL容量量瓶中，再加水水定容至至刻度，成為110倍母液液。注意意Ca2+和SO42、PO43易發(fā)生生沉淀，因此CCaCll22HH2O充分溶溶解后最最后加入入。微量元元素母液液 配配成濃縮縮1000倍的母母液。用用感量0.00001g分分析天平平按表22-4準(zhǔn)準(zhǔn)確稱取取藥品后后，分別別溶解，混合后后加水定定容至110000mL。鐵鹽母母液 配成濃濃縮1000倍的的母液，用感量量0.001g托托盤天平平按表22-4稱稱取藥品品，分別別溶解，混合后

59、后加水定定容至110000mL。有機(jī)物物母液 配成濃濃縮1000倍的的母液。用感量量0.0001gg分析天天平按表表2-4分分別稱取取藥品，溶解，混合后后加水定定容至110000mL。每種激激素必須須單獨(dú)配配成母液液，濃度度一般配配成0.511mgmL，用用時(shí)根據(jù)據(jù)需要取取用。多多數(shù)激素素難溶于于水，要要先溶于于特定溶溶劑，然然后才能能加水定定容。具具體方法法為：IIAA、IBAA、GA、NAAA等先溶溶于少量量95的的酒精中中，再加加水定容容到一定定體積；2，4-DD可用少少量0.1mool/LL的NaaOH溶溶解后，再加水水定容到到一定體體積；KKt和BA先溶溶于少量量0.11moll/L

60、的的HCl中中再加水水定容。（6）母母液的保保存 將配制制好的母母液分別別倒入試試劑瓶中中，貼好好標(biāo)簽，在標(biāo)簽簽上注明明母液名名稱，配配制倍數(shù)數(shù)與日期期。然后后放入冰冰箱內(nèi)44低溫保保存，用用時(shí)再按按比例稀稀釋。2.培養(yǎng)養(yǎng)基的配配制（1）培培養(yǎng)基配配制工藝藝流程確定培養(yǎng)基配方及用量計(jì)算母液用量移取母液定容玻璃器皿洗滌調(diào)節(jié)pH分裝培養(yǎng)基熬制高壓滅菌干燥稱取瓊脂、蔗糖封口標(biāo)識(shí)、記錄（2）培培養(yǎng)基制制備的操操作步驟驟確定培培養(yǎng)基配配方及用用量：根根據(jù)培養(yǎng)養(yǎng)對(duì)象、培養(yǎng)目目的等，通過查查閱資料料及咨詢?cè)兊却_定定培養(yǎng)基基配方，然后據(jù)據(jù)外植體體的數(shù)量量和試驗(yàn)驗(yàn)處理的的多少確確定培養(yǎng)養(yǎng)基的用用量。稱取瓊瓊脂、