動物細(xì)胞的基本形態(tài)觀察和細(xì)胞計數(shù)實驗原理及步驟

1、實驗一：動物細(xì)胞的基本形態(tài)觀察和細(xì)胞計數(shù)【課前預(yù)習(xí)】1細(xì)胞計數(shù)的基本原理？2細(xì)胞計數(shù)與細(xì)菌計數(shù)的異同點(diǎn)？【目的要求】制備不同細(xì)胞的臨時制片，觀察、了解細(xì)胞的基本形態(tài)；掌握細(xì)胞計數(shù)方法?！净驹怼考?xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)與功能相關(guān)是很多細(xì)胞的共同特點(diǎn)，在分化程度較高的細(xì)胞更為明顯，這種合理性是生物漫長進(jìn)化過程所形成的。例如：具有收縮機(jī)能的肌細(xì)胞伸展為細(xì)長形；具有感受刺激和傳導(dǎo)沖動機(jī)能的神經(jīng)細(xì)胞有長短不一的樹枝狀突起；游離的血細(xì)胞為圓形、橢圓形或圓餅形。不論細(xì)胞的形狀如何，細(xì)胞的結(jié)構(gòu)一般分為三大部分：細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。但也有例外。例如：哺乳類紅細(xì)胞成熟時細(xì)胞核消失。細(xì)胞計數(shù)一般用血細(xì)胞計數(shù)板，按白細(xì)

2、胞計數(shù)方法進(jìn)行計數(shù)。細(xì)胞計數(shù)時，先將培養(yǎng)細(xì)胞或血細(xì)胞稀釋成細(xì)胞懸液，然后將細(xì)胞懸液滴入細(xì)胞計數(shù)板內(nèi)，計數(shù)計數(shù)板上計數(shù)室四大格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。根據(jù)計數(shù)室的容積及稀釋倍數(shù)，即可計算出細(xì)胞濃度。【實驗用品】1材料：雞一只2器材和儀器：顯微鏡、載片、蓋片、吸水紙、手術(shù)器材、解剖盤、血球計數(shù)板、小平皿、牙簽3試劑：0.85生理鹽水、Ringer 氏液【方法步驟】1制備10%的雞血細(xì)胞懸液。2雞血涂片的制備與觀察取雞血懸液，靠近一端滴在載片上將另一載片的一端呈45角緊貼在血滴的前緣，均勻用力向前推，使血液在載片上形成均勻的薄層 (圖l1)。晾干，顯微鏡下觀察。圖11 血涂片的制備3細(xì)胞計數(shù)1）制備雞紅細(xì)胞懸液

3、：用Ringer 液按確定的稀釋倍數(shù)制成雞紅細(xì)胞懸液。2）熟悉血細(xì)胞計數(shù)板：血細(xì)胞計數(shù)板呈長方形，有2 個計數(shù)室。每個計數(shù)室分為9 個大正方格，每個大格邊長為1mm ， 計數(shù)室的底與蓋玻片間的距離為0.1mm ， 及每大格的容積為1mm1mm0.1mm=0.1mm3。四角的每個大格被分為16 個中格；中央的大格被分為25 個中格，中央的每個中格又被分為16 個小格。3）滴片：每人取1 付血細(xì)胞計數(shù)板及1 張蓋玻片，用布將蓋玻片擦凈，把蓋玻片蓋在血細(xì)胞計數(shù)板槽上，然后用吸管將制備好的雞血細(xì)胞懸液混勻，吸取血細(xì)胞懸液，滴1 滴于血細(xì)胞計數(shù)板的蓋玻片一側(cè)邊緣，使細(xì)胞懸液自然流入計數(shù)室內(nèi)。注意血細(xì)胞懸

4、液不可滴的過多，如溢出或蓋玻片內(nèi)有氣泡必須重做，否則將影響計數(shù)結(jié)果。該吸管加完樣后不能再用。4）計數(shù)：在低倍鏡下按圖計算計數(shù)板的四角大方格（每個大方格又分16 個小方格）內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。計數(shù)時，只計數(shù)完整的細(xì)胞，若聚成一團(tuán)的細(xì)胞則按一個細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)。數(shù)出計數(shù)板上計數(shù)室四角四大格中的細(xì)胞數(shù)，如細(xì)胞壓在格線上時，數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。二次重復(fù)計數(shù)不應(yīng)超過5?！緦嶒灲Y(jié)果】1雞血涂片的制備與觀察顯微鏡觀察可見雞紅細(xì)胞為橢球形，有核。白細(xì)胞數(shù)目少，為圓形。2細(xì)胞濃度計算 將四大格的細(xì)胞總數(shù)除以4，得出平均每大格的細(xì)胞數(shù)，每大格的容積為0.1mm3，乘以10000 即為1000mm3（1ml）。因此，不同稀

5、釋倍數(shù)細(xì)胞懸液的細(xì)胞濃度可用下式計算：細(xì)胞濃度（細(xì)胞數(shù)ml）（四大格的細(xì)胞數(shù)4）10000稀釋倍數(shù)【實驗報告】1繪圖：顯微鏡下觀察的各種細(xì)胞形態(tài)2計數(shù)每毫升細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)（注意單位：個/ml）3為什么細(xì)胞計數(shù)時，細(xì)胞懸液逸出凹槽外或有氣泡時要重做？附： 必須注意的問題生物繪圖方法繪圖是生物實驗報告的一種重要形式，其基本要求如下：1準(zhǔn)備好3H 鉛筆、橡皮、刀、尺子及繪圖紙，將繪圖紙放在觀察物的有邊、紙下不要墊書或紙張。2繪圖時，特別注意觀察物的形狀、各部分的位置、比例和毗鄰關(guān)系。3圖的位置、大小要適宜，圖占報告紙左上方2/3 的面積，并考慮注字的位置。4觀察清楚后，選擇典型的細(xì)胞或組織，左眼看顯微鏡，右眼配合右手，先用鉛筆在紙上輕輕描出輪廓，使形狀正確，然后再用清晰的線條繪出，線條粗細(xì)要均勻不要重復(fù)。5用圓小點(diǎn)表示明暗和立體感，點(diǎn)的大小要均勻，不能涂陰影。6圖繪好后，要在圖的右側(cè)注明各部分結(jié)構(gòu)名稱，引線要直而平行，長短適度，各引線不能交叉，各線