復(fù)方川烏止痛貼劑中酯型生物堿及總生物堿的含量測定

1、復(fù)方川烏止痛貼劑中酯型生物堿及總生物堿的含量測定【摘要】目的制定復(fù)方川烏止痛貼劑中酯型生物堿及總生物堿的含量測定方法。方法分別采用改進(jìn)異羥肟酸鐵高氯酸鐵法及酸性染料比色法測定制劑中的酯型生物堿及烏頭類總生物堿的含量。結(jié)果酯型生物堿在6.464g/l間有良好的線性關(guān)系；平均加樣回收率為99.7%，RSD為2.25%n5。烏頭總生物堿在1.9415.52g/l間有良好的線性關(guān)系；平均加樣回收率為99.47%，RSD為2.07%n5。結(jié)論結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于該制劑中酯型生物堿及總生物堿的質(zhì)量控制?！娟P(guān)鍵詞】復(fù)方川烏止痛貼酯型生物堿總生物堿Abstrat:bjetiveTestablishthe

2、assayfester-seriesalkalidandttalalkalidinplexPresriptinnkshdPlaster.ethdsFerriHydrxaiaidFerriPerhlriaidethdasusedtdeterinethententfester-seriesalkalid,andaiddyelrietryasusedtdeterinethententfttalalkalidinplexPresriptinnkshdplaster.ResultsAgdlinearityfrester-seriesalkalidasrangedfr6.4t64g/l；theaverag

3、ereveryas99.47%ithRSD2.07%(n=5).Ttalalkalidalsshedagdlinearrrelatinintherangef1.9415.52g/l.Theaveragereveryas102.06%andRSDas1.31%(n=5).nlusinTheresultisaurateandthereprduibilityisgd.Theseethdsanbeusedfrqualityntrlfester-seriesalkalidandttalalkalid.Keyrds:plexPresriptinnkshdPlaster；Ester-seriesalkali

4、d；Ttalalkalid川烏是毛茛科植物烏頭AnituarihaeliDebx.的枯燥母根1，其炮制品制川烏是復(fù)方川烏止痛貼劑中的主要組成藥物，功能祛風(fēng)除濕，溫經(jīng)止痛。制川烏用于制劑中，既要檢查酯型生物堿的含量，以保證臨床用藥的平安性，同時(shí)又要測定烏頭類總生物堿的含量2，以保證其有效性。本實(shí)驗(yàn)對復(fù)方川烏止痛貼劑中的酯型生物堿及總生物堿均進(jìn)展了研究。1儀器與試劑日本島津UV-2401紫外分光光度計(jì)。制川烏產(chǎn)地：四川購自江西中藥飲片廠，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)生藥學(xué)教授陳建偉進(jìn)展品種鑒定。烏頭堿對照品購自中國藥品生物檢定所，供含量測定用，批號：110720-202209。3批中試產(chǎn)品由某制藥廠提供。所有

5、試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1酯型生物堿的含量測定2.1.1檢測波長的選擇精細(xì)稱取烏頭堿對照品10g，用無水乙醇定容于10l量瓶中，精細(xì)量取標(biāo)準(zhǔn)溶液1l，置于25l量瓶中，加無水乙醇使成2.5l，精細(xì)參加堿性鹽酸羥胺試液1.5l，搖勻，在6065水浴中保溫10in，放冷，加高氯酸鐵試液13l，搖勻，放置5in，精細(xì)參加高氯酸試液8l，用高氯酸鐵試液稀釋至刻度，搖勻，放置15in后，經(jīng)紫外分光光度計(jì)在200800n對其進(jìn)展掃描，確定最大吸收波長為510n。見圖1。圖1改進(jìn)異羥肟酸鐵-高氯酸鐵-烏頭堿離子對溶液全波長紫外掃描圖略2.1.2對照品溶液的制備精細(xì)汲取烏頭堿對照品10g，置10l量瓶

6、中，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度。2.1.3供試品溶液的制備本品去除被襯后，粉碎，精細(xì)稱定10g，精細(xì)轉(zhuǎn)移入具塞錐形瓶，參加pH34的無水乙醇150l，浸漬1h后，超聲30in，離心。取上清液，回收乙醇后，用10l0.6l/L的Hl分次轉(zhuǎn)移入分液漏斗中，乙醚萃取3次20,10,10l，取酸水層，加氨試液調(diào)pH值至9，氯仿提取3次10,10,10l，合并氯仿層，蒸干。殘?jiān)訜o水乙醇適量使溶解，轉(zhuǎn)入5l量瓶中，用無水乙醇分次洗滌容器，洗滌液并入量瓶中，再加無水乙醇至刻度，搖勻。精細(xì)量取上述溶液及無水乙醇各2.5l，置25l量瓶中，各精細(xì)參加堿性鹽酸羥胺試液1.5l，搖勻，在6065水浴中保溫10in

7、，放冷，加高氯酸鐵試液13l，搖勻，放置5in，精細(xì)參加高氯酸試液8l，用高氯酸鐵試液稀釋至刻度，搖勻，即得。2.1.4線性關(guān)系考察精細(xì)量取濃度為1.024g/l的對照品溶液0，0.25，0.50，1.0，1.5，2.0，2.5l，分別置于25l量瓶中，均加無水乙醇使成2.5l，各精細(xì)參加堿性鹽酸羥胺試液1.5l，搖勻，在6065水浴中保溫10in，放冷，加高氯酸鐵試液13l，搖勻，放置5in，精細(xì)參加高氯酸試液8l，用高氯酸鐵試液稀釋至刻度，搖勻，放置15in，照分光光度法附錄B在520n的波長處測定吸收度，以濃度為縱坐標(biāo)，吸收度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線=8.824A-3.746r=0.999

8、8。結(jié)果說明本品溶液在濃度6.464g/l范圍內(nèi)吸收度A與濃度呈良好的線性關(guān)系。2.1.5精細(xì)度考察取濃度為1.024g/l的對照品供試液，在520n的波長處，每次間隔約30in，連續(xù)6次測定吸收度，計(jì)算其RSD0.28%。2.1.6重復(fù)性考察取去除被襯后的同一批號樣品適量，精細(xì)稱定5份，按供試品溶液的制備方法制得供試液。分別測定吸收度，測得酯型生物堿的平均含量為0.1151g/g，RSD=2.60%。2.1.7穩(wěn)定性考察取去除被襯后的同一批號樣品適量，精細(xì)稱定5份，按供試品溶液的制備方法制得供試液。每間隔1h，測定吸收度，連續(xù)考察7次，測得RSD0.4%n7。2.1.8加樣回收率考察取去除被

9、襯后的同一批號樣品適量，精細(xì)稱定5g，計(jì)5份，精細(xì)轉(zhuǎn)移入具塞錐形瓶，各精細(xì)參加濃度1.024g/l的對照品溶液0.5l，放置10in，用與“供試品溶液制備項(xiàng)下一樣方法制得供試液。按“樣品含量測定項(xiàng)下方法測定，并按下式計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表1。加樣回收率%=測得量-原有量/參加量100%表1加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果略2.1.9樣品含量測定取3個批號的樣品，去除被襯后，精細(xì)稱定10g，各3份，加10%的微粉硅膠，粉碎，精細(xì)轉(zhuǎn)移入具塞錐形瓶，用與“供試品溶液制備項(xiàng)下一樣方法制得供試液。采用“隨行外標(biāo)二點(diǎn)法，求得隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線。將已制備供試品溶液于波長520n處，依次測定吸收度，從該標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出濃度，計(jì)算

10、，即得。結(jié)果見表2。表2樣品的酯型生物堿含量測定結(jié)果略2.2總生物堿的含量測定2.2.1檢測波長的選擇精細(xì)汲取烏頭堿對照品4g，置50l量瓶中，用氯仿溶解并稀釋至刻度，搖勻，精細(xì)汲取1l，置分液漏斗中，精細(xì)參加氯仿至10l，再精細(xì)參加pH3.0醋酸鹽緩沖液10l和0.1%溴甲酚綠溶液2l，強(qiáng)力振搖5in，靜置20in，分取氯仿層，剩余溶液再用氯仿萃取兩次10，5l，合并氯仿層，于枯燥濾紙濾過，濾液用氯仿定容至25l。經(jīng)紫外分光光度計(jì)在200800n對其進(jìn)展掃描，確定最大吸收波長為413n。見圖2。圖2溴甲酚綠溶液-氯仿-烏頭堿離子對溶液全波長紫外掃描圖略2.2.2對照品溶液的制備精細(xì)汲取烏頭堿

11、對照品4g，置50l量瓶中，用氯仿溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得對照品溶液=0.0776g/l。2.2.3供試品溶液的制備本品去除被襯后，精細(xì)稱定5g，精細(xì)轉(zhuǎn)移入具塞錐形瓶，參加pH值34的無水乙醇150l，浸漬1h后，超聲30in，離心。取上清液，回收乙醇后，用10l0.6l/LHl轉(zhuǎn)移入分液漏斗中，乙醚萃取3次20,10,10l，取酸水層，加氨試液調(diào)pH值至9，氯仿提取3次10,10,10l，合并氯仿層，蒸干。105放置30in，取出，放冷，殘?jiān)勇确逻m量使溶解，轉(zhuǎn)入10l量瓶中，用氯仿分次洗滌容器，洗滌液并入量瓶中，再加氯仿至刻度，搖勻。再將其精細(xì)轉(zhuǎn)入分液漏斗中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，

12、精細(xì)參加pH3.0醋酸鹽緩沖液10l和0.1%溴甲酚綠溶液10l，強(qiáng)力振搖5in，靜置20in，分取氯仿層，剩余溶液再用氯仿萃取兩次10，5l，合并氯仿層，于枯燥濾紙濾過，濾液用氯仿定容至25l，制得供試品溶液。2.2.4線性關(guān)系考察精細(xì)汲取對照品溶液0，1，2，4，6，8l，分別置分液漏斗中，依次精細(xì)參加氯仿至10l，按供試品溶液的制備項(xiàng)下自“精細(xì)參加pH3.0醋酸鹽緩沖液10l起，至“濾液用氯仿定容至25l，搖勻。照紫外分光光度法，分別在413n的波長處測定吸收度。再以濃度為縱坐標(biāo)，以吸收度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線=0.5153A-0.00872r=0.9997。結(jié)果說明烏頭總生物堿在1.9

13、415.52g/l間有良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表3。表3線性關(guān)系考察結(jié)果略2.2.5精細(xì)度考察取濃度為0.1552g/l的對照品供試液，在413n的波長處，每次間隔約30in，連續(xù)6次測定吸收度，計(jì)算其RSD0.53%。2.2.6重復(fù)性考察取去除被襯后的同一批號樣品適量，精細(xì)稱定5份，按供試品溶液的制備方法制得供試液。分別測定吸收度，測得總生物堿的平均含量為0.1053g/g，RSD=1.06%。2.2.7穩(wěn)定性考察取去除被襯后的同一批號樣品適量，精細(xì)稱定5份，按供試品溶液的制備方法制得供試液。每間隔1h，測定吸收度，連續(xù)考察7次，測得RSD0.33%n7。2.2.8加樣回收率考察取去除被襯后的

14、同一批號樣品適量，精細(xì)稱定5g，計(jì)5份，精細(xì)轉(zhuǎn)移入具塞錐形瓶，各精細(xì)參加濃度0.0776g/l的對照品溶液3l，放置10in，用與“供試品溶液制備項(xiàng)下一樣方法制得供試液。按“樣品含量測定項(xiàng)下方法測定，并按下式計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表4。加樣回收率%=測得量-原有量/參加量100%表4加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果略2.2.9樣品含量測定取3個批號的樣品，去除被襯后，精細(xì)稱定10g，各3份，加10%的微粉硅膠，粉碎，精細(xì)轉(zhuǎn)移入具塞錐形瓶，用與“供試品溶液制備項(xiàng)下一樣方法制得供試液。采用“隨行外標(biāo)二點(diǎn)法，求得隨行標(biāo)準(zhǔn)曲線。將已制備供試品溶液于波長413n處，依次測定吸收度，從該標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出濃度，計(jì)算，即得。結(jié)果見表5。表5樣品的烏頭類總生物堿含量測定結(jié)果略3結(jié)論由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，本文所用的改進(jìn)異羥肟酸鐵-高氯酸鐵法及酸性染料比色法，精細(xì)度、重復(fù)性和加樣回收率等均較好，符合定量要求。其中