生遠(yuǎn)志及其皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)家兔離體腸平滑肌運(yùn)動(dòng)作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研

1、生遠(yuǎn)志及其皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)家兔離體腸平滑肌運(yùn)動(dòng)作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研【關(guān)鍵詞】生遠(yuǎn)志；,總皂苷；,蜜遠(yuǎn)志；,離體腸肌摘要：目的討論生遠(yuǎn)志及其皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)家兔離體十二指腸平滑肌的作用機(jī)制。方法采用離體腸肌實(shí)驗(yàn)，用生物機(jī)能分析系統(tǒng)記錄生遠(yuǎn)志及其皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)正常腸肌及工具藥乙酰膽堿、組胺、氯化鋇所致離體腸肌收縮的影響，采集腸肌的振幅與頻率，計(jì)算出各抑制率。結(jié)果生遠(yuǎn)志和遠(yuǎn)志皂苷均能顯著抑制正常腸肌運(yùn)動(dòng)，其抑制率顯著高于蜜遠(yuǎn)志(P0.01)；且生遠(yuǎn)志與總皂苷還能顯著抑制乙酰膽堿Ah、組織胺、氯化鋇所致的腸肌收縮，并與蜜遠(yuǎn)志相比有極顯著差異(P0.01)；蜜遠(yuǎn)志對(duì)正常腸肌和氯化鋇所致的離體腸肌興奮性收縮也有抑

2、制作用(P0.05)。結(jié)論生遠(yuǎn)志及其所含的總皂苷對(duì)家兔離體腸平滑肌運(yùn)動(dòng)具有抑制作用；其抑制機(jī)制，可能系其與乙酰膽堿、組胺競(jìng)爭(zhēng)，阻斷，H1受體以及直接抑制腸肌興奮有關(guān)，且其抑制作用是不可逆的。蜜遠(yuǎn)志對(duì)正常腸肌運(yùn)動(dòng)有直接抑制作用，但顯著小于生遠(yuǎn)志及其皂苷。關(guān)鍵詞：生遠(yuǎn)志；總皂苷；蜜遠(yuǎn)志；離體腸肌ExperientalResearhfrudeRadixPlygalaeanditsSapninandHney-stir-bakedRadixPlygalaentheexvitrIntestineveentehanistDestiRabbitAbstrat:bjetiveTapprahtherudeRadi

3、xPlygalaeanditssapninandHney-stir-bakedRadixPlygalaeehanisfinvitrintestineveentfdestirabbit.ethdsUsedtheinvitrintestineveentexperient,iththebilgifuntinanalyzertrerdtheinfluensesnex-intestinesandtheintestineshihntratereinduedbyAh,HistaineandBariuhlride;Gttheex-intestinesaplitudeandthefrequeny,andalul

4、atedtheinhibitinrati.Resultsparediththentrl,therudeRadixPlygalaeanditssapninuldallrearkablyinhibittheexintestinesveents,theinhibitinratisererearkablylargerthanthatfHney-stir-bakedRadixPlygalae(P0.01);andtherudeRadixPlygalaeanditssapninuldallrearkablyinhibittheveentsftheintestineshihntratereresultedi

5、thAh,HistaineandBariuhlride;theinhibitinratisererearkablylargerthanHney-stir-bakedRadixPlygalae(P0.01);Hney-stir-bakedRadixPlygalaealsinhibitedtheexitabilityntratiththeexintestinesandtheintestineshihntratereinduedbytheBariuhlride(P0.05).nlusinrudeRadixPlygalaeanditssapninaninhibittheexvitrintestines

6、veentfthedestirabbit;theehanisispssiblyrelatedithtfatrs,theneisrudeRadixPlygalaeanditssapninpeteithAhandHistaineandblk,H1reeptr;thenextisdiretinhibitinfexvitrintestineexitability,andtheinhibitryatinisinreversible.Hney-stir-bakedRadixPlygalaeandiretlyinhibittheex-intestineveentbuttheinhibitryatinisre

7、arkablylessthanrudeRadixPlygalaeanditssapnin.Keyrds:rudeRadixPlygalae;Sapnin;Hney-stir-bakedRadixPlygalae;Exvitrintestine遠(yuǎn)志系臨床常用中藥，常用于安神、祛痰、止咳等，但已有文獻(xiàn)中鮮見對(duì)其毒性的報(bào)道。前期研究發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)有明顯抑制作用，毒性較大。同時(shí)發(fā)現(xiàn)蜜遠(yuǎn)志對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的抑制作用小于生遠(yuǎn)志，且毒性較?；谏鲜鲅芯拷Y(jié)果，該研究擬考察生遠(yuǎn)志及其皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)家兔離體十二指腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響，以討論遠(yuǎn)志抑制胃腸運(yùn)動(dòng)的作用機(jī)理。1材料與方法1.1藥材及被檢藥制備1.1.1生遠(yuǎn)志

8、購(gòu)于成都市五塊石中藥材市場(chǎng)，經(jīng)本校盧先明教授鑒定為Plygalatenuifliailld.的根，系藥典載正品藥材。1.1.2蜂蜜四川南寶蜂產(chǎn)品出品，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：Q/20276901-0。1.1.3蜜遠(yuǎn)志系優(yōu)化設(shè)計(jì)，結(jié)合急性毒性與胃腸毒性以及相關(guān)主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，挑選出的最優(yōu)蜜制遠(yuǎn)志工藝制備而成，由成都中醫(yī)藥大學(xué)炮制教研室提供。1.1.4被檢藥液制備分別稱取生遠(yuǎn)志100g，等生藥量蜜遠(yuǎn)志119g即實(shí)際生遠(yuǎn)志量為100g，蜂蜜量19g，合計(jì)119g。其后實(shí)驗(yàn)各標(biāo)示劑量是按原生遠(yuǎn)志實(shí)際含量計(jì)算,參加8倍量水,浸泡30in，煎煮1h，過(guò)濾。重復(fù)煎煮3次，合并濾液，濃縮為12即每毫升藥液中相當(dāng)于含原生藥

9、2g藥液，高溫滅菌,置冰箱內(nèi)供實(shí)驗(yàn)備用。1.1.5遠(yuǎn)志總皂苷參考相關(guān)文獻(xiàn)1,將生遠(yuǎn)志粗粉300g經(jīng)石油醚脫脂后抽濾，藥渣揮干，用95%的乙醇回流提出，趁熱抽濾，重復(fù)4次，合并濾液，并濃縮至約300l，參加3倍量乙醚沉淀，放置過(guò)夜，傾去上清液，將沉淀減壓枯燥，稱重，含量為2.21%。1.2動(dòng)物普通安康家兔，體重23kg,由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。合格證號(hào):SXK(川)202214。1.3藥品1105g/l氯化乙酰膽堿溶液上海化學(xué)試劑總廠所屬上海試劑三廠、10氯化鋇溶液成都化學(xué)試劑廠、1105g/l磷酸組胺溶液SIGA公司，批號(hào)16H0653。1.4試劑臺(tái)氏液，配置方法參考相關(guān)文獻(xiàn)2。1.

10、5器材H-400S恒溫平滑肌槽成都泰盟科技、BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)成都泰盟科技、壓力換能器、手術(shù)器械、1l可調(diào)式移液槍等。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)根據(jù)SPSS12.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)展t檢驗(yàn)分析處理。2方法與結(jié)果取家兔猛擊頭部致死，迅速剖腹，取近幽門端十二指腸約10，置于盛有冷臺(tái)氏液之器皿中，沿腸壁剪去腸系膜，將腸管剪成1.52的小段備用。調(diào)節(jié)恒溫平滑肌槽，使水溫保持在370.5。將壓力換能器與BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)連接。取兔腸一段，兩端各穿一線，其中一線固定于L型通氣管上，放入有50l臺(tái)氏液的浴漕內(nèi)，固定L型通氣管，并調(diào)節(jié)恒溫平滑肌槽，緩慢通入氣泡2個(gè)氣泡/s。腸管另一端與壓力換能器

11、相連，加1g負(fù)荷，翻開BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，待腸管運(yùn)動(dòng)恢復(fù)正常后，記錄一段腸管正?；顒?dòng)曲線，開場(chǎng)滴加給藥。2.1給藥以及觀察記錄方法正常腸肌活動(dòng)被檢藥分別記錄生遠(yuǎn)志、皂苷、蜜遠(yuǎn)志對(duì)正常腸肌的影響正常腸肌活動(dòng)工具藥乙酰膽堿、組胺、氯化鋇被檢藥同前工具藥同前。2.2給藥濃度和劑量被檢藥所含濃度均為2g/l，滴加0.2l即換算成50l臺(tái)氏液濃度為7.9710-3g/l；工具藥乙酰膽堿濃度為1105g/l，氯化鋇濃度為10，磷酸組胺濃度為105g/l，各工具藥滴加量均為0.2l。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3計(jì)算方法及結(jié)果根據(jù)生物信號(hào)處理系統(tǒng)，按給藥后各段腸肌的收縮平均振幅與頻率之乘積與正常腸肌

12、或給予工具藥氯化乙酰膽堿溶液、氯化鋇溶液和磷酸組胺溶液后的收縮平均振幅與頻率之乘積之差，再與正常腸肌或給予工具藥后的腸肌收縮平均振幅與頻率之乘積之比計(jì)算出抑制率。結(jié)果見表13及圖14。表1生遠(yuǎn)志及其皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)正常家兔離體腸肌運(yùn)動(dòng)的影響略與生遠(yuǎn)志組比擬,*P0.01；與遠(yuǎn)志皂苷組比擬,P0.01；n=6圖1生遠(yuǎn)志及其皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)正常家兔離體腸肌運(yùn)動(dòng)的影響略結(jié)果說(shuō)明:生遠(yuǎn)志組和遠(yuǎn)志皂苷組對(duì)正常腸肌有明顯的抑制作用，其抑制率分別為62.58和30.67，蜜遠(yuǎn)志的抑制率那么為6.31；蜜遠(yuǎn)志組、皂苷組與生遠(yuǎn)志組比擬，均有極顯著差異P0.01；蜜遠(yuǎn)志組與遠(yuǎn)志皂苷組比擬，亦具有極顯著差異P0.01。

13、表2生遠(yuǎn)志及其皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)乙酰膽堿致家兔離體腸肌收縮的影響略與生遠(yuǎn)志組比擬,*P0.05,*P0.01；與遠(yuǎn)志皂苷組比擬,P0.05，P0.01;n=6圖2生遠(yuǎn)志及其皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)乙酰膽堿所致家兔離體腸肌收縮的影響略結(jié)果說(shuō)明:生遠(yuǎn)志組和遠(yuǎn)志皂苷組對(duì)乙酰膽堿所致的離體腸肌的興奮性收縮有抑制作用，其抑制率分別為60.34和37.44，蜜遠(yuǎn)志的抑制率那么為11.66。蜜遠(yuǎn)志組與生遠(yuǎn)志組、皂苷組比擬，有極顯著差異(P0.01)。遠(yuǎn)志皂苷組與生遠(yuǎn)志比擬亦有顯著性差異(P0.05)。表3生遠(yuǎn)志及其皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)組胺致家兔離體腸肌收縮的影響略與生遠(yuǎn)志組比擬,*P0.05；與遠(yuǎn)志皂苷組比擬,P0.01;n=

14、6結(jié)果說(shuō)明:遠(yuǎn)志皂苷組和生遠(yuǎn)志組對(duì)組胺所致的離體腸肌的興奮性收縮均有抑制作用，其抑制率分別為72.36和52.95，蜜遠(yuǎn)志的抑制率那么為25.73；蜜遠(yuǎn)志組與生遠(yuǎn)志組、遠(yuǎn)志皂苷組比擬，均有顯著性差異(P0.05或P0.01)。表4生遠(yuǎn)志及其皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)氯化鋇致家兔離體腸肌收縮的影響略與生遠(yuǎn)志組比擬,*P0.05；與遠(yuǎn)志皂苷組比擬,P0.01;n=6圖3生遠(yuǎn)志及其皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)組胺致家兔離體腸肌收縮的影響略圖4生遠(yuǎn)志及其皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)氯化鋇致家兔離體腸肌收縮的影響略結(jié)果說(shuō)明:生遠(yuǎn)志組及其遠(yuǎn)志皂苷組對(duì)氯化鋇所致的離體腸肌的興奮性收縮均有抑制作用，其抑制率分別為23.52%和23.18%，蜜遠(yuǎn)志的

15、抑制率那么為12.05。蜜遠(yuǎn)志組與生遠(yuǎn)志組、遠(yuǎn)志皂苷組比擬,有顯著性差異(P0.05或P0.01)。3討論遠(yuǎn)志為遠(yuǎn)志科植物遠(yuǎn)志Plygalatenuifliailld或卵葉遠(yuǎn)志PlygalasibiriaL.的根皮。具有寧心安神、祛痰開竅、消散瘡癰的成效，臨床常用以治療心神不寧失眠，健忘，咳嗽痰多，瘡癰等證。研究小組在對(duì)定志小丸改善學(xué)習(xí)記憶拆方研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，生遠(yuǎn)志雖然具有安神益智作用，但對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)呈現(xiàn)明顯的抑制作用，并導(dǎo)致胃腸脹氣、腸壁變雹壞死。較長(zhǎng)時(shí)間給予，引起動(dòng)物死亡，顯示長(zhǎng)時(shí)期用生遠(yuǎn)志，會(huì)對(duì)胃腸呈現(xiàn)明顯的毒性3，并且考察了生遠(yuǎn)志及其皂苷與蜜遠(yuǎn)志的急性毒性，測(cè)定其半數(shù)致死量LD50，發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志

16、生品的毒性較大，蜜炙品的毒性較小4。同時(shí)本課題組再度考察了生遠(yuǎn)志及其皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)小鼠胃排空和小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響，結(jié)果說(shuō)明蜜遠(yuǎn)志對(duì)胃排空和小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的抑制作用小于生遠(yuǎn)志5?；谏鲜鲅芯?，本實(shí)驗(yàn)考察了生遠(yuǎn)志及其皂苷與蜜遠(yuǎn)志對(duì)家兔離體腸十二指腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響。研究結(jié)果再次說(shuō)明，生遠(yuǎn)志及其皂苷對(duì)腸平滑肌的抑制作用顯著大于蜜遠(yuǎn)志，這與在體小腸推進(jìn)實(shí)驗(yàn)研究的結(jié)果吻合。而且，生遠(yuǎn)志及其皂苷對(duì)正常腸肌以及由乙酰膽堿、組胺、氯化鋇所致的離體腸肌收縮有顯著抑制作用；蜜遠(yuǎn)志對(duì)離體腸肌雖然也呈現(xiàn)出一定的抑制作用，但其抑制率顯著低于生遠(yuǎn)志和其皂苷，提示其對(duì)腸肌的抑制作用較弱。乙酰膽堿為膽堿受體沖動(dòng)劑，可以明顯興奮

17、胃腸道，使其收縮幅度、張力增加，胃腸平滑肌蠕動(dòng)增加。實(shí)驗(yàn)說(shuō)明，生遠(yuǎn)志能協(xié)同阿托品拮抗受體而發(fā)揮抑制作用。組胺可作用于分布在胃腸平滑肌上的H1受體，以翻開細(xì)胞膜上允許Na+,K+,a2+通透的離子通道,導(dǎo)致細(xì)胞膜去極化,進(jìn)而使電壓依賴性鈣通道開放,胞內(nèi)游離鈣離子濃度增高,從而引起胃腸平滑肌收縮6，結(jié)合生遠(yuǎn)志能顯著抑制胃腸a2+-ATP酶活性，推測(cè)其可能通過(guò)影響細(xì)胞膜a2+的通透性，使胞內(nèi)游離a2+濃度降低而抑制腸肌的收縮。因氯化鋇有直接刺激胃腸黏膜、引起胃腸平滑肌收縮的作用，生、蜜遠(yuǎn)志對(duì)正常腸肌均有抑制作用，其中生遠(yuǎn)志及其皂苷對(duì)腸肌運(yùn)動(dòng)的抑制作用顯著高于蜜遠(yuǎn)志。結(jié)果提示，遠(yuǎn)志對(duì)腸肌的抑制機(jī)理是多

18、方面的，既對(duì)平滑肌有直接抑制作用，同時(shí)又通過(guò)拮抗膽堿能受體、H1受體而發(fā)揮多方面抑制作用。實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，滴加各被檢藥液使腸肌呈現(xiàn)持續(xù)抑制狀態(tài)時(shí)，又繼續(xù)滴加同體積的工具藥，發(fā)現(xiàn)生遠(yuǎn)志和皂苷均不能使腸肌重新恢復(fù)收縮，仍然呈現(xiàn)抑制狀態(tài)，故推測(cè)生遠(yuǎn)志及其皂苷對(duì)腸肌的抑制是不可逆的。而蜜遠(yuǎn)志組雖然對(duì)正常腸肌和給予工具藥后的腸肌有一定的抑制作用，但抑制約12in后可以使腸肌的舒縮活動(dòng)恢復(fù)用藥前的正常收縮狀態(tài)，提示蜜遠(yuǎn)志可能對(duì)腸肌運(yùn)動(dòng)有調(diào)節(jié)作用。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中還發(fā)現(xiàn)遠(yuǎn)志皂苷對(duì)正常腸肌和乙酰膽堿、組胺、氯化鋇所致兔離體腸肌收縮作用均呈現(xiàn)先興奮后抑制，這與彭文鐸7報(bào)道的遠(yuǎn)志皂苷H對(duì)離體兔回腸平滑肌有興奮作用局部相似，故推測(cè)其與遠(yuǎn)志皂苷的刺激性有關(guān)。綜上說(shuō)明，生遠(yuǎn)志及其皂苷對(duì)腸肌的抑制機(jī)制，可能系其與乙酰膽堿、組織胺競(jìng)爭(zhēng)，阻斷、H1受體，并直接抑制腸肌興奮性有關(guān)，且其抑制作用是不可逆的；蜜遠(yuǎn)志對(duì)腸肌抑制作用小，且可逆。參考文獻(xiàn)：1肖崇厚.中藥化學(xué),第2版.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1997,387.2徐叔云.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).北京：人民衛(wèi)生出版社,2001：1834.3王建,郭娟,劉賢武，等.生遠(yuǎn)志及與甘草不同配伍比例對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)的影響J