DB32-T 4366-2022 人載脂蛋白AⅠ羊多抗血清制備技術(shù)規(guī)程

1、ICS 65.020.20Ccs B 41DB32江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)DB32/T 4366 -2022人載脂蛋白A羊多抗血清制備技術(shù)規(guī)程Technical regulations for production of sheep anti-humanapolipoprotein A polyclonal antiserum 2022-09-06 發(fā)布2022-10-06 實施江蘇省市場監(jiān)督管理局 發(fā)布前言本文件按照GB/T 1.1-2020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。 請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由江蘇省畜牧業(yè)標(biāo)

2、準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出并歸口。 本文件起草單位：江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所、句容市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局、江蘇大學(xué)、江蘇省農(nóng)科院。 本文件主要起草人：徐志偉、姚明霞、徐一然、溫小林、鄧碧華、于建寧、李云、胡強、張兆麗、譚圣偉、盛媛媛。 人載脂蛋白 A羊多抗血清制備技術(shù)規(guī)程范圍本文件運用于人載脂蛋白 A羊多抗血清制備中羊品種選擇和飼養(yǎng)要求、免疫佐劑選用、抗原乳化、抗原接種、抗體效價評估、抗血清制備的步驟和方法。 規(guī)范性引用文件本文件無規(guī)范性引用文件。 術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。 載脂蛋白 A Apolipoprotein A用于運輸血液中脂類的高密度主要載脂蛋白, A1是載脂蛋白A族中最多的一種

3、組分，約占HDL顆粒的65%，主要在肝臟、部分在小腸合成。 4羊的選擇和飼養(yǎng)要求選用體重30kg40 kg生長發(fā)育良好、10月齡左右的健康羊。采用群養(yǎng)放牧，適當(dāng)補飼方式，每天早晚觀察羊的健康狀況。 5抗原要求 人血清通過優(yōu)化PEG沉淀、離子交換吸附的方法，純度達(dá)96%。 6免疫佐劑選用首次免疫佐劑采用弗氏完全佐劑，從第二次免疫開始，采用弗氏不完全佐劑。 7抗原乳化采用高速剪切法乳化抗原。乳化容器需放置在降溫夾套中，將佐劑按需要量置于乳化容器中，用吸管以60滴/min的速度緩慢加入載脂蛋白A抗原溶液，用漩渦混合器以1.5萬rmp/min混合均勻，抗原溶液全部加完后，再持續(xù)混合15min?？乖臃N

4、免疫劑量和部位每只羊免疫抗原劑量為 1mg，抗原濃度為 1mg/ml,為各部位平均接種。不同免疫次數(shù)間的間隔天數(shù)和部位，見表 1。表 1免疫劑量和部位次數(shù)間隔天數(shù)（d）免疫接種部位第 1 次0腹股溝、肘部、耳后、額下、背側(cè)和足窩第 2 次15腹股溝、肘部、耳后、額下、背側(cè)和腹股溝淋巴結(jié)點第 39 次9腹股溝、肘部、耳后、額下和背側(cè)抗體效價評估在第7 次免疫后動脈采血檢測抗體水平，采用瓊脂擴散法進(jìn)行效價測定,效價不低于1：16，可以判定為合格，可以采血。 抗血清制備采血在檢測抗體水平達(dá)到效價要求后，采用動脈一次性采血。血液用 250 mL 玻璃瓶收集， 血液占玻璃瓶的 1/5。 10.2 血清制備把收集好血液的玻璃瓶，放在 37恒溫水浴鍋中 1h 后，把玻璃瓶從水浴鍋中取出；再把血清從玻璃瓶中吸出；用低速離心機 4500 rmp/min，離心 15 min，取上清液，顏色為乳白色或微黃色，去掉沉淀物雜質(zhì)。 外觀質(zhì)量 血清應(yīng)呈黃色或微紅色血清狀液體，允許少量的絮狀物或沉淀。