考研必備要點(diǎn)生物化學(xué)氨基酸課件

1、第二章 氨基酸Chapter2 Amino acid教學(xué)目標(biāo)： 掌握氨基酸的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與理化性質(zhì)。 1.從氨基酸的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)上理解氨基酸的分類和生物學(xué)特性。 2.掌握氨基酸的理化性質(zhì)，重點(diǎn)掌握兩性解離與等電點(diǎn)的含義、氨基酸參加的化學(xué)反應(yīng)，特別是側(cè)鏈的反應(yīng)。了解氨基酸的光譜學(xué)特征。第一節(jié) 氨基酸 （Amino acid,AA) 蛋白質(zhì)的構(gòu)件分子 Protein Architecture P123 一 蛋白質(zhì)的水解 酸水解: 6mol/L HCL，4mol/L H2SO4 回流煮沸20h。 缺點(diǎn)：Trp破壞，Asn、Gln脫酰胺基， 羥基氨基酸(Ser Thr)部分破壞。 優(yōu)點(diǎn)：不消旋堿水解：5mol

2、/LNaOH共煮10-20小時(shí) 缺點(diǎn): 消旋 優(yōu)點(diǎn)：色氨酸穩(wěn)定酶水解：水解位點(diǎn)特異，得到多肽片段和AA的 混合物，用于一級結(jié)構(gòu)分析。非解離形式解離形式2.結(jié)構(gòu)特點(diǎn)(1)除脯氨酸（亞氨基酸）外，這些天然氨基酸在結(jié)構(gòu)上 的共同特點(diǎn)為： 與羧基相鄰的-碳原子上都有一個(gè)氨基，因而稱為-氨基酸. -C-C-C-C-COOH -C-C-C-C(NH2)-COOH -氨基酸 -C-C-C(NH2)-C-COOH -氨基酸 -C-C(NH2)-C-C-COOH -氨基酸什么是-氨基酸？三. 氨基酸的分類 AA and classification 基本氨基酸:編碼的蛋白質(zhì)氨基酸 20種 修飾（稀有）氨基酸：多

3、肽合成后由基 本aa經(jīng)酶促修飾而來。 存在于生物體內(nèi)但不 組成蛋白質(zhì) (約150種)。 蛋白質(zhì)AA Pr-AA非蛋白質(zhì)AANon-Pr AA（一）.基本20種氨基酸按照 R基的化學(xué)結(jié)構(gòu)分類 1.脂肪族氨基酸 （1）.中性氨基酸：含一氨基一羧基 Gly Ala Val Leu Ile Ser、Thr Cys、Met 含有羥基和硫的氨基酸 含羥基：Ser、Thr 含硫：Cys、Met Ser的-OH（PKa=15),在生理?xiàng)l件下不解離, 但它是一個(gè)極性基團(tuán)，能與其它基團(tuán)形成 氫鍵，具有重要的生理意義，常出現(xiàn)在 大多數(shù)酶的活性中心。 Thr 中的-OH是仲醇，具有親水性。 Ser和Thr的-OH往往

4、與糖鏈相連，通過O- 糖苷鍵形成糖蛋白。二硫鍵在蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)中具有重要意義。 Cys還常出現(xiàn)在酶的活性中心。Met的R基中含有甲硫基（-S-CH3），硫原 子有親核性，易發(fā)生極化，因此,在生物合成中是一種重要的甲基供體。 （2）酸性氨基酸及其酰胺: Asp、Glu、Gln、Asn 酸性氨基酸及其酰胺: Asp、Glu、Gln、Asn（3）.含堿性基團(tuán): His 、Lys 、Arg Lys側(cè)鏈氨基的pKa為10.53，生理?xiàng)l件下，Lys 側(cè)鏈帶有一個(gè)正電荷（NH3+）. Arg是堿性最強(qiáng)的氨基酸，側(cè)鏈上的胍基是已 知堿性最強(qiáng)的有機(jī)堿，pKa值為12.48，生 理?xiàng)l件下完全質(zhì)子化。 His含咪唑環(huán)

5、，它是20種氨基酸中側(cè)鏈pK值最 接近生理pH值的一種，在接近中性pH時(shí)， 可離解平衡。它是在生理pH條件下唯一具 有緩沖能力的氨基酸。 (2).芳香族氨基酸：Phe、Tyr 、Trp苯丙氨酸酪氨酸色氨酸 (3).雜環(huán)族氨基酸： Pro（His) Pro的-亞氨基是環(huán)的一部分，因此具有特殊的剛性結(jié)構(gòu)，一般出現(xiàn)在兩段-螺旋之間的轉(zhuǎn)角處，Pro殘基所在的位置必然發(fā)生骨架方向的變化. 1.非極性氨基酸 在維持蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)中起著重要作用（蛋白質(zhì)的疏水核心）非極性氨基酸 2. 極性氨基酸: 這類氨基酸的側(cè)鏈都能與水形 成氫鍵，因此很容易溶于水。（1）不帶電荷的極性氨基酸 （2）.帶負(fù)電荷的AA(酸性

6、AA) （3）.帶正電何的AA(堿性AA)* 膠原蛋白中的Lys側(cè)鏈氧化時(shí)能形成很強(qiáng)的分子間(內(nèi))交聯(lián)。* Arg的胍基堿性很強(qiáng)，與NaOH相當(dāng)。* His是一個(gè)弱堿，是天然的緩沖劑，它往往存在于許多酶的活性中心。*非極性AA一般形成蛋白質(zhì)的疏水核心，帶電荷的AA和極性AA位于表面。 酶的活性中心：His、Ser、Cys（三）.根據(jù)人體能否自身合成必需氨基酸（定義）： 成年人：Thr、 Val、 Leu、Ile、 Phe 、Trp、Lys、 Met半必須氨基酸：嬰兒期Arg和His非必需氨基酸：其余（二）非編碼的蛋白質(zhì)氨基酸: _修飾氨基酸 蛋白質(zhì)合成后，由基本氨基酸修飾而來。 （1）4-羥脯

7、氨酸 （2）5-羥賴氨酸 （3）6-N-甲基賴氨酸 （4）-羧基谷氨酸 （5）Tyr的衍生物 （四） 非蛋白質(zhì)氨基酸: 150多種，不組成蛋白質(zhì),但有生理功能. （1）L-型 氨基酸的衍生物 （2）D-型氨基酸 （3）-、-、-氨基酸第二節(jié).氨基酸的重要理化性質(zhì) 一. 一般物理性質(zhì) 溶解性：在水中的溶解度差別很 大，溶解于稀酸或稀堿， 不溶解于有機(jī)溶劑。 熔點(diǎn)： 一般在200以上。 味感： 其味隨不同氨基酸有所 不同。 （一） AA的光學(xué)活性和立體化學(xué)1、氨基酸的構(gòu)型構(gòu)型(configuration) ：具有相同的分子式和結(jié)構(gòu)式，但原子在空間的分布排列不同。構(gòu)象(conformation)：在

8、化學(xué)結(jié)構(gòu)和構(gòu)型同的分子中，其原子由于單鍵的內(nèi)旋轉(zhuǎn)而在空間形成的不同的構(gòu)象體可以相互轉(zhuǎn)化。 Thr和Ile有四種光學(xué)異構(gòu)體分別是D-、L-、D-別-、L- 別-氨基酸。 L-蘇氨酸 (L-threonine) D-蘇氨酸 (D-threonine) L-別-蘇氨酸 (L-allo-threonine)D-別-蘇氨酸 (D-allo-threonine2、氨基酸的旋光性 P143旋光性：除甘氨酸外，-氨基酸都具有旋光性，能使偏振光平面向左或向右旋轉(zhuǎn)，左旋者通常用（-）表示，右旋者用（+）表示。 光學(xué)異構(gòu)體：-氨基酸中-碳原子是一個(gè)不對稱碳原子，在空間的排列方式有兩種方式：D型和L型。 光學(xué)異構(gòu)體的

9、化學(xué)性質(zhì)和物理性質(zhì)都是一樣。并且，構(gòu)型與旋光方向沒有直接對應(yīng)關(guān)系。氨基酸的旋光性（符號和大?。┤Q于它的R基的性質(zhì)，并與溶液的PH值有關(guān)。P144 圖3-16 比旋光度 ：單位濃度和單位長度下的旋光度。是旋光物質(zhì)的特征物理常數(shù)。 P3表3-4蛋白質(zhì)中L型氨基酸的比旋光度 消旋作用 ：旋光性物質(zhì)在化學(xué)反應(yīng)中，只要其不對稱碳原子經(jīng)過對稱狀態(tài)的中間階段，即發(fā)生消旋作用，并轉(zhuǎn)變?yōu)镈-型和L-型的等當(dāng)量混合物，稱消旋物。外消旋物：D-型和L-型的等摩爾混合物內(nèi)消旋物：分子內(nèi)消旋 胱氨酸有三種立體異構(gòu)體： L-胱氨酸 D-胱氨酸 內(nèi)消旋胱氨酸 （二）氨基酸的光譜性質(zhì)可見光區(qū)：無吸收遠(yuǎn)紫外和紅外區(qū)：都吸收近

10、紫外區(qū)（200400nm）：Tyr/Trp/Phe 原因：-C=C-C=C-C=C-C=C- 1、紫外吸收光譜酪氨酸的max275nm，275=1.4103 苯丙氨酸的max257nm，257=2.0102 色氨酸的max280nm，280=5.6103 蛋白質(zhì)含量測定280nm、核磁共振波譜自學(xué)二.氨基酸的酸堿性質(zhì)（P130）1.氨基酸的兼性離子形式 1三種現(xiàn)象： （1）晶體熔點(diǎn)高 （2）不溶于非極性溶劑 （3）介電常數(shù)高2原因： （1）-羧基的 pK1=2.0， 當(dāng)pH3.5，-COO-存在。 -氨基的 pK2=9.4， 當(dāng)pH8.0時(shí)，-NH+3存在。3.5pH pKa 時(shí)，堿酸 平衡右

11、移 pH = pKa 時(shí)，堿=酸 平衡 pH 堿 平衡左移（2）pKa 就是HA50%解離堿 = 酸時(shí)溶液的 pH值，Ka 就是此時(shí)溶液的H+。（3）當(dāng)堿 = 酸時(shí)溶液的pH值等于pKa 氨基酸在水溶液中既能起質(zhì)子供體的作用 又能起質(zhì)子受體的作用，因此是兩性電解質(zhì)。 +H+H+Gly的兩性解離和酸堿滴定曲線 終點(diǎn)：100% Gly+, 凈電荷：+1 第一拐點(diǎn)：50%Gly +, 50%Gly 平均凈電荷 +0.5 pH=pK1+lgGly/Gly+=pK1=2.34 第二拐點(diǎn)：100%Gly 凈電荷為0 , 第三拐點(diǎn)：50%Gly，50%Gly- 凈電荷：-0.5 pH=pK2+lgGly /

12、Gly=pK2=9.6 終點(diǎn)：100% Gly- , 凈電荷：-1 在pH2.34和pH9.60處，Gly具有緩沖能力。 3.氨基酸的等電點(diǎn) (1)氨基酸的等電點(diǎn): 當(dāng)溶液濃度為某一pH值時(shí)，氨基酸分子中所含的-NH3+和-COO-數(shù)目正好相等，即凈電荷為0。在電場中的氨基酸既不向正極也不向負(fù)極移動，此時(shí)溶液的pH值即為氨基酸的等電點(diǎn)，簡稱pI。 等電點(diǎn)時(shí)，氨基酸處于兩性離子狀態(tài)。在某一試驗(yàn)條件下，等電點(diǎn)是氨基酸的特征常數(shù)。 （2）等電點(diǎn)的計(jì)算 中性氨基酸：以Gly為例 K1=Gly H+Gly+K2=Gly- H+GlypI時(shí)，Gly+ = Gly- Gly H+K1=Gly K2H+H+2

13、=K1K2pH=（pK1+pK2）/2pI=（pK1+pK2）/2pI =（2.34+9.60）/2=5.97Gly對多氨基和多羧基氨基酸的解離 解離原則：先解離a-COOH,隨后其他-COOH;然后解離a-NH3+ ，隨后其他a-NH3+ pI等于兩性離子兩側(cè)的pK值得算術(shù)平均值。酸性氨基酸，以Asp為例：堿性氨基酸，以Lys為例：ApK1pK2pIpIpK3pK3pK2pK1加入的OH-mL數(shù)加入的OH-mL數(shù)pHpH一氨基二羧基AA的等電點(diǎn)計(jì)算：pI=2pK1+pK2二氨基一羧基AA的等電點(diǎn)計(jì)算：pI=2pK2+pK3谷氨酸（A）和賴氨酸（B）滴定曲線和等電點(diǎn)計(jì)算中性氨基酸：pK1，為羧

14、基的解離常數(shù)，pK2，為氨基的解離常數(shù)。 pI=(pK1，+pK2，)/2酸性氨基酸：pK1，為羧基的解離常數(shù)，pK2，為側(cè)鏈羧基的解離常數(shù)。 pI=(pK1，+pK2，)/2堿性氨基酸： pK2，為氨基的解離常數(shù)，pK3，為側(cè)鏈氨基的解離常數(shù)。 pI=(pK2，+pK3，)/2等電點(diǎn)與該離子濃度無關(guān)，只決定于兩性離子兩側(cè)的Pka值。氨基酸的兩性解離性質(zhì)及等電點(diǎn)（pI）(pK1)pH = pI 凈電荷=0 pH pI凈電荷為負(fù)CHRCOOHNH3+CHRCOONH2CHRCOONH3+ + H+ OH- + H+ OH-(pK2)1.某氨基酸的等電點(diǎn)即為該氨基酸兩性離子兩邊的pK值和的一半。2

15、.在氨基酸等電點(diǎn)以上任何pH，AA帶凈的負(fù)電荷，在電場中向陽極移動；在氨基酸等電點(diǎn)以下任何pH，AA帶凈的正電荷，在電場中向陰極移動。3.在一定pH范圍中，溶液的pH離AA等電點(diǎn)愈遠(yuǎn)，AA帶凈電荷愈多。 實(shí)驗(yàn)證明在等電點(diǎn)時(shí)，氨基酸主要以兩性離子形式存在，但也有少量的而且數(shù)量相等的正、負(fù)離子形式，還有極少量的中性分子。氨基酸在等電點(diǎn)狀態(tài)下，溶解度最小。 P133 表3-3，氨基酸的解離常數(shù)和等電點(diǎn)氨基酸的-羧基pKa在1.8-2.7間，比典型羧基的pKa（如乙酸pKa為4.76）要小很多，并且，羧基的電離大于氨基。所以，一氨基一羧基的氨基酸的等電點(diǎn)都在pH6.0左右。表中只有His的咪唑基側(cè)鏈在

16、生理?xiàng)l件下不帶電荷，在生理?xiàng)l件下，只有His有緩沖能力。 pH = pKa時(shí)，緩沖能力最大，等電點(diǎn)時(shí)緩沖能力最小。 三. 氨基酸的化學(xué)性質(zhì) P135（一）-氨基參加的反應(yīng)1.與亞硝酸反應(yīng)2.與酰化試劑反應(yīng)3.烴基化反應(yīng)4.形成Schiffs堿反應(yīng)5.脫氨基反應(yīng) NH2 OH R CH COOH + HNO2 R CH COOH+H2O+N2 Van Slyke 法測氨基氮（體積）的基礎(chǔ)， N2中的1/2為氨基氮。 含亞氨基的脯氨酸則不能與亞硝酸反應(yīng)。 氨基酸定量和蛋白質(zhì)水解程度的測定。1、與亞硝酸反應(yīng) 2 ?；磻?yīng) 氨基酸的氨基與酰氯或酸酐在弱堿溶液中發(fā)生作用，氨基被?；?。氨基中的氫被?；?/p>

17、取代。 例如與?；噭┑せ酋Ｂ龋―NS-Cl，5二甲基氨基萘-1-磺酰氯）的反應(yīng) 丹磺酰氯常用于多肽鏈N末端氨基酸的標(biāo)記和微量氨基酸的定量測定。 N GlyAlaSerLeuPhe C DNSGlyAlaSerLeuPhe C 水解 DNSGly、 Ala、 Ser、 Leu、 Phe DNS-AA在紫外光激發(fā)后發(fā)黃色熒光. 此外，蛋白質(zhì)和多肽的人工合成中用作N末端-NH2的保護(hù)劑。 芐氧甲酰氯 、 叔丁氧甲酰氯、對-甲苯磺酰氯、鄰苯二甲酸酐 3.烷基化反應(yīng) Sanger反應(yīng):與2.4一二硝基氟苯（DNFB）的反應(yīng)。 （R烴基）反應(yīng)特點(diǎn)：A.為- NH2的反應(yīng)。B.氨基酸- NH2的一個(gè)H原子

18、可被烴基取代(鹵代烴)C.在弱堿性條件下，與DNFB發(fā)生芳環(huán)取代，生成二硝基苯氨基酸（DNP-氨基酸）。應(yīng)用： 分離得到的DNP-氨基酸（黃色），層析法鑒定。 Edman反應(yīng)： N=C=S + NCHCOOHHHRPITCNCNCHCOOHHHRSPTC-氨基酸NCHRSNCCOPTH-氨基酸pH8.3無水HF苯異硫氰酸酯PITC苯氨基硫甲酰衍生物苯乙內(nèi)硫脲衍生物Edman降解法基礎(chǔ)+PITC弱堿中(400 C)苯硫乙內(nèi)酰脲(PTH-AA)(無水氫氟酸中)H+苯氨基硫甲酰氨基酸（PTC-氨基酸）（Edman反應(yīng)）反應(yīng)特點(diǎn)：A.氨基酸與苯異硫氰酸酯( PITC)偶聯(lián)，生成苯氨 基硫甲酰衍生物（P

19、TC-AA），同時(shí)PTC-氨基酸環(huán)化生成苯乙內(nèi)酰硫脲衍生物（ PTH-氨基酸）。B.PTH-氨基酸（無色）可以用層析法分離鑒定。應(yīng)用： 多肽、蛋白質(zhì)序列分析 多肽順序自動分析儀，靈敏度提高，能連續(xù)測定。一次可連續(xù)自動測定60個(gè)以上的氨基酸。4、與甲醛反應(yīng) 反應(yīng)特點(diǎn)： A.為- NH2的反應(yīng) B.在常溫，中性條件，甲醛與- NH2反應(yīng)， 生成羥甲基衍生物，釋放氫離子。應(yīng)用： 氨基酸定量分析-甲醛滴定法（間接滴定）為什么用甲醛滴定而不用酸堿直接滴定？ R COOH R COO C=O + H2N CH C=N CH H R H R醛 氨基酸 Schiffs堿-H20+H205.生成西佛堿的反應(yīng)（S

20、chiff） 西佛堿是某些酶促反應(yīng)的中間產(chǎn)物（如轉(zhuǎn) 氨基反應(yīng)的中間產(chǎn)物 6.熒光胺 與- NH2的反應(yīng)：氨基酸與熒光胺反應(yīng)生成有熒光的物質(zhì)（M=475)，根據(jù)熒光強(qiáng)度可用熒光分光光度計(jì)測定氨基酸的含量。 7.與5,5-雙硫基-雙(2-硝基 苯甲酸)反應(yīng) -SH的反應(yīng)。 生成的硫代硝基苯甲酸在波長 412nm處有最大吸收峰。 測定細(xì)胞游離- SH的含量 8.脫氨基反應(yīng)： -氨基酸在氨基酸氧化酶 的作用下脫氨基轉(zhuǎn)變成酮酸。 -羧基參加的反應(yīng) P138 （1）成鹽、成酯反應(yīng) : 成鹽：氨基酸與堿作用生成鹽，（為什么 氨基酸的?；磻?yīng)或烷基化反應(yīng)需 要在堿性溶液中進(jìn)行？）。 成酯：-羧基被醇酯化后，形

21、成相應(yīng)的 酯。 （2）成酰氯的反應(yīng) 氨基被保護(hù)后，羧基可與二氯亞砜或 五氯化磷反應(yīng)，生成酰氯，使羧基活化，容易與另一氨基酸結(jié)合，在多肽的人工合成中常用。 （3）脫羧基反應(yīng) 在氨基酸脫羧酶的作用下 ，放出CO2生成相應(yīng)的胺。（二） -羧基參加的反應(yīng)1.成鹽或成酯反應(yīng)2.成酰氯反應(yīng)3.脫羧基反應(yīng)4.疊氮反應(yīng)P138 2、成酯 NH2 干燥，HCl R CH COOH + C2H5OH 回流 R CH COOC2H5 + H2ONH3Cl保護(hù)羧基 1、與NaOH等形成鹽 為什么氨基酸的酰化反應(yīng)或烷基化反應(yīng) 需要在堿性溶液中進(jìn)行？ HN-保護(hù)基 R CH-COOH + PCl5 HN-保護(hù)基 R CH

22、-COOCl + POCl3 + HCl保護(hù)氨基 活化羧基3、成酰氯的反應(yīng) 氨基被保護(hù)后，羧基可與二氯亞砜或 五氯化磷反應(yīng)，生成酰氯，使羧基活化，容易與另一氨基酸結(jié)合，在多肽的人工合成中常用 3.脫羧基反應(yīng) NH2 脫羧酶 RCH-COOH R-CH2-NH2 +CO2 YNH O NH2NH2 RCHCOCH3 YNH O HNO2 RCHCNHNH2 YNH O RCHCN -N+ N + 2H2O ?；被峒柞?肼酰化氨基酰肼?；被／B氮肽的人工合成4、疊氮反應(yīng)（三）-羧基和-氨基都參加的反應(yīng) 1、與茚三酮反應(yīng) 2、成肽反應(yīng) 1.與茚三酮反應(yīng) 茚三酮在弱酸中與-氨基酸共熱，引起氨基酸

23、的氧化脫氨、脫羧反應(yīng)，最后，茚三酮與反應(yīng)產(chǎn)物氨和還原茚三酮脫水縮合生成紫色物質(zhì)（max=570nm）。 Pro、Hy-Pro與茚三酮形成黃色化合物 （max=440nm）弱酸 加熱氨基酸與茚三酮反應(yīng)+茚三酮(無色)NH3CO2 RCHO+還原性茚三酮(弱酸)加熱3H20紫色化合物+ 2NH3 +水合茚三酮還原性茚三酮反應(yīng)特點(diǎn)：A.該反應(yīng)由NH2與COOH共同參與B.茚三酮是強(qiáng)氧化劑C.該反應(yīng)非常靈敏，可在570nm測定吸光值D.測定范圍：0.5-50g/ml E.脯氨酸與茚三酮直接生成黃色物質(zhì)（不釋放NH3）應(yīng)用：A.氨基酸定量分析（先用層析法分離）B.氨基酸自動分析儀： 用陽離子交換樹脂，將

24、樣品中的氨基酸分離，自動定性定量，記錄結(jié)果。OH羥2、成肽反應(yīng)（四） 側(cè)鏈R基參加的反應(yīng)1、Tyr2、堿性AA2、堿性AA3、帶硫AA側(cè)鏈R基參加的反應(yīng) 用于蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾功能團(tuán)有： 羥基、酚基、巰基(包括二硫鍵)、吲 哚基、咪唑基、胍基、甲硫基、非- 氨基和非-羧基等。 Tyr酚基在3和5位上易發(fā)生親電取代反應(yīng)， 如碘化和硝化黃色反應(yīng)一碘Tyr二碘Tyr一硝基Tyr二硝基TyrTyr + 重氮苯磺酸 橘黃色His（咪唑基） + 重氮苯磺酸棕紅色Pauly反應(yīng)35Arg側(cè)鏈胍基在堿性硼酸鈉緩沖液中與環(huán)己二酮生成縮合物。Trp側(cè)鏈吲哚基能被N-溴代琥珀酰亞胺氧化分光光度法測定Trp含量 Met

25、側(cè)鏈上甲硫基：強(qiáng)親核基團(tuán)與烴化試劑成锍鹽保護(hù)巰基解離為硫醇陰離子 與二硫硝基苯甲酸發(fā)生硫醇-二硫化物交換pH8.0時(shí)412nm最大光吸收分光光度法測定-SHCys的巰基不穩(wěn)定，易被氧化成二硫鍵巰基在有痕量的金屬離子如：Cu2+，F(xiàn)e2+，Co2+或Mn2+時(shí)，易被氧化。硫醇的空氣氧化產(chǎn)物Cys中的二硫鍵可被氧化劑（過甲酸）以及還原劑（巰基化合物）打開。磺基丙氨酸強(qiáng)氧化劑過甲酸巰基化合物還原劑及時(shí)保護(hù) DTT二硫蘇糖醇DTT （還原劑）打開二硫鍵.酪氨酸的酚基米倫反應(yīng)（Millon）：酚基與HgNO3、HgNO2 HNO3和HNO2作用產(chǎn)生白色的沉淀，加熱后呈紅色。 . 精氨酸的胍基 坂口反應(yīng)（

26、Sagakuchi）：胍基與-萘酚，次溴（氯）酸鹽在氫氧化鈉溶液中 生成紅色物質(zhì)。 與5,5-雙硫基-雙(2-硝基苯甲酸) 反應(yīng) -SH的反應(yīng)：P13 Cys的R側(cè)鏈上的-SH,在PH8.0和室溫下與 5,5-雙硫基-雙(2-硝基苯甲酸)反應(yīng)生 成含SH的硫代硝基苯甲酸，（ max=412nm）。 測定細(xì)胞游離- SH的含量 苯環(huán)的黃色反應(yīng) phe+少量濃H2SO4+濃HNO3 黃色 TyrorTrp+ 濃HNO3 黃色 Folin一酚反應(yīng) +磷鉬酸 Tyr磷鎢酸 orTrp藍(lán)色（鉬藍(lán)與鎢藍(lán)混合物） 乙醛酸反應(yīng) （紫色環(huán)反應(yīng)） 吲哚 Trp+濃H2SO4-紫色環(huán) 六、氨基酸混合物的分析分離 利

27、用AA成分分配系數(shù)的差異（一）分配層析法的一般原理 分配層析原理層析系統(tǒng)有兩個(gè)相組成，一個(gè)是固定相，一個(gè)是流動相，混合物在層析系統(tǒng)中的分離決定于該混合物的組分在這兩相分配系數(shù)。 分配定律：一種溶質(zhì)在兩種一定的互不相溶的溶劑中分配，在一定溫度下達(dá)到平衡后，溶質(zhì)在兩相中濃度比值為一常數(shù)，即分配系數(shù)。層析系統(tǒng)固定相流動相附著在固相上的液體固體 按兩相所處狀態(tài)分：流動相液體氣體固定相液體液液層析氣液層析固體液固層析氣固層析先決條件： 分配系數(shù)有差異， 差異越大，越容易分開。柱固定相裝于柱內(nèi)紙固定相是液體，吸附在濾紙上，將樣品點(diǎn)在紙上，用流動相展開薄層將有適當(dāng)粘度的固定相涂在薄板上薄膜與紙層析相似，紙用其它高分子有機(jī)吸附劑代替 按操作形式分：吸附固體 吸附能力不同分配液體 分配系數(shù)不同離子交換離子交換劑 親和性不同凝膠多孔凝膠， 通過速度不同親和固定相只能與一種組分結(jié)合，分開其它無親和力的組分 按層析原理分： 固定相 各組分對固定相(1) 紙層析 支持劑：濾紙 固定相：吸附水 流動相：丁醇、醋酸、水 原理： 混合氨基酸在這兩相中不斷 的分配，使他們分布在濾紙 的不同位置?；静襟E：點(diǎn)樣、展層、現(xiàn)色、定性（定量） （2）紙層析 單向紙層析圖Rf值 雙向紙層析圖 相對遷移率 Rf = X/Y X-原點(diǎn)到層析點(diǎn) 的距離 Y-原點(diǎn)到溶劑前 沿距離(2) 柱層