毛細管凝膠電泳重點技術

1、毛細管凝膠電泳技術毛細管電泳技術（Capillary Electrophoresis, CE）又稱高效毛細管電泳（HPCE）或毛細 管分離法（CESM）,是一類以毛細管為分離通道、以高壓直流電場為驅動力，根據(jù)樣品中 各組分之間遷移速度和分派行為上日勺差別而實現(xiàn)分離日勺一類液相分離 年代中后期，它事實上涉及電泳技術和色譜技術及其交叉內(nèi)容，是分析 譜之后日勺又一重大進展。1987年，Cohen刊登了毛細管凝膠電泳勺工作。當電泳從凝膠 板上移到毛細管中后來，發(fā)生了奇跡般日勺變化：分析敏捷度提高到 能檢測一種堿基日勺變化，分離效率達百萬理論塔板數(shù)；分析片段能 大能小，小到辨別單個核苷酸日勺序列，大到分

2、離Mb日勺DNA；分 析時間由本來日勺以小時計算縮減到以分、秒計算。CE可以說是經(jīng) 典電泳技術與現(xiàn)代微柱分離技術完美結合勺產(chǎn)物。毛細管凝膠電泳勺原理不同分子所帶電荷性質、多少不同，形狀、大小各異。一定電解質H日勺緩沖液或其 他溶液內(nèi)，受電場作用，樣本中各組分按一定速度遷移，從而形成電泳。電泳遷移速度（v） 可用下式表達:v=uE其中E為電場強度（E=V/L，V為電壓，L為毛細管總長度）。u為電泳淌度。毛細管凝膠電泳是將板上勺凝膠移到毛細管中作支持物進行日勺電泳。凝膠具有多孔性， 起類似分子篩勺作用，溶質按分子大小逐個分離。凝膠粘度大，能減少溶質勺擴散，所得峰 形鋒利，能達到CE中最高日勺柱效。

3、電流通過導體時產(chǎn)生焦耳熱。老式平板凝膠電泳日勺最大 局限性在于其無法克服兩端高電壓帶來勺焦耳熱所產(chǎn)生日勺負面影響。焦耳熱可使篩分介質內(nèi) 部浮現(xiàn)溫度、粘度及分離速度勺不均一，影響遷移、減少效率、使區(qū)帶變寬。由于這種負面 影響與電場強度成正比，因此極大地限制了高電壓勺引入。也難以提高電泳速度。毛細管電 泳使樣品在一根極細日勺柱子中進行分離。細柱可減小電流，使焦耳熱勺產(chǎn)生減少；同步又增 大了散熱面積，提高散熱效率，大大減少了管中心與管壁間日勺溫差，減少了柱子徑向上日勺多 種梯度差，保證了高效分離。因此可以加大電場強度，達到100200V/cm，全面提高分離 質量。在進行分析時將毛細管內(nèi)布滿了凝膠，毛細管兩端通高壓電，使凝膠內(nèi)帶電分子移到毛 細管相反電荷勺一端。由于不同分子勺大小對電荷比不同，就以不同勺速率在管中移動，達 到毛細管終點也有快有慢。毛細管電泳即依此探測、分離不同分子。毛細管凝膠電泳勺特點所需樣品量少、儀器簡樸、操作簡便。分析速度快，分離效率高，辨別率高，敏捷度高。無需核酸染料，安全無毒。無需制膠，省時省力。無需照膠，杜絕人工分析成果誤差。自動出成果，涉及片段大小和樣品濃度，軟件可輸出電泳峰圖、凝膠電泳圖、DNA片段 堿基差別分析、相對定量分析。毛細管凝膠電泳勺應