《環(huán)境工程微生物學(xué)》微生物培養(yǎng)基

1、二培養(yǎng)基學(xué)以致用養(yǎng)細(xì)菌 水、碳源、氮源、無機(jī)鹽及生長因子等細(xì)菌及其它微生物營養(yǎng)物質(zhì)的合理配制物1.認(rèn)識(shí)化能自養(yǎng)菌氧化硫桿菌的培養(yǎng)基粉末狀硫 10g KH2PO4 4g MgSO4 0.5g CaCl2 0.5g (NH4)2SO4 0.4g FeSO4 0.01g 水 1000mL（自來水即可） 提問：其中各組分作用是什么？空氣中的CO2能源磷源、緩沖物碳源是什么？氮源鹽也可補(bǔ)加一部分碳酸鈉。異養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基中至少有一種有機(jī)物，實(shí)驗(yàn)室中通常是葡萄糖 如一種大腸桿菌培養(yǎng)基葡萄糖 0.5g K2HPO4 1g MgSO4 0.2g NaCl 5g NH4H2PO4 0.4g 水 1000mL2.配

2、制 通常？加水3分類提問：根據(jù)哪些特性可以給培養(yǎng)基分類？物理狀態(tài)、用途、組分組成(一)根據(jù)物理狀態(tài) 固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基1）液體培養(yǎng)基（“湯”）廢水也可看作是一種廣義的液體培養(yǎng)基2）固體培養(yǎng)基（“團(tuán)”）人工做法(與果凍方法一樣)向液體培養(yǎng)基中加入2左右的瓊脂，加熱至100溶解，40下冷卻并凝固。石花菜(紅藻）瓊脂瓊脂主要成份半乳聚糖，分子量大，呈網(wǎng)狀粘著力強(qiáng)，溶解分散（溫度為96以上）條狀瓊脂粉末瓊脂瓊脂特性A.不能被絕大多數(shù)微生物利用、分解液化；提問：有什么好處？不作為額外碳源，干擾試驗(yàn)，保持固體特性B.高壓滅菌結(jié)構(gòu)不被破壞，且顏色透明不妨礙觀察；C.多數(shù)微生物在瓊脂培養(yǎng)基表

3、面生長并形成獨(dú)立菌落；提問：有何好處？易于純化分離3）半固體培養(yǎng)基（“膏”）半流動(dòng)性介于固體與液體之間提問：如何制作？在液體培養(yǎng)基中加入0.5%或更低濃度的瓊脂作用：？半固體培養(yǎng)基中可以融入少量的溶解氧，因此這種培養(yǎng)基常被用于培養(yǎng)在較低氧濃度環(huán)境下才能最佳生長的細(xì)菌。天然的固體培養(yǎng)基土豆塊、培養(yǎng)真菌的麩皮、大米、大麥等。（二）根據(jù)培養(yǎng)基組分天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。1）合成合成純化學(xué)試劑2）天然天然？純生物制品(細(xì)胞提取物)如，常用的細(xì)菌肉湯培養(yǎng)基牛肉膏 3g 蛋白胨 5g水 1000mL pH 7.27.4牛肉膏瘦牛肉經(jīng)過加熱濃縮抽提的膏狀物（主要作碳源）優(yōu)點(diǎn)穩(wěn)定、選擇性缺點(diǎn)很多

4、細(xì)菌營養(yǎng)需求較為復(fù)雜，配方獲取較難（二）根據(jù)培養(yǎng)基組分類似物如酵母膏、麥芽汁、土壤浸出液、牛奶、玉米粉優(yōu)點(diǎn)營養(yǎng)豐富、配制容易缺點(diǎn)？質(zhì)量不穩(wěn)定、選擇性差；3）半合成半不純優(yōu)缺點(diǎn)介于前兩者之間，因而使用最廣。蛋白胨動(dòng)植物蛋白（大豆或動(dòng)物骨粉等）經(jīng)初步酶解形成的短肽（主要作氮源）酵母膏(三)根據(jù)培養(yǎng)基用途普通型、選擇型、鑒別型1）普通普適有兩種制備思路：？肉湯培養(yǎng)基牛肉膏 3g 蛋白胨 5g水 1000mL pH 7.27.42）選擇性培養(yǎng)基選擇性？待選的細(xì)菌能優(yōu)勢生長 投毒法（“正考試”）常用物質(zhì)為染料、膽汁酸鹽、金屬鹽類、酸、堿和抗生素。例如欲分離古細(xì)菌，培養(yǎng)基中通常加入青霉素（由于古細(xì)菌的細(xì)胞

5、壁不同于普通細(xì)菌，因而不會(huì)被對(duì)破壞普通細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的青霉素殺死），古細(xì)菌就唯一分離并存活下來。膽汁酸鹽抑制革蘭氏陽性菌提問：它能選擇性生長那種細(xì)菌？革蘭氏陰性細(xì)菌毒選擇性的抑制劑待選細(xì)菌有抗性投其所好法（“邪挖墻角”）好營養(yǎng)、環(huán)境因子（1）專一性營養(yǎng)源培養(yǎng)法待選細(xì)菌專門需要的某種碳源或氮源例如篩選纖維素分解菌選用纖維素作為培養(yǎng)基中的唯一碳源；各類降解石化廢水特殊有機(jī)物的細(xì)菌篩選通常是以這類有機(jī)物為培養(yǎng)基中的唯一碳源，將目的細(xì)菌富集篩選下來。（2）理化因素控制法理化因素特殊的溫度、氧氣、pH、鹽度等環(huán)境條件主要用于篩選極端環(huán)境微生物。如嗜鹽、嗜熱、嗜冷、嗜酸、嗜堿等的細(xì)菌，同時(shí)也被用于選擇性培

6、養(yǎng)好氧或厭氧細(xì)菌。嗜冷菌嗜熱菌3）鑒別培養(yǎng)基鑒別明查分別（細(xì)菌種類）提供培養(yǎng)環(huán)境外還同時(shí)具有類似于“驗(yàn)鈔機(jī)”的作用 方法？鑒加入指示劑（“紫光燈”）別不同菌落制造不同的代謝物（“有無熒光粉”），顯色不一3）鑒別培養(yǎng)基舉例水處理中常用的遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基就是典型大腸菌群內(nèi)不同種屬細(xì)菌的鑒別培養(yǎng)基。都能生長，但對(duì)乳糖的分解能力不同大腸埃希氏菌強(qiáng)，菌落紫紅色帶金屬光澤枸櫞酸鹽桿菌次之，菌落呈紫紅或深紅色產(chǎn)氣桿菌第三，菌落呈淡紅色副大腸桿菌不能分解乳糖，菌落無色透明4）富集培養(yǎng)基（加富）加富營養(yǎng)特別豐富針對(duì)細(xì)菌數(shù)量少，或?qū)I養(yǎng)要求苛刻培養(yǎng)不易的細(xì)菌 方法？植物提取液、動(dòng)物組織提取液、土壤浸出液、血和血清等。

7、三、營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和運(yùn)輸細(xì)胞膜的選擇吸收 分四種情況水、無機(jī)鹽、氣體、甘油等小分子1被動(dòng)擴(kuò)散?推動(dòng)力?推動(dòng)力濃度梯度無載體蛋白不 內(nèi)部能量消耗YorN?乞討 2促進(jìn)擴(kuò)散促進(jìn)載體蛋白協(xié)助 載體蛋白 細(xì)胞外 | 細(xì)胞膜 | 細(xì)胞內(nèi)糖、氨基酸、金屬離子等?推動(dòng)力濃度梯度有載體蛋白不 內(nèi)部能量消耗YorN?推動(dòng)力?拉贊助3主動(dòng)運(yùn)輸運(yùn)輸載體蛋白主動(dòng)逆濃度梯度方向糖、氨基酸、有機(jī)酸 Na+、K+、硫酸根、磷酸根等?推動(dòng)力ATP放能有載體蛋白消耗 內(nèi)部能量消耗YorN?推動(dòng)力?搶劫細(xì)胞膜細(xì)胞外細(xì)胞內(nèi)酶1磷酸烯醇式丙酮酸酶2熱穩(wěn)定蛋白丙酮酸葡萄糖高能磷酸促進(jìn)擴(kuò)散 高能磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移磷酸化自由能升高，能量級(jí)別、位置的升高。轉(zhuǎn)位磷酸葡萄糖4.基團(tuán)轉(zhuǎn)位基團(tuán)被轉(zhuǎn)運(yùn)的營養(yǎng)物轉(zhuǎn)位？洗錢提問：磷酸化的益處？（一）活化參與代謝;（二）防止?fàn)I養(yǎng)物從細(xì)胞內(nèi)流失（細(xì)胞質(zhì)膜對(duì)大多數(shù)磷酸化的化合物有高度不滲透性）；（三）保持營養(yǎng)物在細(xì)胞內(nèi)的低