應(yīng)用人巨細(xì)胞病毒核酸擴(kuò)增反應(yīng)對(duì)復(fù)方黃芪顆粒治療感染人巨細(xì)胞

1、應(yīng)用人巨細(xì)胞病毒-核酸擴(kuò)增反響對(duì)復(fù)方黃芪顆粒治療感染人巨細(xì)胞【關(guān)鍵詞】應(yīng)用摘要：目的應(yīng)用人巨細(xì)胞病毒-核酸擴(kuò)增HVPR反響討論中藥復(fù)方黃芪顆粒對(duì)感染HV小鼠治療作用。方法用小鼠尾靜脈染毒法建立HV全身獲得性感染模型，并用復(fù)方黃芪顆粒給小鼠灌胃治療，然后應(yīng)用HVPR反響測(cè)定其內(nèi)臟HVDNA陽(yáng)性率。結(jié)果復(fù)方黃芪顆粒42.0，21.0g/kg組HVDNA陽(yáng)性率明顯低于模型組P0.05。結(jié)論復(fù)方黃芪顆粒對(duì)感染HV小鼠有一定的治療作用。關(guān)鍵詞：人巨細(xì)胞病毒-核酸擴(kuò)增HVPR；復(fù)方黃芪顆粒；人巨細(xì)胞病毒；人巨細(xì)胞病毒感染小鼠模型EvaluatinfurativeEffetfRadixAstragaliGr

2、ainSallRatutreatingHuanytegalvirusInfetininiebytheHV-PRRespndAbstrat：bjetiveTstudytheurativeeffetfradixastragaligrainfhineseherbalediinepundpresribenrightinfetinHVbyHVPRrespnd.ethdsDyethepisnethdtestablishtheHVhlebdytaquireithvEinfietailsexydyethedel,andunterattheradixastragaligrainfpundpresribetthe

3、ierespetivelythetreatent,thenapplytheHVPRtrespndteasuresethealeratefHVDNAfitsinternalrgans.ResultsRadixastragaligrainfpundpresribe42.0g/kg，21.0g/kgaleratefHVDNAfsetsesbviuslyarriveinthedelset(P0.05).nlusinTheradixastragaligrainfpundpresribetreatentinfetinHViehadertainlyfuntin.Keyrds：HV-PR;Radixastra

4、galigrain;Huanytegalvirus;SallratdelfHVinfetin人巨細(xì)胞病毒Huanytegalvirus,HV感染非常普遍。在婦產(chǎn)科，妊娠婦女孕早期原發(fā)HV感染可造成流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、畸形，宮內(nèi)生長(zhǎng)緩慢、智力低下及聽力損害等。目前，尚無對(duì)妊娠期HV活動(dòng)性感染平安有效的治療方法。本研究首次采用小鼠尾靜脈染毒法建立HV全身獲得性感染模型，并進(jìn)展了復(fù)方黃芪顆粒對(duì)感染小鼠體內(nèi)研究，應(yīng)用HVPR測(cè)定，證實(shí)黃芪顆粒組HVDNA陽(yáng)性率明顯低于模型組。現(xiàn)將本研究結(jié)果報(bào)道如下。1材料1.1標(biāo)本搜集和處理選取60只雄性小鼠，1822g，共分6組，每組10只，分別為復(fù)方黃芪顆粒大、中、

5、小劑量組，陰性對(duì)照組，模型病毒組和陽(yáng)性對(duì)照組。均采用小鼠尾靜脈注射HV10-1，每只0.1l,陰性對(duì)照組注射0.9%生理鹽水，每只0.1l，于染毒第2天開場(chǎng)治療。大劑量組42.0g/kg，中劑量組21.0g/kg，小劑量組10.5g/kg，陰性對(duì)照組及模型病毒對(duì)照組均給蒸餾水，上述各組給藥途徑為灌胃，每天每只0.5l，陽(yáng)性對(duì)照組更昔洛韋，實(shí)驗(yàn)完畢時(shí)，取主要臟器做HVPR。1.2HVPR引物按文獻(xiàn)1，由山東省醫(yī)科院生物醫(yī)學(xué)研究中心合成并純化，引物序列：上游引物為5-GATGAATTGTTAAG-3，下游引物為5-GGAGTATGTGATGGGA-3。2實(shí)驗(yàn)方法PR檢測(cè)標(biāo)本中HV-DNA片段，每次

6、擴(kuò)增均設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。PR體系25l,其中含10PR緩沖液2.5l，2.5lL-1dNTP21l,上下游混合物各10lL-11.5l，TaqDNA聚合酶1l，標(biāo)本處理后取10l提取物，無菌蒸餾水加至25l，覆以30l無菌石蠟油。反響按941in，561in,711in,40個(gè)循環(huán)，最后于72保溫10in，擴(kuò)增物經(jīng)2%瓊脂電泳，溴乙淀染色，紫外燈下檢測(cè)熒光條帶，與陽(yáng)性模板同一位置即為陽(yáng)性。產(chǎn)物長(zhǎng)度151bp。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3結(jié)果上述結(jié)果說明，黃芪顆粒組HV-DNA陽(yáng)性率明顯低于模型組，與模型組比擬有明顯差異P0.05，與陰性對(duì)照組相近，小劑量組與模型組相比雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但其陽(yáng)性率

7、明顯低于模型組。結(jié)果見表1，圖12。表1復(fù)方黃芪顆粒對(duì)感染HV小鼠HV-DNA影響組別略4討論診斷HV感染主要依靠實(shí)驗(yàn)室檢查。利用特異抗HV單克隆抗體的免疫組化技術(shù)，從病毒別離培養(yǎng)、病變組織、脫落細(xì)胞及外周血中直接檢測(cè)到HV抗原，提示存在活動(dòng)性HV感染，是診斷HV感染可靠的根據(jù)。因受靈敏度限制，檢測(cè)HV抗原的免疫組化技術(shù)尚難于檢出微量存在的病毒抗原，不能滿足臨床診斷要求，進(jìn)步其靈敏度亟待解決3。原位免疫PR技術(shù)2，可用于檢測(cè)微量存在的抗原，極大地進(jìn)步了免疫組化檢測(cè)的敏感性，我們利用其根本原理,建立了檢測(cè)HV抗原的原位免疫PR方法,用于診斷活動(dòng)性HV感染。研究結(jié)果說明，本法檢測(cè)HV感染的小鼠內(nèi)臟

8、組織細(xì)胞，可在感染后8h明晰地檢出陽(yáng)性信號(hào)，與常規(guī)免疫組化相比陽(yáng)性信號(hào)強(qiáng)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)多，顯示高敏感度。HV感染細(xì)胞后可在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)即刻早期、早期和晚期蛋白，即刻早期、早期蛋白通常在病毒復(fù)制前即可產(chǎn)生，其存在提示病毒呈活動(dòng)狀態(tài)4。本法采用pBV220質(zhì)粒DNA片段作為指示元件DNA，它是與人基因組無關(guān)的DNA片段，與HV-DNA序列也無同源性。在檢測(cè)中平行設(shè)置的陰性對(duì)照(正常小鼠內(nèi)臟組織細(xì)胞、不加抗HV單抗),無陽(yáng)性信號(hào)出現(xiàn)。同時(shí)我們用本法檢測(cè)了搜集到的5例因感染HV小鼠內(nèi)臟組織標(biāo)本，也呈陽(yáng)性染色。且黃芪顆粒組HV-DNA陽(yáng)性率明顯低于模型組，與模型組比擬有明顯差異P0.05，與陰性對(duì)照組相近，小劑量組與模型組相比雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但其陽(yáng)性率明顯低與于模型組，顯示本法有較強(qiáng)特異性。本研究成功地將原位免疫PR技術(shù)應(yīng)用于HV感染小鼠模型診斷，顯著進(jìn)步了HV感染診斷敏感性，為中藥復(fù)方黃芪顆粒治療HV感染療效評(píng)價(jià)提供重要的參考根據(jù)。參考文獻(xiàn)：1AlainS.Transplanatin,1997，63:1533.2張波，董荷，陸哲明，等.進(jìn)步免疫組織化學(xué)敏感性的原位免疫聚合酶鏈反響技術(shù)J.中華病理學(xué)雜志，1995,24(3):182.3董永綏.繼續(xù)深化進(jìn)展巨細(xì)胞病毒感染的研究J.中華兒科雜志,1995,33(1):34.4GaetaA,Nazzari,Angelettis,etal.nitr