高效液相色譜測(cè)定法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

1、SOP-02-QC-014/0.0SOP-02-QC-014/0.0高效液相色譜測(cè)定法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程第 頁(yè)共7頁(yè)SOP-02-QC-0140.0SOP-02-QC-0140.0高效液相色譜測(cè)定法標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程第4頁(yè)共7頁(yè)W、1W、1當(dāng)對(duì)測(cè)定結(jié)果有異議時(shí)，色譜柱的理論板數(shù)（n）和分離度（R）均以峰寬（W）的計(jì)算結(jié)果為準(zhǔn)。靈敏度用于評(píng)價(jià)色譜系統(tǒng)檢測(cè)微量物質(zhì)的能力，通常以信噪比（S/N）來表示。通過測(cè)定一系列不同濃度的供試品或?qū)φ掌啡芤簛頊y(cè)定信噪比。定量測(cè)定時(shí)，信噪比應(yīng)不小于10；定性測(cè)定時(shí)，信噪比應(yīng)不小于3。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中可以設(shè)置靈敏度實(shí)驗(yàn)溶液來評(píng)價(jià)色譜系統(tǒng)的檢測(cè)能力。拖尾因子（T）用于評(píng)價(jià)色譜峰的

2、對(duì)稱性。拖尾因子計(jì)算公式為：TWT0.05h2di式中：W.0為5%峰高處的峰寬；d為峰頂在5%峰高處橫坐標(biāo)平行線的投影點(diǎn)至峰前沿與此平行線交點(diǎn)的距離（如圖）。r4=/r71m1以峰高作定量參數(shù)時(shí)，除另有規(guī)定外，T值應(yīng)在0.95T.05之間。以峰面積作定量參數(shù)時(shí)，一般的峰拖尾或前伸不會(huì)影響峰面積積分，但嚴(yán)重拖尾會(huì)影響基線和色譜峰起止的判斷和峰面積積分的準(zhǔn)確性，此時(shí)應(yīng)在品種正文項(xiàng)下對(duì)拖尾因子作出規(guī)定。重復(fù)性用于評(píng)價(jià)色譜系統(tǒng)連續(xù)進(jìn)樣時(shí)響應(yīng)值的重復(fù)性能。采用外標(biāo)法時(shí)，通常取各品種項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%，采用標(biāo)法時(shí)，通常配制相當(dāng)于80

3、%、100%和120%的對(duì)照品溶液，加入規(guī)定量的標(biāo)溶液，配成3種不同濃度的溶液，分別至少進(jìn)樣2次，計(jì)算平均校正因子，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。4.3測(cè)定法4.3.1標(biāo)法按品種正文項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱（量）取對(duì)照品和標(biāo)物質(zhì)，分別配成溶液，各精密量取適量，混合配成校正因子測(cè)定用的對(duì)照溶液。取一定量進(jìn)樣，記錄色譜圖。測(cè)量對(duì)照品和標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰髙，按下式計(jì)算校正因子：校正因子（f）=as/CsA/cRR式中A為標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高；SA為對(duì)照品的峰面積或峰高；Rc為標(biāo)物質(zhì)的濃度；Sc為對(duì)照品的濃度。R再取各品種項(xiàng)下含有標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)量供試品中待測(cè)成分和標(biāo)物質(zhì)的峰面積或

4、峰高，按下式計(jì)算含量：含量）二fXA/cSS式中A為供試品的峰面積或峰高；Xc為供試品的濃度；XA為標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高；Scs為標(biāo)物質(zhì)的濃度；f為標(biāo)法校正因子。采用標(biāo)法，可避免因供試品前處理及進(jìn)樣體積誤差對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。4.3.2外標(biāo)法按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱（量）取對(duì)照品和供試品，配制成溶液，分別精密取一定量，進(jìn)樣，記錄色譜圖，測(cè)量對(duì)照品溶液和供試品溶液中待測(cè)物質(zhì)的峰面積（或峰高），按下式計(jì)算含量：含量(c)=cXX式中各符號(hào)意義同上。由于微量注射器不易精確控制進(jìn)樣量，當(dāng)采用外標(biāo)法測(cè)定時(shí)，以手動(dòng)進(jìn)樣器定量環(huán)或自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣為宜。4.3.3加校正因子的主成分自身對(duì)照法測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí)，可采

5、用加校正因子的主成分自身對(duì)照法。在建立方法時(shí)，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱（量）取待測(cè)物對(duì)照品和參比物質(zhì)對(duì)照品各適量，配制待測(cè)物校正因子的溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，按下式計(jì)算待測(cè)物的校正因子。BB式中c為待測(cè)物的濃度；AA為待測(cè)物的峰面積或峰髙；Ac為參比物質(zhì)的濃度；BA為參比物質(zhì)的峰面積或峰髙。B也可精密稱（量）取主成分對(duì)照品和雜質(zhì)對(duì)照品各適量，分別配制成不同濃度的溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，繪制主成分濃度和雜質(zhì)濃度對(duì)其峰面積的回歸曲線，以主成分回歸直線斜率與雜質(zhì)回歸直線斜率的比計(jì)算校正因子。校正因子可直接載入各品種項(xiàng)下，用于校正雜質(zhì)的實(shí)測(cè)峰面積。需作校正計(jì)算的雜質(zhì)，通常以主成分為參比，采用相對(duì)保留

6、時(shí)間定位，其數(shù)值一并載入各品種項(xiàng)下。測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí)，按各品種項(xiàng)下規(guī)定的雜質(zhì)限度，將供試品溶液稀釋成與雜質(zhì)限度相當(dāng)?shù)娜芤海鳛閷?duì)照溶液；進(jìn)樣，記錄色譜圖，必要時(shí)，調(diào)節(jié)縱坐標(biāo)圍（以噪聲水平可接受為限）使對(duì)照溶液的主成分色譜峰的峰高約達(dá)滿量程的10%25%。除另有規(guī)定外，通常含量低于0.5%的雜質(zhì)，峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)小于10%；含量在0.5%2%的雜質(zhì)，峰面積的RSD應(yīng)小于5%；含量大于2%的雜質(zhì)，峰面積的RSD應(yīng)小于2%。然后，取供試品溶液和對(duì)照溶液適量，分別進(jìn)樣，除另有規(guī)定外，供試品溶液的記錄時(shí)間，應(yīng)為主成分色譜峰保留時(shí)間的2倍，測(cè)量供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)的峰面積，分別乘以相應(yīng)的

7、校正因子后與對(duì)照溶液主成分的峰面積比較，計(jì)算各雜質(zhì)含量。4.3.4不加校正因子的主成分自身對(duì)照法測(cè)定雜質(zhì)含量時(shí)，若無法獲得待測(cè)雜質(zhì)的校正因子，或校正因子可以忽略，也可采用不加校正因子的主成分自身對(duì)照法。同上述4.3.3法配制對(duì)照溶液、進(jìn)樣調(diào)節(jié)縱坐標(biāo)圍和計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差后，取供試品溶液和對(duì)照品溶液適量，分別進(jìn)樣。除另有規(guī)定外，供試品溶液的記錄時(shí)間應(yīng)為主成分色譜峰保留時(shí)間的2倍，測(cè)量供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)的峰面積并與對(duì)照溶液主成分的峰面積比較，依法計(jì)算雜質(zhì)含量。4.3.5面積歸一化法按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，配制供試品溶液，取一定量進(jìn)樣，記錄色譜圖。測(cè)量各峰的面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積，計(jì)算各峰面積占總峰面積的百分率。用于雜質(zhì)檢