平面色譜法講稿

1、關(guān)于平面色譜法第一張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 概述平面色譜法（PC）： 在平面上進(jìn)行分離紙色譜法 薄層色譜法第二張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月一、平面色譜法的特點(diǎn)固定相一次使用，樣品預(yù)處理簡單，對被分離物質(zhì)沒有限制分離能力強(qiáng)，展開時(shí)間短，一次可以同時(shí)展開多個(gè)試樣 所用儀器簡單，操作方便缺點(diǎn)：自動化程度低，分辨率和重現(xiàn)性較差第三張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月二、平面色譜的主要技術(shù)參數(shù)平面色譜定性參數(shù)及相平衡參數(shù)比移值 相對比移值平面色譜分離評價(jià)參數(shù)分離度平面色譜板效參數(shù)理論塔板數(shù) 理論塔板高度第四張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月1、平面色譜

2、定性參數(shù)及相平衡參數(shù)關(guān)系比移值：溶質(zhì)移動距離與流動相移動距離之比定性參數(shù)第五張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月討論 Rf與K有關(guān)，即與組分性質(zhì)、平面板和展開劑的性質(zhì)有關(guān) K大，Rf小色譜條件一定，Rf只與組分性質(zhì)有關(guān)，是平面色譜基本定性參數(shù)，說明組分保留行為Rf范圍：0 Rf 1 Rf = 0.20.8（常用）；0.30.5（最佳）相平衡參數(shù)第六張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月相對比移值Rs 討論參考物與被測組分在完全相同條件下展開；可消除系統(tǒng)誤差，提高重現(xiàn)性和可靠性相對比移值Rs與組分、參考物性質(zhì)及色譜條件有關(guān)，范圍可以大于或小于1參比物i被測物s原點(diǎn)L2L1第七張，PPT

3、共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月2、平面色譜分離評價(jià)參數(shù)分離度：兩相鄰斑點(diǎn)中心距離與兩斑點(diǎn)平均寬度（直徑）的比值相臨兩斑點(diǎn)間距離越大，斑點(diǎn)越集中，分離度越大，分離效率越高當(dāng)R1.5時(shí)，相臨斑點(diǎn)可達(dá)到基線分離第八張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月TLC分離度與比移值的關(guān)系Rf =0.3 時(shí) 分離度R最大Rf = 0.20.5時(shí) 分離度R變化不大Rf 0.1或Rf 0.7時(shí) 分離度R急劇下降 第九張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月3、平面色譜板效參數(shù)理論塔板高度L為原點(diǎn)距斑點(diǎn)中心的距離W為組分斑點(diǎn)的寬度L0為原點(diǎn)距溶劑前沿的距離理論塔板數(shù)W 越小，n 越大，H 值越小，板效越高第十

4、張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月三、平面色譜法操作流程圖活化第十一張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月一、概述1定義： 將固定相均勻涂布在表面光滑的平板上，形成薄層而進(jìn)行色譜分離和分析的方法。第二節(jié)、薄層色譜法 TLC2分離機(jī)制 吸附薄層色譜 分配薄層色譜 空間排阻薄層色譜 膠束薄層色譜第十二張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月二、吸附薄層色譜材料氧化鋁、硅膠纖維素、聚酰胺（一）固定相吸附劑第十三張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月1.硅膠：最常用的吸附劑，SiO2XH2O吸附的原因 氫鍵作用吸附活性中心硅膠含水量%05152538活性級吸附強(qiáng)弱： 五級; 級數(shù)高,

5、 含水量大, 吸附力弱第十四張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月1）物質(zhì)極性，吸附能力 強(qiáng)極性吸附中心，不易洗脫2）吸水占用活性位點(diǎn)失活105110OC烘干30min(活化)，吸附力最大 500OC烘干(不可逆失水)無吸附力適用：硅膠具微酸性，分析酸性或中性物質(zhì) 硅膠特性：1.硅膠：最常用的吸附劑，SiO2XH2O第十五張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月堿性（pH 910）: 分離堿性及中性化合物。如生物堿等。酸性（pH 45）: 用于分離酸性中性物質(zhì)。如酸性色素、氨基酸等。 中性（pH 7.5）: 用途最廣，適于分析酸性堿性和中性物質(zhì)，如生物堿、揮發(fā)油、甾體等。 2.氧化鋁第十

6、六張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月吸附的原因氫鍵。吸附強(qiáng)弱： 五級，級數(shù)高，含水量大，吸附力弱 2.氧化鋁氧化鋁含水量%0361015活性級第十七張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 常用的是聚己內(nèi)酰胺，商名為錦綸、尼龍-6、卡普隆等。 吸附的原因氫鍵 聚酰胺分子內(nèi)存在著許多酰胺基，可與酚、酸、醌等形成氫鍵 氫鍵能力強(qiáng)，組分越后出柱 3.聚酰胺第十八張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月疏水改性硅膠（非極性鍵合相）4.改性硅膠 借化學(xué)反應(yīng)方法將有機(jī)分子以共價(jià)鍵連接在硅醇基上，稱化學(xué)鍵合固定相。 親水改性硅膠（極性鍵合相） 介于極性和疏水改性吸附劑間的色譜選擇性反相色譜采用高

7、含水溶劑，需低疏水改性硅膠第十九張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月玻板： 5cm10cm、10cm20cm、20cm20cm（二）載板 具一定機(jī)械強(qiáng)度，化學(xué)惰性，耐一定溫度、表面平整、厚度均勻、價(jià)格便宜光滑、平整、洗凈后不附水珠、干燥二、吸附薄層色譜材料第二十張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月含粘結(jié)劑固定相： 硅膠G含13%15%煅石膏 制備硅膠G含30%煅石膏 氧化鋁G含9%煅石膏不含粘結(jié)劑固定相：硅膠H（三）粘結(jié)劑 加強(qiáng)固定相顆粒的附著力，增加薄層板的潤濕性1）無機(jī)粘結(jié)劑：煅石膏二、吸附薄層色譜材料第二十一張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月2）有機(jī)粘結(jié)劑： 羧甲基纖

8、維素鈉（CMC） 0.8%CMC溶液配勻漿涂鋪的薄層板強(qiáng)度高，色譜分離性能好注意：不適合濃硫酸顯色，易霉變降解（三）粘結(jié)劑二、吸附薄層色譜材料第二十二張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月作用：適當(dāng)波長激發(fā)光照射下可以產(chǎn)生均勻的熒光背景，清晰顯示化合物的暗斑短波熒光指示劑： 254nm 錳激活的硅酸鋅；鈉熒光素，陰極綠長波熒光指示劑： 365nm 銀激活的硫化鋅、硫化鎘；彩藍(lán)（四）熒光指示劑二、吸附薄層色譜材料第二十三張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 硅膠H不含粘合劑 硅膠G硅膠和煅石膏混合而成 硅膠HF254不含粘結(jié)劑，含熒光指示劑 254 nm呈現(xiàn)強(qiáng)綠色熒光背景 硅膠GF25

9、4同時(shí)含粘結(jié)劑和熒光指示劑 254 nm呈現(xiàn)強(qiáng)綠色熒光背景硅膠HF254+365不含粘結(jié)劑，含熒光劑 254 nm和356 nm呈現(xiàn)熒光背景第二十四張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 被分離物質(zhì)的極性 展開劑的極性 吸附劑的活度選擇根據(jù)三、吸附劑和流動相的選擇：第二十五張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月1、被分離物質(zhì)的極性烷烴 烯烴 醚 硝基化合物 二甲胺 酯 酮 醛 胺 酰胺 醇 酚 羧酸三、吸附劑和流動相的選擇：第二十六張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 石油醚 環(huán)己烷 二硫化碳 三氯乙烷 苯 甲苯 二氯甲烷 氯仿 乙醚 乙酸 乙酯 丙酮 正丁醇 乙醇 甲醇 吡啶

10、酸“相似相溶”原則 根據(jù)組分性質(zhì)選擇適當(dāng)極性的流動相2. 展開劑的極性選擇：三、吸附劑和流動相的選擇：第二十七張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月極性化合物選用吸附活性小的（活度級別大的）薄層板，極性大的強(qiáng)洗脫劑展開非極性化合物選用吸附活性大的（活度級別小的）薄層板，極性小的強(qiáng)洗脫劑展開以感興趣Rf值是否在0.30.5間為衡量標(biāo)準(zhǔn)三、吸附劑和流動相的選擇：3、薄層板活度級別選擇第二十八張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月4、TLC色譜條件選擇原則三、吸附劑和流動相的選擇：第二十九張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月四、薄層色譜操作過程第三十張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022

11、年6月四、薄層色譜操作過程1、薄層制備（鋪板） 1份吸附劑+3份粘合劑+水 調(diào)成糊狀，均勻涂布薄層板硅膠G：自含粘合劑，僅加水。硅膠H：不含粘合劑。需另加粘合劑。第三十一張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月 薄層放置110烘30min，干燥器中備用 吸附劑活性越高，活性級別越低； 最好二級或三級 不可將剛涂布好的薄層板立即烘烤活化2、活化四、薄層色譜操作過程第三十二張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月3、點(diǎn)樣溶解試樣的溶劑盡量避免用水配置試樣濃度約為0.01%0.1%點(diǎn)樣四、薄層色譜操作過程點(diǎn)樣裝置：容量毛細(xì)管；自動薄層色譜點(diǎn)樣儀第三十三張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月點(diǎn)

12、樣原點(diǎn)應(yīng)小而圓，距板邊緣2cm 多次點(diǎn)樣（每次揮干后），防止邊緣效應(yīng) 點(diǎn)樣量勿超載，防止拖尾 點(diǎn)樣勿傷及薄層表面第三十四張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月4、展開展開過程： 展開室預(yù)先用展開劑飽和，平衡系統(tǒng) 點(diǎn)樣薄板一端浸入展開劑展開（距邊緣0.51 cm） 揮盡溶劑 展開室通常為圓形或長方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃蓋，應(yīng)能密閉。四、薄層色譜操作過程第三十五張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月5、定位光學(xué)檢出法：直接觀察、熒光顯示技術(shù)試劑顯色法：噴霧顯色法，浸漬顯色法四、薄層色譜操作過程薄層色譜常用通用型顯色劑 碘蒸氣法 10%硫酸乙醇溶液 0.05%熒光黃甲醇溶液第三十六張，P

13、PT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月日光，紫外光，顯色劑顯示測出Rf值 相同條件下展開，與已知標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對照進(jìn)行定性鑒別。6、定性分析四、薄層色譜操作過程第三十七張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月7、定量分析四、薄層色譜操作過程洗脫方法：顯色后取下斑點(diǎn)，用溶劑定量洗脫，收集洗脫液以適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行定量測定。目視比較法：顯色后比較標(biāo)準(zhǔn)系列與樣品的斑點(diǎn)顏色或面積大小。薄層掃描法：顯色后用薄層掃描儀掃描定量。第三十八張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月1、薄層掃描法檢測茶堿中毒者血清中茶堿濃度2、TLC同時(shí)測定10種精神安定藥物血藥濃度3、異煙肼中毒快速檢驗(yàn)4、尿液中利福平的測定5、薄層掃

14、描法測定血漿中的度冷丁五、薄層色譜的應(yīng)用 中草藥和中成藥的鑒別及成分分析 判斷合成反應(yīng)進(jìn)行的程度 藥物的純度和雜質(zhì)限量試驗(yàn) 臨床藥物分析第三十九張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月2010版藥典（二部）采用TLC的品種數(shù)量，共435個(gè)TLC品種數(shù)量硅膠G254個(gè)品種硅膠G254148個(gè)品種硅膠H15個(gè)品種硅膠HF25412個(gè)品種硅藻土2個(gè)品種微晶纖維素3個(gè)品種氧化鋁1個(gè)品種第四十張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月2005年版收載薄層色譜定性鑒別1507項(xiàng)2010年版新增薄層色譜定性鑒別2494項(xiàng)味連 雅連 云連三種黃連的薄層色譜圖像第四十一張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月北五味子與南五味子的薄層色譜鑒別北五味子Fructus Schisandriae chineses南五味子FructusSchisandriae sphenantheraeReferenceg-schisandrin（五味子乙素）Schizandrin（五味子甲素）Schisantherin (Gomisin C)（五味子酯甲）Schisandrin (五味子醇甲）第四十二張，PPT共四十六頁，創(chuàng)作于2022年6月白芷異歐前胡素歐前胡素 1 2 3 s 4 5 61白芷（浙江） 2白芷（磐安） 3白芷（杭州）4白芷對照藥材5、6白芷（四川遂寧）第四十三張，PPT共四十六頁，