演示文稿分析方法驗證的基本思路

1、演示文稿分析方法驗證的基本思路第一頁，共三十二頁。（優(yōu)選）分析方法驗證的基本思路第二頁，共三十二頁。3測定方法HPLCGC滴定分析方法類型含量有關(guān)物質(zhì)或溶殘溶劑殘留含量驗證項目系統(tǒng)適應(yīng)性YesYesYesNo專屬性YesYesYesYes (空白校正)精密度YesYesYesYes線性及范圍YesYesYesYes準(zhǔn)確度YesYesYesNo定量限及檢測限NoYesYesNo耐用性YesYesYesYes第三頁，共三十二頁。44含量（HPLC）一系統(tǒng)適應(yīng)性2. 專屬性3. 精密度線性及范圍準(zhǔn)確度耐用性第四頁，共三十二頁。系統(tǒng)適應(yīng)性是分析方法達到其分析目的的前提；嚴(yán)格說來，作為方法驗證的一個項目

2、是合適的；在分析方法驗證前應(yīng)進行系統(tǒng)適應(yīng)性的測試，并在驗證過程中確保系統(tǒng)適應(yīng)性符合要求。55含量（HPLC）1. 系統(tǒng)適應(yīng)性溶液配制 空白溶液；系統(tǒng)適應(yīng)性溶液；對照液可接受標(biāo)準(zhǔn)滿足專論的系統(tǒng)適應(yīng)性要求；對稱因子應(yīng)在0.81.5之間（EP 2.2.46）；RSD （EP 2.2.46 & USP 621）需報告內(nèi)容主峰與已知雜質(zhì)RT（RRT）；分離度；主峰峰面積及RSD；可能包括拖尾因子或?qū)ΨQ因子或理論塔板數(shù) 。第五頁，共三十二頁。66含量（HPLC）2. 專屬性溶液配制 空白溶液；對照液；供試液可接受標(biāo)準(zhǔn)空白溶液在供試液和對照液中主峰RT處無干擾；供試液中主峰RT與對照液中主峰RT保持一致；供

3、試液與對照液中主峰的峰純度因子995或者符合色譜系統(tǒng)默認(rèn)參數(shù)需報告內(nèi)容主峰RT及主峰純度因子第六頁，共三十二頁。中間精密度：同一實驗室內(nèi)不同人、不同日期、不同儀器重現(xiàn)性：不同實驗室之間3. 精密度對方法 n次重復(fù)，不是對某個溶液 n次重復(fù)重復(fù)性溶液配制對照液，2份；供試液，6份可接受標(biāo)準(zhǔn)RSD（n=6）2.0%重現(xiàn)性溶液配制同重復(fù)性可接受標(biāo)準(zhǔn)RSD（n=6）2.0%；RSD（n=12）2.0%；（作用不大）重復(fù)性與重現(xiàn)性均值的絕對差值2.0%；樣品檢測溶液配制ATS和基地對不同于驗證使用的另一批次樣品進行檢測。可接受標(biāo)準(zhǔn)ATS與基地QC檢測的含量的絕對差值2.0%。重現(xiàn)性中已經(jīng)進行，此項不一定

4、必需需報告內(nèi)容主峰峰面積；6份及12份含量單值，MeanSD，RSD；95%CI（n=6）；含量均值的絕對差值。7第七頁，共三十二頁。8溶液名稱進樣針數(shù)目的空白溶液 1或2針消除殘留，排除干擾，通常必需專屬性溶液1或2針若非綜合驗證，不必需系統(tǒng)適應(yīng)性溶液 1針看系統(tǒng)適應(yīng)性項目和要求對照液1 5針/6針這是真正的系統(tǒng)適應(yīng)性對照液22針供試液6份各1針對照液12針重現(xiàn)性下進樣序列：第八頁，共三十二頁。線性和范圍是兩個不同的概念。應(yīng)根據(jù)方法的特征首先確定范圍，然后在范圍內(nèi)驗證方法的線性Y軸截距的大小應(yīng)當(dāng)根據(jù)范圍的開始點設(shè)定，對于含量等范圍較窄，且范圍起始點離遠(yuǎn)點較遠(yuǎn)的方法，Y軸截距不必需或者應(yīng)放寬。

5、99含量（HPLC）4. 線性及范圍溶液配制 50%150%的線性溶液（至少5個點）可接受標(biāo)準(zhǔn)r 0.9990;Y軸截距/100%濃度時Y軸響應(yīng)值的絕對值2.0%需報告內(nèi)容線性點的實際濃度及峰面積；線性圖；線性范圍；線性方程；相關(guān)系數(shù)；殘差平方和；Y軸截距；Y軸截距的95%CI；Y軸截距/100%濃度時Y軸響應(yīng)值的絕對值。第九頁，共三十二頁。1010含量（HPLC）5. 準(zhǔn)確度溶液配制 80%，100%，120%的準(zhǔn)確度溶液各三份，可用一個母 液稀釋。可接受標(biāo)準(zhǔn)單個回收率及平均回收率應(yīng)在98.0%102.0%；回收率（n=9）的RSD2.0%。需報告內(nèi)容實際測得值；理論值；單個回收率；平均回收

6、率及其95%CI及RSD。第十頁，共三十二頁。116. 耐用性溶液穩(wěn)定性溶液配制系統(tǒng)適應(yīng)性溶液；對照液；供試液可接受標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)適應(yīng)性溶液：如分離度符合要求；對照液及供試液： 各時間點主峰含量（或峰面積）與0h相比應(yīng)在 98.0102.0%； 主峰峰純度因子990。需報告內(nèi)容系統(tǒng)適應(yīng)性要求；主峰含量（或峰面積）及峰純度因子；各時間點含量（或峰面積）與0h的比值；符合要求測試點的RSD。色譜條件的影響溶液配制系統(tǒng)適應(yīng)性溶液；對照液色譜條件流動相比例；流速；pH值；柱溫；色譜柱批號?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)同系統(tǒng)適應(yīng)性項下的可接受標(biāo)準(zhǔn)。需報告內(nèi)容同系統(tǒng)適應(yīng)性項下各報告內(nèi)容第十一頁，共三十二頁。12耐用性個人理解 耐

7、用性的目的是通過有意識地對測定參數(shù)進行調(diào)整，來測試方法對檢測條件變化的容許能力，從而為日常檢測提供指導(dǎo)。 通常以系統(tǒng)適應(yīng)性指標(biāo)來評估 目前的方法驗證中，關(guān)于耐用性的驗證操作方法太過復(fù)雜，且對實際檢測的指導(dǎo)意義不大。 需思考和討論的問題： EP、USP中都有在保證系統(tǒng)適應(yīng)性滿足要求的前提下，允許對系統(tǒng)進行調(diào)整的參數(shù)范圍。這里面允許的參數(shù)范圍要遠(yuǎn)寬于耐用性驗證的范圍。請問你怎么考慮這兩個參數(shù)的范圍差別。 第十二頁，共三十二頁。1313有關(guān)物質(zhì)或溶殘（HPLC）二系統(tǒng)適應(yīng)性2. 專屬性精密度檢測限及定量限線性及范圍準(zhǔn)確度耐用性第十三頁，共三十二頁。1414含量（HPLC）1. 系統(tǒng)適應(yīng)性溶液配制 空

8、白溶液 系統(tǒng)適應(yīng)性溶液 對照液 靈敏度溶液 可接受標(biāo)準(zhǔn)滿足專論的系統(tǒng)適應(yīng)性要求；對稱因子應(yīng)在0.81.5之間（EP 2.2.46）RSD （EP 2.2.46 & USP 621）S/N 10需報告內(nèi)容分離度或拖尾因子或?qū)ΨQ因子或理論塔板數(shù)；主峰及已知雜質(zhì)RT，RRT；主峰峰面積及RSD；主峰信噪比。第十四頁，共三十二頁。15152. 專屬性空白干擾及增敏試驗溶液配制 空白溶液；供試液；對照液； 系統(tǒng)適應(yīng)性溶液，增敏溶液?？山邮軜?biāo)準(zhǔn) 空白溶液在各雜質(zhì)及主峰RT處（和/或RRT）無干擾 供試液和對照液中已知單雜及主峰與相鄰峰的R1.5 供試液和對照液中主峰及已知雜質(zhì)的RT保持一致 供試液與對照液

9、中主峰的峰純度因子990 增敏溶液與系統(tǒng)適應(yīng)性溶液中的已知雜質(zhì)RT保持一致 增敏溶液與供試液相比，已知雜質(zhì)RT處峰面積增強需報告內(nèi)容 分離度；主峰及已知雜質(zhì)峰RT（和/或RRT）及其峰 面積；主峰峰純度因子。第十五頁，共三十二頁。16162. 專屬性（續(xù)上）強制降解試驗溶液配制 未破壞供試液；各破壞試驗空白溶液； 酸破壞試驗；堿破壞試驗；氧化破壞試驗； 光照破壞試驗；高溫破壞試驗。注：1. 光照強度總量：ICH Q1B要求要達到1.2106Lux hours； 2. 破壞后主峰含量的計算：用未破壞供試液為對照液進行外標(biāo)計 算破壞后主峰含量，降解率在510%，降解率與總雜偏差5%可接受標(biāo)準(zhǔn) 各破

10、壞溶液中新增降解雜質(zhì)與主峰及已知雜質(zhì)R1.5 （可調(diào)整，至少保留主峰與相鄰雜質(zhì)的R的標(biāo)準(zhǔn)） 各破壞溶液中主峰的峰純度因子990。需報告內(nèi)容 分離度；主峰峰純度；主峰含量及降解率；對比破壞 前后各雜質(zhì)變化情況（包括RRT，含量及總雜）；列 出主要降解雜質(zhì)。第十六頁，共三十二頁。173. 精密度分析重復(fù)性溶液配制對照液，1份；供試液或100%加標(biāo)液或雜質(zhì)限度濃度的主成分考察溶液，6份可接受標(biāo)準(zhǔn)RSD（n=6）10.0%重現(xiàn)性溶液配制同分析重復(fù)性可接受標(biāo)準(zhǔn)RSD（n=6）10.0%RSD（n=12）10.0%；重復(fù)性與重現(xiàn)性已知單雜含量均值（或主成分則以主峰計）的絕對差值0.05%（可調(diào)整）。樣品檢

11、測溶液配制ATS和基地對不同于驗證使用的另一批次樣品進行檢測?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)ATS與基地QC檢測的已知雜質(zhì)含量的絕對差值 0.05%，總雜的絕對差值 0.10%（可調(diào)整）需報告內(nèi)容主峰或已知單雜峰面積；6份及12份主峰或已知單雜含量單值，MeanSD，RSD；95%CI（n=6）；含量均值的絕對差值。第十七頁，共三十二頁。18溶液名稱進樣針數(shù)空白溶液 1或2針系統(tǒng)適應(yīng)性溶液 1針靈敏度溶液1針專屬性溶液（如必要）1或2針對照液3、5、6針（根據(jù)RSD定）供試液6份各1針靈敏度溶液1針系統(tǒng)適應(yīng)性溶液1針應(yīng)考慮成本重現(xiàn)性下進樣序列：第十八頁，共三十二頁。19含量（HPLC）4. 檢測限及定量限溶液配制

12、 對照液逐級稀釋至S/N 3和S/N 10時的濃度溶液， 連續(xù)進樣三針。可接受標(biāo)準(zhǔn)檢測限：S/N 3;定量限：S/N 10； RSD（n=3）10.0%或15.0%； 定量限忽略限（或報告限）。需報告內(nèi)容信噪比；主峰峰面積及RSD（RSD僅是用于定量限） ；定量限及檢測限的濃度及其相當(dāng)于供試液中主峰濃度的百分比。第十九頁，共三十二頁。2020含量（HPLC）5. 線性及范圍溶液配制 報告限雜質(zhì)限度的150%（至少5個點）注：若方法描述中對照液的濃度超過了雜質(zhì)限度，則線性最高點做到 對照液濃度的150%?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)r 0.990;Y軸截距/最低雜質(zhì)限度時Y軸響應(yīng)值的絕對值5.0% （最大可放寬至

13、10.0%）需報告內(nèi)容線性點實際濃度及峰面積；線性圖；線性范圍；線性方程；相關(guān)系數(shù)；殘差平方和；Y軸截距；Y軸截距的95%CI；Y軸截距/雜質(zhì)限度對應(yīng)的響應(yīng)值的絕對值。第二十頁，共三十二頁。雜質(zhì)準(zhǔn)確度測定通常采用回收率的方式檢測，雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品可得時可行對于原料藥，雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品不可得時不可行。對于制劑，雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品不可得時可用主成分代替。應(yīng)考慮檢測驗證成本。不一定為做準(zhǔn)確度而進行雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的制備和標(biāo)定。從定量限起做準(zhǔn)確度，有回收率超標(biāo)的風(fēng)險。21含量（HPLC）6. 準(zhǔn)確度溶液配制 報告限，雜質(zhì)限度，及線性最高點的準(zhǔn)確度溶液各3 份，可用一個母液稀釋。 供試液，1份（供試品加標(biāo)雜質(zhì)）和/或 對照液，1

14、份（主成分方法）注：若本底太高，最低點可從50%做起，或用對照品代替供試品?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)單個回收率及平均回收率應(yīng)在90.0%110.0%；回收率（n=9）的RSD10.0%。需報告內(nèi)容實際測得值；理論值；單個回收率；平均回收率及其95%置信區(qū)間及RSD。第二十一頁，共三十二頁。227. 耐用性溶液穩(wěn)定性溶液配制系統(tǒng)適應(yīng)性溶液；對照液；供試液可接受標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)適應(yīng)性溶液：滿足要求；對照液：主峰峰面積與0h相比應(yīng)在0.91.1之間；供試液：總雜含量與0h相比應(yīng)在0.91.1之間； 各原單雜含量的極差|An- A0| 0.05%； 不得出現(xiàn)大于0.05%的新雜質(zhì)。 主峰面積變化可以增加，重點考慮雜質(zhì)峰需報

15、告內(nèi)容系統(tǒng)適應(yīng)性要求；主峰峰面積或含量， RRT；各時間點主峰峰面積與0h比值；單雜含量及極差；總雜質(zhì)含量與0h的比值。色譜條件的影響溶液配制系統(tǒng)適應(yīng)性；對照液（方法開發(fā)時應(yīng)考慮供試液）色譜條件流動相比例；流速；pH值；柱溫；色譜柱批號?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)同系統(tǒng)適應(yīng)性項下的可接受標(biāo)準(zhǔn)。注：在RSD符合要求的情況下，可減少為3針。需報告內(nèi)容同系統(tǒng)適應(yīng)性項下各報告內(nèi)容。第二十二頁，共三十二頁。2323溶劑殘留（GC）三系統(tǒng)適應(yīng)性2. 專屬性精密度檢測限及定量限線性及范圍準(zhǔn)確度耐用性第二十三頁，共三十二頁。2424含量（HPLC）1. 系統(tǒng)適應(yīng)性溶液配制 空白溶液；對照液可接受標(biāo)準(zhǔn)對照液中待測溶劑峰與相鄰峰

16、的分離度1.5；RSD (n=6) 5.0%或10.0%；需報告內(nèi)容分離度；待峰溶劑峰的峰面積及RSD。2. 專屬性溶液配制 空白溶液；對照液；供試液；100%加標(biāo)溶液； 專屬性溶液（峰鑒別溶劑 + 對照液）；可接受標(biāo)準(zhǔn)空白溶液在待測溶劑峰的RT處（或RRT）無干擾；供試液和100%加標(biāo)液與對照液中待測峰RT保持一致；專屬性溶液及100%加標(biāo)液中待測峰與相鄰峰的R1.5100%加標(biāo)液和供試液相比，待測峰的峰面積增加。需報告內(nèi)容分離度；各溶劑峰的RT（或RRT）及峰面積。第二十四頁，共三十二頁。253. 精密度重復(fù)性溶液配制對照液，1份；供試液或100%加標(biāo)液，6份可接受標(biāo)準(zhǔn)RSD（n=6）10

17、.0%重現(xiàn)性溶液配制同分析重復(fù)性可接受標(biāo)準(zhǔn)RSD（n=6）10.0%；RSD（n=12）10.0%；重復(fù)性與重現(xiàn)性均值的絕對差值1/10溶殘限度 （對于痕量分析的可以放寬到限度的1/2）；樣品檢測溶液配制ATS和基地對不同于驗證使用的另一批次樣品進行檢測.可接受標(biāo)準(zhǔn)ATS與基地QC檢測的含量的絕對差值1/10溶殘限度 （對于痕量分析的可以放寬到限度的1/2）。需報告內(nèi)容待測溶劑峰面積；6份及12份含量單值，MeanSD，RSD；95%CI（n=6）；含量均值的絕對差值。第二十五頁，共三十二頁。26溶液名稱進樣針數(shù)空白溶液 1或2針專屬性溶液（如必要）1或2針對照液6份各1針供試液6份（或100

18、%供試品加標(biāo)液6份）各1針重現(xiàn)性下進樣序列：第二十六頁，共三十二頁。2727含量（HPLC）4. 檢測限及定量限溶液配制 對照液逐級稀釋至S/N 3和S/N 10時的濃度，各 平行配制3份?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)檢測限：S/N 3;定量限： S/N 10；RSD（n=3）10.0%或15.0%需報告內(nèi)容信噪比；待測溶劑峰峰面積及RSD（RSD僅用于定量限）；定量限及檢測限的濃度及其相當(dāng)于供試液濃度的百分比（或ppm）。 第二十七頁，共三十二頁。2828含量（HPLC）5. 線性及范圍溶液配制 LOQ150%的線性溶液（至少5個點）可接受標(biāo)準(zhǔn)r 0.990;Y軸截距/100%濃度時Y軸響應(yīng)值的絕對值5.0%

19、 （最大可放寬至10.0%）。需報告內(nèi)容線性實際濃度及峰面積；線性圖；線性方程；線性范圍；相關(guān)系數(shù)；殘差平方和；Y軸截距；Y軸截距95%CI；Y軸截與/100%濃度對應(yīng)響應(yīng)值的絕對值。6. 準(zhǔn)確度溶液配制 50%，100%，150%的加標(biāo)液各三份，可用一個母 液稀釋；供試液，2份注：若本底太高，低濃度點可用對照品代替供試品?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)單個回收率及平均回收率應(yīng)在90.0%110.0%；回收率（n=9）的RSD10.0%。注：痕量分析回收率最多可以放寬到70.0-130.%。需報告內(nèi)容實際測得值；理論值；單個回收率；平均回收率及其95%CI及RSD。第二十八頁，共三十二頁。297. 耐用性溶液穩(wěn)定性溶液配制對照液，1份；可接受標(biāo)準(zhǔn)對照液中待測溶劑峰的峰面積與0h相比應(yīng)在0.901.10之間。需報告內(nèi)容各時間點主峰峰面積及與0h的比值。氣相色譜法，溶液穩(wěn)定性測試可不考慮色譜條件的影響溶液配制對照液，1份；（方法開發(fā)時應(yīng)考慮供試液）色譜條件色譜柱初始溫度；頂空瓶加熱溫度；載氣流速；色譜柱批號；頂空瓶平衡時間。注：可根據(jù)實際情況考察對色譜耐用性影響較大的