牛膝中對(duì)成骨樣細(xì)胞UMR106有促進(jìn)增殖作用的活性成分研究

1、牛膝中對(duì)成骨樣細(xì)胞UMR106有促進(jìn)增殖作用的活性身分研究【摘要】目的探求牛膝中對(duì)成骨樣細(xì)胞UR106的增殖有明顯促進(jìn)作用的活性身分。要領(lǐng)運(yùn)用薄層、色譜技能等要領(lǐng)舉行分散，斷定。效果分散出3個(gè)化合物，結(jié)晶-谷甾醇、結(jié)晶胡蘿卜苷、結(jié)晶蛻皮甾酮。結(jié)論牛膝的醋酸乙酯層用硅膠柱色譜、薄層色譜、反相高效液相色譜平分散本領(lǐng)舉行化學(xué)分散，得到3種含量較大的化合物?！娟P(guān)鍵詞】牛膝高效液相色譜-谷甾醇胡蘿卜苷蛻皮甾酮牛膝為莧科牛膝AhyrenthesbidentataBI的枯燥根，主產(chǎn)于河南省，也稱懷牛膝，具補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨的成效。主治腰膝酸痛，下肢萎軟。藥理學(xué)研究表白：牛膝具有保肝、落酶、鎮(zhèn)痛、抗炎、加強(qiáng)免疫力

2、及抗朽邁作用。其化學(xué)身分重要為多糖，齊墩果酸類(lèi)三萜皂苷和植物甾酮類(lèi)。按照中醫(yī)理論，對(duì)30種中藥提取物舉行活性挑選，創(chuàng)造牛膝的甲醇提取物對(duì)破骨細(xì)胞具有較強(qiáng)按捺作用。進(jìn)一步研究證明：牛膝正丁醇可溶部門(mén)為其活性身分。為了探求牛膝中明顯促進(jìn)骨樣細(xì)胞UR106增殖的活性身分，對(duì)牛膝的甲醇提取物的正丁醇可溶部門(mén)的化學(xué)身分舉行研究，分散得到3個(gè)化合物。1質(zhì)料與要領(lǐng)1.1儀器、試劑及藥品JJasPU-980高效液相色譜輸液泵日天職光公司，JasUV-975紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器(日天職光公司)；Khr色譜事情站SientifiSysteIn.，X-250超聲波洗濯器北京醫(yī)療裝備二廠，1H-NRBrukerARX-3

3、00300Hz核磁共振儀。乙腈色譜純，天津四友生物醫(yī)學(xué)技能提供；硅膠，青島海洋化學(xué)試劑廠提供。牛膝購(gòu)自遼寧省沈陽(yáng)市中藥材公司，經(jīng)本校藥用植物教研室孫啟時(shí)傳授斷定為AhyranthesbidentataBI之枯燥根比較品-谷甾醇、胡蘿卜苷、蛻皮甾酮比較品由本校自然藥化研究室李銑傳授提供純度均90%。1.2藥物提取及分散取牛膝藥材細(xì)粉1.5kg，放入圓頂燒瓶中，用75%乙醇加熱回流提取3次，歸并濾液，進(jìn)一步減壓接納溶液得到乙醇提取浸膏。浸膏用水溶液，得到水混懸液?；鞈乙河檬兔演腿?，萃取后保存石油醚層，放入棕色瓶中，混懸液用氯仿萃取，得到氯仿層?；鞈乙河谜〈己痛姿嵋阴ポ腿?，別離得到了醋酸乙酯和正

4、丁醇層及水層。順?biāo)焱瓿闪颂崛∈虑?。取牛膝醋酸乙酯層浸膏適量，用石油醚-丙酮舉行梯度硅膠柱層析，溶劑梯度變革挨次為：石油醚-丙酮2001、石油醚-丙酮1001、石油醚-丙酮501、石油醚-丙酮201、石油醚-丙酮101、石油醚-丙酮51、石油醚-丙酮31、石油醚-丙酮21、石油醚-丙酮11、丙酮，每個(gè)溶劑梯度用5個(gè)層析硅膠柱的保存體積洗脫,每250l為一餾分，各餾分接納溶劑后，用硅膠GF254薄層板查驗(yàn)各餾分身分，歸并重要身分雷同的餾分1。當(dāng)洗脫溶劑為石油醚-丙酮101時(shí)，網(wǎng)絡(luò)餾分60-66，用硅膠制備薄層舉行制備，以石油醚-丙酮51為睜開(kāi)體系，氯仿-甲醇重結(jié)晶得化合物。當(dāng)洗脫溶劑為石油醚-丙酮

5、21時(shí)，網(wǎng)絡(luò)餾分192-199，經(jīng)硅膠制備薄層舉行制備，以氯仿-甲醇-水653510為睜開(kāi)體系，氯仿-甲醇11重結(jié)晶得化合物。當(dāng)洗脫溶劑為丙酮時(shí)，網(wǎng)絡(luò)餾分202-214，經(jīng)硅膠制備薄層舉行制備，以醋酸乙酯-甲醇41為睜開(kāi)體系，甲醇重結(jié)晶，反相高效液相色譜制備，以水-乙腈-四氫呋喃86113為活動(dòng)相，得化合物。1.3含藥細(xì)胞造就液的配制取從牛膝醇提物的醋酸乙酯層浸膏中分散得到的每種化合物約1g溶于1lDS中，配成1g/l的儲(chǔ)藏液，舉行細(xì)胞的增殖檢測(cè)實(shí)行時(shí)，用無(wú)血清E依次稀釋成1.0102，1.0103，1.0104，1.0105，1.0106，1.0107g/l6個(gè)濃度。2效果牛膝中分散得到的3

6、種化合物的斷定：化合物：白色針晶，p139142，Lieberann-Burhard反響陽(yáng)性，用以下面3種溶劑體系為睜開(kāi)劑舉行薄層色譜時(shí)：石油醚-丙酮51；環(huán)己烷-醋酸乙酯52；氯仿-石油醚-醋酸乙酯861，和比較品-谷甾醇Rf雷同，和比較品混淆后熔點(diǎn)不低落。故斷定為-谷甾醇(-sitsterl)?；衔铮喊咨勰?，p303305，Liberann-Burhard和lish反響均為陽(yáng)性，用以下面3種溶劑體系為睜開(kāi)劑舉行薄層色譜時(shí)：甲醇-醋酸乙酯-冰乙酸642；醋酸乙酯-甲醇41；氯仿-甲醇-冰乙酸821，其Rf值和比較品胡蘿卜苷同等，在以差異比例乙腈-水為活動(dòng)相的高效液相色譜中，其保存時(shí)間和胡

7、蘿卜苷比較品雷同，斷定該化合物為胡蘿卜苷dausterl?；衔铮喊咨樉?，p241243，Lieberann-Burhard反響陽(yáng)性，當(dāng)以下面3種溶劑體系為睜開(kāi)劑舉行薄層色譜時(shí)：氯仿-甲醇-水653510下層；醋酸乙酯-甲醇41；氯仿-甲醇-冰醋酸721，其Rf值和蛻皮甾酮比較品同等；在以差異比例的甲醇-水、乙腈-水為活動(dòng)相的高效液相色譜中，其保存時(shí)間和蛻皮甾酮比較品雷同，證明該化合物為蛻皮甾酮(edysterne)2。胡蘿卜苷、蛻皮甾酮對(duì)成骨樣細(xì)胞的增殖也表示出明顯的促進(jìn)作用，當(dāng)其在細(xì)胞造就液中的濃度為1.2106g/l相稱于藥材2.4104g/l時(shí)，其促進(jìn)成骨樣細(xì)胞增殖的作用最強(qiáng)，3次實(shí)

8、行的最高增殖率均勻?yàn)?5%。-谷甾醇對(duì)成骨樣細(xì)胞的增殖既無(wú)明顯的促進(jìn)作用又無(wú)明顯的按捺作用。3討論牛膝的醇提物對(duì)成骨樣細(xì)胞UR106有促進(jìn)增殖的作用，增殖率可達(dá)27%，醇提物的醋酸乙酯萃取部位比醇提物具有更強(qiáng)的促進(jìn)增殖作用，其增殖率可達(dá)55%。本研究以成骨樣細(xì)胞UR106的增殖為活性指標(biāo)，對(duì)醋酸乙酯層的身分舉行活性追蹤和化學(xué)分散，創(chuàng)造含量較高的化合物-蛻皮甾酮和胡蘿卜苷對(duì)成骨樣細(xì)胞UR106的增殖具有明顯的促進(jìn)作用，因此，確定蛻皮甾酮和胡蘿卜苷為牛膝中對(duì)成骨樣細(xì)胞UR106的增殖有明顯促進(jìn)作用的活性身分。對(duì)牛膝的醋酸乙酯層用硅膠柱色譜、薄層色譜、反相高效液相色譜平分散本領(lǐng)舉行化學(xué)分散，得到3種含量較