土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎

1、課題2土壤中分解尿素細(xì)菌分離和計(jì)數(shù)課題2 微生物培養(yǎng)與應(yīng)用土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第1頁一、課題背景1、尿素利用尿素是一個(gè)主要農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細(xì)菌利用尿素原因土壤中細(xì)菌分解尿素是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕窩O(NH2)2脲酶+ CO2NH3+H2O土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第2頁3、常見分解尿素微生物芽孢桿菌、小球菌、假單胞桿菌、克氏桿菌、棒狀桿菌、梭狀芽孢桿菌，一些真菌和放線菌也能分解尿素。4、課題目從土壤中分離出能夠分解尿素細(xì)菌統(tǒng)計(jì)每克土壤樣品中終究含有多少這么細(xì)菌一.研究思緒.篩選菌株.

2、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目.設(shè)置對照土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第3頁 1、實(shí)例：啟示：尋找目標(biāo)菌種時(shí)要依據(jù)它對生存環(huán)境要求，到對應(yīng)環(huán)境中去尋找。原因：因?yàn)闊崛獪囟?0800C，淘汰了絕大多數(shù)微生物只有Taq細(xì)菌被篩選出來。DNA多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一個(gè)在體外將少許DNA大量復(fù)制技術(shù)，此項(xiàng)技術(shù)要求使用耐高溫（930C）DNA聚合酶。.篩選菌株土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第4頁要分離一個(gè)微生物，必須依據(jù)該微生物特點(diǎn)，包含營養(yǎng)、生理、生長條件等；配置適當(dāng)培養(yǎng)基方法：抑制大多數(shù)微生物生長造成有利于該菌生長環(huán)境，結(jié)果：培養(yǎng)一定時(shí)間后，該菌數(shù)量上升，再經(jīng)過稀釋涂布平板法等方法對它進(jìn)行純

3、化培養(yǎng)分離。2、試驗(yàn)室中微生物篩選原理：人為提供有利于目標(biāo)菌株生長條件(包含營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其它微生物生長。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第5頁15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO47H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO43、土壤中分解尿素細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)所需培養(yǎng)基：從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類？從功效上屬于哪類培養(yǎng)基？固體培養(yǎng)基在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素選擇培養(yǎng)基土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第6頁培養(yǎng)基氮源為尿素，只有能合成脲酶微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶微

4、生物因?yàn)椴荒芊纸饽蛩兀狈Φ炊荒苌L發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素微生物。4、培養(yǎng)基選擇分解尿素微生物原理選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其它種類微生物生長培養(yǎng)基。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第7頁1、顯微鏡直接計(jì)數(shù)：利用血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積里樣品中微生物數(shù)量。.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對運(yùn)動細(xì)菌計(jì)數(shù)；需要相對高細(xì)菌濃度；個(gè)體小細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察；缺點(diǎn)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第8頁2.間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）（1）慣用方法：每克樣品中菌落數(shù)(CV)M其中，C

5、代表某一稀釋度下平板上生長平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用稀釋液體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。 當(dāng)樣品稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表 面生長一個(gè)菌落，起源于樣品稀釋 液中一個(gè)活菌，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)平板上 菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有 多少活菌。（2）原理：稀釋涂布平板法。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第9頁注意事項(xiàng)為了確保結(jié)果準(zhǔn)確，普通選擇菌落數(shù)在30300平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)。為使結(jié)果靠近真實(shí)值可將同一稀釋度加到三個(gè)或三個(gè)以上平皿中，經(jīng)涂布，培養(yǎng)計(jì)算出菌落平均數(shù)。統(tǒng)計(jì)菌落往往比活菌實(shí)際數(shù)目低。涂布平板法所選擇稀釋度很主要，普通以三個(gè)稀釋度中第二個(gè)稀釋度所出現(xiàn)平均菌落數(shù)在50個(gè)左右為最好。土壤

6、中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第10頁設(shè)置對照主要目標(biāo)是排除試驗(yàn)組中非測試原因?qū)υ囼?yàn)結(jié)果影響，提升試驗(yàn)結(jié)果可信度。.設(shè)置對照：設(shè)置對照方法：空白對照：不給對照組任何處理原因。條件對照：給對照組施以部分試驗(yàn)原因，但不是所要研究 處理原因。本身對照：對照組和試驗(yàn)組都在同一研究對象上進(jìn)行。相互對照：不單設(shè)對照組，而是幾個(gè)試驗(yàn)組相互對照。A同學(xué)結(jié)果與其它同學(xué)不一樣，可能解釋有兩種。一是因?yàn)橥翗硬灰粯?；二是因?yàn)榕囵B(yǎng)基污染或操作失誤。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第11頁小結(jié)：經(jīng)過這個(gè)事例能夠看出，試驗(yàn)結(jié)果要有說服力，對照設(shè)置是必不可少。方案一：由其它同學(xué)用與A同學(xué)相同土樣進(jìn)行

7、試驗(yàn) 方案二：將A同學(xué)配制培養(yǎng)基在不加土樣情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對照，以證實(shí)培養(yǎng)基是否受到污染。結(jié)果預(yù)測：假如結(jié)果與A同學(xué)一致，則證實(shí)A無誤；假如結(jié)果不一樣，則證實(shí)A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基配制有問題。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第12頁二.試驗(yàn)詳細(xì)操作 .土壤取樣 從肥沃、濕潤土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好信封中。取土樣用小鐵鏟和盛土樣信封在使用前都要滅菌。.制備培養(yǎng)基：制備以尿素為唯一氮源選擇培養(yǎng)基。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第13頁應(yīng)在火焰旁稱取土壤10g。在稀釋土壤溶液過程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行分離不一樣微生

8、物采取不一樣稀釋度原因：不一樣微生物在土壤中含量不一樣目標(biāo)：確保取得菌落數(shù)在30300之間、適于計(jì)數(shù)平板三樣品稀釋土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第14頁為何分離不一樣微生物要采取不一樣稀釋度？測定土壤中細(xì)菌總量和測定土壤中能分解尿素細(xì)菌數(shù)量，選取稀釋范圍相同嗎？原因：土壤中各類微生物數(shù)量（單位：株/kg）是不一樣。比如在干旱土壤中上層樣本中：好氧及兼性厭氧細(xì)菌數(shù)約為2 185萬，放線菌數(shù)約為477萬，霉菌數(shù)約為23.1萬。結(jié)論：為取得不一樣類型微生物，就需要按不一樣稀釋度進(jìn)行分離，同時(shí)還應(yīng)該有針對性地提供選擇培養(yǎng)條件。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第15頁.取樣

9、涂布試驗(yàn)時(shí)要對培養(yǎng)皿作好標(biāo)識。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)間、稀釋度、培養(yǎng)物等。假如得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30300平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，假如同一稀釋倍數(shù)三個(gè)重復(fù)菌落數(shù)相差較大，表明試驗(yàn)不準(zhǔn)確，需要重新試驗(yàn)。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第16頁.微生物培養(yǎng)與觀察在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)統(tǒng)計(jì)作為結(jié)果，以預(yù)防因培養(yǎng)時(shí)間不足而造成遺漏菌落數(shù)目。 培養(yǎng)不一樣微生物往往需要不一樣培養(yǎng)溫度。細(xì)菌：3037培養(yǎng)12d放線菌：2528培養(yǎng)57d霉菌：2528溫度下培養(yǎng)34d。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第17

10、頁微生物培養(yǎng)與觀察土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第18頁三.結(jié)果分析與評價(jià)1.經(jīng)過對照試驗(yàn)，若培養(yǎng)物有雜菌污染，菌落數(shù)偏高；若培養(yǎng)物混入其它氮源，則菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高，難以選擇出分解尿素微生物。2.提醒：選擇每個(gè)平板上長有30300個(gè)菌落稀釋倍計(jì)算每克樣品菌數(shù)最適當(dāng)。同一稀釋倍數(shù)三個(gè)重復(fù)菌落數(shù)不能相差懸殊，如相差較大，表示試驗(yàn)不準(zhǔn)確。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第19頁四、操作提醒 無菌操作 做好標(biāo)識 規(guī)劃時(shí)間 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第20頁五.課外延伸 在以尿素為唯一氮源培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后，假如PH升高，指示

11、劑將變紅，說明該細(xì)菌能夠分解尿素。測定飲水中大腸桿菌數(shù)量方法是將一定體積水用細(xì)菌過濾器過濾后，將濾膜放到 伊紅美藍(lán) 培養(yǎng)基上培養(yǎng)，大腸桿菌菌落展現(xiàn)黑色，經(jīng)過記述得出水樣中大腸桿菌數(shù)量。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第21頁大腸桿菌呈 黑色中心 ,有或無金屬光澤大腸桿菌在伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB)上經(jīng)典特征 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第22頁本課題知識小結(jié):土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第23頁六、例題解析 例1對細(xì)菌群體生長規(guī)律測定正確表述是A在液體培養(yǎng)基上進(jìn)行 B最少接種一個(gè)細(xì)菌 C接種一個(gè)細(xì)菌 D及時(shí)補(bǔ)充消耗營養(yǎng)物質(zhì) 解析：細(xì)菌群體生長規(guī)律測

12、定是人們在一定條件下進(jìn)行。這些條件是：一種細(xì)菌、恒定容積培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基、定時(shí)測定細(xì)菌總數(shù)。在這些條件下，才能測定出細(xì)菌生長規(guī)律。測定時(shí)只能用一個(gè)細(xì)菌子細(xì)胞群體改變規(guī)律表示微生物生長；恒定容積是給微生物提供一定生存環(huán)境；液體培養(yǎng)基才能經(jīng)過樣品推測細(xì)菌總數(shù)。若接種各種細(xì)菌，則會發(fā)生種間斗爭而不能測定一個(gè)微生物生長規(guī)律。在接種時(shí)，要確保一定接種量。答案：A土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第24頁例2在微生物群體生長規(guī)律測定中，種內(nèi)斗爭最顯著最激烈時(shí)期是A調(diào)整期 B對數(shù)期 C穩(wěn)定時(shí) D衰亡期解析：種內(nèi)斗爭是一個(gè)生態(tài)原因。種內(nèi)斗爭反應(yīng)了種內(nèi)生物對生存空間和生活資源爭奪。在生活空間充裕，

13、營養(yǎng)充分時(shí)候，種內(nèi)斗爭程度是比較低。伴隨微生物個(gè)體數(shù)目標(biāo)增加，每個(gè)個(gè)體生存空間越來越少，營養(yǎng)物質(zhì)也越來越少，每個(gè)個(gè)體對生存空間和資源爭奪也越來越激烈，種內(nèi)斗爭就越來越激烈。由此可知，在穩(wěn)定時(shí)種內(nèi)斗爭最激烈。在衰亡期，微生物數(shù)目已經(jīng)開始降低，pH已經(jīng)極度不適于微生物生存，次級代謝產(chǎn)物積累到很高程度，這時(shí)微生物生存斗爭主要是與無機(jī)環(huán)境斗爭。答案：C土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第25頁1.對細(xì)菌群體生長規(guī)律測定正確表述是（ ） A.在液體培養(yǎng)基上進(jìn)行 B.最少接種一個(gè)細(xì)菌 C.接種一個(gè)細(xì)菌 D.及時(shí)補(bǔ)充消耗營養(yǎng)物質(zhì) 2.使用選擇培養(yǎng)基目標(biāo)是（ ） A.培養(yǎng)細(xì)菌 B.培養(yǎng)真菌 C.使

14、需要微生物大量繁殖 D.表現(xiàn)某微生物特定性狀與其它微生物加以區(qū)分3.能合成脲酶微生物所需要碳源和氮源分別是( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素實(shí)踐訓(xùn)練A CD土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第26頁4.以下說法不正確是（ ） A.科學(xué)家從7080度熱泉中分離到耐高溫TaqDNA聚合酶 B.統(tǒng)計(jì)某一稀釋度5個(gè)平板菌落數(shù)依次為M1、M2、M3、M4、M5，以M3作為該樣品菌落數(shù)預(yù)計(jì)值 C.設(shè)置對照試驗(yàn)主要目標(biāo)是排除試驗(yàn)組中非測試原因?qū)υ囼?yàn)結(jié)果影響，提升試驗(yàn)結(jié)果可信度 D.同其它生物環(huán)境相比，土壤中微生物數(shù)量最大，種類最多。5.為培養(yǎng)和分離出酵母菌并淘汰雜菌，常在培養(yǎng)基中加入（） A.較多氮源物質(zhì) B.較多碳源物質(zhì) C.青霉素類藥品 D.高濃度食鹽BC土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)市公開課一等獎第27頁例3（江蘇）抗生素作為治療細(xì)菌感染藥品，其高效性和巨大經(jīng)濟(jì)價(jià)值使抗生素工業(yè)經(jīng)久不衰。其中青霉素發(fā)覺和應(yīng)用含