急性子提取物抗氧化活性的體外研究

1、急性子提取物抗氧化活性的體外研究【摘要】目的研究急性子提取物的體外抗氧化活性。方法提取急性子水溶性物質(zhì)和脂溶性物質(zhì)，并將脂溶性物質(zhì)用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇遞次萃取，然后將各提取物分別進(jìn)展抗卵黃脂質(zhì)過(guò)氧化及消除氧自由基活性的考察。結(jié)果急性子醋酸乙酯提取物對(duì)卵黃脂質(zhì)過(guò)氧化抑制率能到達(dá)90%以上，對(duì)氧自由基抑制率能到達(dá)70%以上，明顯高于V。結(jié)論急性子醋酸乙酯提取物具有很好的抗氧化作用?！娟P(guān)鍵詞】急性子抗氧化體外自由基是引起癌癥、衰老、心血管病等退變性疾病的根源,生物體內(nèi)常見(jiàn)的自由基有超氧陰離子自由基、羥基自由基、烷氧基自由基等，其中超氧陰離子自由基形成最早，去除了超氧陰離子自由基，即可從根本上預(yù)

2、防體內(nèi)形成過(guò)多的羥基自由基和其他活性氧自由基，到達(dá)防衰老、抗癌、抗心血管病的目的1。急性子為鳳仙花科植物鳳仙花Ipatiensbalsaina的枯燥成熟種子，夏秋種子即將成熟時(shí)采收。急性子具有軟堅(jiān)消積、降氣行癖、透骨通筋活血的作用。急性子還有一定的抗癌作用，藥敏試驗(yàn)證實(shí)對(duì)胃淋巴肉瘤細(xì)胞敏感2。本文首次研究了急性子抗卵黃脂質(zhì)過(guò)氧化作用、消除氧自由基的才能并測(cè)定了其復(fù)原力，體外實(shí)驗(yàn)證明急性子具有抗氧化作用，定性鑒別說(shuō)明其含有黃酮類化合物多碳化合物。本實(shí)驗(yàn)為急性子資源的開(kāi)發(fā)利用奠定了根底，并為急性子天然抗氧化劑的開(kāi)發(fā)提供了理論根據(jù)。1材料與儀器1.1材料來(lái)源急性子購(gòu)于同仁堂沈陽(yáng)中街店，經(jīng)鑒定為See

3、nipatientis。1.2試劑與儀器儀器主要有數(shù)字恒溫水浴鍋，低速離心機(jī)，循環(huán)水式多用真空泵，電子天平，電熱枯燥培養(yǎng)箱，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。所用試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。2方法2.1急性子中物質(zhì)的提取2.1.1急性子中脂溶性物質(zhì)的提取將急性子用粉碎機(jī)粉碎，之后用95%乙醇回流提取3次，2h/次，然后進(jìn)展抽濾，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓回收溶劑，至無(wú)醇味。加適量水混勻，分別用石油醚、醋酸乙醋、正丁醇萃齲揮散溶劑，即得到提取物質(zhì)。2.1.2急性子中水溶性物質(zhì)的提取將急性子用粉碎機(jī)粉碎，用石油醚脫脂。脫脂處理后的粉末放入圓底燒瓶中，參加80%乙醇回流去掉小分子物質(zhì)，將乙醇揮散。樣品按照1100的比例加蒸餾水

4、，在80水浴煮3次，2h/次，抽濾，棄殘?jiān)?，合并濾液，70濃縮為原體積的1/3,參加3倍體積95%的乙醇,抽濾，沉淀用乙醇、丙酮抽洗，冷凍枯燥得粗多糖。2.2急性子抗氧化活性的體外研究2.2.1急性子抗卵黃脂質(zhì)過(guò)氧化活性的測(cè)定3采用依賴雞卵黃脂蛋白的脂質(zhì)過(guò)氧化模型,操作步驟:新穎卵黃用等體積的0.1l/LpH7.4的PBS按11配成懸液,再稀釋成125(卵黃總體積),磁力攪拌30in。在一組試管中參加上述卵黃懸液0.2l;分別參加樣品0.1l(對(duì)照管參加PBS)，再參加25l/L的硫酸亞鐵0.2l;用0.1l/LPBS補(bǔ)至2l,置于37水浴振蕩50in,取出后參加20%三氯乙酸0.5l,靜置1

5、0in后.3000r/in離心15in,取上清液2.0l參加0.8%硫代巴比妥酸1.0l塞緊管口100水浴15in,空白管以PBS取代上清液,其余一樣,532n測(cè)光吸收,計(jì)算抑制率。抑制率%=對(duì)照吸光度-樣品吸光度對(duì)照吸光度100%2.2.2急性子去除氧自由基活性測(cè)定取8個(gè)微燒杯，編好號(hào)后，按NBT光復(fù)原法參加各試劑及樣品。試劑參加后充分混勻，取1號(hào)燒杯放入暗處作為空白調(diào)零時(shí)用，其它7個(gè)微燒杯放入4500Lux日光燈照射下啟動(dòng)反響，15in后遮光終止反響。在560n波長(zhǎng)下測(cè)定光密度，以2，3號(hào)杯的D值計(jì)算出不同試劑量在反響系統(tǒng)中抑制NBT關(guān)復(fù)原的相關(guān)百分率。然后以所加試劑量為橫坐標(biāo)，以抑制百分

6、率為縱坐標(biāo)作圖，畫(huà)出兩者的相關(guān)曲線。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.2.3復(fù)原力的測(cè)定分別取2.5l不同濃度的醋酸乙酯提取物于試管中，依次參加2.5l0.2l/L磷酸鹽緩沖液PBS，pH=7.6和2.5lK4FeN6于50水浴保溫20in后，快速冷卻，再參加2.5l10%TA，以4000r/in的轉(zhuǎn)速離心10in，取上清液2.5l依次參加2.5l重蒸水，0.5l0.1%Fel3，充分混勻，靜止10in，在700n處測(cè)定吸光度值，以重蒸水做陰性對(duì)照，抗壞血酸為陽(yáng)性對(duì)照。2.3定性鑒別將醋酸乙酯提取物分別進(jìn)展以下顏色反響：鹽酸-鋅粉反響：將樣品溶于甲醇或乙醇，滴加幾滴濃鹽酸，再參加少許的鋅粉振蕩，必要時(shí)

7、微熱，觀察顏色。氨熏：取檢品的乙醇溶液點(diǎn)于濾紙片上，將濾紙?jiān)诎彼戏窖?0s，立即在紫外燈下觀察。三氯化鋁反響：取檢品的乙醇溶液點(diǎn)于濾紙片上，1%三氯化鋁乙醇溶液通過(guò)紙斑反響后，置于紫外燈下觀察。三氯化鐵反響：取檢品1l，參加三氯化鐵試液12滴，觀察顏色。lish反響：取檢品1l,參加5%萘酚試液數(shù)滴振搖后，沿管壁滴入56滴濃硫酸，使成兩液層，待23in后，觀察兩層液面顏色。3結(jié)果3.1急性子各提取物抗卵黃脂質(zhì)過(guò)氧化活性結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，急性子石油醚組和多糖組均無(wú)抗卵黃脂質(zhì)過(guò)氧化作用,只有醋酸乙酯組和正丁醇組均具有抗卵黃脂質(zhì)過(guò)氧化作用,抑制率隨濃度的增加而上升,并均強(qiáng)于V。并且醋酸乙酯組

8、作用強(qiáng)于正丁醇組。醋酸乙酯提取物的抑制率最高可達(dá)92.88%。由圖2可見(jiàn)，只有醋酸乙酯提取物具有消除氧自由基的作用,并且抑制率隨濃度增加而增大,并明顯高于V。3.3復(fù)原力測(cè)定的結(jié)果見(jiàn)圖3。復(fù)原力是抗氧化物質(zhì)提供電子才能的重要指標(biāo)，抗氧化劑通過(guò)自身的復(fù)原作用給出電子而使自由基變?yōu)榉€(wěn)定的分子，從而失去活性?？寡趸Чc復(fù)原力親密相關(guān)，復(fù)原力越強(qiáng)，抗氧化性就越強(qiáng)。由圖3可知，醋酸乙酯提取物隨濃度增加復(fù)原力增強(qiáng)。3.4定性鑒別結(jié)果鹽酸-鋅粉反響：呈現(xiàn)紫紅色。氨熏：氨熏后顏色加深，紫外光下觀察呈現(xiàn)亮黃色熒光斑點(diǎn)。三氯化鋁反響：紫外光下觀察呈現(xiàn)黃色熒光斑點(diǎn)。三氯化鐵反響：呈現(xiàn)綠色。lish反響：兩層液面之

9、間呈現(xiàn)紫紅色園環(huán)。急性子醋酸乙酯提取物定性鑒別結(jié)果顯示其含有黃酮類化合物，并可能為黃酮苷以及含有多酚類化合物。4討論急性子石油醚提取物消除氧自由基活性低于對(duì)照組，由此可驗(yàn)證急性子的低毒性可能與其所含有的揮發(fā)性成分有關(guān)4。近年來(lái)研究報(bào)道證實(shí)，類黃酮具有很好的去除自由基、抗氧化活性，黃酮類化合的抗氧化作用機(jī)制為其將氫原子供應(yīng)自由基，自身轉(zhuǎn)變成酚基自由基，酚基自由基的穩(wěn)定性降低了自動(dòng)氧化鏈反響的傳遞速度，從而引起了抑制脂類進(jìn)一步被氧化的作用，簡(jiǎn)言之，就是作為自由基吸收劑而起到抗氧化作用?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1田云,盧向陽(yáng),易克，等.天然抗氧化劑去除氧自由基的才能J.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2022,30(3)：209.2胡喜蘭，朱慧，劉存瑞，等鳳仙花的化